CN109056083B - 一种可调控释放的肉桂醛精油脂质体抗菌双层膜的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种可调控释放的肉桂醛精油脂质体抗菌双层膜的制备方法，包括如下步骤：(1)以二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇、肉桂醛精油为原料制备肉桂醛热敏型精油脂质体；(2)以肉桂醛热敏型精油脂质体和酪蛋白为原料制备热敏蛋白复合型脂质体；(3)制备果胶流延膜；(4)取玉米醇溶蛋白粉溶解于乙醇水溶液中得到基础纺丝液；往基础纺丝液中加入热敏蛋白复合型脂质体得到静电纺丝液；以果胶流延膜为接收物，静电纺丝得到桂醛精油脂质体抗菌双层膜。本发明方法可以提高精油的稳定性和膜的机械性能，并可在温度相对偏高的环境中预防腐败菌的产生并起到可持续释放的效果。
Description
(一)技术领域
本发明属于食品抗菌包装领域，具体涉及一种可调控的肉桂醛精油脂质体抗菌双层活性膜的制备方法。
(二)背景技术
可食性抗菌包装是指以生物大分子为基材，通过向内部或表面添加抗菌剂,使包装膜起到抑制、延缓食品表面微生物生长繁殖作用的包装。常见的可食抗菌膜有蛋白膜、多糖膜、脂质膜和复合膜。静电纺丝技术能够得到高孔隙率、高比表面积的纳米纤维材料,通过静电纺丝将抗菌物质载入纳米纤维是目前流行的抗菌包装制备方法，然而，静电纺丝因机械性能缺陷限制了在食品中的应用。多层膜的制备可以起到改善膜的机械性能及水汽透过性的作用。同时，在基膜中添加抗菌剂可有效地起到定向释放的效果。
对于抗菌剂的添加，常见的抗菌剂分为有机材料和天然材料，因有机材料存在迁移性等安全缺陷，天然的抗菌剂被广大消费者所接受，其中最为常见的为精油类抗菌物质，此类物质具有安全性较高、抗菌效果好、用量少等优点。但因为精油的不稳定性和溶解性，直接加入到溶液制膜会使精油在油水界面分层，影响膜性质和精油效果。
目前的精油抗菌膜将精油通过乳液、脂质体、β-环糊精、静电纺丝等技术进行包埋。中国专利申请号为CN107858784A的发明公布了一种负载肉桂醛精油的抗菌活性包装膜的制备方法,得到精油的负载量更大,更适用于低温场景释放的抗菌包装。此类静电纺丝包装膜虽然具有抗菌作用，但机械性能较差，且不具备调控式释放。中国专利申请号为CN106436276A的发明公布了一种增强静电纺丝薄膜力学性能的试剂及方法。该发明实现静电纺丝薄膜的弹性模量、断裂强度和韧性同时增强。该发明虽然改善了纺丝膜的机械性能，但在应用时起不到抗菌包装的作用。
针对以上问题，本发明制备了一种双层具有缓释效果的抗菌包装，该发明提高了精油的稳定性，提高了静电纺丝膜的机械性能。与传统的单层静电纺丝抗菌包装相比，本发明改善了电纺膜力学性能较差的问题，此外，可在环境温度相对偏高的温度中预防腐败菌的产生并起到可持续释放的效果。
(三)发明内容
本发明的目的是提供一种肉桂醛精油脂质体抗菌双层膜的制备方法，以提高精油的稳定性和膜的机械性能，并可在温度相对偏高的环境中预防腐败菌的产生并起到可持续释放的效果。
下面对本发明的技术方案进行具体说明。
本发明提供了一种肉桂醛精油脂质体抗菌双层膜的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备肉桂醛热敏型精油脂质体
