TWI767886B

TWI767886B - 蛋白質或肽傳遞用的可溶性微針及其製造方法

Info

Publication number: TWI767886B
Application number: TW105125518A
Authority: TW
Inventors: 沈愚先; 李鮮和; 黃英敃; 姜來圭
Original assignee: 南韓商Ｌｇ生活健康股份有限公司
Priority date: 2015-04-06
Filing date: 2016-08-10
Publication date: 2022-06-21
Also published as: TW201714610A; KR20160119679A

Abstract

本發明涉及一種確保了肽或蛋白質的穩定性，並能夠提高上述肽或蛋白質的皮膚透過率的透皮給藥系統，尤其是，涉及一種包含肽或蛋白質的微針。

Description

蛋白質或肽傳遞用的可溶性微針及其製造方法

本發明涉及一種可溶性微針、能夠將蛋白質或肽穩定地傳遞至皮膚的透皮給藥系統以及改善了不穩定蛋白質或肽的穩定性的透皮給藥系統。

近年來，為了改善皮膚狀態(例如，皺紋、彈性等)，正在開發包含生長因子(epidermal growth factor(表皮生長因子，EGF)、human growth hormone(人生長激素，hGH)、transforming gowth factor α and β(轉化生長因子TGF-α，-β)、Fibroblast growth factor 1 and 2(成纖維細胞生長因子FGF-1，-2)、Keratinocyte growth factor(角質細胞生長因子，KGF)、Hepatocyte growth factor(肝細胞生長因子，HGF)、Platelet derived growth factor(血小板衍生生長因子，PDGF)等)的各種蛋白質和肽，並有包含這種蛋白質和肽的各種化妝品被開發上市。

例如，EGF是在人體傷口自然癒合的過程中，能夠促使肉芽(肉芽組織)生長，並促使血管再生的體內傷口治癒物質，能夠對老化現象發揮效果，因此，最近正進行著針對含有EGF成分的化妝品的開發。

然而，尤其是這種生長因子的生物半衰期短，且缺乏持續穩定性，因此，常有報導指出將其含入普通化妝品劑型時發生改性，從而難以發揮效果。為了改善這種不穩定蛋白質的穩定性，有時會利用微粒子(microparticle)或脂質體(liposome)等的被囊化(encapsulation)方法。然而，在這種方法中，由於粒子和脂質體的體積大（幾十至幾百 nm，或幾 μm以上），僅通過皮膚塗抹，難以直接吸收至皮膚內。

其次，對這種用於改善皮膚狀態的蛋白質而言，在大多數情況下，僅通過含量的增加，就難以提高所期望的效果。即，表皮生長因子（EGF）、人生長激素等作為活性蛋白質成分中的一種，比起含量，其活性度更為重要，並且，即便是增加了含量，在沒有活性度的情況下，也難以獲得期望的效果。

另外，對皮膚有益且有用的物質而言，為了通過實際的產品發揮其功效，必須在使用產品時透過角質層並從表皮層浸透至真皮層才能夠發揮效果，需要一種能夠均勻地傳遞至整個皮膚的方法。以往有一種利用表面活性劑等提高透過性的方法，然而，其透過性的提升效果微乎其微，並且，具有軟化皮膚屏障的缺點。

由於通過皮膚傳遞藥物具有使用便利性，因此，以多種形態應用於各種領域中。這種通過皮膚的藥物，主要是為了通過皮膚傳遞至體循環體系（systemic circulation），而除此之外，也有特應症治療劑、美白或皺紋改善用化妝品等藥物是以傳遞至皮膚本身的器官為目的使用的。儘管具有這種便利性以及功能性，但由於皮膚的結構，將藥物通過皮膚傳遞存在各種困難，因此，不容易開發出能夠通過皮膚的藥物。皮膚的角質層由磚塊（brick）結構和灰漿（mortar）結構組成，所述磚塊（brick）結構是由角蛋白豐富的角質細胞所組成；所述灰漿（mortar）結構是由神經醯胺（ceramide）、脂肪酸（fatty acid）或蠟（wax）等脂質將這種角質細胞之間填充的結構。這種結構起著屏障的作用，具有物質透過性非常低的特性。只有500 Da以下的低分子結構成分才能夠通過擴散方式傳遞至皮膚內，且只有脂質親和性優秀的物質才能夠通過皮膚。

