CN109136109A - 一种出芽短梗霉菌株及其应用 - Google Patents
一种出芽短梗霉菌株及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109136109A CN109136109A CN201811118435.0A CN201811118435A CN109136109A CN 109136109 A CN109136109 A CN 109136109A CN 201811118435 A CN201811118435 A CN 201811118435A CN 109136109 A CN109136109 A CN 109136109A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- aureobasidium pullulans
- bacterial strain
- liamocin
- application
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000223678 Aureobasidium pullulans Species 0.000 title claims abstract description 43
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 38
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 52
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 52
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 11
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 38
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 38
- 229910052564 epsomite Inorganic materials 0.000 claims description 20
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 20
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 19
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 18
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 18
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 15
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 15
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 14
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 14
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 12
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 12
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 12
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 12
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 11
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 11
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 6
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 4
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 claims description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 2
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-LECHCGJUSA-N alpha-D-xylose Chemical compound O[C@@H]1CO[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-LECHCGJUSA-N 0.000 claims 1
- 229960003487 xylose Drugs 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 2
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 abstract 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000000295 fuel oil Substances 0.000 description 2
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- WQZRAWSNEARGPQ-UHFFFAOYSA-N 3,5-dihydroxydecanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)CC(O)CC(O)=O WQZRAWSNEARGPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 1
