CN109096364A - 一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法，具体包括以下步骤：S1、制液：首先将待进行分离纯化的血浆倒入量杯内，量取血浆50ml，并将所有的血浆均按照50ml单位分成多组，再向血浆溶液中添加50ml可溶性无机盐，搅拌20‑30min直至搅拌均匀，从而可制得多组血浆盐液,涉及血浆蛋白质纯化技术领域。该血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法，可实现对血浆进行多组分离纯化，并且达到了对血浆进行两次洗脱的目的，从而大大增强了分离和纯化效果，实现了将将血浆中的功能性蛋白进行既快速又高效的分离和纯化，可实现将功能性蛋白分离的纯度提取到较高程度，达到了方便人们纯化功能性蛋白的目的，从而大大方便了人们使用功能性蛋白。
Description
技术领域
本发明涉及血浆蛋白质纯化技术领域，具体为一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法。
背景技术
蛋白质是一种大分子物质，并且不同蛋白质的分子大小不同，因此可以利用一些较简单的方法使蛋白质和小分子物质分开，并使蛋白质混合物也得到分离，根据蛋白质分子大小不同进行分离的方法主要有透析、超滤、离心和凝胶过滤等，透析和超滤是分离蛋白质时常用的方法，透析是将待分离的混合物放入半透膜制成的透析袋中，再浸入透析液进行分离，超滤是利用离心力或压力强行使水和其它小分子通过半透膜，而蛋白质被截留在半透膜上的过程，这两种方法都可以将蛋白质大分子与以无机盐为主的小分子分开，它们经常和盐析、盐溶方法联合使用，在进行盐析或盐溶后可以利用这两种方法除去引入的无机盐，由于超滤过程中，滤膜表面容易被吸附的蛋白质堵塞，以致超滤速度减慢，截流物质的分子量也越来越小，所以在使用超滤方法时要选择合适的滤膜，也可以选择切向流过滤得到更理想的效果。
目前对血浆中的功能性蛋白质进行分离纯化方式分离和纯化效果较差，不能实现将将血浆中的功能性蛋白进行既快速又高效的分离和纯化，不能将功能性蛋白分离的纯度提取到较高程度，无法达到方便人们纯化功能性蛋白的目的，从而给人们使用功能性蛋白带来了极大的不便。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法，解决了现有的对血浆中的功能性蛋白质进行分离纯化方式分离和纯化效果较差，不能实现将将血浆中的功能性蛋白进行既快速又高效的分离和纯化，不能将功能性蛋白分离的纯度提取到较高程度，无法达到方便人们纯化功能性蛋白的目的，从而给人们使用功能性蛋白带来了极大不便的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法，具体包括以下步骤：
S1、制液：首先将待进行分离纯化的血浆倒入量杯内，量取血浆50ml，并将所有的血浆均按照50ml单位分成多组，再向血浆溶液中添加50ml可溶性无机盐，搅拌20-30min直至搅拌均匀，从而可制得多组血浆盐液；
S2、第一次洗脱：先选择相应的离心机，将第一过滤组件安装在离心机内，再将S1制得的一组血浆盐液倒入第一过滤组件内，并将第一洗脱液倒入第一过滤间内，然后启动离心机开始工作，进行切向流过滤20-30min，从而完成第一次梯度洗脱，可得到混合液；
S3、馏分透析：将S2中制得的混合液倒入半透膜制成的透析袋中，再浸入透析液进行分离即可得到功能性蛋白溶液；
S4、第二次洗脱：先将第一过滤组件从离心机中取出，再将第二过滤组件安装在离心机内，然后将S3得到的功能性蛋白溶液倒入第二过滤组件内，并将第二洗脱液倒入第二过滤组件内进行第二次洗脱，可得到更高纯度的功能性蛋白溶液；
S5、脱盐处理：将S4中得到的高纯度的功能性蛋白溶液倒入烧杯内，先补加蒸馏水对溶液进行稀释，然后再浓缩至起始体积，重复该操作，直到回流溶液内的样品达到所需的离子强度，即可完成对高纯度的功能性蛋白溶液的脱盐操作；
S6、干燥保存：将浓缩的白蛋白溶液进行喷雾干燥，干燥后样品真空低温保存。
优选的，所述步骤S5中洗滤过程中，定时测量回流液的电导率，以监测脱盐进程。
优选的，所述步骤S2和步骤S4中的洗脱循环流速400L/h.跨膜压(TMP)2.0bar.温度<25C，并通过KF Comm软件记录处理过程中滤液质量以及流速的变化。
优选的，所述步骤S1中可溶性无机盐为磷酸盐、碳酸盐、硫酸盐、卤化物、柠檬酸盐的混合物。
(三)有益效果