由於這種皮膚結構上的特性，對脂質親和性低的肽而言，為了提高其脂質親和性，正嘗試著通過引入一定長度的烷基鏈以提高皮膚內吸收。

然而，此時肽的分子量增大，從而存在著實質上難以提高皮膚內吸收的問題。

因此，本發明人開始著手研究能夠將起到改善皮膚效果的各種的肽、蛋白質成分傳遞至皮膚內，並能夠提升效果的方案。

發明所要解決的問題

鑒於上述情況，本發明要解決的課題是，提供一種能夠將用於改善皮膚狀態的多種蛋白質成分、尤其是將生長因子穩定地傳遞至皮膚內的蛋白質給藥系統、製造該系統的方法以及利用該系統向皮膚內傳遞蛋白質（尤其是生長因子）的方法。

並且，在提升肽的脂質親和度的同時，解決以往因分子量大而難以透過皮膚的、肽的透皮傳遞問題。

另外，提供一種能夠將用於改善皮膚狀態的多種肽傳遞至皮膚內的肽給藥系統、製造該系統的方法、以及利用該系統向皮膚內傳遞脂質親和度低的肽的方法。

解決問題的技術方案

為了解決上述課題，本發明提供一種含有蛋白質或肽的微針，更佳地，形成上述微針的物質在皮膚內溶解，因此，將上述微針使用於皮膚時，通過微針的溶解或崩解，能夠將肽穩定地傳遞至皮膚。

本發明人對各種給藥系統進行了研究，然而，如上所述地在任何一種系統中，實現在提升脂質親和度低的肽的脂質親和度的同時，即使分子量增加也能夠穩定地透過皮膚的肽傳遞系統並非容易。本發明人經過多方努力，驚奇地發現通過將N-端具有烷基鏈的肽或肽衍生物含入皮膚內可溶性（soluble）微針中，能夠將其有效地傳遞至皮膚內，從而完成了本發明。

多肽作為多個胺基酸的連接體，是指互不相同的胺基酸通過一種稱作肽鍵的化學鍵被長長地連接在一起的情形，上述多肽也被簡稱為肽。

為了達成上述課題，微針在皮膚內需呈現可溶性，並且，為了形成可溶性微針，可以使用透明質酸（Hyaluronic acid）、羧甲基纖維素鈉（Na-CMC，Sodium carboxymethyl cellulose）、乙烯基吡咯烷酮-醋酸乙烯酯共聚物、聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol）以及聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinyl pyrrolidone）等水溶性高分子；木糖（Xylose）、蔗糖（Sucrose）、麥芽糖（Maltose）、乳糖（Lactose）、海藻糖（Trehalose）等糖類；或它們的混合物。尤其是，綜合考慮微針的皮膚透過強度，以及在皮膚內的溶解速度等，較佳地使用寡透明質酸（Oligo-Hyaluronic acid）、羧甲基纖維素鈉（Na-CMC，Sodium carboxymethyl cellulose）以及糖類（Saccharide）（更佳地為海藻糖（Trehalose））的混合物，更佳地還混合有下述的甘油（Glycerine）。較佳地，本發明的微針除含有形成微針的上述成分之外，還可以包含增塑劑、表面活性劑、防腐劑、抗炎劑等。

作為上述增塑劑（plasticizer），例如，可以單獨或混合使用乙二醇（Ethylene glycol）、丙二醇（Propylene glycol）、二丙二醇（Dipropylene glycol）、丁二醇（Butylene glycol）、甘油（Glycerine）等多元醇。

較佳地，在本發明的微針中，肽的含量相對於微針製造溶液的總重量為0.01～20重量%，更優選為0.1～5重量%。

可在本發明中使用的肽，可以是由3～10個胺基酸組成的肽，較佳地，可以是在上述胺基酸的N-端具有碳原子數為10～20的烷基的肽。利用凝膠滲透色譜法測得的上述肽的分子量可以為200～3000 Da。

較佳地，上述肽可以是選自於由三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、三胜肽（Palmitoyl tripeptide）、肉豆蔻醯四肽（myristoyl tetrapeptide）、己醯基四肽（Caprooyl tetrapeptide）、肉豆蔻醯五肽（myristoyl pentapeptide）、五胜肽（Palmitoyl pentapeptide）、肉豆蔻醯六肽（myristoyl hexapeptide）、六胜肽（Palmitoyl hexapeptide）、七胜肽（Palmitoyl heptapeptide）或它們的混合物所組成的組中的任意一種。

例如，上述三胜肽可較佳地為三胜肽-5（Pal-Lys-Val-Lys-OH），肉豆蔻醯四肽可以是肉豆蔻醯四肽-12（Myr-Lys-Ala-Lys-Ala-NH₂ ），己醯基四肽可以是己醯基四肽-3（Cap-Lys-Gly-His-Lys），肉豆蔻醯五肽可以是肉豆蔻醯五肽-17（Myr-Lys-Leu-Ala-Lys-Lys-NH₂ ），五胜肽可以是五胜肽-4（Pal-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH），肉豆蔻醯六肽可以是肉豆蔻醯六肽-16（Myr-Ala-Asp-Leu-Lys-Pro-Thr），六胜肽可以是六胜肽-12（Pal-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly），七胜肽可以是七胜肽-18（Pal-Tyr-Pro-Trp-Gln-Arg-Phe）。

