CN109082477B - 一种不同品种青稞的鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于鉴定青稞品种的试剂盒，它包括SEQ ID NO.1～28所示的14对SSR引物。本发明还提供了一种鉴定青稞品种的方法。本发明提供的检测方法可以准确、有效地区分青稞的品种，成本低廉，为青稞快速鉴定提供了条件。
Description
技术领域
本发明涉及一种青稞品种的鉴别方法。
背景知识
青稞(Hordeum vulgare Linn.var.nudum Hook.f.)是禾本科大麦属的一种禾谷类作物，因其内外颖壳分离，籽粒裸露，故又称裸大麦、元麦、米大麦。主要产自中国西藏、青海、四川、云南等地，是藏族人民的主要粮食。青稞
有着广泛的药用以及营养价值，已推出了青稞挂面、青稞馒头、青稞营养粉等青稞产品。
青稞作为一种具有营养保健功能的特色杂粮，迎合了当前人们追求营养、健康的消费心理，备受青睐。近年来，随着育成的青稞品种的增加，有关鉴定不同青稞品种的报道较少，目前大多采用形态学鉴定，然而，形态学鉴定耗时费力，成本高，对人员的要求高，难满足青稞繁多品种的鉴定需求。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种利用SSR引物扩增检测青稞品种的方法。
本发明提供了一种用于鉴定青稞品种的试剂盒，它包括SEQ ID NO.1～28所示的14对SSR引物。
其中，所述试剂盒还包括SEQ ID NO.29～32所述的2对SSR引物、SEQ ID NO.33～40所述的4对SSR引物和/或SEQ ID NO.41～44所述的2对SSR引物。
其中，所述试剂盒还包括PCR扩增用试剂。
其中，所述试剂盒还包括DNA提取用试剂。
本发明还提供了前述试剂盒在鉴定青稞品种中的用途。
其中，所述青稞是品种为福8-4、南-3、山南白青稞、甘靑3号、昆仑15号、北青3号、藏青2000、北青9号、北青1号、喜拉2号、北青5号、康青6号、甘靑4号、昆仑2号、喜拉6号、昆仑8号、藏青85、林芝黑六棱、高原早1号、康青3号、喜拉10号、甘青5号、甘农大NFC、甘农大7号、2010区04、阿里白青稞的青稞。
本发明还提供了一种鉴定青稞品种的方法，它是采用前述试剂盒鉴定。
所述方法包括如下步骤：
(1)提取样本DNA：取待检青稞样品，提取其中的DNA；
(2)基因扩增：用前述的试剂盒对待检样本进行PCR扩增；
(3)结果检测：对DNA扩增结果进行检测。
步骤(1)中，所述青稞是品种为福8-4、南-3、山南白青稞、甘靑3号、昆仑15号、北青3号、藏青2000、北青9号、北青1号、喜拉2号、北青5号、康青6号、甘靑4号、昆仑2号、喜拉6号、昆仑8号、藏青85、林芝黑六棱、高原早1号、康青3号、喜拉10号、甘靑5号、甘农大NFC、甘农大7号、2010区04、阿里白青稞的青稞。
本发明还提供了一组引物对，其包括SEQ ID NO.1～28所示的14对SSR引物；优选还包括SEQ ID NO.29～32所述的2对SSR引物、SEQ ID NO.33～40所述的4对SSR引物和/或SEQ ID NO.41～44所述的2对SSR引物。
本发明提供的试剂盒和方法可以有效鉴别不同品种的青稞，克服现有方法鉴别青稞存在的问题，成本低廉，为青稞种子真实性和纯度快速鉴定提供了条件，应用前景优良。
下面通过具体实施方式对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
具体实施方式
实施例1本发明青稞鉴别方法
1、SR引物
表1 32对SSR引物(由北京擎科新业生物技术有限公司合成)：
2、材料和试剂
材料：青稞种子
引物：表1所述引物。
试剂：Master mix酶和去离子水(ddH2O)以及提取植物基因组DNA提取试剂盒均由天根公司提供。
3、检测方法
3.1DNA提取
严格按照试剂盒说明书提取青稞叶片的DNA。
3.2 SSR-PCR引物扩增
反应体系：总体积20μl，包括2μl的引物(一个体系对应一对引物)、2μl的DNA模板、6μl的ddH2O、10μl Mastermix酶。
反应程序：94℃预变性4min，94℃变性35s，65℃退火35s，72℃延伸40s，共10个循环，每次循环退火温度降低1℃；94℃预变性35s，95℃变性35s，72℃退火40s，72℃延伸10min，共32个循环。
3.3检测
采用琼脂糖凝胶电泳，检测条带扩增情况，在ABI3730仪器上机检测PCR产物条带大小。
实施例2采用本发明青稞鉴别方法鉴别青稞
1、材料
青稞材料如下表2所示：
本申请的所有材料都可以购买得到。
表2青稞材料及其来源和性质
续表2-1
续表2-2
2、检测方法
采用实施例1所用的引物、试剂和方法进行检测
如表3所示，采用本发明引物可以扩增27个青稞品种，得到的结果不同，因此可以通过表1所示引物组鉴别不同的品种。
实验结果说明，本发明寻找到了能够鉴别表2所示27个品种的青稞的24对SSR引物，可以用于表2所示27个品种的青稞的鉴别。
综上，本发明提供的试剂盒和方法可以有效鉴别不同品种的青稞，克服现有方法鉴别青稞存在的问题，成本低廉，为青稞快速鉴定提供了条件，应用前景优良。
序列表
<110> 西藏自治区农牧科学院农业研究所
<120> 一种不同品种青稞的鉴别方法
<130> GY462-18P1413
<160> 40
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> QK320-F(artificial sequence)
<400> 1
cgccatttcc ttcctgttag 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> QK320-R(artificial sequence)
<400> 2
cctgcatgtc attggaacac 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> QK362-F(artificial sequence)
<400> 3
gagaagggtg gtgatggaga 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> QK362-R(artificial sequence)
<400> 4
gtccgtacct tgacggagtc 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> QK387-F(artificial sequence)
<400> 5
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<210> 6
<211> 20
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<400> 6
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<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> QK482-F(artificial sequence)
<400> 7
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<210> 8
<211> 20
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<400> 8
tcaagtcctc tgcaaacacg 20
<210> 9
<211> 22
<212> DNA
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<400> 9
tgcgtatgaa aattgtttgt ga 22
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
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<400> 10
gcattcgttg cagcttgtag 20
<210> 11
<211> 20
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<213> QK339-F(artificial sequence)
<400> 11
tttcgtgagt tcttcccgtc 20
<210> 12
<211> 20
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<211> 20
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<400> 14
gcgacacaac acaaaccaac 20
