CN109169270A - 一种提高臭参种子无菌萌发率和直接器官发生的高效方法 - Google Patents

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黄衡宇
徐福荣
张爱丽
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Yunnan University of Traditional Chinese Medicine TCM
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Abstract

本发明公开了一种提高臭参种子无菌萌发率和直接器官发生的高效方法，选取饱满有光泽的臭参种子，经消毒、冲洗后接种于MS培养基上，光照培养5～15天得到臭参幼苗；截取基部1～2cm带节，接种到预培养基中培养10～15天后，再转入增殖培养基中培养10～30天，再转入生根培养基中培养10～15天得到生根苗；将生根苗置于自然光下闭瓶炼苗5～8天，然后打开瓶盖炼苗2～4天，取出生根苗，小心洗净残余培养基后用多菌灵溶液浸泡根部4～6min，再移栽到水浸透的腐殖质土壤上。本发明对试管苗赢弱的桔梗科物种获得存活率高且方便移栽的生根苗来说，具有重要意义。

Description

一种提高臭参种子无菌萌发率和直接器官发生的高效方法
技术领域
本发明属于栽培技术领域，具体涉及一种提高臭参种子无菌萌发率和直接器官发生的高效方法。
背景技术
臭参为桔梗科党参属植物管钟党参的根，产于西藏、四川和云南，生于海拔3300～4200m的山地草坡及灌丛中，臭参是中国西南地区特有的药食两用植物，具有补气血、通经络、助消化等功效，在云南民间作党参使用，臭参富含维生素、氨基酸、微量元素等营养成分，具有良好的保健功效，其地上部分总黄酮含量较高，有抗氧化活性，随着社会经济迅速发展，生活水平逐渐提高，人们在健康投资上的比重不断增加，为满足市场需求，开发一种能解决上述技术难题的方法是非常必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高臭参种子无菌萌发率和直接器官发生的高效方法。
本发明的目的是这样实现的，所述的提高臭参种子无菌萌发率和直接器官发生的高效方法包括以下步骤：
1)选取饱满有光泽的臭参种子，经消毒、冲洗后接种于MS培养基上，置于温度20～30℃、光照度1500～2000Lx光照培养5～15天得到臭参幼苗；
2)截取臭参幼苗基部1～2cm带节，接种到预培养基MS+2,4-D 0.1～0.5mg/L中培养10～15天后，再转入增殖培养基MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA 1.0～2.0mg/L中培养10～30天，再转入生根培养基1/2MS+2,4-D 0.5～1.0mg/L中培养10～15天得到生根苗；
3)将生根苗置于自然光下闭瓶炼苗5～8天，然后打开瓶盖炼苗2～4天，取出生根苗，小心洗净残余培养基后用多菌灵溶液浸泡根部4～6min，再移栽到水浸透的腐殖质土壤上。
本发明种子萌发成幼苗后，截取其基部1-2cm带节，进行培养，在MS+2,4-D 0.1-0.5mg/L中培养10-15天后，转入MS+6-BA 0.5-1.0mg/L+NAA 1.0-2.0mg/L中培养20天，增殖系数可达25.0以上。这样的繁殖系数在整个桔梗科植物中从未见报道，且无愈伤组织出现，全由基茎节部膨大后，其休眠芽大量发生，再进一步产生2或3级侧芽；此方法(也称直接器官发生)能最大程度保留母本性状，而避免了由愈伤组织(或称间接器官发生)途径可能引起的变异。生根培养基为1/2MS+2,4-D 0.5-1.0mg/L，根粗短发达，有利于驯化移栽。2,4-D常规使用于愈伤组织诱导，基本不用于不定根诱导阶段。本发明在生根培养阶段使用2,4-D所获得的试管苗状根粗，便于移栽，其成活率可达95％以上；这对试管苗赢弱的桔梗科物种获得存活率高且方便移栽的生根苗来说，具有重要意义。
具体实施方式
本发明所述的提高臭参种子无菌萌发率和直接器官发生的高效方法包括以下步骤：
1)选取饱满有光泽的臭参种子，经消毒、冲洗后接种于MS培养基上，置于温度20～30℃、光照度1500～2000Lx光照培养5～15天得到臭参幼苗；
2)截取臭参幼苗基部1～2cm带节，接种到预培养基MS+2，4-D 0.1～0.5mg/L中培养10～15天后，再转入增殖培养基MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA 1.0～2.0mg/L中培养10～30天，再转入生根培养基1/2MS+2,4-D 0.5～1.0mg/L中培养10～15天得到生根苗；
3)将生根苗置于自然光下闭瓶炼苗5～8天，然后打开瓶盖炼苗2～4天，取出生根苗，小心洗净残余培养基后用多菌灵溶液浸泡根部4～6min，再移栽到水浸透的腐殖质土壤上。
所述的消毒是采用质量浓度0.1％的升汞水溶液消毒3～5次，每次10～120s。
所述的消毒是采用质量浓度0.1％的升汞水溶液消毒4次，第一次15s，第二次30s，第三次60s，第四次120s。
所述的冲洗是采用无菌水冲洗7～10次，每次3～6min。
所述的预培养基为MS+2,4-D 0.3mg/L，pH6.5。
所述的增殖培养基为MS+6-BA 0.8mg/L+NAA 1.5mg/L，pH5.8。
所述的生根培养基为1/2MS+2,4-D 0.8mg/L，pH7.0。
所述的多菌灵溶液的质量浓度为0.1％。
实施例1
选取饱满有光泽的臭参种子，经消毒、冲洗后接种于MS培养基上，置于温度20～25℃、光照度1500～1800Lx光照培养15天得到臭参幼苗；
截取臭参幼苗基部1～2cm带节，接种到预培养基MS+2,4-D 0.1mg/L中培养15天后，再转入增殖培养基MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 1.0mg/L中培养30天，再转入生根培养基1/2MS+2,4-D 0.5mg/L中培养15天得到生根苗；
将生根苗置于自然光下闭瓶炼苗5天，然后打开瓶盖炼苗2天，取出生根苗，小心洗净残余培养基后用多菌灵溶液浸泡根部4min，再移栽到水浸透的腐殖质土壤上。
实施例2
选取饱满有光泽的臭参种子，经消毒、冲洗后接种于MS培养基上，置于温度25～30℃、光照度1800～2000Lx光照培养5天得到臭参幼苗；
截取臭参幼苗基部1～2cm带节，接种到预培养基MS+2,4-D 0.5mg/L中培养10天后，再转入增殖培养基MS+6-BA 1.0mg/L+NAA2.0mg/L中培养10天，再转入生根培养基1/2MS+2,4-D 1.0mg/L中培养10天得到生根苗；
将生根苗置于自然光下闭瓶炼苗8天，然后打开瓶盖炼苗4天，取出生根苗，小心洗净残余培养基后用多菌灵溶液浸泡根部6min，再移栽到水浸透的腐殖质土壤上。
实施例3
选取饱满有光泽的臭参种子，经消毒、冲洗后接种于MS培养基上，置于温度25～30℃、光照度1800～2000Lx光照培养10天得到臭参幼苗；
截取臭参幼苗基部1～2cm带节，接种到预培养基MS+2,4-D 0.3mg/L中培养12天后，再转入增殖培养基MS+6-BA 0.8mg/L+NAA 1.5mg/L中培养20天，再转入生根培养基1/2MS+2,4-D 0.8mg/L中培养12天得到生根苗；
将生根苗置于自然光下闭瓶炼苗6天，然后打开瓶盖炼苗3天，取出生根苗，小心洗净残余培养基后用多菌灵溶液浸泡根部5min，再移栽到水浸透的腐殖质土壤上。

