CN108606156A - 一种小麦低聚肽及其工业化生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种小麦低聚肽及其工业化生产方法，其中该小麦低聚肽组成中至少包括肽段AQ、IQ和SQQ。该小麦低聚肽的工业化生产方法，包括如下步骤：采用蛋白酶对谷朊粉实施酶解，得到酶解液；将酶解液进行离心，并依次对离心液进行过滤、大孔吸附树脂纯化、阳离子交换树脂纯化和阴离子交换树脂纯化处理。采用本发明所提供的工业化生产方法，能够保留具有谷氨酰胺补充剂功能的AQ、IQ和SQQ这三种功能性肽段。
Description
技术领域
本发明涉及一种小麦低聚肽及其工业化生产方法，尤其涉及一种具有谷氨酰胺补充剂功能的小麦低聚肽及其工业化生产工艺。
背景技术
小麦低聚肽是从小麦中获取的功能因子，具有天然无毒、价格低廉等特点，并且含有大量二肽、三肽等低聚肽，摄入后可迅速被机体吸收并发挥作用。研究表明，小麦低聚肽能促进胰岛素分泌，抑制胆固醇上升，并且具有ACE抑制作用、免疫调节、抗氧化等多种生物活性，刺激机体淋巴细胞增殖，增强巨噬细胞吞噬功能，提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率等。此外，小麦低聚肽中含有高谷酰胺，能够有效调节神经，也可作肠功能障碍时的特殊营养物质。2012年国家卫生部《关于批准中长链脂肪酸食用油和小麦低聚肽作为新资源食品等的公告》中，批准小麦低聚肽作为新资源食品，确定了小麦低聚肽在食品行业中直接使用的合法地位。
小麦低聚肽一般是以小麦谷朊粉(小麦分离蛋白粉)为原料，经调浆、酶解、分离、提纯、干燥等工艺制得。在目前的生产工艺中，多注重小麦低聚肽中的低聚肽含量，并保留尽可能多的二肽及三肽，比如专利CN104593319A中就记载了一种小麦低聚肽的制备工艺，依次采用非特异性蛋白酶和特异性蛋白酶对小麦谷朊粉进行酶解后，所得酶解液依次经离心、微滤、阳离子交换、纳滤和超滤，制得小麦低聚肽产品。产品中分子量小于1000道尔顿的低聚肽占总蛋白的质量百分比超过90％，并且低聚肽至少包括VN、TFN、QVSQ、HGAQ、GGDNP和GTCGAG，使得该小麦低聚肽能够作为细胞培养基添加剂，可灵活地与多种基础培养基进行复配使用，用于对多种动物细胞进行无血清培养。
但是在小麦低聚肽的生产过程中，为了尽可能的保留较多的二肽、三肽等低聚肽，往往会在酶解液提纯过程中损失一些重要的功能性肽段，比如具有谷氨酰胺补充剂功能的异亮氨酰谷氨酰胺(Ile-Gln，IQ)、丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln，AQ)和丝氨酰谷氨酰谷氨酰胺(Ser-Gln-Gln，SQQ)等，所以最终得到的小麦低聚肽产品中基本检测不到上述功能性肽段。
发明内容
针对现有技术中的上述缺陷，本发明提供一种小麦低聚肽，该小麦低聚肽中保留了丙氨酰谷氨酰胺(AQ)、异亮氨酰谷氨酰胺(IQ)和丝氨酰谷氨酰谷氨酰胺(SQQ)这三个功能性肽段。
本发明还提供上述小麦低聚肽的工业化生产方法，通过实施特定的纯化工艺，使具有谷氨酰胺补充剂功能的AQ、IQ和SQQ这三个功能性肽段得以保留。
本发明首先提供一种小麦低聚肽，该小麦低聚肽组成中至少包括肽段AQ、IQ和SQQ。
具体的，本发明所提供的小麦低聚肽中，基于小麦低聚肽的总质量(干基)，丙氨酰谷氨酰胺(AQ)的含量大于等于0.18％、异亮氨酰谷氨酰胺(IQ)的含量大于等于1.05％、丝氨酰谷氨酰谷氨酰胺(SQQ)的含量大于等于0.25％。
根据本发明提供的小麦低聚肽，其是通过对谷朊粉进行蛋白酶酶解后，再经分离纯化制得的，
其中，该分离纯化依次包括对酶解液实施离心、过滤、大孔吸附树脂纯化、阳离子交换树脂纯化和阴离子交换树脂纯化。