将二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇、肉桂醛精油按4g:1-2g:2g:1-2mL溶于三氯甲烷中，并采用超声辅助溶解后倒入反应容器中，通过旋转蒸发将溶剂蒸干，在反应容器内壁得到带蜂窝状的薄膜；往反应容器中加入0.05-0.1mmol/L(优选0.1mmol/L)的PBS缓冲溶液，经水合旋蒸得到水合溶液；所得水合溶液再经超声、离心、滤膜过膜处理，得到肉桂醛热敏型精油脂质体；
(2)制备热敏蛋白复合型脂质体
将酪蛋白溶解在含有吐温80表面活性剂的0.05-0.1mmol/L(优选0.1mmol/L)的PBS缓冲溶液中，所述PBS缓冲溶液中吐温80的浓度为10-15mg/mL，所述酪蛋白与PBS缓冲溶液的投料比为0.8-1.2g：1L(优选1g：1L)，并在室温下温育3-4小时(优选3h)，得到含有酪蛋白的溶液；随后，将肉桂醛热敏型精油脂质体和含有酪蛋白的溶液按照体积比8-12:1-3(优选9:1)混合，然后进行10-15分钟(优选10分钟)冰浴超声处理；
将酪蛋白和肉桂醛热敏型精油脂质体混合物在-20±2℃下冷冻2～3小时(优选2h)，此过程使囊泡破裂，然后在0±2℃下缓慢解冻2～3小时(优选2h)，酪蛋白会穿插在脂质体双分子层中，然后温和脉冲超声处理以促进蛋白脂质体的密封得到热敏蛋白复合型脂质体，超声功率设置为50-100W(优选50W)，超声时间为1.5-2小时(优选2h)；
(3)制备果胶流延膜
将果胶溶于去离子水中过夜溶解，加入甘油作为增塑剂，取果胶溶液于玻璃皿中，放入35-40℃烘箱中4±0.5小时后揭膜，得到果胶流延膜；其中，果胶和甘油的投料质量比为3-3.5:0.9-1.1，优选1:0.3；
(4)制备静电纺丝双层膜
静电纺丝液的配制：取玉米醇溶蛋白粉溶解于乙醇的体积浓度为70-80％(优选70％)的乙醇水溶液中，其中玉米醇溶蛋白粉与乙醇水溶液的投料比为2-3g：10mL(优选2g：100mL)，得到基础纺丝液；往基础纺丝液中加入热敏蛋白复合型脂质体，其中基础纺丝液与热敏蛋白复合型脂质体的体积比为5-10:3-5(优选7:3)，搅拌2-3小时，超声除去气泡，得到静电纺丝液；
纺丝条件：取制备的静电纺丝液进行静电纺丝，纺丝参数为电压13-15KV(优选15KV)，针头型号18G，极距针头到接收器的距离11-13cm(优选13cm)，接收器为滚筒形式，将步骤(3)制备的果胶流延膜作为接收物，纺丝液推进速率0.15-0.18mL/h(优选0.15mL/h)，温度控制在25±2℃，相对湿度为50±5％，得到肉桂醛精油脂质体抗菌双层膜，其厚度为0.6～0.8mm。
本发明步骤(1)中，所述二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇、肉桂醛精油的投料比为4g:2g:2g:2mL。
本发明步骤(1)中，旋转蒸发的条件为：在35-40℃(优选40℃)、0.07-0.08MPa(优选0.08MPa)减压旋蒸40-50min(优选40min)将溶剂蒸干。水合旋蒸的条件为：在室温(优选25-30℃)、0.02-0.03MPa(优选0.02MPa)条件下水合旋蒸30-40分钟(优选40分钟)。所述的水合溶液优选在封闭式探头超声仪中进行超声，超声条件为：400-450W超声10-15min，优选于400W超声10min。滤膜的选择是根据脂质体的粒径大小确定，实验室常用滤膜为0.22μm和0.45μm两种。
本发明步骤(3)中，果胶流延膜的厚度可根据实际需要进行控制，可根据果胶溶液的浓度、体积用量以及玻璃器皿的面积对其厚度进行调控。本发明中，控制果胶、去离子水和甘油的投料质量比为3-3.5:100:0.9-1.1，优选3:100：0.9，取果胶溶液置于玻璃皿中，其中果胶溶液体积与玻璃器皿的底面积的比例为0.1-0.12mL/cm2，经烘干得到果胶流延膜。
