CN102697728B - 一种水溶性药物脂质体的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种水溶性药物脂质体的制备方法，包括以下步骤：（1）将类脂类膜材物质溶解于有机溶剂中，加入玻璃微球后，经过旋转蒸发，冷冻干燥得到成膜的玻璃微球；（2）将水溶性药物配制成溶液，加入到成膜的玻璃微球中，在水浴中超声，加入缓冲溶液，搅拌；（3）分离出玻璃微球后，所得液体即为水溶性药物脂质体混悬液。本发明方法可以极大的提高水溶性药物脂质体的包封率，有效避免药物与有机溶剂接触，保护了药物的生物活性；同时可以将有机溶剂清除干净，提高了脂质体的安全性，是一种生产成本较低、适合工业化的方法。

Description

一种水溶性药物脂质体的制备方法

技术领域

本发明涉及生物医药领域及食品领域，确切的说是一种一种水溶性药物脂质体的制备方法。

技术背景

脂质体是由磷脂或其类似物在水相中自发形成的闭合的囊泡状结构。最早于1965年被英国的 Bangbam博士发现并命名的。之后它作为一种药物载体受到了广泛的研究和应用。

脂质体作为药物载体，具有无毒性、长效性、靶向性、缓释性、给药途径多样性、药物在组织中分布的可控性、与细胞的亲和性等特性。但脂质体的研究距今虽已有40多年的历史，国内外上市的产品仍较少，对药物尤其是对水溶性药物的包封率低是影响其工业化生产的重要原因之一。

目前常用的的脂质体制备方法包括：薄膜分散法、超声分散法、逆向蒸发法、注入法、冻融法、复乳法、超临界法、主动载药法等 ，其中可以用做包封水溶性药物的方法有逆向蒸发法、冻融法、超临界法、主动载药法等。在文章“重组人生长激素脂质体的制备及载药研究”（中国生化药物杂志，第27卷第三期，2006年）中报道了采用乙醇注入法结合反复冻融技术制备水溶性药物人生长激素脂质体，包封率可达 63. 59%。在文章“Development of liposomal capreomycin sulfate formulations: Effects of formulation variables on peptide”（Inter J Pharmac，第311期，2006年）中报导了以反复冻融法制备了强亲水性药物硫酸卷曲霉素的脂质体，包封率达50%。文章“Preparation of liposomes using an improved supercritical reverse phase evaporation”（Langmuir，第22期，2006年）中报导了以超临界 CO2取代有机溶剂作为溶媒，采用超临界逆向蒸发法制备 D- 葡萄糖的脂质体，以薄膜分散法作为参照，包封率分别为 36%，10%。文章“A liposomal formulation of doxorubicin, composed of hexadecylphosphocholine ( HePC ) : physicochemical characterization and cytotoxic activity against human cancer cell lines ”（Biomed i Phamracothe，第60期，2005年）中报导了用pH梯度法制备了阿霉素脂质体，最高包封率达99.1%。这些文章所报道的方法中，冻融法一般需要反复冻融多次，实验极为耗时，且包封率也较低；逆向蒸发法在制备脂质体过程中会涉及有机溶剂与药物的直接接触，会对药物的活性和安全性产生影响，而且包封率也较低，一般不超过50%；超临界逆向蒸发法避免了药物与有机溶剂接触，但是用超临界设备，成本较高，且包封率也较低；主动载药法可以获得较高包封率的脂质体，但其制备条件较难控制，而且此技术的应用与药物本身的结构、性质密切相关，难以推广。

专利号为ZL 200410096075. 0 的中国专利公开了一种以逆向蒸发法为基础，利用电场来提高水溶性药物的包封率的脂质体制备方法，以逆向蒸发法为基础，利用电场对磷脂膜的致孔作用，可以实现在连续相转变过程中，乳滴中的水渗出而药物仍然吸附或保留在乳滴中，获得了较高的包封率。此方法包封盐酸二甲双胍，当施加 1mA电流的电场 30 m in 后，形成脂质体的包封率超过60%，而逆向蒸发法制得的包封率仅30%。但此方法仍然涉及有机溶剂污染药物的问题，最终包封率也较低。