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
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<210> 16
<211> 20
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<210> 17
<211> 20
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<400> 17
aaatgaccta tgttgccgga 20
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
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ctcatgccat tgttgacacc 20
<210> 19
<211> 20
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<400> 19
tttacagcag cagcagcact 20
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
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<210> 21
<211> 20
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<213> QK414-F(artificial sequence)
<400> 21
gtcgaggtcg gatttgatgt 20
<210> 22
<211> 20
<212> DNA
<213> QK414-R(artificial sequence)
<400> 22
cgtgtacaca cacgcacttg 20
<210> 23
<211> 20
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<400> 23
aagtggcctt ggggttattc 20
<210> 24
<211> 20
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<400> 24
gcgagccact ttaccaagag 20
<210> 25
<211> 20
<212> DNA
<213> QK331-F(artificial sequence)
<400> 25
gaaccctaca agggagggag 20
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
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<400> 26
tctccatttc aattttcccg 20
<210> 27
<211> 20
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cacaatgtag aggccagggt 20
<210> 28
<211> 20
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<400> 28
atgacagtgc gtgtccagag 20
<210> 29
<211> 20
<212> DNA
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<400> 29
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<211> 20
<212> DNA
<213> QK329-R(artificial sequence)
<400> 30
ctccggcaga agtttacctg 20
<210> 31
<211> 20
<212> DNA
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tgctaccaat gttgtgccat 20
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<211> 20
<212> DNA
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ggtcgcacta ggctgatttc 20
<210> 33
<211> 20
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<400> 33
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<213> QK379-R(artificial sequence)
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tatccctccc agatttgtgc 20
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<213> QK242-R(artificial sequence)
<400> 36
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<210> 37
<211> 20
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<400> 37
gagagagagg gagggaagga 20
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<211> 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> QK374-F(artificial sequence)
<400> 39
gtcaagcttc gatcctctgc 20
<210> 40
<211> 20
<212> DNA
<213> QK374-R(artificial sequence)
<400> 40
tggaatagga agggttcacg 20
Claims (9)
1.一种用于鉴定青稞品种的试剂盒，其特征在于：它包括SEQ ID NO.1～28所示的14对SSR引物。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括SEQ ID NO.29～32所述的2对SSR引物、SEQ ID NO.33～40所述的4对SSR引物和/或SEQ ID NO.41～44所述的2对SSR引物。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括PCR扩增用试剂。
4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括DNA提取用试剂。
5.权利要求1～4任意一项所述试剂盒在鉴定青稞品种中的用途，其特征在于：所述青稞是品种为福8-4、南-3、山南白青稞、甘靑3号、昆仑15号、北青3号、藏青2000、北青9号、北青1号、喜拉2号、北青5号、康青6号、甘靑4号、昆仑2号、喜拉6号、昆仑8号、藏青85、林芝黑六棱、高原早1号、康青3号、喜拉10号、甘靑5号、甘农大NFC、甘农大7号、2010区04、阿里白青稞的青稞。
6.一种鉴定青稞品种的方法，其特征在于：它是采用权利要求1～4任意一项所述试剂盒鉴定；
所述青稞是品种为福8-4、南-3、山南白青稞、甘靑3号、昆仑15号、北青3号、藏青2000、北青9号、北青1号、喜拉2号、北青5号、康青6号、甘靑4号、昆仑2号、喜拉6号、昆仑8号、藏青85、林芝黑六棱、高原早1号、康青3号、喜拉10号、甘靑5号、甘农大NFC、甘农大7号、2010区04、阿里白青稞的青稞。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：它包括如下步骤：
(1)提取样本DNA：取待检青稞样品，提取其中的DNA；
(2)基因扩增：用权利要求1～4任意一项所述的试剂盒对待检样本进行PCR扩增；
(3)结果检测：对DNA扩增结果进行检测。
8.一组引物对，其特征在于：其包括SEQ ID NO.1～28所示的14对SSR引物。
9.根据权利要求8所述的引物对，其特征在于：还包括SEQ ID NO.29～32所述的2对SSR引物、SEQ ID NO.33～40所述的4对SSR引物和/或SEQ ID NO.41～44所述的2对SSR引物。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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