2、本发明具体推荐所述制备方法按照如下步骤实施：
(1)制备肉桂醛热敏型精油脂质体
将二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇、肉桂醛精油按4g:2g:2g:2mL溶于三氯甲烷中，并采用超声辅助溶解后倒入反应容器中，在35-40℃、0.07-0.08MPa条件下减压旋蒸40-50min将溶剂蒸干，在反应容器内壁得到带蜂窝状的薄膜；往反应容器中加入0.1mmol/L的PBS缓冲溶液，在室温、0.02-0.03MPa条件下水合旋蒸30-40分钟，得到水合溶液；所得水合溶液再经400-450W超声10-15min、离心、0.22μm滤膜过膜处理，得到肉桂醛热敏型精油脂质体；
(2)制备热敏蛋白复合型脂质体
将酪蛋白溶解在含有吐温80表面活性剂的0.1mmol/L的PBS缓冲溶液中，所述PBS缓冲溶液中吐温80的浓度为10mg/mL，所述酪蛋白与PBS缓冲溶液的投料比为1g：1L，并在室温下温育3-4h，得到含有酪蛋白的溶液；随后，将肉桂醛热敏型精油脂质体和含有酪蛋白的溶液按照体积比9:1混合，然后进行10分钟冰浴超声处理；
将酪蛋白和肉桂醛热敏型精油脂质体混合物在-20±2℃下冷冻2-3小时，此过程使囊泡破裂，然后在0±2℃下缓慢解冻2～3小时，酪蛋白会穿插在脂质体双分子层中，然后温和脉冲超声处理以促进蛋白脂质体的密封得到热敏蛋白复合型脂质体，超声功率设置为50-100W，超声时间为1.5-2小时；
(3)制备果胶流延膜
将果胶溶于去离子水中过夜溶解，加入甘油作为增塑剂，控制果胶、去离子水和甘油的投料质量比为3:100：0.9，取果胶溶液置于玻璃皿中，其中果胶溶液体积与玻璃器皿的底面积的比例为0.1-0.12mL/cm2，放入35-40℃烘箱中4±0.5小时后揭膜，得到果胶流延膜；
(4)制备静电纺丝双层膜
静电纺丝液的配制：取玉米醇溶蛋白粉溶解于乙醇的体积浓度为70％的乙醇水溶液中，其中玉米醇溶蛋白粉与乙醇水溶液的投料比为2g：10mL，得到基础纺丝液；往基础纺丝液中加入热敏蛋白复合型脂质体，其中基础纺丝液与热敏蛋白复合型脂质体的体积比为7:3，搅拌2-3小时，超声除去气泡，得到静电纺丝液；
纺丝条件：取制备的静电纺丝液进行静电纺丝，纺丝参数为电压15KV，针头型号18G，极距针头到接收器的距离13cm，接收器为滚筒形式，将步骤(3)制备的果胶流延膜作为接收物，纺丝液推进速率0.15mL/h，温度控制在25±2℃，相对湿度为50±5％，得到肉桂醛精油脂质体抗菌双层膜，其厚度为0.6～0.8mm。
本发明的有益效果主要体现在：
(1)提高了纺丝膜的机械强度
具体而言，通过制备双层膜，玉米醇溶蛋白单层纺丝膜的拉伸强度从4.54MPa提高到了双层膜的17.37MPa。一方面，单纯的玉米醇溶蛋白静电纺丝膜存在较低的机械强度，限制了在实际中的应用，将静电纺丝膜纺在果胶流延膜中，可有效改善单层静电纺丝膜在机械强度方面的缺陷。同时，相比传统通过流延或热压方法制备双层膜，因亲水性果胶流延膜和疏水性玉米醇溶蛋白流延膜膜低相容性，会导致膜分离的现象，而静电纺丝可在膜表面提供较好的粘附性，可有效改善双层膜之间的相容性。另一方面，果胶流延膜的存在可阻碍活性成分的的扩散，可起到定向释放效果。
(2)可作为一种温度和腐败菌双调控的抗菌包装
