CN109022282A - 一种产海洋低温尿酸氧化酶菌株的筛选方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及发酵工程领域，具体是一种产海洋低温尿酸氧化酶菌株的筛选方法。本发明以大连深海海泥、海水为样品，通过透明圈法对菌株进行初筛，其初筛培养基中添加大量K2HPO4以提高酶活，结合酶偶联分光光度法测酶活，进行复筛，最终得到海洋低温尿酸氧化酶高产菌株，酶活达到42.5U/mL。本发明方法中的初筛培养基配方，更适合从深海海泥、海水中筛选出高产尿酸氧化酶；本发明复筛方法‑酶偶联分光光度法测尿酸氧化酶极为灵敏，其测定过氧化氢浓度可精确到1μmol/L，并且其操作简便，成本低廉。

Description

一种产海洋低温尿酸氧化酶菌株的筛选方法
技术领域
本发明属于酶工程和基因工程领域，具体是一种产海洋低温尿酸氧化酶菌株的筛选方法。
背景技术
尿酸氧化酶是以尿酸为底物，能催化尿酸嘌呤环氧化开放，生成尿囊素，二氧化碳和过氧化氢的一种胞内酶。尿酸氧化酶广泛应用于医药、临床检测和商用染发剂，具有广阔的研究前景。但是国内外对尿酸氧化酶的研究仍处在起步阶段，现在的尿酸氧化酶的产量低，所得到的酶活也不高。国内医药所需的尿酸氧化酶主要依赖于进口，价格昂贵，因此需要对尿酸氧化酶进行深入研究。以减少进口尿酸氧化酶使用量，丰富我国的医药市场，摆脱我们国家对尿酸氧化酶依赖于进口的现状。
尿酸氧化酶的来源非常广泛，尿酸氧化酶最早被Schittenhelm发现，他从牛的肾脏中提纯了此酶。随着生命科学和化学的不断发展，极大丰富了尿酸氧化酶的来源，并对尿酸氧化酶的性质进行研究。其中，从微生物中发现尿酸氧化酶是尿酸氧化酶研究的重要进步。目前国际上筛选得到的产尿酸氧化酶菌株主要以陆地高温为主，而海洋低温产尿酸氧化酶菌株筛选方法鲜有报道。我国海洋资源丰富，从海洋中筛选新型、低温、高活性的尿酸氧化酶产生菌株尤为重要。
发明内容
本发明的目的是提供一种能筛选高产尿酸氧化酶菌株的筛选方法，应用透明圈法初筛、酶偶联分光光度法测酶活复筛筛选产尿酸氧化酶菌株。
为实现上述发明目的，本发明通过以下技术方案实现：
一种产海洋低温尿酸氧化酶菌株的筛选方法，所述方法包括以下步骤：
(1)从深海海泥、海水中采集样本；
(2)菌种初筛：将采集的海水、海泥振荡混匀后，静止，取上清液接种到富集培养基，25℃、160r/min振荡培养3d，同样的方法定向富集3次；将富集菌液梯度稀释后涂布于平板初筛培养基上，25℃培养2～5d；选取出现透明圈的菌落进一步纯化并保藏菌株；
其中，富集培养基按质量百分比为：尿酸1.00％，酵母膏0.75％，NaCl 0.05％，MgSO4 0.05％，K2HPO4 0.25％，KH2PO4 0.07％，pH7.5，121℃高压灭菌；
初筛培养基(平板)按质量百分比为：尿酸1.00％，酵母膏0.75％，NaCl 0.05％，MgSO40.05％，K2HPO4 0.25％，KH2PO4 0.07％，琼脂1.5％，pH7.5，121℃高压灭菌；
(3)菌种复筛：
将步骤(2)中初筛菌株接种于发酵培养基中，25℃、160r/min培养36h，酶偶联分光光度法测定尿酸氧化酶的酶活，从初筛菌株中筛选产尿酸氧化酶活最高的菌株，该菌株即为产海洋低温尿酸氧化酶菌株；
其中，发酵培养基按质量百分比为：尿酸1.00％，酵母膏0.75％，NaCl 0.05％，MgSO4 0.05％，K2HPO4 0.25％，KH2PO4 0.07％，pH7.5，121℃高压灭菌。
上述产海洋低温尿酸氧化酶菌株的筛选方法，步骤(3)中酶偶联分光光度法测尿酸氧化酶的酶活方法具体为：
(1)粗酶液制备：
取发酵液离心获得湿菌，经pH8.5的硼酸缓冲溶液洗涤3次以上洗净，将洗涤后的菌体悬浮于pH 8.5的硼酸缓冲溶液中，冰浴条件下超声波破碎，将破碎液离心，上清液即为粗酶液；
(2)酶活的测定：
将粗酶溶液(0.1ml)与含有2mM尿酸的0.6ml硼酸钠缓冲液(pH8.5，0.1M)，0.15ml4-氨基安替比林(30mM)，0.1ml苯酚1.5％，0.05ml过氧化物酶(15U/ml)加入到25mL比色管中，25℃孵育10min，然后通过加入1.0ml乙醇停止反应，去离子水定容至20mL；空白对照：把粗酶液置换为硼酸钠缓冲液；通过分光光度计读取540nm处的吸光度；代入过氧化氢标准曲线y＝4.5734x+0.0733(R2＝0.9996)，即可计算出生成H2O2含量；进而计算出酶活；酶的单位定义为：在标准测定条件下每分钟可产生1.0μmol H2O2的酶量。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明通过透明圈法初筛、酶偶联分光光度法测酶活复筛筛选得到高产海洋低温尿酸氧化酶菌株，其中，初筛培养基中添加大量K2HPO4，是传统的4-5倍，极大提高了酶活；透明圈法简单易操作，且成本较低，酶偶联分光光度法测酶活具有计算简便、灵敏度高、样品量少、成本低等优点。本发明突破传统尿酸氧化酶菌株的初筛培养基配方，更加适合从低温、高压、资源丰富的深海海泥、海水中筛选高产尿酸氧化酶的新型资源；复筛方法-酶偶联分光光度法测尿酸氧化酶极为灵敏，准确，误差为传统方法的十万分之一；并且其操作简便，成本低，弥补了尿酸氧化酶筛选培养基相关领域的不足；相对于其他筛选方法得到的菌株在产酶过程中更加节约资源和环保。