概括起来说，目前水溶性药物脂质体的制备方法主要存在以下三方面问题：

包封率普遍偏低，造成药物的浪费。

有机溶剂与药物发生接触，造成药物活性的丧失；有机溶剂不易除净，对药物安全造成隐患。

制备工艺复杂，造价昂贵，难以实现工业化生产。

发明内容：

为了克服水溶性药物脂质体制备过程中存在的上述问题，本发明提供一种新的水溶性药物脂质体制备方法——玻璃微球法。

本发明目的通过以下技术方案来实现：

一种水溶性药物脂质体的制备方法，包括以下步骤：

（1）将类脂类膜材物质溶解于有机溶剂中，加入玻璃微球后，经过旋转蒸发，冷冻干燥得到成膜的玻璃微球；

（2）将水溶性药物配制成水溶性药物溶液，加入到成膜的玻璃微球中，在水浴中超声，加入缓冲溶液，搅拌；

（3）分离出玻璃微球后，所得液体即为水溶性药物脂质体混悬液。

优选的，步骤（2）所述超声的频率为20kHz~100kHz，超声时间为1min~30min，使药物与玻璃微球表面的薄膜充分接触、吸附。

优选的，步骤（1）所述的玻璃微球与有机溶剂的体积比为1:1~5:1。

优选的，步骤（2）所述水溶性药物为胰岛素、抗生素、牛血清蛋白、免疫球蛋白或谷胱甘肽。

优选的，步骤（2）加入到成膜的玻璃微球中的水溶性药物溶液与玻璃微球的体积比为1:5~1:1。

优选的，步骤（1）所述玻璃微球的粒径为10目~300目；步骤（1）所述旋转蒸发的温度为20℃~50℃，旋转蒸发的时间为10min~180min，关键在于蒸发掉有机溶剂后磷脂可以在玻璃微球表面形成薄膜，并采用冷冻干燥法去除薄膜中痕量的有机溶剂。

优选的，步骤（2）所述搅拌时间为1min~180min。搅拌的作用是洗膜，即形成脂质体。

优选的，步骤（3）所述分离出玻璃微球的方法是离心、过滤或真空抽滤。分离出的玻璃微球以适量缓冲溶液清洗，收集合并所有液体即得水溶性药物脂质体混悬液。

优选的，所述类脂类膜材物质包磷脂类物质、甾醇类物质、表面活性剂类物质中的一种以上。

优选的，所述磷脂类物质包括卵磷脂或鞘磷脂；所述甾醇类物质包括胆甾醇或β-谷甾醇；所述表面活性剂类物质包括吐温-80。

优选的，所述水溶性药物溶液可以使盐溶液、水溶液或缓冲液。

本发明相对于现有技术所具有的优点及有益效果：

（1）本发明可以极大的提高水溶性药物脂质体的包封率。

（2）该制备工艺可以有效避免药物与有机溶剂接触，保护了药物的生物活性。

（3）该工艺可以将有机溶剂清除干净，提高了脂质体的安全性。

（4）该生产工艺适合工业化生产，且制备成本较低。

具体实施方式

以下结合实例对本发明的具体实施作进一步说明，但本发明的实施和保护范围不限于此。

实施例1

称取104mg卵磷脂，28mgβ-谷甾醇，溶解于5mL氯仿中，量取40目玻璃微球15mL加入到所述氯仿中，完全吸附后，于40℃旋转蒸发除去氯仿，将所得玻璃微球冷冻干燥12h，除去痕量氯仿；称取21mg牛血清蛋白溶解于5mL磷酸盐缓冲溶液中（10mM，pH7.4），加入到上述玻璃微球中，待完全吸附后，放于水浴超声波中，28kHz频率下超声10min，取出后继续加入磷酸盐缓冲液5mL，磁力搅拌60min，真空抽滤，收集滤液，以10mL磷酸盐缓冲液清洗玻璃微球，真空抽滤，收集滤液，合并两次滤液即为牛血清蛋白脂质体混悬液。以高速冷冻离心法（采用高速冷冻离心机）辅助超滤离心法分离脂质体和游离药物，测定包封率，为87.96%。