另外，本發明提供一種肽給藥用（傳遞用）的微針貼劑（patch）系統，該系統附著有上述微針。

另外，本發明提供一種含有肽或肽衍生物的微針的製造方法，該方法包括：製造包含上述肽和皮膚內可溶性物質的溶液的S1步驟；將上述溶液注入微針模具的S2步驟；以及，乾燥並將微針從上述模具中分離的S3步驟。

較佳地，上述微針可包含分子量為200～3000 Da的肽或肽衍生物。另外，本發明提供一種肽的皮膚透過率得以提高的肽的透皮給藥方法，其特徵在於，利用了本發明的微針。

另外，本發明提供含有大分子量肽的微針在皺紋改善中的用途。

根據本發明的又一個實施例，提供一種包含含有蛋白質或肽的微粒子的微針，更佳地，形成微針的物質在皮膚內發生溶解，當在皮膚上使用微針時，通過微針的溶解或崩解，包含在微針內部的微粒子能夠迅速地擴散至皮膚內。

包含在內部的微粒子含有形成疏水性核的高分子，因此能夠將蛋白質或肽穩定地傳遞至皮膚。

本文中所使用的「蛋白質或肽」，並非必須區分而使用，而是以包括胺基酸聚合物的廣義使用。

眾所周知，通常情況下，蛋白質是指分子量大於肽的胺基酸聚合物，而胺基酸的聚合數目為50以下時則稱作肽。但在本文中，並非必須以胺基酸的聚合數目來限定並做解釋。

本發明人對各種給藥系統進行了研究，並經過多方努力，驚奇地發現通過將包含蛋白質的微粒子浸漬在可溶性（soluble）微針中，能夠將蛋白質或肽有效地傳遞至皮膚內，從而完成了本發明。將封裝有蛋白質的微粒子浸漬在可溶性微針中，並使用於皮膚時，通過微針能夠使蛋白質無痛透過至皮膚內，並且，由於微針因皮膚內的水分發生溶解，封裝有蛋白質成分的微粒子能夠傳遞至皮膚內。

本文中使用的「封裝有蛋白質的微粒子」，表示蛋白質位於微粒子內部的狀態，並表示蛋白質被微粒子完全包圍的狀態。例如，封裝有蛋白質的微粒子的截面，可具有如本說明書的圖6所示的形態，但其僅為示例。

「浸漬」表示被包含的狀態，其不僅包括位於微針內部並與外部環境完全隔絕的狀態，還可以包括微粒子的一部分暴露在微針表面的狀態。「包合」和「浸漬」在本文中能夠以相同的含義使用。「浸漬在微針中」不僅可理解為完全包含在微針內部的情況，還可以理解為，以在皮膚上使用微針時，微針和微粒子能夠一同被傳遞的形式包含在微針中的所有形態的集合。

由傳遞至皮膚內的微粒子釋放出蛋白質成分，尤其是釋放出生長因子，因此，能夠有效地傳遞至皮膚內。本文中使用的生長因子可以包含生長激素。

為了達成上述課題，微針在皮膚內需呈現可溶性，並且，為了形成可溶性微針，可以使用透明質酸（Hyaluronic acid）、羧甲基纖維素鈉（Na-CMC，Sodium carboxymethyl cellulose）、乙烯基吡咯烷酮-醋酸乙烯酯共聚物、聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol）和聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinyl pyrrolidone）等水溶性高分子；木糖（Xylose）、蔗糖（Sucrose）、麥芽糖（Maltose）、乳糖（Lactose）、海藻糖（Trehalose）等糖類；或它們的混合物。尤其是，綜合考慮微針的皮膚透過強度，以及在皮膚內的溶解速度等，較佳地使用寡透明質酸（Oligo-Hyaluronic acid）、羧甲基纖維素鈉（Na-CMC，Sodium carboxymethyl cellulose）和糖類（saccharide）（更優選為海藻糖（Trehalose））的混合物，更佳地還混合有下述的甘油（Glycerine）。較佳地，本發明的微針除了包含含有蛋白質、尤其是含有生長因子的微粒子和形成微針的上述成分之外，還可以包含增塑劑、表面活性劑、防腐劑、抗炎劑等。其中，上述增塑劑、表面活性劑、防腐劑、抗炎劑等，不僅可以使用本文中所記載的成分，而且，本領域中通常使用的所有成分均可以使用。