具体来说，通过调节二棕榈酰磷脂酰甘油(液晶态相变温度10℃)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(液晶态相变温度55℃)两者的比例可以得到具有某一特定液晶态相变温度的热敏脂质体，当环境温度低于液晶态相变温度时，热敏脂质体中脂质体膜呈致密的胶晶态排列，药物很难扩散出来。当环境温度高于磷脂液晶态相变温度,可使脂质体膜的结构发生变化，从而导致磷脂双分子层由排列整齐且致密的胶晶态变为疏松混乱的液晶态，膜流动性增强,最终释放活性物质导致脂质体膜的通透性发生改变，可有效抑制在储藏到销售过程中因环境温度较高导致的微生物生长。同时脂质体对精油的包埋，改善了精油的水不溶性，提高了精油的稳定性并起到控制释放的作用。另一方面利用蛋白质脂质体包埋技术得到的包埋精油的蛋白质脂质体，具有可调控释放的作用。包埋在蛋白脂质体中的精油不会释放，直到储藏过程中蛋白脂质体遇到腐败靶细菌，这种细菌可以分泌蛋白酶，在蛋白酶的作用下，脂质体膜表面的蛋白质被酶解，被包埋的精油因此而释放，所以有效的控制了精油的释放。
(四)附图说明
图1是本发明路线和常规路线的工艺路线对比图。
图2是本发明双层膜的抑菌机理图。
图3是4℃下草莓分别经保鲜膜、对比例1纺丝膜、对比例2双层膜、实施例1纺丝膜处理5天得到的宏观图。
图4是30℃下草莓分别经保鲜膜、对比例1纺丝膜、对比例2双层膜、实施例1纺丝膜处理5天得到的宏观图。
(五)具体实施方案
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1：
1、热敏型脂质体的制备
(1)将0.4g二棕榈酰磷脂酰甘油、0.2g二硬脂酰磷脂酰胆碱、0.2g胆固醇溶于10mL三氯甲烷中，加入200μl肉桂醛精油，并采用超声辅助溶解后倒入圆底烧瓶中。
(2)将圆底烧瓶置于旋转蒸发仪中，旋转蒸发仪温度设置为40℃，在0.08MPa减压旋蒸40min将溶剂蒸干，圆底烧瓶内壁带蜂窝状的薄膜。
往圆底烧瓶中加入溶解0.1Mm的PBS缓冲溶液，在0.02MPa条件下水合旋蒸40分钟，得到水合溶液。
(3)将所得的水合溶液在封闭式探头超声仪中于400W超声10min，并离心，0.22μm滤膜过膜处理后得到热敏型脂质体。
2、热敏/蛋白复合型脂质体制备
(1)将100mg酪蛋白溶解在100mL含有10mg/mL吐温80表面活性剂的0.1Mm PBS缓冲溶液中，并在室温下温育3小时。随后，将18mL热敏型脂质体和2mL含有酪蛋白和表面活性剂的缓冲溶液混合，然后进行10分钟冰浴超声处理。
(2)将蛋白和肉桂醛精油脂质体混合物在-20℃下冷冻2小时，此过程使囊泡破裂，然后在0℃下缓慢解冻2小时。酪蛋白会穿插在纳米脂质体双分子层中，然后经功率为50W，时间为2小时脉冲超声处理以促进蛋白脂质体的密封得到肉桂醛蛋白脂质体。
3、果胶流延膜的制备
(1)将3g果胶溶于100g去离子水中过夜溶解,加入0.9g甘油作为增塑剂，得到果胶溶液；
(2)取70mL果胶溶液于30×20cm的玻璃皿中。放入40℃烘箱中4小时后揭膜，得到果胶流延膜。
4、双层纺丝膜的制备
(1)室温下配置乙醇体积浓度为70％的乙醇水溶液备用；
(2)取2g玉米醇溶蛋白溶于10mL步骤(1)的乙醇溶液中，充分搅拌两小时使其溶解完全，得到质量分数为20％的基础纺丝液；
(3)在(2)制备的纺丝液和得到的肉桂醛热敏/蛋白复合型脂质体按体积比为7：3混合，磁力搅拌器搅拌2h使均匀，超声5min除去气泡，得到纺丝液；