实施例2

称取81mg卵磷脂，21mgβ-谷甾醇，30mg吐温-80，溶解于5mL氯仿中，量取40目玻璃微球15mL加入到氯仿中，完全吸附后，于40℃旋转蒸发除去氯仿，将所得玻璃微球冷冻干燥12h，除去痕量氯仿；称取19mg谷胱甘肽溶解于5mL磷酸盐缓冲溶液中（10mM，pH7.4），加入到上述玻璃微球中，待完全吸附后，放于水浴超声波中，28kHz频率下超声15min，取出后继续加入磷酸盐缓冲液5mL，磁力搅拌60min，真空抽滤，收集滤液，以10mL磷酸盐缓冲液清洗玻璃微球，真空抽滤，收集滤液，合并两次滤液即为谷胱甘肽脂质体混悬液。以高速冷冻离心法辅助超滤离心法分离脂质体和游离药物，测定包封率，为94.12%。

实施例3

称取94mg卵磷脂，26mgβ-谷甾醇，36mg吐温-80，溶解于3mL氯仿中，量取100目玻璃微球10mL加入到氯仿中，完全吸附后，于40℃旋转蒸发除去氯仿，将所得玻璃微球冷冻干燥12h，除去痕量氯仿；量取胰岛素注射液（40U/mL）3mL，加入到上述玻璃微球中，待完全吸附后，放于水浴超声波中，28kHz频率下超声10min，取出后加入磷酸盐缓冲液3mL，磁力搅拌60min，真空抽滤，收集滤液，以6mL磷酸盐缓冲液清洗玻璃微球，真空抽滤，收集滤液，合并两次滤液即为胰岛素脂质体混悬液。以高速冷冻离心法辅助超滤离心法分离脂质体和游离药物，测定包封率，为90.22%。

实施例4

称取102mg卵磷脂，25mg胆固醇38mg，吐温-80，溶解于3mL氯仿中，量取60目玻璃微球10mL加入到氯仿中，完全吸附后，于40℃旋转蒸发除去氯仿，将所得玻璃微球冷冻干燥12h，除去痕量氯仿；量取胰岛素注射液（40U/mL）3mL，加入到上述玻璃微球中，待完全吸附后，放于水浴超声波中，28kHz频率下超声10min，取出后加入磷酸盐缓冲液3mL，磁力搅拌60min，真空抽滤，收集滤液，以6mL磷酸盐缓冲液清洗玻璃微球，真空抽滤，收集滤液，合并两次滤液即为胰岛素脂质体混悬液。以高速冷冻离心法辅助超滤离心法分离脂质体和游离药物，测定包封率，为85.64%。

Claims (5)

1.一种水溶性药物脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将类脂类膜材物质溶解于有机溶剂中，加入玻璃微球后，经过旋转蒸发，冷冻干燥得到成膜的玻璃微球；所述的玻璃微球与有机溶剂的体积比为1:1~5:1；所述玻璃微球的粒径为10目~300目；所述旋转蒸发的温度为20℃~50℃，旋转蒸发的时间为10min~180min；

（2）将水溶性药物配制成水溶性药物溶液，加入到成膜的玻璃微球中，在水浴中超声，加入缓冲溶液，搅拌；加入到成膜的玻璃微球中的水溶性药物溶液与玻璃微球的体积比为1:5~1:1；所述超声的频率为20kHz~100kHz，超声时间为1min~30min；所述水溶性药物为胰岛素、抗生素、牛血清蛋白、免疫球蛋白或谷胱甘肽；

（3）分离出玻璃微球后，所得液体即为水溶性药物脂质体混悬液。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述搅拌时间为1min~180min。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述分离出玻璃微球的方法是离心、过滤或真空抽滤。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述类脂类膜材物质包括磷脂类物质、甾醇类物质和表面活性剂类物质。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述磷脂类物质包括卵磷脂或鞘磷脂；所述甾醇类物质包括胆甾醇或β-谷甾醇；所述表面活性剂类物质包括吐温-80。