在本發明中，與上述蛋白質一同形成微粒子的物質，必需是在微針的製造過程中，不會引發蛋白質的結構變形，並能夠穩定地包合的物質。尤其是，形成上述微粒子的物質，需能夠形成疏水性核，以在蛋白質無結構變形的情況下能夠穩定地提供該蛋白質。

作為形成這種微粒子的物質，可以使用能夠形成疏水性核的高分子，作為緩釋高分子，可以單獨或混合使用聚丙交酯、聚乙交酯、聚（丙交酯-共聚-乙交酯）、聚酸酐（polyanhydride）、聚原酸酯（polyorthoester）、聚醚酯、聚己內酯、甲氧基聚乙二醇-b-聚己內酯（MPEG-PCL）、聚醯胺酯、聚丁酸、聚戊酸、聚氨基甲酸酯或它們的共聚物等的生物降解高分子；以及，聚丙烯酸脂、乙烯-醋酸乙烯聚合物、丙烯酸取代醋酸纖維素、非降解聚氨基甲酸酯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚氟乙烯、聚乙烯基咪唑、氯磺化聚烯烴（chlorosulphonate polyolefins）、聚氧化乙烯或它們的共聚物等的非生物降解高分子，但本發明並不受限於此。

當綜合考慮蛋白質、尤其是生長因子的穩定性以及在皮膚內的釋放性等時，作為上述形成疏水性核的高分子，可較佳地使用聚丙交酯、聚乙交酯和聚（丙交酯-共聚-乙交酯）中的任意一種以上與甲氧基聚乙二醇-b-聚己內酯（MPEG-PCL）的混合物。

這種微粒子在能夠達成本發明目的的範圍內，可以是骨架（matrix）型，也可以是膜控（reservoir）型。

可在本發明中使用的微粒子，能夠通過本發明所屬領域中公知的各種方法製成。例如，可以利用溶劑交換法（Solvent exchange method）、溶劑蒸發法（Solvent evaporation method）、膜透析法（Membrane dialysis method）、噴霧乾燥法（Spray drying method）等製成本發明中可以使用的微粒子。例如，可以利用文獻Journal of Controlled Release，70，1-20，2001以及International Journal of PharmTech Research，3，1242-1254，2011中記載的方法。較佳地可以通過普通的乳化和溶劑蒸發（emulsification and solvent evaporation）方法製成。

較佳地，本發明的微粒子直徑為0.01～10 μm。如果粒子的大小超過10 μm，則在浸漬到微針時，針的強度減弱，從而難以穿透皮膚。本發明微粒子的直徑，是通過雷射散射（LLS）方法測得，例如，利用瑪律文（Malvern）公司的Zetasizer 2000^TM 測得。

較佳地，在本發明的微粒子中，蛋白質或肽的含量相對於微粒子的總重量為0.01～20重量%，更佳地為0.1～5重量%。另外，在本發明的微針中，這種微粒子的含量相對於微針的總重量較佳地為0.05～10重量%，更佳地為0.1～5重量%。

可在本發明中使用的蛋白質，特別較佳地為生長因子（growth factor）或生長激素。上述生長因子或生長激素是參與細胞的生長、增殖和分化的蛋白質，尤其是考慮到與選擇性的組織或臟器的匹配性，以及在傳遞過程中引發的蛋白質結構的改性等，需要準備合適的傳遞體或傳遞方法。本發明通過大量的研究結果確認，在蛋白質中，特別是生長因子（growth factor）和／或生長激素（human growth hormone）的傳遞過程中，將微粒子使用於微針中，對生長因子及生長激素的傳遞有效。

上述生長因子，可以是選自於由骨形態發生蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）、成纖維細胞生長因子（fibroblast growth factor，FGF）、血管內皮細胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、神經生長因子（nerve growth factor，NGF）、表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）、胰島素樣生長因子（insulinlike growth factor，IGF）、轉化生長因子（trans-forming growth factor-α and -β，TGF-α，-β）、腦源性神經營養因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）、血小板衍生生長因子（plateletderived growth factor，PDGF）、胎盤生長因子（placental growth factor，PlGF）、肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）、成纖維細胞生長因子（Fibroblast growth factor 1 and 2，FGF-1，-2）、角質化細胞生長因子（Keratinocyte growth factor，KGF）及其類似物所組成的組中的任意一種以上。

本文中使用的類似物，可包括與上述蛋白質具有80%序列同源性的情形，較佳地為具有85%序列同源性的蛋白質類似物，更佳地為具有90%序列同源性的蛋白質類似物。

另外，本發明提供一種蛋白質給藥用（傳遞用）的微針貼劑（patch）系統，該系統附著有上述微針。較佳地，本發明的一個實施例中提供一種蛋白質或肽在化妝學上的透皮給藥方法。