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000692870 Inachis io Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N Sorbitan monooleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N 0.000 description 1
- 150000004703 alkoxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 210000001647 gastrula Anatomy 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 polyol ester Chemical class 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种出芽短梗霉菌株及其应用,属于发酵工程与生物技术领域。该出芽短梗霉菌株的保藏名称为:出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)ZK‑502,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏日期:2018年08月20日,保藏编号:CGMCC No.16326。本发明提供的芽短梗霉菌株能高效地发酵产生liamocin,并且该出芽短梗霉菌株不产黑色素,发酵液为浅粉色至淡黄色,有利于简化后期处理工艺。本发明提供的方法简单易行,所用的原料成分简单,liamocin的产量可以达到8~10g/L,有望实现liamocin的商业化、大规模生产;所得的liamocin产品,溶于水,在医药、化妆品、食品中具有广泛应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种出芽短梗霉菌株及其应用,属于发酵工程与生物技术领域。
背景技术
liamocin是出芽短梗霉的新型活性产物之一,由于其密度比水重,静止时会沉淀在底部,故又称为重油(heavy oil)。liamocin目前泛指出芽短梗霉产生的一类比水重的多元醇酯类的化合物,该多元醇酯头部基团多为甘露醇或阿拉伯醇,尾部为3,5-二羟基癸酸的三联体或四联体。
liamocin具有椰子香气,密度比水大,油的颜色由淡黄色到孔雀石色颜色不等,且大部分的油具有荧光性,微溶于水,易溶于有机溶剂。现已证明该多元醇酯具有抑制哺乳动物癌细胞增增殖、抑菌、表面活性剂等多种生物活性,具有广泛的应用前景。
尽管早在20世纪90年代就有学者发现了liamocin。但liamocin的生物合成途径十分复杂,liamocin的生物合成机理尚未研究清楚。以Kurosawa T及Price NPJ为代表的学者对liamocin结构,性能和应用做了较深入的研究,但liamocin的发酵方面的研究较少,目前现有技术中liamocin的产量普遍不高。
本申请的发明人从浙江省杭州市小和山地区植物花蕊表面筛选获得一株高产liamocin的出芽短梗霉菌株。
发明内容
本发明的目的在于提供一株高产liamocin的出芽短梗霉菌株。
本发明的另一个目的在于提供该出芽短梗霉菌株在发酵生产liamocin中的应用。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下:
一种出芽短梗霉菌株,所述出芽短梗霉菌株的保藏名称为:出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)ZK-502,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏日期:2018年08月20日,保藏编号:CGMCC No.16326。
本发明出芽短梗霉菌株的菌落形态特征:在PDA培养基培养,菌落最初乳白色,后变为淡粉色,菌落质地粘稠湿润,菌落边缘呈菌丝状。主要为酵母样形态,细胞椭圆形,大小均匀,可产生芽生孢子、厚壁孢子、肿胀孢子和菌丝。
所述出芽短梗霉菌株在发酵生产liamocin中的应用,具体步骤如下:
S1、菌种活化:将斜面菌种转接至PDA斜面培养基中,于25~28℃恒温培养箱培养2~3d;
S2、种子培养:选取步骤S1中培养良好的斜面菌种,挑取2~3环接种于种子培养基中,于摇床25~28℃,150~200r/min培养2~3d;
S3、发酵培养:分为两个阶段
(1)将步骤S2中培养好的种子液以6~10%的比例接种至发酵培养基(一)中,于摇床25~28℃,150~200r/min培养2~3d;
(2)将步骤(1)中培养结束的培养液在无菌条件下7000~8000r/min离心5~10min,收取细胞转移至发酵培养基(二)中,于摇床25~28℃,150~200r/min继续培养5~7d;
S4、liamocin的提取:在经步骤S3中步骤(2)发酵后的发酵液中加入适量有机溶剂,对发酵产生的liamocin进行萃取,然后旋转蒸发有机溶剂、干燥除去水分,获得liamocin。
作为优选,所述步骤S2中种子培养基的组成为:5%葡萄糖、0.2%酵母提取物、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O和0.1%NaCl。
作为优选,所述步骤S3中发酵培养基(一)的组成为:5~7%碳源、0.1~0.2%有机氮源、0.5%K2HPO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O、0.1%NaCl和0.1~0.2%吐温80。
作为优选,所述步骤S3中发酵培养基(二)的组成为:5~7%碳源、0.1~0.2无机氮源、0.5%K2HPO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O、0.1%NaCl和0.1~0.2%吐温80。
作为优选,所述碳源为葡萄糖、木糖、蔗糖或麦芽糖。
作为优选,所述有机氮源为酵母提取物或蛋白胨等。
作为优选,所述无机氮源为NH4NO3或NH4(SO4)2等。
作为优选,所述步骤S5中有机溶剂为:乙酸乙酯或甲基乙基酮。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
