KR20190028633A - 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법 - Google Patents
일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법을 공개하였는바, 다음의 절차를 포함한다: 어피를 분쇄하고 불순물을 제거한다. 추출물을 저온 교반기에 넣은후 추출물과 무이온수 체적비 1:3 비례에 따라 30분간 교반하여 혼합하고, 10분간 정치시켜 상층 부유물을 제거한후 여과장치에 넣어 흡착 여과를 한다. 여과후의 추출물을 수집하여 1차정제, 2차분해와 3차정제를 실시하고, 동시에 3차정제와 입자 충돌장치를 통해 얻은 나노급 콜라겐에 대한 SGS와 PUNY 품질 검사를 실시하여 제로 에스트론, 제로 클로로마이세틴, 제로 프로게스테론, 제로 살모넬라균, 제로 메틸테스토스테론, 제로 마크로단틴 대사물, 제로 지방, 제로 에스트라디올, 제로 에스트라올에 도달한다. 또한 본 발명은 어피 처리를 통해 얻은 진액을 콜라겐 추출에 사용함으로써 콜라겐의 정제율과 순도를 뚜렷하게 증가할 수 있다. 다시 나노급 콜라겐 정제 설비를 통해 정제한후 나노급 혼합 파우더를 얻고, 마지막으로 입자 충돌장치를 이용한 충돌을 거쳐 균일한 분자량의 나노급 콜라겐을 취득하는데 그 흡수율은 96%에 달한다.
Description
본 발명은 콜라겐 정제 방법에 관한 것으로서, 구체적으로는 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법에 관한 것이다.
콜라겐은 일종 생물성 고분자 물질로서 영문명은 Collagen이며, 동물세포에서 조직을 결합하는 역할을 한다. 바이오 과학 산업에서 제일 핵심적인 원재료 중 하나일 뿐만 아니라 수요량이 아주 막강한 최고의 생물 의학 소재이다. 그 응용 영역은 생물 의학 소재, 화장품, 식품공업, 연구용도 등을 포함한다. 콜라겐은 일종 세포 밖의 단백질로서 3줄기 펩티드사슬이 나선형으로 뒤틀어지면서 형성된 섬유 모양의 단백질이다. 콜라겐은 인체에서 함량이 제일 풍부한 단백질로서 세계 콜라겐의 아버지라 불리는 브랜트(J·Brandt) 박사는: “인체 노화 과정은 바로 콜라겐이 유실되는 과정이다!”고 밝힌 적이 있는바 콜라겐은 몸 전체 단백질의 30% 이상을 차지한다. 콜라겐에는 인체에 필요한 글리신, 프롤린, 하드록시프롤린 등 아미노산을 풍부히 함유되어 있다. 콜라겐은 세포 밖 기질에서 제일 중요한 구성부분이다. 콜라겐은 생물 대분자이고 동물 체결 조직 중의 주요 성분일 뿐만 아니라 포유 동물 체내에서 함량이 제일 많고 분포가 제일 넓은 기능성 단백으로 단백질 총량의 25％-30％를 점한다. 조직의 형성, 성숙, 세포 사이의 정보 전달, 상처 치유, 칼슘화 역할, 혈액 응고와 노화 등과 밀접한 관계가 있다. 콜라겐 펩타이드는 식품, 화장품, 보건품 업계에서 광범위하게 응용되고 있으며 종래 콜라겐 펩타이드 제조 원료는 주로 육지 동물의 골격과 가죽으로부터 추출하였다.
콜라겐은 인체에서 함량이 제일 풍부한 단백질로서 전신 총 단백질 함량의30% 이상을 점한다. 콜라겐에는 인체에 필요한 글리신, 프롤린, 하드록시프롤린 등 아미노산이 풍부히 함유되어 있다. 콜라겐은 세포 밖 기질에서 제일 중요한 구성부분이다. 콜라겐은 피부를 당겨주어 주름을 없애 주고, 보습 효과와 조직 복구, 미백과 기미 약화 등 효능이 있어 줄곧 사람들에 의해 식용되고 있다. 특히 그중 나노급에 도달한 콜라겐은 임상 의료 영역에도 이용되고 있다. 콜라겐은 일반적으로 짐승이나 가축류의 피부에 존재하지만 고품질 콜라겐은 모두 어피에서 추출한 물고기 콜라겐을 사용하는바, 현재 자주 보는 콜라겐 제조 방법은 공법 조건의 영향을 받아 주로 효소분해와 가수분해 두가지 수공법을 사용하고 있다. 하지만 정제 정밀도가 떨어지는데다 정제율도 낮기에 이 두가지 방식으로 추출해낸 콜라겐에는 불순물이 비교적 많아 콜라겐의 품질에 엄중히 영향을 주고 있음은 물론, 그 분자량은 소분자 레벨에 도달하는 정도이다. 소분자 레벨의 콜라겐은 분해후 재흡수율은 30% 좌우에 도달할 수 있다. 고품질 콜라겐 원료는 주로 어피에서 오는데 해양 오염과 더불어 고품질 물고기 콜라겐 원료 공급이 줄어들고 있다. 따라서 일종 흡수율이 높은 콜라겐은 현단계 콜라겐 시장에서 제일 강한 기술 수요를 필요로 하는바, 민용 영역의 수요를 만족해야 하는 것 이외에 더 첨단화와 전문화된 의료 영역의 수요도 만족해야 하는 과제를 떠안고 있다.