附图说明
图1菌株Z7落形态及显微形态，a.菌落形态，b.纤维形态(10×100)；
图2菌株Z7电泳图；
图3菌株Z7 16S rDNA基因序列系统发育树；
图4过氧化氢标准曲线。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
一种产海洋低温尿酸氧化酶菌株的筛选方法，包括以下步骤：
(1)菌种初筛：
准备无菌100mL三角瓶若干个，向其加入50mL无菌生理盐水；以大连黄海海泥、海水作为样品，将采集到的海水，海泥(海泥2.0g、海水2mL各15份)样品加入到三角瓶中，振荡混匀10min，静止30min，取样液上清2mL接种到富集培养基(g/L)：尿酸10g，酵母膏7.5g，NaCl 0.5g，MgSO4 0.5g，K2HPO4 2.5g，KH2PO4 0.7g，pH7.5，121℃高压灭菌；25℃、160r/min振荡培养3d；同样的方法定向富集三次；将富集菌液梯度稀释后涂布于平板初筛培养基(g/L)：尿酸10g，酵母膏7.5g，NaCl 0.5g，MgSO4 0.5g，K2HPO4 2.5g，KH2PO4 0.7g，pH7.5，121℃高压灭菌；25℃培养2～5d；随时观察菌落形态，及透明圈大小(菌落周围是否出现透明圈作为初筛标准)；选取出现透明圈的菌落进一步纯化，并保藏菌株进行后续实验；
(2)菌种复筛：
将初筛菌株接种于200mL/500mL发酵培养基(g/L)：尿酸10g，酵母膏7.5g，NaCl0.5g，MgSO4 0.5g，K2HPO4 2.5g，KH2PO4 0.7g，pH7.5，121℃高压灭菌；25℃、160r/min培养36h，测定尿酸氧化酶的酶活，从初筛菌株中筛选产尿酸氧化酶活最高的菌株，选取酶活为42.5U/mL的菌株，该菌株即为产海洋低温尿酸氧化酶菌株，命名为Z7。
其中，尿酸氧化酶的酶活测定方法如下：
(1)粗酶液制备：取发酵液离心获得湿菌，经pH8.5的硼酸缓冲溶液洗涤3次以上洗净，将洗涤后的菌体悬浮于pH 8.5的硼酸缓冲溶液中，冰浴条件下超声波破碎，将破碎液离心，上清液即为粗酶液；
(2)酶活的测定：将粗酶溶液(0.1ml)与含有2mM尿酸的0.6ml硼酸钠缓冲液(pH8.5,0.1M)，0.15ml 4-氨基安替比林(30mM)，0.1ml苯酚1.5％，0.05ml过氧化物酶(15U/ml)加入到25mL比色管中，25℃孵育10min。然后通过加入1.0ml乙醇停止反应，去离子水定容至20mL。空白对照：把粗酶液置换为硼酸钠缓冲液。通过分光光度计读取540nm处的吸光度(OD值)，代入过氧化氢标准曲线y＝4.5734x+0.0733(R2＝0.9996)，代入过氧化氢标准曲线y＝4.5734x+0.0733(R2＝0.9996)，即可计算出生成H2O2含量；进而计算出酶活；酶的单位定义为：在标准测定条件下每分钟可产生1.0μmol H2O2的酶量。
制作过氧化氢标准曲线：在25mL比色管中分别加入0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL1μmol/mL H2O2，加入0.15ml 4-氨基安替比林(30mM)，0.1ml 1.5％苯酚，0.05ml过氧化物酶(15U/ml)到比色管中，25℃孵育20min；再通过加入1.0ml乙醇停止反应，去离子水定容至20mL；空白对照：不加入H2O2；通过分光光度计读取540nm处的吸光度(OD值)；以OD值为横坐标x，H2O2物质量(μmol)为纵坐标y，绘制过氧化氢标准曲线(附图4)，得回归方程y＝4.5734x+0.0733(R2＝0.9996)。
筛选得到的产海洋低温尿酸氧化酶菌株Z7的鉴定：
(1)形态学特征
菌株平板点样法得到单菌落，对单菌落进行形态学观察，通过革兰氏染色法对菌体染色，在光学显微镜下(10×100)观察(如图1)。
(2)生理生化特征
根据《常见细菌系统鉴定手册》(第8版)细菌鉴定相关标准设计实验，主要包括：KOH拉丝试验、淀粉水解试验、油脂水解试验等一系列试验(见表1)。
表1菌株Z7生理生化特征
注：+：阳性反应；-：阴性反应；
(3)菌株分子生物学鉴定
将复筛得到的尿酸氧化酶高产菌株送交生工生物(上海)有限公司测序鉴定，将测序结果提交到GenBank数据库中，经基本局部比对搜索工具(basic lacal aliqnmentsearch tood，BLAST)序列比对，利用MEGA5软件构建系统发育树。
菌株Z7 16SrRNA扩增产物经过琼脂糖凝胶电泳分析，结果见图2。由图2可知，获得一条清晰的条带，根据Maker定量分析菌株Z7的16S rRNA序列大小为1392bp。