(1)本发明的出芽短梗霉菌株(编号为CGMCC No.16132),能高效地发酵产生liamocin。
(2)本发明的出芽短梗霉菌株不产黑色素,发酵液为浅粉色至淡黄色,有利于简化后期处理工艺。
(3)本发明提供的方法简单易行,所用的原料成分简单,liamocin的产量可以达到8~10g/L,有望实现liamocin的商业化、大规模生产。
(4)本发明所得的liamocin产品,提取方法简单,产品溶于水,在医药、化妆品、食品中具有广泛应用前景。
具体实施方式
下面通过具体实施例,对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
1、菌株的分离筛选
步骤1:选取植物的花蕊将其用剪刀剪碎,取适量放入装有5ml富集培养基的小试管中,于摇床28℃、180r/min培养2~4d。
所述富集培养基的组成为:10%甘露醇、0.1%NaNO3、0.05%KH2PO4、0.02%MgSO4·7H2O、0.2%柠檬酸和0.02%司班80。
步骤2:取富集培养中培养液变浑浊的样品100μL均匀涂布于PDA平板培养基表面,于恒温培养箱中28℃培养3~4d,筛选出与出芽短梗霉菌落相似的单菌落,然后将该菌落用平板划线法进行分离,直至获得菌落形态一致的单菌落。提取单菌落接种于PDA斜面培养基上进行保存。
所述PDA平板/斜面培养基的组成:20%马铃薯(去皮),2%葡萄糖和1.5~2%琼脂。
步骤3:选取上述新鲜斜面菌株接种到发酵培养基中进行发酵培养,筛选出liamocin的高产菌株。
所述发酵培养基的组成:5%葡萄糖、0.06%蛋白胨、0.04%酵母提取物、0.5%K2HPO4、0.04%MgSO4·7H2O和0.1%NaCl。
经上述分离路线从植物花蕊中得到一株编号为ZK-502菌株,证明该菌株具有发酵高产liamocin的性能。通过将本发明菌株的ITS序列和其他真菌的对比,结果证实本发明的菌株为出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)ZK-502。
2、菌株的鉴定
菌落形态特征为:PDA培养基培养,菌落最初乳白色,后变为淡粉色。菌落质地粘稠湿润,菌落边缘呈菌丝状。菌体主要为酵母样形态,细胞椭圆形,大小均匀,可产生芽生孢子、厚壁孢子、肿胀孢子和菌丝。
3、本发明的出芽短梗霉菌株用于发酵产liamocin的方法
以下实施例中的种子培养基为:装液量为250mL或300mL三角瓶中50mL种子培养基。
发酵培养基为:装液量为250mL或300mL三角瓶中50mL发酵培养基。
实施例1
本发明的出芽短梗霉菌株用于发酵产生liamocin的方法如下:
S1、菌种活化:将斜面菌转接于PDA斜面培养基中,于26℃恒温培养箱培养2d;
S2、种子培养:选取培养良好的斜面菌种挑取3环接种于50mL的种子培养基中,于摇床26℃,160r/min培养2d;
其中,种子培养基的组成为:5%葡萄糖、0.2%酵母提取物、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O和0.1%NaCl。
S3、发酵培养:分为两个阶段
(1)将步骤S2中培养好的种子液以6%的比例接种至发酵培养基(一)中,于摇床26℃,160r/min培养3d;
其中,发酵培养基(一)的组成为:5%葡萄糖、0.2%酵母提取物、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O、0.1%NaCl和0.1%吐温80。
(2)将步骤(1)中培养结束的培养液在无菌条件下8000r/min离心10min,收取细胞转移至发酵培养基(二)中,于摇床26℃,180r/min继续培养7d;
其中,发酵培养基(二)的组成为:5%葡萄糖、0.2%NH4NO3、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O、0.1%NaCl和0.1%吐温80。
S4、liamocin的提取:取等体积的甲基乙基酮加入到将上述步骤S3发酵后的发酵液中,使发酵液中所产的liamocin油滴充分溶于有机溶剂中,倒入分液漏斗中分离,然后用旋转蒸发器蒸发掉有机溶剂,气流干燥除去水分,得到liamocin。经测定,liamocin产量达到9.06g/L。
实施例2
本发明的出芽短梗霉菌株用于发酵产生liamocin的方法如下:
S1、菌种活化:将斜面菌转接于PDA斜面培养基中,于28℃恒温培养箱培养2.5d;
S2、种子培养:选取步骤S1中培养良好的斜面菌种,挑取2环接种于50mL种子培养基中,于摇床26℃,160r/min培养2d;
其中,种子培养基的组成为:5%葡萄糖、0.2%酵母提取物、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O和0.1%NaCl。
S3、发酵培养:分为两个阶段:
(1)将步骤S2中培养好的种子液以10%的比例接种至发酵培养基(一)中,于摇床28℃,200r/min培养3d;
其中,发酵培养基(一)的组成为:5%木糖、0.2%酵母提取物、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O、0.1%NaCl和0.1%吐温80。
(2)将步骤(1)中培养结束的培养液在无菌条件下7000r/min离心10min,收取细胞转移至发酵培养基(二)中,于摇床28℃,200r/min继续培养7d;
其中,发酵培养基(二)的组成为:5%木糖、0.2%NH4NO3、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O、0.1%NaCl和0.1%吐温80。
S4、liamocin的提取:取等体积的乙酸乙酯加入到将上述步骤S3发酵后的发酵液中,使发酵液中所产的liamocin油滴充分溶于有机溶剂中,倒入分液漏斗分离,然后用旋转蒸发器蒸发掉有机溶剂,气流干燥除去水分,得到liamocin。经测定,liamocin产量达到8.54g/L。
实施例3
本发明的出芽短梗霉菌株用于发酵产生liamocin的方法如下:
S1、菌种活化:将斜面菌转接于PDA斜面培养基中,于26℃恒温培养箱培养2d;