본 발명은 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법을 제공하는바 2차 단백질 분해법을 적용하였다. 2차례 막분리를 상호 결합하는 방식을 통해 얻은 콜라겐은 분자량이 작고 인체 대사를 거쳐 소화후 흡수율은 96% 좌우에 도달할 수 있어 보통 소분자 콜라겐의 30% 좌우에 불과한 흡수율에 비해 커다란 제고를 가져올 수 있다. 본 발명은 조작이 용한바 본 발명에 따른 공법으로 어피 처리를 통해 얻은 진액을 콜라겐 추출에 사용함으로써 콜라겐의 정제율과 순도를 크게 높일 수 있다. 정제율은 96%에 달하고 얻은 나노급 콜라겐은 제로 에스트론, 제로 클로로마이세틴, 제로 프로게스테론, 제로 살모넬라균, 제로 메틸테스토스테론, 제로 마크로단틴 대사물, 제로 지방, 제로 에스트라디올, 제로 에스트라올의 품질 레벨에 도달하는 것 이외에, 본 발명의 정제 방식으로 정제한 콜라겐은 추출 재료 사용 효율이 높고, 흡수율이 높으며, 생산 원가 가성비가 높으며, 콜라겐 순도가 좋은 장점이 있어 상술한 배경 기술에서 존재하는 문제를 효과적으로 해결할 수 있다.
상술한 목적을 실현하기 위해 본 발명은 아래의 기술 방안을 제공한다: 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법으로 다음의 절차를 포함한다.
1) 분쇄: 우선 어피에 대해 정밀검사를 실시한다. 즉 항생소 검사, 중금속 잔량 검사, 여성 호르몬 검사와 동물성 독소 잔류물 검사로 나눈다. 다음 어피를 초순수에 넣어 담그고 콜라겐 함유 원료가 얼어서 흐트러진 조직 과립으로 되면 유리막대를 이용하여 풀처럼 걸쭉하게 되도록 골고루 반죽한다. 풀 모양의 조직 과립을 다시 10배 체적의 초순수에 넣은후 조직파쇄기 조작 규정에 따라 3회 호모지네이트로 완전히 부유물로 되게 한다. 조직 과립을 균일하게 파쇄한후 초순수에 넣어 조직의 함량이 25g/l로 되게 한후 골고루 혼합한다. 빙초산을 조직 현탄액에 넣어 용액 농도를 0.5mg/ml로 조절한다. 소화: 펩신을 취한후 0.5M 초산에서 펩신을 용해시켜 10mg/ml의 펩신 용액을 만든 다음 조직 현탄액 0.1mg/ml에 옮긴다. 즉 매 100ml 호모지네이트에 1ml의 펩신 용액을 넣어 골고루 혼합한후 온실에서 7-10일간 소화시킨다.
2) 불순물 제거: 추출물을 저온 교반기에 넣은후 추출물과 무이온수 체적비 1:3 비례에 따라 30분간 교반하여 혼합하고, 10분간 정치시켜 상층 부유물을 제거한후 여과장치에 넣어 흡착 여과를 하여 여과후의 추출물을 수집한다.
3) 1차 분해: 1차 분해는 다음 절차를 포함한다: 절차 2) 중의 추출물과 물을 1:3 비례로 혼합하여 혼합물을 얻고, 온도를 30℃까지 조절하되 온도 pH는 7이다. 고초균, 바실러스 리체니포르미스가 포함된 배양액을 체적비 2:1 비례로 교반하여 5분간 혼합한후 혼합물에 넣는다. 균일한 속도로 교반하되 온도 30℃, pH 7에서 24시간 유지한다. 혼합액을 고속 원심기 중의 원심 탱크에 넣어 15분 동안 원심과정을 거친후 정치하여 10분간 침전시킨다. 상술한 혼합물을 정제하되 순 추출 방법은 막분리법을 적용하고, 3000Da와 1000Da의 한외 여과법을 적용하여 원심과정을 거친후의 상층액을 걸러내서 분리한후 3000Da-1000Da의 콜라겐 펩타이드 성분을 얻은후 진공 여과장치에 넣어 흡인 여과, 건조, 멸균을 한다.