上述蛋白酶具体可以是碱性蛋白酶和中性蛋白酶组合的两步酶解，一般是先采用碱性蛋白酶对谷朊粉进行酶解，酶解结束后再采用中性蛋白酶继续酶解，酶解结束后高温灭酶，然后对得到的酶解液实施后续的分离纯化处理。
在本发明具体实施过程中，是将谷朊粉与水混合，比如将谷朊粉与去离子水按照1：(5-20)的质量比混合调浆，随后加入碱性蛋白酶进行酶解，其中每100g谷朊粉加入的碱性蛋白酶为1.90-2.90AU，然后加入中性蛋白酶进行酶解，其中每100g谷朊粉加入的中性蛋白酶为0.64-0.96AU。
碱性蛋白酶和中性蛋白酶的具体加入量可根据其活力合理调整，比如在本发明具体实施过程中，所使用的碱性蛋白酶购自诺维信(中国)生物技术有限公司，具体为Alcalase 2.4L型碱性蛋白酶，每100g谷朊粉加入约0.9g碱性蛋白酶；所使用的中性蛋白酶购自诺维信(中国)生物技术有限公司，具体为Neutrase 0.8L型中性蛋白酶，每100g谷朊粉加入约0.9g中性蛋白酶。
酶解温度和酶解时间可根据所用碱性蛋白酶和中性蛋白酶的实际情况确定，比如碱性蛋白酶的酶解温度可以控制在50-65℃，并调节pH值为8-10，酶解时间为20min以上，即可实现有效酶解，酶解时间过长不会对特殊肽段产生太大的影响，一般碱性蛋白酶的酶解时间为20-60min，比如30min。中性蛋白酶的酶解温度具体可以控制在50-65℃，酶解时间控制在150min以上，一般可控制在120-240min，比如210min。
酶解完成后，可采用本领域常规手段进行灭酶，比如升温至100℃并维持30min左右。
酶解液中含有部分未能酶解的固体杂质，可通过离心得以去除，在实际工业生产中，一般可采用卧螺离心机(卧式螺旋沉降离心机)去除酶解液中的固体杂质；在中试生产或者小规模生产时，一般可采用台式离心机进行。
经过离心处理后，得到的离心液基本澄清，然后可进一步通过过滤去除其中的大分子物质，一般可采用50-200nm孔径的陶瓷膜实施微滤，随后采用大孔吸附树脂去除非极性氨基酸等物质，并依次经阳离子交换树脂和阴离子交换树脂脱盐并除去游离氨基酸等带电荷物质，经过上述分离提纯，酶解液中的AQ、IQ和SQQ这三个功能性肽段得以保留。
分离提纯后的产物经浓缩和喷雾干燥，即可得到粉末状的小麦低聚肽，即小麦低聚肽粉。
本发明还提供上述小麦低聚肽的工业化生产方法，包括如下步骤：
采用蛋白酶对谷朊粉实施酶解，得到酶解液；
将酶解液进行离心，并依次对离心液实施过滤、大孔吸附树脂纯化、阳离子交换树脂纯化和阴离子交换树脂纯化，并对纯化产物进行干燥。
根据本发明提供的小麦低聚肽的工业化生产方法，在提纯工艺中，离心用于去除酶解液中的固体杂质、过滤能够去除其中的大分子物质、大孔吸附树脂去除非极性氨基酸等物质、阴阳离子交换树脂脱盐及去除游离氨基酸等带电荷物质，从而使AQ、IQ和SQQ这三个功能性肽段得以保留。
本发明对所用的谷朊粉原料不做特别限定，采用目前市场上常用的谷朊粉产品即可，比如河南莲花面粉有限公司生产的谷朊粉，其中的蛋白质含量不低于75％，一般集中在75％-85％。
本发明对具体的酶解工艺不做特别限定，其可以采用本领域制备小麦低聚肽所常用的酶解工艺即可，只要得到的酶解液中含有肽段AQ、IQ和SQQ即可。在本发明具体实施过程中，所采取酶解的具体工艺包括：
将谷朊粉与水混合后，依次加入碱性蛋白酶和中性蛋白酶进行酶解，最后灭酶处理，得到所述酶解液，其中：
谷朊粉与水的质量比为1：(5-20)；每100g谷朊粉加入的碱性蛋白酶和中性蛋白酶分别为1.90-2.90AU和0.64-0.96AU。
具体的，可以首先将谷朊粉加入到反应罐中，按比例加入去离子水调浆，并加入氢氧化钠调整pH至8-10；随后加热升温至50-65℃，并加入碱性蛋白酶进行酶解，酶解完成后，继续加入中性蛋白酶进行酶解；最后灭酶处理，比如升温至100℃灭酶，维持30min左右，获得酶解液。