S2、种子培养:选取步骤S1中培养良好的斜面菌种,挑取3环接种于种子培养基中,于摇床28℃,200r/min培养2d;
其中,种子培养基的组成为:5%葡萄糖、0.2%酵母提取物、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O和0.1%NaCl。
S3、发酵培养:分为两个阶段
(1)将步骤S2中培养好的种子液以8%的比例接种至发酵培养基(一)中,于摇床28℃,180r/min培养3d;
其中,发酵培养基(一)的组成为:7%麦芽糖、0.2%蛋白胨、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O、0.1%NaCl和0.1%吐温80。
(2)将步骤(1)中培养结束的培养液在无菌条件下8000r/min离心10min,收取细胞转移至发酵培养基(二)中,于摇床28℃,150r/min继续培养7d;
其中,发酵培养基(二)的组成为:7%麦芽糖、0.2%NH4(SO4)2、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O、0.1%NaCl和0.1%吐温80。
S4、liamocin的提取:取等体积的甲基乙基酮加入到将上述步骤S3发酵后的发酵液中,使发酵液中所产的liamocin油滴充分溶于有机溶剂中,倒入分液漏斗分离,然后用旋转蒸发器蒸发掉有机溶剂,气流干燥除去水分,得到liamocin。经测定,Liamocin产量达到8.38g/L。
实施例4
本发明的出芽短梗霉菌株用于发酵产生liamocin的方法如下:
S1、菌种活化:将斜面菌种转接至PDA斜面培养基中,于26℃恒温培养箱培养2d;
S2、种子培养:选取步骤S1中培养良好的斜面菌种,挑取3环接种于种子培养基中,于摇床28℃,200r/min培养2d;
其中,种子培养基的组成为:5%葡萄糖、0.2%酵母提取物、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O和0.1%NaCl。
S3、发酵培养:分为两个阶段
(1)将步骤S2中培养好的种子液以9%的比例接种至发酵培养基(一)中,于摇床26℃,160r/min培养3d;
其中,发酵培养基(一)的组成为:6%蔗糖、0.2%酵母提取物、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O、0.1%NaCl和0.2%吐温80。
(2)将步骤(1)中培养结束的培养液在无菌条件下7000r/min离心10min,收取细胞体转移至发酵培养基(二)中,于摇床26℃,200r/min继续培养7d;
其中,发酵培养基(二)的组成为:6%蔗糖、0.2%NH4NO3、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O、0.1%NaCl和0.2%吐温80。
S5、liamocin的提取:取等体积的乙酸乙酯加入到将上述步骤S3发酵后的发酵液中,使发酵液中所产的liamocin油滴充分溶于有机溶剂中,倒入分液漏斗分离,然后用旋转蒸发器蒸发掉有机溶剂,气流干燥除去水分,得到liamocin。经测定,liamocin产量达到8.47g/L。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案,并非对本发明作任何形式上的限制,在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
Claims (10)
1.一种出芽短梗霉菌株,其特征在于,所述出芽短梗霉菌株的保藏名称为:出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)ZK-502,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏日期:2018年08月20日,保藏编号:CGMCC No.16326。
2.一种权利要求1所述出芽短梗霉菌株的应用,其特征在于,所述出芽短梗霉菌株在发酵生产liamocin中的应用。
3.根据权利要求2所述出芽短梗霉菌株的应用,其特征在于,包括以下步骤:
S1、菌种活化:将斜面菌种转接至PDA斜面培养基中,于25~28℃恒温培养箱培养2~3d;
S2、种子培养:选取步骤S1中培养良好的斜面菌种,挑取2~3环接种于种子培养基中,于摇床25~28℃,150~200r/min培养2~3d;
S3、发酵培养:分为两个阶段:
(1)将步骤S2中培养好的种子液以6~10%的比例接种至发酵培养基(一)中,于摇床25~28℃,150~200r/min培养2~3d;
(2)将步骤(1)中培养结束后的培养液在无菌条件下7000~8000r/min离心5~10min,收取细胞转移至发酵培养基(二)中,于摇床25~28℃,150~200r/min继续培养5~7d;
S4、liamocin的提取:在经步骤S3中步骤(2)发酵后的发酵液中加入适量有机溶剂,对发酵产生的liamocin进行萃取,然后旋转蒸发有机溶剂、干燥除去水分,获得liamocin。
4.根据权利要求3所述出芽短梗霉菌株的应用,其特征在于,所述步骤S2中种子培养基的组成为:5%葡萄糖、0.2%酵母提取物、0.5%KH2PO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O和0.1%NaCl。
5.根据权利要求3所述出芽短梗霉菌株的应用,其特征在于,所述步骤S3中发酵培养基(一)的组成为:5~7%碳源、0.1~0.2%有机氮源、0.5%K2HPO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O、0.1%NaCl和0.1~0.2%吐温80。
6.根据权利要求3所述出芽短梗霉菌株的应用,其特征在于,所述步骤S3中发酵培养基(二)的组成为:5~7%碳源、0.1~0.2无机氮源、0.5%K2HPO4、0.04%MgSO4·7H2O、0.04%MnSO4·H2O、0.1%NaCl和0.1~0.2%吐温80。
7.根据权利要求5或6所述出芽短梗霉菌株的应用,其特征在于,所述碳源为葡萄糖、木糖、蔗糖或麦芽糖。
8.根据权利要求5所述出芽短梗霉菌株的应用,其特征在于,所述有机氮源为酵母提取物或蛋白胨。