4) 2차 분해: 1차 분해로 획득한 산물과 물을 체적비 60:40 비례로 혼합하여 35℃ 온도에서 30분간 항온 교반을 한다. 콜라겐 원료 중량의 0.5％ 비례에 따라 혼합액에 트립신을 넣고, 콜라겐 원료 중량의 5％ 비례에 따라 폴리에틸렌글리콜을 넣은후 10분간 계속 교반한다. pH값을 7-8로 조절한후 37℃에서 8시간 동안 반응시키고, 가속하여 45℃까지 가열한후 효소 활성을 종결한다. 혼합액을 고속 원심기 중의 원심 탱크에 넣고 15분 동안 원심과정을 거친다. 상술한 혼합물을 정제하되 순 추출 방법은 막분리법을 적용하고, 1000Da의 한외 여과법을 적용하여 원심과정을 거친후의 상층액을 걸러내서 분리한후 1000Da 이하의 콜라겐 펩타이드 성분을 취득한다.
5) 1차 정제: 상술한 절차에서 얻은 1000Da 이하의 콜라겐 펩타이드 성분을 음이온 교환 수지에 넣고, 3-3.5 시간 동안 교반을 거쳐 침전시켜 수지가 원료액의 색소와 비린내를 완전히 흡착하게 한다. 크로마토그래피 칼럼으로 원료액과 수지를 분리시킨다. 이어서 살균처리후 원료액을 한외 여과 분리장치를 통해 여과한후 한외 여과 투석액을 취득한다. 원심 정제: 투석후의 용액을 고속 냉동과 원심과정을 거치고, 마지막으로 미분자를 통해 충돌 공법에 대한 최후의 정제를 하여 얻어낸 침전물이 마지막으로 순화된 콜라겐이다.
6) 2차 정제: 다시 마지막으로 순화한 후의 콜라겐을 일종 나노급 콜라겐 정제 설비(당사 특허설비)를 통해 정제한후 나노급 혼합 파우더를 취득한다.
7) 나노급 혼합원료 충돌 실시: 혼합한 나노급 콜라겐 파우더를 입자 충돌장치에 넣은후 충돌시켜 최종적으로 분자량이 비교적 균일한 나노급 콜라겐을 취득한다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 흡착 여과는 구체적으로 사전에 배합해 놓은 10MNaOH 표준 용액으로 소화액의 pH를 9-9.5까지 조절한후 정치 상태에서 밤을 경과하여 펩신을 불활화한다. pH값 조절: 소화액에 동일한 체적의 초순수를 넣고 농염산으로 pH를 4.0까지 조절한후 2시간 동안 교반한다. 규조토 세척: pH값을 조절한 후의 소화액 체적에 근거하여 15g/L로 규조토를 취한후 규조토를 10m MHCl로 2시간 담그고 초순수로 여러 차례 세척한다. 흡착 여과: 규조토를 소화액에 넣고 골고루 혼합한후 2시간 동안 정치시킨다. 여과기에 여과지를 넣고 여과기와 순환 위생 펌프를 실리콘 튜브로 긴밀히 연결한후 여과기와 순환 위생 펌프의 표준 조작규정에 따라 여과를 하여 규조토를 제거하고, 소화 여과액을 취득한다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 절차 5)에서 정제한후 건조시키되 건조 방법은 냉동건조이고, 건조시간은 24-36시간이다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 초순수의 제조방법은 다음을 포함한다: 1급 담수화 과정과 2급 담수화 과정으로 상술한 1급 담수화 과정에서 열매 매개체는 열매 입구로부터 진입한후 열교환 통로2의 하부 통로를 거쳐 열교환 통로2의 각 열교환 플레이트와 열교환을 한후 열매 출구를 통해 배출되고, 담수화가 필요한 바닷물은 냉수 급수관으로부터 집류 통로1을 거쳐 각각 열교환 통로1로 흘러 들어가며, 바닷물은 열교환 통로1에서 열교환플레이트와 열교관을 한후 초보적 예열을 하고, 코팅 리쿼드 피막형성 장치를 거쳐 열교환 통로1 하부의 열교환 플레이트 표면에서 균일하게 코팅 리쿼드 피막을 형성한후 열매 매개체를 통해 가열된 열교환 플레이트와 함께 가열되면서 수증기는 점차 증발되고, 미증발 농수는 농수 저장공간으로 흘러 들어가 정기적으로 배출된다. 