将菌株的16S rRNA序列输入美国国家生物技术信息中心(national center ofbiotechnologyinformation,NCBI)数据库中Nucleotide BLAST与GenBank数据库中同源性最高的己知分类菌株序列进行比较，用软件MEGA5以邻接(Neighbor-Joining,NJ)法进行系统发育树构建如图3所示。由图3可知，菌株Z7与苛求芽孢杆菌Bacillus fastidiosus(NR113989.1)同源性最高为99％，因此可以鉴定菌株Z7为苛求芽孢杆菌(Bacillusfastidiosus)。
序列表
<110> 大连大学
<120> 一种产海洋低温尿酸氧化酶菌株的筛选方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1392
<212> DNA
<213> 苛求芽孢杆菌(Bacillus fastidiosus)
<400> 1
gatgggagct tgctccctga tgttagtggc ggacgggtga gtaacacgtg ggtaacctgc 60
ctgtaagatt gggataactt cgggaaaccg aagctaatac cggataatat aagaaaccgc 120
atggtttctt attgaaagat ggtttcggct atcacttaca gatggacccg cggcgcatta 180
gctagttggt gaggtaacgg ctcaccaagg caacgatgcg tagccgacct gagagggtga 240
tcggccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtagggaatc 300
ttccgcaatg gacgaaagtc tgacggagca acgccgcgtg agcgaagaag gccttcgggt 360
cgtaaagctc tgttgttagg gaagaacaag taccggagta actgccggta ccttgacggt 420
acctaaccag aaagccacgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca 480
agcgttgtcc ggaattattg ggcgtaaagc gcgcgcaggc ggtttcttaa gtctgatgtg 540
aaagcccacg gctcaaccgt ggagggtcat tggaaactgg gaaacttgag tgcagaagag 600
gaaagtggaa ttccacgtgt agcggtgaaa tgcgtagaga tgtggaggaa caccagtggc 660
gaaggcgact ttctggtctg taactgacgc tgaggcgcga aagcatgggg agcgaacagg 720
attagatacc ctggtagtcc atgccgtaaa cgatgagtgc taagtgttag agggtttccg 780
ccctttagtg ctgcagctaa cgcattaagc actccgcctg gggagtacgg tcgcaagact 840
gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa 900
gcaacgcgaa gaaccttacc aggtcttgac atcctctgac actcctagag ataggacgtt 960
tcccttcggg gaacagagtg acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat 1020
gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttgatctta gttgccagca ttcagttggg 1080
cactctaagg tgactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt caaatcatca 1140
tgccccttat gacctgggct acacacgtgc tacaatggat ggtacaaagg gctgcaagac 1200
tgcgaagtca agcgaatccc ataaaaccat tctcagttcg gattgcaggc tgcaactcgc 1260
ctgcatgaag ccggaatcgc tagtaatcgt ggatcagcat gccacggtga atacgttccc 1320
gggccttgta cacaccgccc gtcacaccac gagagtttgt aacacccgaa gtccctgggg 1380
caacatgtgg aa 1392

Claims (2)

1.一种产海洋低温尿酸氧化酶菌株的筛选方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)从深海海泥、海水中采集样本；
(2)菌种初筛：将采集的海水、海泥振荡混匀后，静止，取上清液接种到富集培养基，25℃、160r/min振荡培养3d，同样的方法定向富集3次；将富集菌液梯度稀释后涂布于平板初筛培养基上，25℃培养2～5d；选取出现透明圈的菌落进一步纯化并保藏菌株；