本發明提供一種含有肽或蛋白質的微針的製造方法，該方法包括：製造包含上述肽或蛋白質以及皮膚內可溶性物質的溶液的S1步驟；將上述溶液注入微針模具的S2步驟；以及，乾燥並將微針從上述模具分離的S3步驟，其中，上述S1步驟還包括將肽或蛋白質封裝至微粒子內的步驟，上述將肽或蛋白質封裝至微粒子內的步驟中，利用形成疏水性核的高分子將肽或蛋白質含入微粒子內部，從而改善了蛋白質結構的不穩定性或蛋白質的聚集（aggregation）。

另外，本發明提供一種皮膚透過量高且穩定性優秀的蛋白質的透皮給藥方法，其特徵在於，利用了本發明的微針。

另外，本發明提供一種微針在皺紋改善中的用途，其中，所述微針包含含有蛋白質，較佳地含有生長因子或生長激素，更佳地含有EGF、TGF-β或hGH的微粒子。

根據本發明的一個實施例，提供一種將包含分子量為200～3000 Da的肽的微針貼在皮膚上，從而將肽注入皮膚的方法。

根據本發明的一個實施例，提供包含分子量為200～3000 Da的肽的微針在皮膚皺紋改善中的用途。

根據本發明的一個實施例，提供一種將包含封裝有生長因子的微粒子的微針貼在皮膚上，從而將上述生長因子注入皮膚的方法。

根據本發明的一個實施例，提供包含封裝有生長因子的微粒子的微針在皮膚皺紋改善中的用途。

發明效果

根據本發明，提供一種提升了分子量大的肽的皮膚透過率的微針。

另外，根據本發明，提供一種含有皮膚透過率得以提升的肽的透皮給藥用的微針。另外，本發明還提供以利用這種微針為特徵的、肽的透皮給藥方法。

根據本發明，提供一種確保了蛋白質、尤其是生長因子的穩定性、且皮膚透過量得以提升的蛋白質透皮給藥用的微針。另外，本發明提供一種不會引發蛋白質結構的變形，使其能夠穩定地傳遞至皮膚的透皮給藥用的微針。

根據本發明，提供一種在含入普通化妝材料劑型時不會發生蛋白質之間的聚集，並能夠穩定地將蛋白質傳遞至皮膚內的蛋白質透皮傳遞系統。

另外，根據本發明，提供一種以利用這種微針為特徵的生長因子的透皮給藥方法。

為了有助於理解本發明，下面將舉出實施例詳細說明。但是，可對本發明的實施例進行各種變形，本發明的範圍並非限定於下述實施例。本發明的實施例，是為了向本領域的普通技術人員更加完整地說明本發明而提供的。

＜製造載蛋白微粒子＞

首先，將1 g聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）溶於10 mL的二氯甲烷（Methylene Chloride）中。將200 mg多肽（表皮生長因子，EGF）溶於2 mL純淨水中的溶液緩緩地添加至PLGA溶液中，製造了第一次W/O乳液。向0.2% 聚乙烯醇水溶液（100 mL）中邊攪拌邊添加了第一次製造的W/O 乳液。將如此製造的W/O/W 雙重乳液在室溫中攪拌24個小時，使作為有機溶劑的二氯甲烷蒸發，製造了裝有EGF的微粒子。利用旋轉蒸發器將殘留的二氯甲烷完全去除，並使水分與有機溶劑一同將蒸發，濃縮至EGF含量達到總量的0.2%。利用ELISA 試劑盒分析的結果，EGF含量為0.21%，利用細微性分析儀（Particle size analyzer）分析的結果，微粒子的平均大小為350 nm。

＜製造EGF載微粒子微針＞

如下表1，製造了EGF（以溶液形態添加）或浸漬有EGF的可溶性微針。下述表1的含量以重量%表示。

表1

具體而言，如下所述地製造了浸漬有EGF的可溶性微針。將Oligo-HA（寡透明質酸）、Na-CMC（羧甲基纖維素鈉）以及海藻糖溶解到純淨水中，並添加甘油、HCO-40以及EGF製造了EGF溶液。將所製造的EGF溶液澆注到矽膠微針模具（silicone microneedle mold），在3000 rpm下離心分離（centrifugation）10分鐘，向微小模具填充了溶液。填充溶液後將其放入乾燥烘箱（70 ℃）中乾燥3個小時，最後，利用粘著膜將微針從矽膠模具（silicone mold）中分離出來。