수증기는 아래 개구부와 거품 거르기망과 연결되어 상부의 증기 공간에 집결되고, 비응결 기체는 정기적으로 비응결 기체 배출구를 통해 배출되며, 나머지 수증기는 열교환 통로2의 상부 개구부를 통해 열교환 통로2의 상부 통로로 들어가고, 수증기는 열교환 통로2의 상부 통로에서 열교환 통로2의 플레이트와 열교환을 통해 1급 담수로 응결되어 집류 통로3 내부에 집결된후 정기적으로 1급 담수구를 거쳐 배출된다. 상술한 2급 담수화 과정에서 1급 담수화를 거친 1급 담수는 2급 입수구를 통해 초순수 챔버1과 초순수 챔버2로 들어가고, 동시에 음극 워터 챔버, 양극 워터 챔버와 농수 챔버의 입수구는 1급 담수 시스템의 농수 배출구와 연결된다. 초순수 챔버 내부에서 1급 담수중의 음이온과 양이온 불순물은 음극 전극, 양극 전극, 음이온 막과 양이온 막의 흡착과 선택성 삼투역할 하에 점차적으로 2급 초순수로 순화되어, 정기적으로 초순수 출구를 통해 배출되고, 음극 워터 챔버, 양극 워터 챔버와 농수 챔버의 농수는 정기적으로 각자의 출구를 통해 배출된다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 절차 3) 중 멸균시의 온도는 180-200℃이다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 절차 1) 콜라겐 함유 원료는 물고기 진피 조직이다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 절차 1) 중 유리막대 교반시의 속도는 300r/min이다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 절차 1) 중 유리막대 교반시의 속도는 300r/min이다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 절차 1) 중 입자 충돌장치의 압력은 0.06Mpa이다.
종래 기술에 비해 본 발명의 유익한 효과는: 2차 단백질 분해법 적용을 통한 2차례 막분리를 상호 결합하는 방식은 제조원가가 저렴한 외에 콜라겐 분자량이 작으며 조작이 용이하다. 본 발명에 따른 공법으로 어피 처리를 통해 얻은 진액을 콜라겐 추출에 사용함으로써 콜라겐의 정제율과 순도를 뚜렷하게 증가할 수 있다. 얻은 나노급 콜라겐은 제로 항생소, 제로 중금속 잔량, 제로 여성 호르몬과 제로 동물성 독소 잔류물 목적에 도달할 수 있는바, 소분자 레벨 나노 콜라겐 평균 흡수율 30%와 비교하여 본 정제 방법을 통해 얻은 나노급 콜라겐 흡수율은 96%에 도달할 수 있다.
도 1은 본 발명의 제조 흐름도이다.
이하 도면을 통해 본 발명의 바람직한 실시예에 대해 설명하기로 한다. 이해해야 할 점은 여기서의 묘사한 바람직한 실시예는 단지 본 발명에 대한 설명과 해석에 불과하며 본 발명을 한정하는 것이 아니다.
실시예: 도 1과 같이 본 발명은 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법을 제공하는바, 다음의 절차를 포함한다.
1) 분쇄: 우선 어피에 대해 정밀검사를 실시한다. 즉 항생소 검사, 중금속 잔량 검사, 여성 호르몬 검사와 동물성 독소 잔류물 검사로 나눈다. 다음 어피를 초순수에 넣어 담그고 콜라겐 함유 원료가 얼어서 흐트러진 조직 과립으로 되면 유리막대를 이용하여 풀처럼 걸쭉하게 되도록 골고루 반죽한다. 풀 모양의 조직 과립을 다시 10배 체적의 초순수에 넣은후 조직파쇄기 조작 규정에 따라 3회 호모지네이트로 완전히 부유물로 되게 한다. 조직 과립을 균일하게 파쇄한후 초순수에 넣어 조직의 함량이 25g/l로 되게 한후 골고루 혼합한다. 빙초산을 조직 현탄액에 넣어 용액 농도를 0.5mg/ml로 조절한다. 소화: 펩신을 취한후 0.5M 초산에서 펩신을 용해시켜 10mg/ml의 펩신 용액을 만든 다음 조직 현탄액 0.1mg/ml에 옮긴다. 즉 매 100ml 호모지네이트에 1ml의 펩신 용액을 넣어 골고루 혼합한후 온실에서 7-10일간 소화시킨다.