为去除酶解液中的固体杂质，可首先对酶解液实施离心分离。本发明对所用离心分离的具体手段不做特别限定，比如可采用卧螺离心机或台式离心机对酶解液进行初步的分离提纯。
对离心分离后的酶解液所实施的过滤处理具体可采用孔径为50-200nm的滤膜进行，一般选择50-200nm孔径的陶瓷膜，比如100-200nm孔径的陶瓷膜，进一步如200nm孔径的陶瓷膜。经过过滤后，能够得到较为澄清的酶解液。
过滤后的酶解液可首先经大孔吸附树脂去除其中的非极性氨基酸等物质，一般将过滤后的酶解液以0.5-5mL/min的线性流速通过大孔吸附树脂柱，待紫外检测值达到50mAu时开始收集流出液，待紫外检测值低于100mAu时停止收集流出液。
大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，可以有选择地通过物理吸附酶解液中的非极性氨基酸等物质。大孔吸附树脂一般为白色球状颗粒，粒度为20-60目。在本发明具体实施过程中，为了有效物理吸附酶解液中的非极性氨基酸等物质，使用非极性大孔吸附树脂。
进一步的，为进一步提高分离提纯效果，在上完样品后，继续用去离子水冲洗大孔吸附树脂柱。
经过了大孔吸附树脂分离纯化后的酶解液随后以1-10mL/min的线性流速通过阳离子交换树脂柱，待紫外检测值达到100mAu时开始收集流出液，待紫外检测值低于200mAu时停止收集流出液。
具体的，所用的阳离子交换树脂柱为预平衡好的氢型阳离子交换树脂柱，且所用阳离子交换树脂为食品级阳离子交换树脂，具体为丙烯酸系树脂，其颗粒尺寸在0.5-1.0mm。
进一步的，为进一步提高分离提纯效果，在上完样品后，继续用去离子水冲洗阳离子交换树脂。
经过了阳离子交换树脂纯化的酶解液随后以1-10mL/min的线性流速通过阴离子交换树脂柱，待紫外检测值达到100mAu时开始收集流出液，待紫外检测值低于200mAu时停止收集流出液。
具体的，所用的阴离子交换树脂柱为预平衡好的氢氧型阴离子交换树脂柱，且所用阴离子交换树脂为食品级阴离子交换树脂，具体为丙烯酸系树脂，其颗粒尺寸在0.5-1.0mm。
进一步的，为进一步提高分离提纯效果，在上完样品后，继续用去离子水冲洗阴离子交换树脂。
经过了阴阳离子交换树脂脱盐及除去游离氨基酸等带电荷物质后，所得到的酶解液可以进一步实施干燥处理，得到小麦低聚肽粉；或者在实施干燥处理之前，首先对其进行浓缩处理，以缩短干燥时间和成本。
上述浓缩处理可以采用本领域常规浓缩手段完成，比如蒸发浓缩。在本发明具体实施过程中，是使用三效真空浓缩器将分离提纯后的酶解液浓缩至波美值为20％(采用手持式折光仪快速检测溶液中可溶性固形物的含量，所直接读取的数值即为波美值，以百分比体现)。
上述分离纯化后得到的小麦低聚肽，可采用目前本领域任意可接受的方式进行进一步加工，以满足相应的应用需求，比如可将其进一步干燥后得到小麦低聚肽产品，或称为小麦低聚肽粉。
上述干燥处理可采用本领域常规干燥手段，本发明在此不做特别限定，在本发明具体实施过程中，是采用喷雾干燥方法对纯化产物实施干燥，喷雾干燥条件具体为：进口温度160-180℃，出口温度60-80℃。收集喷雾干燥产物，即得到小麦低聚肽粉。
为鉴定上述小麦低聚肽粉中的AQ、IQ和SQQ，本发明使用分子排阻色谱(SuperdexPeptide 10/30GL,GE Healthcare)对小麦低聚肽进行预分离，利用反相高效液相色谱联合质谱鉴定出其中的3个主要特征性肽段：AQ、IQ、SQQ。
并且，通过采用上述酶解工艺及配合实施分离提纯工艺，所得到的小麦低聚肽中，AQ的含量≥0.18％，甚至可达到0.29％±0.01％；IQ的含量≥1.05％，甚至可达到1.39％±0.07％、SQQ的含量≥0.25％，甚至可达到0.33％±0.01％。