本发明提供了一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法。具备以下有益效果：该血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法，具体包括以下步骤：S1、制液：首先将待进行分离纯化的血浆倒入量杯内，量取血浆50ml，并将所有的血浆均按照50ml单位分成多组，S2、第一次洗脱：先选择相应的离心机，将第一过滤组件安装在离心机内，再将S1制得的一组血浆盐液倒入第一过滤组件内，S3、馏分透析：将S2中制得的混合液倒入半透膜制成的透析袋中，再浸入透析液进行分离即可得到功能性蛋白溶液，S4、第二次洗脱：先将第一过滤组件从离心机中取出，再将第二过滤组件安装在离心机内，S5、脱盐处理：将S4中得到的高纯度的功能性蛋白溶液倒入烧杯内，先补加蒸馏水对溶液进行稀释，S6、干燥保存：将浓缩的白蛋白溶液进行喷雾干燥，干燥后样品真空低温保存，可实现对血浆进行多组分离纯化，并且达到了对血浆进行两次洗脱的目的，从而大大增强了分离和纯化效果，实现了将将血浆中的功能性蛋白进行既快速又高效的分离和纯化，可实现将功能性蛋白分离的纯度提取到较高程度，很好的达到了方便人们纯化功能性蛋白的目的，从而大大方便了人们使用功能性蛋白。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例提供一种技术方案：一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法,具体包括以下步骤：
S1、制液：首先将待进行分离纯化的血浆倒入量杯内，量取血浆50ml，并将所有的血浆均按照50ml单位分成多组，再向血浆溶液中添加50ml可溶性无机盐，搅拌20-30min直至搅拌均匀，从而可制得多组血浆盐液；
S2、第一次洗脱：先选择相应的离心机，将第一过滤组件安装在离心机内，再将S1制得的一组血浆盐液倒入第一过滤组件内，并将第一洗脱液倒入第一过滤间内，然后启动离心机开始工作，进行切向流过滤20-30min，从而完成第一次梯度洗脱，可得到混合液；
S3、馏分透析：将S2中制得的混合液倒入半透膜制成的透析袋中，再浸入透析液进行分离即可得到功能性蛋白溶液；
S4、第二次洗脱：先将第一过滤组件从离心机中取出，再将第二过滤组件安装在离心机内，然后将S3得到的功能性蛋白溶液倒入第二过滤组件内，并将第二洗脱液倒入第二过滤组件内进行第二次洗脱，可得到更高纯度的功能性蛋白溶液；
S5、脱盐处理：将S4中得到的高纯度的功能性蛋白溶液倒入烧杯内，先补加蒸馏水对溶液进行稀释，然后再浓缩至起始体积，重复该操作，直到回流溶液内的样品达到所需的离子强度，即可完成对高纯度的功能性蛋白溶液的脱盐操作；
S6、干燥保存：将浓缩的白蛋白溶液进行喷雾干燥，干燥后样品真空低温保存。
本发明中，步骤S5中洗滤过程中，定时测量回流液的电导率，以监测脱盐进程。
本发明中，步骤S2和步骤S4中的洗脱循环流速400L/h.跨膜压(TMP)2.0bar.温度<25C，并通过KF Comm软件记录处理过程中滤液质量以及流速的变化。
本发明中，步骤S1中可溶性无机盐为磷酸盐、碳酸盐、硫酸盐、卤化物、柠檬酸盐的混合物。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (4)
1.一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
S1、制液：首先将待进行分离纯化的血浆倒入量杯内，量取血浆50ml，并将所有的血浆均按照50ml单位分成多组，再向血浆溶液中添加50ml可溶性无机盐，搅拌20-30min直至搅拌均匀，从而可制得多组血浆盐液；
S2、第一次洗脱：先选择相应的离心机，将第一过滤组件安装在离心机内，再将S1制得的一组血浆盐液倒入第一过滤组件内，并将第一洗脱液倒入第一过滤间内，然后启动离心机开始工作，进行切向流过滤20-30min，从而完成第一次梯度洗脱，可得到混合液；
S3、馏分透析：将S2中制得的混合液倒入半透膜制成的透析袋中，再浸入透析液进行分离即可得到功能性蛋白溶液；
S4、第二次洗脱：先将第一过滤组件从离心机中取出，再将第二过滤组件安装在离心机内，然后将S3得到的功能性蛋白溶液倒入第二过滤组件内，并将第二洗脱液倒入第二过滤组件内进行第二次洗脱，可得到更高纯度的功能性蛋白溶液；
S5、脱盐处理：将S4中得到的高纯度的功能性蛋白溶液倒入烧杯内，先补加蒸馏水对溶液进行稀释，然后再浓缩至起始体积，重复该操作，直到回流溶液内的样品达到所需的离子强度，即可完成对高纯度的功能性蛋白溶液的脱盐操作；
S6、干燥保存：将浓缩的白蛋白溶液进行喷雾干燥，干燥后样品真空低温保存。
2.根据权利要求1所述的一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤S5中洗滤过程中，定时测量回流液的电导率，以监测脱盐进程。
3.根据权利要求1所述的一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤S2和步骤S4中的洗脱循环流速400L/h.跨膜压(TMP)2.0bar.温度<25C，并通过KF Comm软件记录处理过程中滤液质量以及流速的变化。
4.根据权利要求1所述的一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤S1中可溶性无机盐为磷酸盐、碳酸盐、硫酸盐、卤化物、柠檬酸盐的混合物。
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