2) 불순물 제거: 추출물을 저온 교반기에 넣은후 추출물과 무이온수 체적비 1:3 비례에 따라 30분간 교반하여 혼합하고, 10분간 정치시켜 상층 부유물을 제거한후 여과장치에 넣어 흡착 여과를 하여 여과후의 추출물을 수집한다.
3) 1차 분해: 1차 분해는 다음 절차를 포함한다: 절차 2) 중의 추출물과 물을 1:3 비례로 혼합하여 혼합물을 얻고, 온도를 30℃까지 조절하되 온도 pH는 7이다. 고초균, 바실러스 리체니포르미스가 포함된 배양액을 체적비 2:1 비례로 교반하여 5분간 혼합한후 혼합물에 넣는다. 균일한 속도로 교반하되 온도 30℃, pH 7에서 24시간 유지한다. 혼합액을 고속 원심기 중의 원심 탱크에 넣어 15분 동안 원심과정을 거친후 정치하여 10분간 침전시킨다. 상술한 혼합물을 정제하되 순 추출 방법은 막분리법을 적용하고, 3000Da와 1000Da의 한외 여과법을 적용하여 원심과정을 거친후의 상층액을 걸러내서 분리한후 3000Da-1000Da의 콜라겐 펩타이드 성분을 얻은후 진공 여과장치에 넣어 흡인 여과, 건조, 멸균을 한다.
4) 2차 분해: 1차 분해로 획득한 산물과 물을 체적비 60:40 비례로 혼합하여 35℃ 온도에서 30분간 항온 교반을 한다. 콜라겐 원료 중량의 0.5％ 비례에 따라 혼합액에 트립신을 넣고, 콜라겐 원료 중량의 5％ 비례에 따라 폴리에틸렌글리콜을 넣은후 10분간 계속 교반한다. pH값을 7-8로 조절한후 37℃에서 8시간 동안 반응시키고, 가속하여 45℃까지 가열한후 효소 활성을 종결한다. 혼합액을 고속 원심기 중의 원심 탱크에 넣고 15분 동안 원심과정을 거친다. 상술한 혼합물을 정제하되 순 추출 방법은 막분리법을 적용하고, 1000Da의 한외 여과법을 적용하여 원심과정을 거친후의 상층액을 걸러내서 분리한후 1000Da 이하의 콜라겐 펩타이드 성분을 취득한다.
5) 1차 정제: 상술한 절차에서 얻은 1000Da 이하의 콜라겐 펩타이드 성분을 음이온 교환 수지에 넣고, 3-3.5 시간 동안 교반을 거쳐 침전시켜 수지가 원료액의 색소와 비린내를 완전히 흡착하게 한다. 크로마토그래피 칼럼으로 원료액과 수지를 분리시킨다. 이어서 살균처리후 원료액을 한외 여과 분리장치를 통해 여과한후 한외 여과 투석액을 취득한다. 원심 정제: 투석후의 용액을 고속 냉동과 원심과정을 거치고, 마지막으로 미분자를 통해 충돌 공법에 대한 최후의 정제를 하여 얻어낸 침전물이 마지막으로 순화된 콜라겐이다.
6) 2차 정제: 다시 마지막으로 순화한 후의 콜라겐을 일종 나노급 콜라겐 정제 설비(당사 특허설비)를 통해 정제한후 나노급 혼합 파우더를 취득한다.