本发明提供的小麦低聚肽，其中含有具有谷氨酰胺补充剂功能的AQ、IQ和SQQ这三种功能性肽段，从而为小麦低聚肽产品提供了更为广泛的应用前景。
本发明提供的小麦低聚肽的工业化生产方法，通过采用特定的分离提纯工艺，使得到的小麦低聚肽中含有具有谷氨酰胺补充剂功能的AQ、IQ和SQQ这三种功能性肽段，其中AQ的含量可达到0.18％以上，甚至可达到0.29％±0.01％；IQ的含量可达到1.05％以上，甚至可达到1.39％±0.07％、SQQ的含量可达到0.25％，甚至可达到0.33％±0.01％，不仅避免了功能性肽段资源的损失，而且拓宽了小麦低聚肽产品的应用范围。
附图说明
图1为本发明实施例中鉴定AQ所用的标样图谱；
图2为本发明实施例中鉴定IQ所用的标样图谱；
图3为本发明实施例中鉴定SQQ所用的标样图谱；
图4为本发明实施例1中制得的小麦低聚肽中AQ含量检测图谱；
图5为本发明实施例1中制得的小麦低聚肽中IQ含量检测图谱；
图6为本发明实施例1中制得的小麦低聚肽中SQQ含量检测图谱；
图7为本发明实施例2中制得的小麦低聚肽中AQ含量检测图谱；
图8为本发明实施例2中制得的小麦低聚肽中IQ含量检测图谱；
图9为本发明实施例2中制得的小麦低聚肽中SQQ含量检测图谱；
图10为本发明实施例3中制得的小麦低聚肽中AQ含量检测图谱；
图11为本发明实施例3中制得的小麦低聚肽中IQ含量检测图谱；
图12为本发明实施例3中制得的小麦低聚肽中SQQ含量检测图谱。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下实施例和对比例中，均利用反相高效液相色谱Inertsil ODS-3(5μm,2.1mm×250mm,GL Science,Tokyo,Japan)联合质谱(LCMS-8040,Shimadzu,Kyoto,Japan)检测小麦低聚肽中的功能肽段：AQ、IQ和SQQ的含量。
以下实施例和对比例中，所用谷朊粉均购自河南莲花面粉有限公司，80型谷朊粉；碱性蛋白酶均购自诺维信(中国)生物技术有限公司，Alcalase 2.4L型碱性蛋白酶；中性蛋白酶均购自诺维信(中国)生物技术有限公司，Neutrase 0.8L型中性蛋白酶。
实施例1
1、小麦低聚肽的制备：
1)将400g谷朊粉加入反应罐中，用5L去离子水调浆，加入NaOH调整pH值为8.0，升温至50℃，加入碱性蛋白酶3.6g，酶解30min后，再加入中性蛋白酶3.6g，继续酶解3.5h，升温至100℃灭酶，维持30min。
2)采用台式离心机对酶解液进行离心处理，收集清液，再采用孔径为200nm的陶瓷膜进行过滤，进一步澄清酶解液。
3)将酶解液以0.5mL/min的线性流速通过预平衡好的非极性大孔吸附树脂柱，待紫外检测值高于50mAu时开始收集流出液，上完样品后继续用去离子水冲洗非极性大孔吸附树脂柱，待紫外检测值低于100mAu时停止收集流出液。
4)将流出液以1mL/min的线性流速通过预平衡好的氢型阳离子交换树脂柱，待紫外检测值高于100mAu时开始收集流出液，上完样品后继续用去离子水冲洗阳离子交换树脂柱，待紫外检测值低于200mAu时停止收集流出液。
5)将收集的流出液以1mL/min的线性流速通过预平衡好的氢氧型阴离子交换树脂柱，待紫外检测值高于100mAu时开始收集，上完样品后继续用去离子水冲洗阳离子交换树脂柱，待紫外检测值低于200mAu时停止收集流出液。
6)用蒸发浓缩系统浓缩流出液至波美值20％停止，然后送入喷雾干燥塔，其中进口温度160℃，出口温度60℃，得到小麦低聚肽产品。
2、小麦低聚肽产品中功能肽段AQ、IQ、SQQ的含量检测：
使用分子排阻色谱(Superdex Peptide 10/30GL,GE Healthcare)对小麦低聚肽进行预分离，利用反相高效液相色谱联合质谱鉴定该小麦低聚肽中是否含有特征性肽段：AQ、IQ、SQQ。