(4)用5mL注射器吸取步骤(3)制备的纺丝液，纺丝参数设置为电压15KV,针头型号18G，极距针头到接收器的距离13cm，接收器为滚筒形式，将以上所制备的果胶流延膜作为接收物，纺丝液推进速率0.15mL/h，温度控制在25℃,相对湿度为55％，得到纳米纤维抗菌膜的厚度为0.738mm；
(5)利用(4)得到的双层膜将草莓置于4℃和30℃保鲜进行保鲜实验。
对比例1：以不含果胶膜的单层玉米醇溶蛋白静电纺丝膜的制备
玉米醇溶蛋白纺丝膜的制备
(1)室温下配置体积浓度70％的乙醇水溶液备用。
(2)取2g玉米醇溶蛋白溶于10mL步骤(1)的乙醇溶液中，充分搅拌两小时使其溶解完全，得到质量体积分数为20％的基础纺丝液。
(3)将步骤(2)制备的基础纺丝液和按照实施例1方法制备的肉桂醛热敏/蛋白复合型脂质体按体积比为7：3混合，磁力搅拌器搅拌均匀，超声5min除去气泡得到纺丝液。
(4)用5mL注射器吸取步骤(3)中的纺丝液，纺丝参数设置为电压15KV，针头型号18G，极距针头到接收器的距离13cm，将锡箔纸作为接收物，纺丝液推进速率0.15mL/h，温度控制在25℃，相对湿度为55％，得到纳米纤维抗菌膜的厚度为0.130mm。
(5)利用(4)得到的单层纺丝膜对草莓分别置于4℃和30℃进行保鲜实验。
对比例2:传统不含复合型脂质体双层抗菌膜的制备
(1)将0.4g大豆卵磷脂、0.2g胆固醇，按2：1质量比例溶于10mL三氯甲烷中并加入200μl肉桂醛精油，采用超声辅助溶解后倒入圆底烧瓶中。
(2)将圆底烧瓶置于旋转蒸发仪中，旋转蒸发仪温度设置为40℃，在0.08MPa减压旋蒸40min将溶剂蒸干，圆底烧瓶内壁带蜂窝状的薄膜。
(3)往圆底烧瓶中加入0.1Mm的PBS缓冲溶液，在0.02MPa条件下水合旋蒸40分钟，得到水合溶液。
(4)将所得的水合溶液在封闭式探头超声仪中400W超声10min，并离心，0.22μm滤膜过膜处理后得到肉桂醛热敏型精油脂质体。
果胶流延膜的制备
(1)将3g果胶溶于100g去离子水中过夜溶解，加入0.9g甘油作为增塑剂，
(2)取(1)中得到的70mL果胶溶液于30×20cm的玻璃皿中。放入40℃烘箱中4小时后揭膜，得到果胶流延膜。
双层纺丝膜的制备
(1)室温下配置乙醇体积浓度为70％的乙醇水溶液备用；
(2)取2g玉米醇溶蛋白溶于10mL步骤(1)的乙醇水溶液中，搅拌两小时使其溶解完全，得到质量体积分数为20％的基础纺丝液。
(3)在(2)制备的基础纺丝液和得到的肉桂醛热敏型精油脂质体按体积比为7：3混合，磁力搅拌器搅拌均匀，超声5min除去气泡，得到纺丝液；
(4)用5mL注射器吸取步骤(3)制备的纺丝液，纺丝参数设置为电压15KV，针头型号18G，极距针头到接收器的距离13cm，将以上所制备的果胶流延膜作为接收物,纺丝液推进速率0.15mL/h，温度控制在25℃,相对湿度为55％，得到纳米纤维抗菌膜的厚度为0.718mm。
(5)利用(4)得到的双层膜对草莓进行保鲜实验分别置于4℃和30℃保鲜。
表1.脂质体表征
表2.膜的机械性能
注：市售保鲜膜购自超市，由脱普日用化学品(中国)有限公司，型号:M100E2。
Claims (10)
1.一种肉桂醛精油脂质体抗菌双层膜的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备肉桂醛热敏型精油脂质体
将二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇、肉桂醛精油按4g:1-2g:2g:1-2mL溶于三氯甲烷中，并采用超声辅助溶解后倒入反应容器中，通过旋转蒸发将溶剂蒸干，在反应容器内壁得到带蜂窝状的薄膜；往反应容器中加入0.05-0.1mmol/L的PBS缓冲溶液，经水合旋蒸得到水合溶液；所得水合溶液再经超声、离心、滤膜过膜处理，得到肉桂醛热敏型精油脂质体；