具體而言，如下所述地製造了浸漬有EGF 微粒子（EGF-MP）的可溶性微針。將Oligo-HA（寡透明質酸）、Na-CMC（羧甲基纖維素鈉）以及海藻糖溶解在純淨水中，並添加甘油、HCO-40以及EGF 微粒子（EGF 0.2%）製造了溶液。將所製造的溶液澆注（casting）到矽膠微針模具後，在3000 rpm下離心分離10分鐘，向微小模具填充了溶液。填充溶液後將其放入乾燥烘箱（70 ℃）中乾燥3個小時，利用粘著膜將微針從矽膠模具中分離出來。

＜EGF水包油劑型（Oil-in-Water）乳霜＞

為了對比浸漬在微針中的EGF的皮膚透過量，在比較例中，將EGF浸漬在普通的水包油劑型乳霜中進行了比較。下述含量以重量%表示。

表2

＜藥物釋放行為＞

利用裝有豬皮膚的弗蘭茲擴散池，評價了上面製造的微針的EGF釋放（參照圖2）。作為受體溶液（acceptor solution），使用了含有30重量% DPG的PBS溶液。利用弗蘭茲擴散池，並利用ELISA 試劑盒隨時間測量了豬皮膚組織以及受體溶液中EGF的含量。向豬皮膚塗抹EGF乳霜，或貼上浸漬有EGF或EGF-MP的微針，對比了隨時間的肽的皮膚透過量。使微針浸透到豬皮膚內發生溶解後（貼附時間：2小時、溫度：32℃），摘除了微針。並將通過微針吸收了EGF的豬皮膚放入弗蘭茲擴散池中，確認了EGF隨時間從豬皮膚釋放至受體溶液的行為，將其結果示於圖3。如圖3所示，浸漬在微針中的EGF和EGF-MP，是通過微針直接穿透皮膚，其透過量為1 μg以上，與乳霜相比，表現出了約500倍以上的皮膚透過量。

＜皺紋改善效果＞

將EGF乳霜、浸漬有EGF和EGF-MP的微針每天使用於眼角皺紋處，經過12周後，通過矽膠複製品（silicone replica）以及皺紋圖像分析方法確認了皺紋改善情況（N＝20），將其結果示於圖4。與EGF乳霜相比，浸漬有EGF的微針表現出了優秀的改善效果，尤其是，浸漬有EGF-MP的微針表現出了突出的皺紋改善效果。這是EGF通過浸漬有EGF-MP的微針（MN）有效傳遞至皮膚帶來的效果，並且，EGF以穩定的結構從傳遞至皮膚內的EGF-MP中釋放出來，從而使得皺紋改善效果突出。

＜EGF穩定性分析（SEC）＞

利用SEC（體積排阻色譜法）確認了浸漬在微針中的EGF被釋放時，EGF的結構是否有改性。

當將EGF本身浸漬在微針中並傳遞至皮膚時，EGF結構發生聚集而導致變形，聚集峰（aggregation peak）相對增加，而將其穩定地封裝到微粒子並浸漬到微針時，傳遞至皮膚之後也不會發生聚集，表現出其結構與標準物質類似的結果。

由此可知，當EGF等多肽或蛋白質的情況下，將其穩定地封裝的微粒子浸漬到微針中並傳遞至皮膚時，能夠高效地透皮傳遞的同時，能夠以穩定的結構被傳遞至皮膚。

＜製造肽微針＞

如下表3，製造了肽（以溶液形態添加）或浸漬有肽的可溶性微針。下述表3的含量以重量%表示。

表3

具體而言，如下所述地製造了浸漬有肽（肉豆蔻醯四肽-6）的可溶性微針。

將Oligo-HA（寡透明質酸）、Na-CMC（羧甲基纖維素鈉）以及海藻糖溶解在純淨水中，並添加甘油、HCO-40以及肽溶液（肽10%，DPG 90%）製造了分散有肽的溶液（DPG：二丙二醇）。將所製造的肽分散溶液澆注到矽膠微針模具後，在3000 rpm下離心分離10分鐘，向微小模具填充了溶液。填充溶液後將其放入乾燥烘箱（70 ℃）中乾燥3個小時，最後，利用粘著膜將微針從矽膠模具中分離了出來。

＜肽的水包油劑型（Oil-in-Water）乳霜＞

為了對比浸漬在微針中的肽的皮膚透過量，在比較例，將肽浸漬在普通的水包油劑型乳霜中進行了比較。下述含量以重量%表示。

表4

＜藥物釋放行為＞

利用裝有豬皮膚的弗蘭茲擴散池，對上面製造的微針所釋放的肽的隨時間皮膚透過量進行了比較（參照圖2）。受體溶液（acceptor solution）使用了含有30重量% DPG的PBS溶液。

