CN109097330A - 一种化合物用于促进cik细胞增殖并增强其杀瘤活性的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种化合物用于促进CIK细胞增殖并增强其杀瘤活性的用途。CIK细胞介导的免疫治疗在提高患者治愈率、减少肿瘤复发、改善患者生活质量、延长生存时间方面可起重要的作用，具有良好的应用前景。提高CIK细胞培养效率、增强CIK细胞杀瘤活性成为当前研究所急需解决的问题。本发明可以促进CIK细胞增殖、提高其对肿瘤细胞的杀伤活性。

Description

一种化合物用于促进CIK细胞增殖并增强其杀瘤活性的用途
技术领域
本发明涉及细胞免疫，尤其涉及CIK细胞。
背景技术
CIK细胞介导的免疫治疗在提高患者治愈率、减少肿瘤复发、改善患者生活质量、延长生存时间方面可起重要的作用，具有良好的应用前景。
提高CIK细胞培养效率、增强CIK细胞杀瘤活性成为当前研究所急需解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种化合物用于促进CIK细胞增殖并增强其杀瘤活性的用途。
为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：
17-氧代白羽扇豆碱在制备增强CIK细胞增殖能力的试剂或培养基方面的应用。
17-氧代白羽扇豆碱在增强CIK细胞杀瘤活性方面的应用。
鹰爪豆碱、白羽扇豆碱、13α-羟基白羽扇豆碱、17-氧代白羽扇豆碱、2-硫代鹰爪豆碱、罗默碱对CIK细胞体外培养的影响总结如下：鹰爪豆碱：对CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性均无明显增强；白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；13α-羟基白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；17-氧代白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；2-硫代鹰爪豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；罗默碱：对CIK细胞的增殖能力无明显增强，但可以显著增强CIK细胞的杀瘤活性。结合鹰爪豆碱、白羽扇豆碱、13α-羟基白羽扇豆碱、17-氧代白羽扇豆碱、2-硫代鹰爪豆碱的化学结构可以推测这类生物碱的2位氧杂化或硫杂化对活性至关重要。
附图说明
图1是化合物结构式。
图2是培养12天CIK细胞体外增殖倍数。
图3是培养12天CD3+CD56+表型细胞占比。
图4是培养12天CIK细胞对K562肿瘤细胞的杀伤活性测定结果。
具体实施方式
一、实验材料
鹰爪豆碱(spartein)、白羽扇豆碱(lupanine)、13α-羟基白羽扇豆碱(13α-hydroxy-lupanine)、17-氧代白羽扇豆碱(17-oxo-lupanine)、2-硫代鹰爪豆碱(2-thionosparteine)、罗默碱(roemerine)自制或购买，纯度不低于98％，化学结构式如图1所示。
在无菌条件下，收集健康成年人外周血(肝素抗凝)50ml。淋巴细胞分离液购自北京索莱宝科技有限公司。RPMI-1640培养基和胎牛血清购自Gibco。
二、实验方法
1、核细胞的分离、分组和CIK细胞诱导培养
取肝素抗凝的健康成年人外周血50ml，加入淋巴细胞分离液15ml，2000r/min离心30min，分离单个核细胞。用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基调整细胞浓度为1×106/ml，接种于24孔板，每孔930μl。然后按下述进行实验分组：
细胞因子组：γ干扰素、白细胞介素1α、白细胞介素2、CD3单抗；
细胞因子+生物碱组：用生物碱、γ干扰素、白细胞介素1α、白细胞介素2、CD3单抗；
对照组：只用培养液；
实验组与对照组均设4个复孔。
按分组情况，第1天，细胞因子组、细胞因子+生物碱组加入γ干扰素1000U/ml，细胞因子+生物碱组加入生物碱5μM；培养24h后，细胞因子组、细胞因子+生物碱组加入白细胞介素1α100U/ml、白细胞介素2250U/ml、CD3单抗40ng/ml，细胞因子+生物碱组加入生物碱5μM，继续培养；第4天更换培养基，调整细胞浓度为1×106/ml，细胞因子组、细胞因子+生物碱组补加白细胞介素2250U/ml、CD3单抗40ng/ml，细胞因子+生物碱组补加生物碱5μM；第8天，细胞因子组、细胞因子+生物碱组补加白细胞介素2250U/ml、CD3单抗40ng/ml，细胞因子+生物碱组补加生物碱5μM，继续培养至第12天。
2、细胞表型分析及细胞增殖测定
各组于培养第12天，用台盼蓝拒染法计数细胞，用流式细胞仪检测CIK细胞的比例及细胞表型，并计数CIK细胞总数，每组每次各查4个复孔，计算平均值。
3、肿瘤杀伤力测定
用MTT显色法测定CIK细胞杀瘤活性，各组以培养12天的CIK细胞为效应细胞，以对数生长期K562细胞为靶细胞，效靶比为15:1。杀瘤活性(％)＝(1－效靶细胞组OD值－单独效应细胞组OD值)/单独靶细胞组OD值×100％
4、统计学方法
用SPSS 17.0统计软件进行数据统计，计量资料以均值±标准差表示，进行多组数据计量资料单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计意义。
三、实验结果
1、CIK细胞体外增殖及细胞表型分析
各组培养至第12天时CIK细胞相对于第0天的增殖倍数如表1和图2所示；各组0天和培养至第12天时CD3+CD56+表型细胞的百分比如表1和图3所示。
表1 CIK细胞体外增殖倍数和CD3+CD56+表型细胞占比
2、肿瘤杀伤力测定结果
各组培养至第12天的CIK细胞对K562肿瘤细胞的杀伤活性测定结果如表2和图4所示。
表2 CIK细胞对K562肿瘤细胞的杀伤活性测定结果
杀伤活性/％
对照组 25.97±5.12
细胞因子组 48.25±5.71
细胞因子+鹰爪豆碱组 49.18±5.24
细胞因子+白羽扇豆碱组 72.38±5.68
细胞因子+13α-羟基白羽扇豆碱组 70.67±5.53
细胞因子+17-氧代白羽扇豆碱组 68.85±5.19
细胞因子+2-硫代鹰爪豆碱组 72.19±5.87
细胞因子+罗默碱组 81.95±5.62
鹰爪豆碱、白羽扇豆碱、13α-羟基白羽扇豆碱、17-氧代白羽扇豆碱、2-硫代鹰爪豆碱、罗默碱对CIK细胞体外培养的影响总结如下：
鹰爪豆碱：对CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性均无明显增强；
白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；
13α-羟基白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；
17-氧代白羽扇豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；
2-硫代鹰爪豆碱：显著增强CIK细胞的增殖能力和杀瘤活性；
罗默碱：对CIK细胞的增殖能力无明显增强，但可以显著增强CIK细胞的杀瘤活性。
结合鹰爪豆碱、白羽扇豆碱、13α-羟基白羽扇豆碱、17-氧代白羽扇豆碱、2-硫代鹰爪豆碱的化学结构可以推测这类生物碱的2位氧杂化或硫杂化对活性至关重要。

Claims (2)

1.17-氧代白羽扇豆碱在制备增强CIK细胞增殖能力的试剂或培养基方面的应用。
2.17-氧代白羽扇豆碱在增强CIK细胞杀瘤活性方面的应用。
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