9.根据权利要求6所述出芽短梗霉菌株的应用,其特征在于,所述无机氮源为NH4NO3或NH4(SO4)2。
10.根据权利要求3所述出芽短梗霉菌株的应用,其特征在于,所述步骤S4中有机溶剂为:乙酸乙酯或甲基乙基酮。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811118435.0A CN109136109B (zh) | 2018-09-25 | 2018-09-25 | 一种出芽短梗霉菌株及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811118435.0A CN109136109B (zh) | 2018-09-25 | 2018-09-25 | 一种出芽短梗霉菌株及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109136109A true CN109136109A (zh) | 2019-01-04 |
CN109136109B CN109136109B (zh) | 2021-02-26 |
Family
ID=64823764
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201811118435.0A Active CN109136109B (zh) | 2018-09-25 | 2018-09-25 | 一种出芽短梗霉菌株及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109136109B (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110713940A (zh) * | 2019-10-15 | 2020-01-21 | 天津科技大学 | 一种高产重油出芽短梗霉菌株及其构建方法与用途 |
CN111587893A (zh) * | 2019-02-21 | 2020-08-28 | 财团法人食品工业发展研究所 | 普鲁兰短梗霉发酵产物及其制法及减少真菌病害的微生物制剂与减少农产品真菌病害的方法 |
CN113774095A (zh) * | 2021-10-25 | 2021-12-10 | 长春工业大学 | 一种提高出芽短梗霉菌株发酵产重油能力的方法 |
CN114015579A (zh) * | 2021-08-24 | 2022-02-08 | 天津科技大学 | 一种高产β-葡聚糖的出芽短梗霉及其应用 |
CN115287247A (zh) * | 2022-09-06 | 2022-11-04 | 长春工业大学 | 一种适用于出芽短梗霉菌株高温驯化与筛选的方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2015142736A1 (en) * | 2014-03-20 | 2015-09-24 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Novel oils having antibacterial activity |
US20170016039A1 (en) * | 2015-07-17 | 2017-01-19 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Methods and strains for producing bioproducts in aureobasidium pullulans |
CN106434394A (zh) * | 2016-12-08 | 2017-02-22 | 山东省药学科学院 | 出芽短梗霉alb1基因敲除突变株及其应用 |
-
2018
- 2018-09-25 CN CN201811118435.0A patent/CN109136109B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2015142736A1 (en) * | 2014-03-20 | 2015-09-24 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Novel oils having antibacterial activity |
US20170016039A1 (en) * | 2015-07-17 | 2017-01-19 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Methods and strains for producing bioproducts in aureobasidium pullulans |
CN106434394A (zh) * | 2016-12-08 | 2017-02-22 | 山东省药学科学院 | 出芽短梗霉alb1基因敲除突变株及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
DAVID MACHAKU等: ""出芽短梗霉发酵产liamocin的培养条件研究"", 《浙江科技学院学报》 * |
JONG SHIK KIM ET AL.: ""A Novel Biosurfactant Produced by Aureobasidium pullulans L3-GPY from a Tiger Lily Wild Flower, Lilium lancifolium Thunb."", 《PLOS ONE》 * |
KATHARINA MARIA SAUR ET AL.: ""A pH shift induces high-titer liamocin production in Aureobasidium pullulans"", 《APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY》 * |