即，利用弗蘭茲擴散池，並利用液相色譜法隨時間測量了豬皮膚組織以及受體溶液中肽的含量。

如圖3所示，浸漬在微針中的EGF和EGF-MP，是通過微針直接穿透皮膚，其透過量為1 μg以上，與乳霜相比，表現出了約500倍以上的皮膚透過量

向豬皮膚塗抹肽乳霜、或貼上浸漬有肽的微針，對比了隨時間的肽的皮膚透過量。使微針浸透到豬皮膚內發生溶解後（貼附時間：2小時；溫度：32 ℃），摘除了微針。並將通過微針吸收了肽的豬皮膚放入弗蘭茲擴散池中，確認了肽隨時間從豬皮膚釋放至受體溶液的行為，將其結果示於圖7。

如圖7所示，含有肽的乳霜的皮膚透過量約為0.1 μg，微乎其微，而浸漬在微針中的肽是通過微針直接穿透皮膚，其透過量為15 μg以上，與乳霜相比，表現出了約100倍以上的皮膚透過量。

＜皺紋改善效果＞

將肽乳霜以及浸漬有肽的微針每天使用於眼角皺紋處，經過12周後，通過矽膠複製品（silicone replica）以及皺紋圖像分析方法，確認了皺紋改善程度（N＝20）。

與肽乳霜相比，浸漬有肽的微針表現出了5倍以上優秀的改善效果，經確認，這是因為肽通過微針有效地浸透至皮膚內，從而使皺紋改善效果突出。

工業實用性

本發明能夠應用於改善皮膚皺紋用的化妝品、藥學的用途中。

本發明的微針能夠帶來優秀的減少皮膚皺紋的效果。

雖然本發明已以實施例揭露如上然其並非用以限定本發明，任何所屬技術領域中具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作些許之更動與潤飾，故本發明之保護範圍當視後附之專利申請範圍所界定者為準。

無

本說明書所附的以下附圖，用於舉例說明本發明的較佳實施例，並與前述的發明內容一同用於更加深刻地理解本發明的技術思想，因此，不應該僅侷限於附圖中所公開的內容解釋本發明。

圖1是表示本發明的製造微針的各種方法中一個示例的圖。可通過溶液鑄膜法（solution casting）製造可溶性微針，可將溶液澆注（casting）到模具（mold）中，利用真空和/或離心分離（centrifuge）向微小的模具（mold）填充溶液後乾燥而製成。作為形成微針結構體的材料（material），可以使用普通的合成水溶性高分子和天然水溶性高分子。

圖2是用於評價本發明微針的藥物釋放行為的弗蘭茲擴散池（Franz diffusion cell）。

圖3是表示利用裝有豬皮膚的弗蘭茲擴散池對微針的EGF釋放進行評價的評價結果的圖表。

圖4是表示將本發明的浸漬有EGF溶液的微針（EGF微針）和浸漬EGF微粒子的微針（EGF-MP微針）長期使用於眼角皺紋後所表現出的皺紋改善程度的實驗結果。

圖5是表示EGF穩定性分析（SEC，Size Exclusion Chromatography，體積排阻色譜法）實施結果的圖表。其中，圖5A表示EGF標準物質的SEC資料，圖5B表示由微針釋放出的EGF的SEC資料。