(2)制备热敏蛋白复合型脂质体
将酪蛋白溶解在含有吐温80表面活性剂的0.05-0.1mmol/L的PBS缓冲溶液中，所述PBS缓冲溶液中吐温80的浓度为10-15mg/mL，所述酪蛋白与PBS缓冲溶液的投料比为0.8-1.2g：1L，并在室温下温育3-4小时，得到含有酪蛋白的溶液；随后，将肉桂醛热敏型精油脂质体和含有酪蛋白的溶液按照体积比8-12:1-3混合，然后进行10-15分钟冰浴超声处理；
将酪蛋白和肉桂醛热敏型精油脂质体混合物在-20±2℃下冷冻2～3小时，此过程使囊泡破裂，然后在0±2℃下缓慢解冻2～3小时，酪蛋白会穿插在脂质体双分子层中，然后温和脉冲超声处理以促进蛋白脂质体的密封得到热敏蛋白复合型脂质体，超声功率设置为50-100W，超声时间为1.5-2小时；
(3)制备果胶流延膜
将果胶溶于去离子水中过夜溶解，加入甘油作为增塑剂，取果胶溶液于玻璃皿中，放入35-40℃烘箱中4±0.5小时后揭膜，得到果胶流延膜；其中，果胶和甘油的投料质量比为3-3.5:0.9-1.1；
(4)制备静电纺丝双层膜
静电纺丝液的配制：取玉米醇溶蛋白粉溶解于乙醇的体积浓度为70-80％的乙醇水溶液中，其中玉米醇溶蛋白粉与乙醇水溶液的投料比为2-3g：10mL，得到基础纺丝液；往基础纺丝液中加入热敏蛋白复合型脂质体，其中基础纺丝液与热敏蛋白复合型脂质体的体积比为5-10:3-5，搅拌2-3小时，超声除去气泡，得到静电纺丝液；
纺丝条件：取制备的静电纺丝液进行静电纺丝，纺丝参数为电压13-15KV，针头型号18G，极距针头到接收器的距离11-13cm，接收器为滚筒形式，将步骤(3)制备的果胶流延膜作为接收物，纺丝液推进速率0.15-0.18mL/h，温度控制在25±2℃，相对湿度为50±5％，得到肉桂醛精油脂质体抗菌双层膜，其厚度为0.6～0.8mm。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇、肉桂醛精油的投料比为4g:2g:2g:2mL。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，旋转蒸发的条件为：在35-40℃、0.07-0.08MPa下减压旋蒸40-50min将溶剂蒸干。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，水合旋蒸的条件为：在室温、0.02-0.03MPa条件下水合旋蒸30-40分钟。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，水合旋蒸的条件为：在25-30℃、0.02MPa条件下水合旋蒸40分钟。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述的水合溶液在封闭式探头超声仪中进行超声，超声条件为：400-450W超声10-15min。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，控制果胶、去离子水和甘油的投料质量比为3-3.5:100:0.9-1.1，取果胶溶液置于玻璃皿中，其中果胶溶液体积与玻璃器皿的底面积的比例为0.1-0.12mL/cm2，经烘干得到果胶流延膜。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，控制果胶、去离子水和甘油的投料质量比为3:100:0.9。