7) 나노급 혼합원료 충돌 실시: 혼합한 나노급 콜라겐 파우더를 입자 충돌장치에 넣은후 충돌시켜 최종적으로 분자량이 비교적 균일한 나노급 콜라겐을 취득한다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 흡착 여과는 구체적으로 사전에 배합해 놓은 10MNaOH 표준 용액으로 소화액의 pH를 9-9.5까지 조절한후 정치 상태에서 밤을 경과하여 펩신을 불활화한다. pH값 조절: 소화액에 동일한 체적의 초순수를 넣고 농염산으로 pH를 4.0까지 조절한후 2시간 동안 교반한다. 규조토 세척: pH값을 조절한 후의 소화액 체적에 근거하여 15g/L로 규조토를 취한후 규조토를 10m MHCl로 2시간 담그고 초순수로 여러 차례 세척한다. 흡착 여과: 규조토를 소화액에 넣고 골고루 혼합한후 2시간 동안 정치시킨다. 여과기에 여과지를 넣고 여과기와 순환 위생 펌프를 실리콘 튜브로 긴밀히 연결한후 여과기와 순환 위생 펌프의 표준 조작규정에 따라 여과를 하여 규조토를 제거하고, 소화 여과액을 취득한다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 절차 5)에서 정제한후 건조시키되 건조 방법은 냉동건조이고, 건조시간은 24-36시간이다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 초순수의 제조방법은 다음을 포함한다: 1급 담수화 과정과 2급 담수화 과정; 상술한 1급 담수화 과정에서 열매 매개체는 열매 입구로부터 진입한후 열교환 통로2의 하부 통로를 거쳐 열교환 통로2의 각 열교환 플레이트와 열교환을 한후 열매 출구를 통해 배출되고, 담수화가 필요한 바닷물은 냉수 급수관으로부터 집류 통로1을 거쳐 각각 열교환 통로1로 흘러 들어가며, 바닷물은 열교환 통로1에서 열교환플레이트와 열교관을 한후 초보적 예열을 하고, 코팅 리쿼드 피막형성 장치를 거쳐 열교환 통로1 하부의 열교환 플레이트 표면에서 균일하게 코팅 리쿼드 피막을 형성한후 열매 매개체를 통해 가열된 열교환 플레이트와 함께 가열되면서 수증기는 점차 증발되고, 미증발 농수는 농수 저장공간으로 흘러 들어가 정기적으로 배출된다. 수증기는 아래 개구부와 거품 거르기망과 연결되어 상부의 증기 공간에 집결되고, 비응결 기체는 정기적으로 비응결 기체 배출구를 통해 배출되며, 나머지 수증기는 열교환 통로2의 상부 개구부를 통해 열교환 통로2의 상부 통로로 들어가고, 수증기는 열교환 통로2의 상부 통로에서 열교환 통로2의 플레이트와 열교환을 통해 1급 담수로 응결되어 집류 통로3 내부에 집결된후 정기적으로 1급 담수구를 거쳐 배출된다. 상술한 2급 담수화 과정에서 1급 담수화를 거친 1급 담수는 2급 입수구를 통해 초순수 챔버1과 초순수 챔버2로 들어가고, 동시에 음극 워터 챔버, 양극 워터 챔버와 농수 챔버의 입수구는 1급 담수 시스템의 농수 배출구와 연결된다. 초순수 챔버 내부에서 1급 담수중의 음이온과 양이온 불순물은 음극 전극, 양극 전극, 음이온 막과 양이온 막의 흡착과 선택성 삼투역할 하에 점차적으로 2급 초순수로 순화되어, 정기적으로 초순수 출구를 통해 배출되고, 음극 워터 챔버, 양극 워터 챔버와 농수 챔버의 농수는 정기적으로 각자의 출구를 통해 배출된다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 절차 3) 중 멸균시의 온도는 180-200℃이다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 절차 1) 콜라겐 함유 원료는 물고기 진피 조직이다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 절차 1) 중 유리막대 교반시의 속도는 300r/min이다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 절차 1) 중 유리막대 교반시의 속도는 300r/min이다.
상술한 기술방안에 근거하여 상술한 절차 1) 중 입자 충돌장치의 압력은 0.06Mpa이다.
이상에 기반하여 본 발명의 장점은 2차 단백질 분해법을 적용하였는바, 2차례 막분리를 상호 결합하는 방식은 제조원가가 저렴한 외에 콜라겐 분자량이 작으며 조작이 용이하다. 본 발명에 따른 공법으로 어피 처리를 통해 얻은 진액을 콜라겐 추출에 사용함으로써 콜라겐의 정제율과 순도를 뚜렷하게 증가할 수 있다. 정제율은 96%에 달하고 얻은 나노급 콜라겐은 제로 항생소, 제로 중금속 잔량, 제로 여성 호르몬과 제로 동물성 독소 잔류물 목적에 도달할 수 있는 것 이외에, 추출 재료 이용율이 높고 수율이 높으며, 생산 원가가 저렴한 외에 콜라겐 순도가 좋고 추출 공법이 간단한 등 장점이 있다.
마지막으로 설명해야 할 점은: 이상에서 언급한 내용은 본 발명의 바람직한 실시예에 불과하며 본 발명을 제한하는 것이 아니다. 비록 상술한 실시예를 참고하여 본 발명에 대해 상세하게 설명하였다 하더라도, 본 영역의 기술자라면 상술한 각 실시예에 기재된 기술방안에 대해 변경하거나, 그 중 부분 기술 특징에 대해 동등한 교체를 할 수 있다. 본 발명의 정신과 원칙을 벗어나지 아니하는 범위에서 진행한 임의의 변경, 동등한 교체, 개선 등은 모두 본 발명 보호 범주에 속해야 할 것이다.