圖6是示例性示出微粒子形態的示意圖。

圖7是表示利用裝有豬皮膚的弗蘭茲擴散池對微針的肽釋放進行評價的評價結果的圖表。

圖8是表示將本發明的浸漬有肽溶液的微針（肽微針）以及浸漬有肽的微針（肽微針）長期使用於眼角皺紋後所表現出的皺紋改善程度的實驗結果。

Claims

一種微針，其包含一微粒子，該微粒子包含有一疏水性核以及一肽或一蛋白質；其中，形成該微針的材料為皮膚內可溶性且水溶性；以及該肽或該蛋白質穩定地被包覆於該微粒子中，且該疏水性核對該肽或該蛋白質提供穩定性，使該肽或該蛋白質在該微針中不產生結構變形；其中，該肽是選自由三胜肽(Palmitoyl tripeptide)、肉豆蔻醯四肽(Myristoyl tetrapeptide)、己醯基四肽(Caprooyl tetrapeptide)、肉豆蔻醯五肽(Myristoyl pentapeptide)、五胜肽(Palmitoyl pentapeptide)、肉豆蔻醯六肽(Myristoyl hexapeptide)、六胜肽(Palmitoyl hexapeptide)、以及七胜肽(Palmitoyl heptapeptide)所組成之群組中的至少一者；該蛋白質為表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)。
如請求項1所述的微針，其中，形成該微針的物質為透明質酸(Hyaluronic acid)、羧甲基纖維素鈉(Na-CMC，Sodium carboxymethyl cellulose)、乙烯基吡咯烷酮-醋酸乙烯酯共聚物、聚乙烯醇(Polyvinyl alcohol)、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinyl pyrrolidone)、糖類或其混合物。
如請求項1所述的微針，其中，該微針除含有形成該微針的物質之外，還包含一增塑劑(plasticizer)。
如請求項1所述的微針，其中，形成該微粒子的材料包含一形成該疏水性核的高分子。
如請求項1所述的微針，其特徵在於，形成該微針的物質為透明質酸(Hyaluronic acid)、羧甲基纖維素鈉(Na-CMC，Sodium carboxymethyl cellulose)以及糖類之混合物。
如請求項4所述的微針，其中，該形成該疏水性核的高分子是由一生物降解高分子、一非生物降解高分子及其混合物所組成群組中選出的任意一種；其中，該生物降解高分子是由聚丙交酯、聚乙交酯、聚(丙交酯-共聚-乙交酯)、聚酸酐、聚原酸酯、聚醚酯、聚己內酯、甲氧基聚乙二醇-b-聚己內酯(MPEG-PCL)、聚醯胺酯、聚丁酸、聚戊酸、聚氨基甲酸酯及其共聚物所組成群組中選出的任意一種以上；以及其中，該非生物降解高分子是由聚丙烯酸脂、乙烯-醋酸乙烯聚合物、丙烯酸取代醋酸纖維素、非降解聚氨基甲酸酯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚氟乙烯、聚乙烯基咪唑、氯磺化聚烯烴(chlorosulphonate polyolefins)、聚氧化乙烯及其共聚物所組成群組中選出的任意一種以上。
如請求項6所述的微針，其中，該形成該疏水性核的高分子為聚丙交酯、聚乙交酯以及聚(丙交酯-共聚-乙交酯)中的任意一種以上與甲氧基聚乙二醇-b-聚己內酯(MPEG-PCL)的混合物。
如請求項1所述的微針，其中，該微粒子為骨架(matrix)型或膜控(reservoir)型。
如請求項1所述的微針，其中，該微粒子的直徑為0.01~10μm。
一種製備如請求項1所述的微針的製造方法，該微粒子包含一疏水性核以及一肽或一蛋白質，該製造方法包括：步驟S1：製造具有包含該疏水核以及該肽或該蛋白質的該微粒子、和一皮膚內可溶性且水溶性之物質的一溶液；步驟S2：將該溶液注入一微針模具；以及步驟S3：乾燥並將一微針從該微針模具中分離；其中，該微粒子係由包含使用一形成該疏水性核的高分子，將該肽或該蛋白質封裝於該微粒子中的步驟之程序所製造；且該疏水性核對該肽或該蛋白質提供穩定性，使該肽或該蛋白質在該微針中不產生結構變形；其中，該肽是選自由三胜肽(Palmitoyl tripeptide)、肉豆蔻醯四肽(Myristoyl tetrapeptide)、己醯基四肽(Caprooyl tetrapeptide)、肉豆蔻醯五肽(Myristoyl pentapeptide)、五胜肽(Palmitoyl pentapeptide)、肉豆蔻醯六肽(Myristoyl hexapeptide)、六胜肽(Palmitoyl hexapeptide)、以及七胜肽(Palmitoyl heptapeptide)所組成之群組中的至少一者；該蛋白質為表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)。
如請求項10所述的製造方法，其中，該皮膚內可溶性且水溶性之物質為透明質酸(Hyaluronic acid)、羧甲基纖維素鈉(Na-CMC，Sodium carboxymethyl cellulose)以及糖類之混合物。
如請求項10所述的製造方法，其中，該形成該疏水性核的高分子是由一生物降解高分子、一非生物降解高分子及其混合物所組成群組中選出的任意一種；其中，該生物降解高分子是由聚丙交酯、聚乙交酯、聚(丙交酯-共聚-乙交酯)、聚酸酐、聚原酸酯、聚醚酯、聚己內酯、甲氧基聚乙二醇-b-聚己內酯(MPEG-PCL)、聚醯胺酯、聚丁酸、聚戊酸、聚氨基甲酸酯及其共聚物所組成群組中選出的任意一種以上；以及其中，該非生物降解高分子是由聚丙烯酸脂、乙烯-醋酸乙烯聚合物、丙烯酸取代醋酸纖維素、非降解聚氨基甲酸酯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚氟乙烯、聚乙烯基咪唑、氯磺化聚烯烴(chlorosulphonate polyolefins)、聚氧化乙烯及其共聚物所組成群組中選出的任意一種以上。