Claims (8)

1.一种提高臭参种子无菌萌发率和直接器官发生的高效方法，其特征是：所述的提高臭参种子无菌萌发率和直接器官发生的高效方法包括以下步骤：
1)选取饱满有光泽的臭参种子，经消毒、冲洗后接种于MS培养基上，置于温度20～30℃、光照度1500～2000Lx光照培养5～15天得到臭参幼苗；
2)截取臭参幼苗基部1～2cm带节，接种到预培养基MS+2,4-D 0.1～0.5mg/L中培养10～15天后，再转入增殖培养基MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA 1.0～2.0mg/L中培养10～30天，再转入生根培养基1/2MS+2,4-D 0.5～1.0mg/L中培养10～15天得到生根苗；
3)将生根苗置于自然光下闭瓶炼苗5～8天，然后打开瓶盖炼苗2～4天，取出生根苗，小心洗净残余培养基后用多菌灵溶液浸泡根部4～6min，再移栽到水浸透的腐殖质土壤上。
2.根据权利要求1所述的提高臭参种子无菌萌发率和直接器官的高效方法，其特征是：所述的消毒是采用质量浓度0.1％的升汞水溶液消毒3～5次，每次10～120s。
3.根据权利要求1或2所述的提高臭参种子无菌萌发率和直接器官的高效方法，其特征是：所述的消毒是采用质量浓度0.1％的升汞水溶液消毒4次，第一次15s，第二次30s，第三次60s，第四次120s。
4.根据权利要求1所述的提高臭参种子无菌萌发率和直接器官的高效方法，其特征是：所述的冲洗是采用无菌水冲洗7～10次，每次3～6min。
5.根据权利要求1所述的提高臭参种子无菌萌发率和直接器官的高效方法，其特征是：所述的预培养基为MS+2,4-D 0.3mg/L，pH6.5。
6.根据权利要求1所述的提高臭参种子无菌萌发率和直接器官的高效方法，其特征是：所述的增殖培养基为MS+6-BA 0.8mg/L+NAA 1.5mg/L，pH5.8。
7.根据权利要求1所述的提高臭参种子无菌萌发率和直接器官的高效方法，其特征是：所述的生根培养基为1/2MS+2,4-D 0.8mg/L，pH7.0。
8.根据权利要求1所述的提高臭参种子无菌萌发率和直接器官的高效方法，其特征是：所述的多菌灵溶液的质量浓度为0.1％。
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