Claims (7)
- 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법으로서,
1) 분쇄: 우선 어피에 대해 항생소 검사, 중금속 잔량 검사, 여성 호르몬 검사와 동물성 독소 잔류물 검사로 나누어 정밀검사를 실시하는 단계; 다음 어피를 초순수에 넣어 담그고 콜라겐 함유 원료가 얼어서 흐트러진 조직 과립으로 되면 유리막대를 이용하여 풀처럼 걸쭉하게 되도록 골고루 반죽하는 단계; 풀 모양의 조직 과립을 다시 10배 체적의 초순수에 넣은후 조직파쇄기 조작 규정에 따라 3회 호모지네이트로 완전히 부유물로 되게 하는 단계; 조직 과립을 균일하게 파쇄한후 초순수에 넣어 조직의 함량이 25g/l로 되게 한후 골고루 혼합하는 단계; 빙초산을 조직 현탄액에 넣어 용액 농도를 0.5mg/ml로 조절하는 단계; 및 소화: 펩신을 취한후 0.5M 초산에서 펩신을 용해시켜 10mg/ml의 펩신 용액을 만든 다음 조직 현탄액 0.1mg/ml에 옮기는 것으로서, 매 100ml 호모지네이트에 1ml의 펩신 용액을 넣어 골고루 혼합한후 온실에서 7-10일간 소화시키는 단계;
2) 불순물 제거: 추출물을 저온 교반기에 넣은후 추출물과 무이온수 체적비 1:3 비례에 따라 30분간 교반하여 혼합하는 단계; 10분간 정치시켜 상층 부유물을 제거한후 여과장치에 넣어 흡착 여과를 하여 여과후의 추출물을 수집하는 단계;
3) 1차 분해: 절차 2) 중의 추출물과 물을 1:3 비례로 혼합하여 혼합물을 얻고, 온도 pH가 7인 상태에서 온도를 30℃까지 조절하는 단계; 고초균, 바실러스 리체니포르미스가 포함된 배양액을 체적비 2:1 비례로 교반하여 5분간 혼합한후 혼합물에 넣는 단계; 균일한 속도로 교반하되 온도 30℃, pH 7에서 24시간 유지하는 단계; 혼합액을 고속 원심기 중의 원심 탱크에 넣어 15분 동안 원심과정을 거친후 정치하여 10분간 침전시키는 단계; 상기 혼합물을 정제하되 순 추출 방법은 막분리법을 적용하고, 3000Da와 1000Da의 한외 여과법을 적용하여 원심과정을 거친후의 상층액을 걸러내서 분리한후 3000Da-1000Da의 콜라겐 펩타이드 성분을 취득하는 단계; 진공 여과장치에 넣어 흡인 여과, 건조, 멸균을 수행하는 단계;
4) 2차 분해: 1차 분해로 획득한 산물과 물을 체적비 60:40 비례로 혼합하여 35℃ 온도에서 30분간 항온 교반을 하는 단계; 콜라겐 원료 중량의 0.5％ 비례에 따라 혼합액에 트립신을 넣고, 콜라겐 원료 중량의 5％ 비례에 따라 폴리에틸렌글리콜을 넣은후 10분간 계속 교반하는 단계; pH값을 7-8로 조절한후 37℃에서 8시간 동안 반응시키고, 가속하여 45℃까지 가열한후 효소 활성을 종결하는 단계; 혼합액을 고속 원심기 중의 원심 탱크에 넣고 15분 동안 원심과정을 거치는 단계; 상기 혼합물을 정제하되 순 추출 방법은 막분리법을 적용하고, 1000Da의 한외 여과법을 적용하여 원심과정을 거친후의 상층액을 걸러내서 분리한후 1000Da 이하의 콜라겐 펩타이드 성분을 취득하는 단계;
5) 1차 정제: 상기 절차에서 얻은 1000Da 이하의 콜라겐 펩타이드 성분을 음이온 교환 수지에 넣고, 3-3.5 시간 동안 교반을 거쳐 침전시켜 수지가 원료액의 색소와 비린내를 완전히 흡착하게 하는 단계; 크로마토그래피 칼럼으로 원료액과 수지를 분리시키는 단계; 살균처리후 원료액을 한외 여과 분리장치를 통해 여과한후 한외 여과 투석액을 취득하는 단계; 원심 정제: 투석후의 용액을 고속 냉동과 원심과정을 거치고, 침전물로서 마지막으로 순화된 콜라겐을 취득하도록 미분자를 통해 충돌 공법에 대한 최후의 정제를 하는 단계;
6) 2차 정제: 다시 마지막으로 순화한 후의 콜라겐을 일종 나노급 콜라겐 정제 설비를 통해 정제한후 나노급 혼합 파우더를 취득하는 단계; 및
7) 나노급 혼합원료 충돌 실시: 혼합한 나노급 콜라겐 파우더를 입자 충돌장치에 넣은후 충돌시켜 최종적으로 분자량이 비교적 균일한 나노급 콜라겐을 취득하는 단계를 포함하는 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법. - 청구항 1에 있어서,