TIMOTHY D. LEATHERS ET AL.: ""Medium optimization for production of anti-streptococcal liamocins by Aureobasidium pullulans"", 《BIOCATALYSIS AND AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY》 * |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111587893A (zh) * | 2019-02-21 | 2020-08-28 | 财团法人食品工业发展研究所 | 普鲁兰短梗霉发酵产物及其制法及减少真菌病害的微生物制剂与减少农产品真菌病害的方法 |
CN111587893B (zh) * | 2019-02-21 | 2022-03-29 | 财团法人食品工业发展研究所 | 普鲁兰短梗霉发酵产物及其制法及减少真菌病害的微生物制剂与减少农产品真菌病害的方法 |
CN110713940A (zh) * | 2019-10-15 | 2020-01-21 | 天津科技大学 | 一种高产重油出芽短梗霉菌株及其构建方法与用途 |
US11352633B2 (en) | 2019-10-15 | 2022-06-07 | Tianjin University Of Science And Technology | Aureobasidium pullulans strains with high-yield heavy oil and construction method and application thereof |
CN114015579A (zh) * | 2021-08-24 | 2022-02-08 | 天津科技大学 | 一种高产β-葡聚糖的出芽短梗霉及其应用 |
CN114015579B (zh) * | 2021-08-24 | 2023-03-03 | 天津科技大学 | 一种高产β-葡聚糖的出芽短梗霉及其应用 |
CN113774095A (zh) * | 2021-10-25 | 2021-12-10 | 长春工业大学 | 一种提高出芽短梗霉菌株发酵产重油能力的方法 |
CN115287247A (zh) * | 2022-09-06 | 2022-11-04 | 长春工业大学 | 一种适用于出芽短梗霉菌株高温驯化与筛选的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN109136109B (zh) | 2021-02-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109136109A (zh) | 一种出芽短梗霉菌株及其应用 | |
CN103981137B (zh) | 一株拮抗枣缩果病病原菌的菌株及其应用 | |
CN103060204B (zh) | 大量生产普鲁兰多糖的诱变菌株及其培养方法 | |
CN102268385B (zh) | 一种用于发酵生产环磷酸腺苷的节杆菌及其应用 | |
CN109536409A (zh) | 一种抗逆性高且可利用多种碳源的乳酸片球菌菌株及利用该菌株生产乳酸的方法 | |
CN100374545C (zh) | 一株产槐糖脂的拟威克酵母变种及其应用 | |
WO2019062354A1 (zh) | 真菌诱导子、其制备方法及利用该真菌诱导子进行白芨种苗快繁的方法 | |
CN108865949A (zh) | 枯草芽孢杆菌tkm-1及其应用 | |
CN103849581B (zh) | 一种花椒内生短杆菌及其筛选纯化方法和用途 | |
CN101173210A (zh) | 双鼠李糖脂的产生菌筛选及制备方法 | |
CN103614328B (zh) | 一种产2,3-丁二醇的多粘类芽孢杆菌及用途 | |
CN107699556A (zh) | 利用枯草芽孢杆菌制备d‑阿洛酮糖差向异构酶的方法 | |
CN103255067B (zh) | 一株利用木糖高产普鲁兰糖的出芽短梗霉及其应用 | |
CN103451108A (zh) | 一种出芽短梗霉菌of-01菌株及用它制备烟草内源性衍生香料的方法 | |
CN106434466B (zh) | 一种产生天然红色素的赤红球菌及其制备方法与应用 | |
CN105543105B (zh) | 促进大花红景天积累红景天苷的真菌菌株及其应用 | |
CN101974452B (zh) | 一种粘杆菌素高产菌株及其筛选方法 | |
CN101457250B (zh) | 一种微生物细胞生物转化白桦脂醇合成白桦脂酸的方法 | |
CN110591932A (zh) | 一株控制果蔬采后病害的酵母菌ma及其使用方法 | |
CN102533565B (zh) | 产糖苷酶的黑曲霉及其应用于提高虎杖中白藜芦醇含量 | |
CN109294929A (zh) | 一种用于黑茶发酵的冠突散囊菌菌粉的制备方法 | |
CN105647812B (zh) | 一株裂褶菌菌株及其在普洱茶生产中的应用 | |
CN110903994B (zh) | 产高温蛋白酶地衣芽孢杆菌及其应用 | |
CN105316238B (zh) | 一种从红豆杉中培养筛选产紫杉醇菌的方法 | |
CN109824392B (zh) | 一种有机肥及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
TR01 | Transfer of patent right | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20220616 Address after: 313000 Building 2, No. 268, Chuangxin Road, Chengnan Industrial Park, Daochang Township, Wuxing District, Huzhou City, Zhejiang Province Patentee after: Youxian workshop (Zhejiang) Food Co.,Ltd. Address before: 310023 No. 318 stay Road, Xihu District, Zhejiang, Hangzhou Patentee before: ZHEJIANG University OF SCIENCE AND TECHNOLOGY |