AQ、IQ和SQQ的结构鉴定图谱分别如图1至图3所示(标样)，图1包括AQ(m/z＝218.2)的一级质谱图及其在CE＝-25.0条件下的二级碎片图谱；图2包括IQ(m/z＝260.2)的一级质谱图及其在CE＝-35.0条件下的二级碎片图谱；图3包括SQQ(m/z＝362.2)的一级质谱图及其在CE＝-25.0条件下的二级碎片图谱。
经与标样(图1至图3)进行比对，证实小麦低聚肽中同时存在肽段AQ、IQ和SQQ。说明采用本实施例所提供的方法，使得具有谷氨酰胺补充剂功能的AQ、IQ和SQQ这三个功能性肽段得以保留。
图4至图6分别是本实施例制得的小麦低聚肽产品中AQ、IQ、SQQ的含量检测图谱。经检测，该小麦低聚肽产品中，功能肽段AQ的含量为0.29％±0.01％，IQ的含量为1.39％±0.01％，SQQ的含量为0.33％±0.01％(均以小麦低聚肽产品总质量计，下同)。
实施例2
1、小麦低聚肽的制备：
1)将400g谷朊粉加入反应罐中，用5L去离子水调浆，加入NaOH调整pH值为8.0，升温至50℃，加入碱性蛋白酶3.6g，酶解30min后，再加入中性蛋白酶3.6g，继续酶解3.5h，升温至100℃灭酶，维持30min。
2)采用台式离心机对酶解液进行离心处理，收集清液，再采用孔径为200nm的陶瓷膜进行过滤，进一步澄清酶解液。
3)将酶解液以2.5mL/min的线性流速通过预平衡好的非极性大孔吸附树脂柱，待紫外检测值高于50mAu时开始收集流出液，上完样品后继续用去离子水冲洗非极性大孔吸附树脂柱，待紫外检测值低于100mAu时停止收集流出液。
4)将流出液以5mL/min的线性流速通过预平衡好的氢型阳离子交换树脂柱，待紫外检测值高于100mAu时开始收集流出液，上完样品后继续用去离子水冲洗阳离子交换树脂柱，待紫外检测值低于200mAu时停止收集流出液。
5)将收集的流出液以5mL/min的线性流速通过预平衡好的氢氧型阴离子交换树脂柱，待紫外检测值高于100mAu时开始收集，上完样品后继续用去离子水冲洗阳离子交换树脂柱，待紫外检测值低于200mAu时停止收集流出液。
6)用蒸发浓缩系统浓缩流出液至波美值20％停止，然后送入喷雾干燥塔，其中进口温度180℃，出口温度80℃，得到小麦低聚肽产品。
2、小麦低聚肽产品中功能肽段AQ、IQ、SQQ的含量检测：
参考实施例1中的方法鉴定本实施例中的小麦低聚肽产品中是否含有AQ、IQ、SQQ以及相应含量。图7至图9分别是本实施例制得的小麦低聚肽产品中AQ、IQ和SQQ的含量检测图谱。经检测，该小麦低聚肽产品中同时含有AQ、IQ和SQQ，其中，功能肽段AQ的含量为0.19％±0.01％，IQ的含量为1.24％±0.02％，SQQ的含量为0.30％±0.00％。
实施例3
1、小麦低聚肽的制备：
1)将400g谷朊粉加入反应罐中，用5L去离子水调浆，加入NaOH调整pH值为8.0，升温至50℃，加入碱性蛋白酶3.6g，酶解30min后，再加入中性蛋白酶3.6g，继续酶解3.5h，升温至100℃灭酶，维持30min。
2)采用台式离心机对酶解液进行离心处理，收集清液，再采用孔径为200nm的陶瓷膜进行过滤，进一步澄清酶解液。
3)将酶解液以5mL/min的线性流速通过预平衡好的非极性大孔吸附树脂柱，待紫外检测值高于50mAu时开始收集流出液，上完样品后继续用去离子水冲洗非极性大孔吸附树脂柱，待紫外检测值低于100mAu时停止收集流出液。
4)将流出液以10mL/min的线性流速通过预平衡好的氢型阳离子交换树脂柱，待紫外检测值高于100mAu时开始收集流出液，上完样品后继续用去离子水冲洗阳离子交换树脂柱，待紫外检测值低于200mAu时停止收集流出液。