상기 흡착 여과는 구체적으로 사전에 배합해 놓은 10MNaOH 표준 용액으로 소화액의 pH를 9-9.5까지 조절한후 정치 상태에서 밤을 경과하여 펩신을 불활화하는 단계; pH값 조절: 소화액에 동일한 체적의 초순수를 넣고 농염산으로 pH를 4.0까지 조절한후 2시간 동안 교반하는 단계; 규조토 세척: pH값을 조절한 후의 소화액 체적에 근거하여 15g/L로 규조토를 취한후 규조토를 10m MHCl로 2시간 담그고 초순수로 여러 차례 세척하는 단계; 흡착 여과: 규조토를 소화액에 넣고 골고루 혼합한후 2시간 동안 정치시키는 단계; 및 여과기에 여과지를 넣고 여과기와 순환 위생 펌프를 실리콘 튜브로 긴밀히 연결한후 여과기와 순환 위생 펌프의 표준 조작규정에 따라 여과를 하여 규조토를 제거하고, 소화 여과액을 취득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법. - 청구항 1에 있어서,
상기 절차 5)에서 정제한후 건조시키되 건조 방법은 냉동건조이고, 건조시간은 24-36시간인 것을 특징으로 하는 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법. - 청구항 1에 있어서,
상기 초순수의 제조방법은, 1급 담수화 과정과 2급 담수화 과정 포함; 상기 1급 담수화 과정에서 열매 매개체는 열매 입구로부터 진입한후 열교환 통로2의 하부 통로를 거쳐 열교환 통로2의 각 열교환 플레이트와 열교환을 한후 열매 출구를 통해 배출되고, 담수화가 필요한 바닷물은 냉수 급수관으로부터 집류 통로1을 거쳐 각각 열교환 통로1로 흘러 들어가며, 바닷물은 열교환 통로1에서 열교환플레이트와 열교관을 한후 초보적 예열을 하고, 코팅 리쿼드 피막형성 장치를 거쳐 열교환 통로1 하부의 열교환 플레이트 표면에서 균일하게 코팅 리쿼드 피막을 형성한후 열매 매개체를 통해 가열된 열교환 플레이트와 함께 가열되면서 수증기는 점차 증발되고, 미증발 농수는 농수 저장공간으로 흘러 들어가 정기적으로 배출되고, 수증기는 아래 개구부와 거품 거르기망과 연결되어 상부의 증기 공간에 집결되고, 비응결 기체는 정기적으로 비응결 기체 배출구를 통해 배출되며, 나머지 수증기는 열교환 통로2의 상부 개구부를 통해 열교환 통로2의 상부 통로로 들어가고, 수증기는 열교환 통로2의 상부 통로에서 열교환 통로2의 플레이트와 열교환을 통해 1급 담수로 응결되어 집류 통로3 내부에 집결된후 정기적으로 1급 담수구를 거쳐 배출되고, 상기 2급 담수화 과정에서 1급 담수화를 거친 1급 담수는 2급 입수구를 통해 초순수 챔버1과 초순수 챔버2로 들어가고, 동시에 음극 워터 챔버, 양극 워터 챔버와 농수 챔버의 입수구는 1급 담수 시스템의 농수 배출구와 연결되고, 초순수 챔버 내부에서 1급 담수중의 음이온과 양이온 불순물은 음극 전극, 양극 전극, 음이온 막과 양이온 막의 흡착과 선택성 삼투역할 하에 점차적으로 2급 초순수로 순화되어, 정기적으로 초순수 출구를 통해 배출되고, 음극 워터 챔버, 양극 워터 챔버와 농수 챔버의 농수는 정기적으로 각자의 출구를 통해 배출되는 것을 특징으로 하는 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법. - 청구항 1에 있어서,
상기 절차 3)에서 멸균시의 온도는 180-200℃인 것을 특징으로 하는 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법. - 청구항 1에 있어서,
상기 절차 1)에서 콜라겐 함유 원료는 물고기 진피 조직인 것을 특징으로 하는 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법. - 청구항 1에 있어서,
상기 절차 1)에서 유리막대 교반시의 속도는 300r/min인 것을 특징으로 하는 일종 흡수율이 96%에 달하는 나노급 콜라겐 정제 방법.
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