9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，取玉米醇溶蛋白粉溶解于乙醇的体积浓度为70的乙醇水溶液中，其中玉米醇溶蛋白粉与乙醇水溶液的投料比为2g：10mL，得到基础纺丝液；往基础纺丝液中加入热敏蛋白复合型脂质体，其中基础纺丝液与热敏蛋白复合型脂质体的体积比为7:3。
10.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于所述制备方法按照如下步骤实施：
(1)制备肉桂醛热敏型精油脂质体
将二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇、肉桂醛精油按4g:2g:2g:2mL溶于三氯甲烷中，并采用超声辅助溶解后倒入反应容器中，在35-40℃、0.07-0.08MPa条件下减压旋蒸40-50min将溶剂蒸干，在反应容器内壁得到带蜂窝状的薄膜；往反应容器中加入0.1mmol/L的PBS缓冲溶液，在室温、0.02-0.03MPa条件下水合旋蒸30-40分钟，得到水合溶液；所得水合溶液再经400-450W超声10-15min、离心、0.22μm滤膜过膜处理，得到肉桂醛热敏型精油脂质体；
(2)制备热敏蛋白复合型脂质体
将酪蛋白溶解在含有吐温80表面活性剂的0.1mmol/L的PBS缓冲溶液中，所述PBS缓冲溶液中吐温80的浓度为10mg/mL，所述酪蛋白与PBS缓冲溶液的投料比为1g：1L，并在室温下温育3-4h，得到含有酪蛋白的溶液；随后，将肉桂醛热敏型精油脂质体和含有酪蛋白的溶液按照体积比9:1混合，然后进行10分钟冰浴超声处理；
将酪蛋白和肉桂醛热敏型精油脂质体混合物在-20±2℃下冷冻2-3小时，此过程使囊泡破裂，然后在0±2℃下缓慢解冻2～3小时，酪蛋白会穿插在脂质体双分子层中，然后温和脉冲超声处理以促进蛋白脂质体的密封得到热敏蛋白复合型脂质体，超声功率设置为50-100W，超声时间为1.5-2小时；
(3)制备果胶流延膜
将果胶溶于去离子水中过夜溶解，加入甘油作为增塑剂，取果胶溶液于玻璃皿中，放入35-40℃烘箱中4±0.5小时后揭膜，得到果胶流延膜；
(4)制备静电纺丝双层膜
静电纺丝液的配制：取玉米醇溶蛋白粉溶解于乙醇的体积浓度为70％的乙醇水溶液中，其中玉米醇溶蛋白粉与乙醇水溶液的投料比为2g：10mL，得到基础纺丝液；往基础纺丝液中加入热敏蛋白复合型脂质体，其中基础纺丝液与热敏蛋白复合型脂质体的体积比为7:3，搅拌2-3小时，超声除去气泡，得到静电纺丝液；
纺丝条件：取制备的静电纺丝液进行静电纺丝，纺丝参数为电压15KV，针头型号18G，极距针头到接收器的距离13cm，接收器为滚筒形式，将步骤(3)制备的果胶流延膜作为接收物，纺丝液推进速率0.15mL/h，温度控制在25±2℃，相对湿度为50±5％，得到肉桂醛精油脂质体抗菌双层膜，其厚度为0.6～0.8mm。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| CN201811002900.4A CN109056083B (zh) | 2018-08-30 | 2018-08-30 | 一种可调控释放的肉桂醛精油脂质体抗菌双层膜的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
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