5)将收集的流出液以10mL/min的线性流速通过预平衡好的氢氧型阴离子交换树脂柱，待紫外检测值高于100mAu时开始收集，上完样品后继续用去离子水冲洗阳离子交换树脂柱，待紫外检测值低于200mAu时停止收集流出液。
6)用蒸发浓缩系统浓缩流出液至波美值20％停止，然后送入喷雾干燥塔，其中进口温度170℃，出口温度70℃，得到小麦低聚肽产品。
2、小麦肽中功能肽段AQ、IQ、SQQ的含量检测：
参考实施例1中的方法鉴定本实施例中的小麦低聚肽产品中是否含有AQ、IQ、SQQ以及相应含量。图10至图12分别是本实施例制得的小麦低聚肽产品中AQ、IQ、SQQ的含量检测图谱。经检测，该小麦低聚肽产品中同时含有AQ、IQ和SQQ，其中，功能肽段AQ的含量为0.21％±0.01％，IQ的含量为1.11％±0.04％，SQQ的含量为0.28％±0.01％。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (10)
1.一种小麦低聚肽，其特征在于，所述小麦低聚肽组成中至少包括肽段AQ、IQ和SQQ。
2.根据权利要求1所述的小麦低聚肽，其特征在于，基于小麦低聚肽的总质量，所述AQ的含量≥0.18％、IQ的含量≥1.05％、SQQ的含量≥0.25％。
3.根据权利要求1或2所述的小麦低聚肽，其特征在于，所述小麦低聚肽是通过对谷朊粉进行蛋白酶酶解后，再经分离纯化制得的，
其中，所述分离纯化依次包括对酶解液实施离心、过滤、大孔吸附树脂纯化、阳离子交换树脂纯化和阴离子交换树脂纯化。
4.一种权利要求1-3任一项所述的小麦低聚肽的工业化生产方法，其特征在于，包括如下步骤：
采用蛋白酶对谷朊粉实施酶解，得到酶解液；
将所述酶解液进行离心，并依次对离心液实施过滤、大孔吸附树脂纯化、阳离子交换树脂纯化和阴离子交换树脂纯化处理。
5.根据权利要求4所述的工业化生产方法，其特征在于，所述酶解步骤包括：
将谷朊粉与水混合后，依次加入碱性蛋白酶和中性蛋白酶进行酶解，并经灭酶处理，得到所述酶解液，其中：
谷朊粉与水的质量比为1：(5-20)；每100g谷朊粉加入的碱性蛋白酶和中性蛋白酶分别为1.90-2.90AU和0.64-0.96AU。
6.根据权利要求4所述的工业化生产方法，其特征在于，所述过滤采用孔径为50-200nm的滤膜进行。
7.根据权利要求4所述的工业化生产方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂分离纯化步骤包括：
将过滤后的酶解液以0.5-5mL/min的线性流速通过大孔吸附树脂柱，待紫外检测值达到50mAu时开始收集流出液，待紫外检测值低于100mAu时停止收集流出液。
8.根据权利要求4所述的工业化生产方法，其特征在于，所述阳离子交换树脂纯化具体包括：
将经大孔吸附树脂分离纯化后的酶解液以1-10mL/min的线性流速通过阳离子交换树脂柱，待紫外检测值达到100mAu时开始收集流出液，待紫外检测值低于200mAu时停止收集流出液。
9.根据权利要求4所述的工业化生产方法，其特征在于，所述阴离子交换树脂纯化具体包括：
将经阳离子交换树脂纯化的酶解液以1-10mL/min的线性流速通过阴离子交换树脂柱，待紫外检测值达到100mAu时开始收集流出液，待紫外检测值低于200mAu时停止收集流出液。
10.根据权利要求4所述的工业化生产方法，其特征在于，还包括对纯化产物实施喷雾干燥处理，喷雾干燥条件为：进口温度160-180℃，出口温度60-80℃。
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| GR01 | Patent grant | ||
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