其中，富集培养基按质量百分比为：尿酸1.00％，酵母膏0.75％，NaCl 0.05％，MgSO40.05％，K2HPO4 0.25％，KH2PO4 0.07％，pH7.5，121℃高压灭菌；
初筛培养基(平板)按质量百分比为：尿酸1.00％，酵母膏0.75％，NaCl 0.05％，MgSO40.05％，K2HPO4 0.25％，KH2PO4 0.07％，琼脂1.5％，pH7.5，121℃高压灭菌；
(3)菌种复筛：
将步骤(2)中初筛菌株接种于发酵培养基中，25℃、160r/min培养36h，酶偶联分光光度法测定尿酸氧化酶的酶活，从初筛菌株中筛选产尿酸氧化酶活最高的菌株，该菌株即为产海洋低温尿酸氧化酶菌株；
其中，发酵培养基按质量百分比为：尿酸1.00％，酵母膏0.75％，NaCl 0.05％，MgSO40.05％，K2HPO4 0.25％，KH2PO4 0.07％，pH7.5，121℃高压灭菌。
2.如权利要求1所述的产海洋低温尿酸氧化酶菌株的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中酶偶联分光光度法测尿酸氧化酶的酶活方法具体为：
(1)粗酶液制备：
取发酵液离心获得湿菌，经pH8.5的硼酸缓冲溶液洗涤3次以上洗净，将洗涤后的菌体悬浮于pH 8.5的硼酸缓冲溶液中，冰浴条件下超声波破碎，将破碎液离心，上清液即为粗酶液；
(2)酶活的测定：
将粗酶溶液(0.1ml)与含有2mM尿酸的0.6ml硼酸钠缓冲液(pH8.5，0.1M)，0.15ml 4-氨基安替比林(30mM)，0.1ml苯酚1.5％，0.05ml过氧化物酶(15U/ml)加入到25mL比色管中，25℃孵育10min，然后通过加入1.0ml乙醇停止反应，去离子水定容至20mL；空白对照：把粗酶液置换为硼酸钠缓冲液；通过分光光度计读取540nm处的吸光度；代入过氧化氢标准曲线y＝4.5734x+0.0733(R2＝0.9996)，即可计算出生成H2O2含量；进而计算出酶活；酶的单位定义为：在标准测定条件下每分钟可产生1.0μmol H2O2的酶量。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109897805A (zh) * 2019-04-04 2019-06-18 大连大学 一种产肌氨酸氧化酶菌株的筛选方法
CN112831448A (zh) * 2021-04-02 2021-05-25 新疆医科大学 用于筛选肠道降解尿酸菌株的高尿酸培养基及其制备方法
CN114317308A (zh) * 2020-09-30 2022-04-12 宁波倍益嘉生物科技有限公司 一种降嘌呤和尿酸的益生菌株、组合物及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101875923A (zh) * 2009-12-31 2010-11-03 杭州北斗生物技术有限公司 人血清白蛋白与尿酸氧化酶的融合蛋白及其制备方法
CN102220354A (zh) * 2011-05-01 2011-10-19 浙江大学 Microbacterium属细菌耐热尿酸氧化酶基因及其用途
US20150004150A1 (en) * 2013-06-26 2015-01-01 Food Industry Research And Development Institute Method of reducing levels of uric acid
CN105543187A (zh) * 2016-02-18 2016-05-04 重庆医科大学 苛求芽孢杆菌尿酸酶突变体v145a

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101875923A (zh) * 2009-12-31 2010-11-03 杭州北斗生物技术有限公司 人血清白蛋白与尿酸氧化酶的融合蛋白及其制备方法
CN102220354A (zh) * 2011-05-01 2011-10-19 浙江大学 Microbacterium属细菌耐热尿酸氧化酶基因及其用途
US20150004150A1 (en) * 2013-06-26 2015-01-01 Food Industry Research And Development Institute Method of reducing levels of uric acid
CN105543187A (zh) * 2016-02-18 2016-05-04 重庆医科大学 苛求芽孢杆菌尿酸酶突变体v145a

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
EVA RUFINO-PALOMARES等: "Proteomics in the liver of gilthead sea bream (Sparus aurata) to elucidate the cellular response induced by the intake of maslinic acid", 《PROTEOMICS》 *
周学来: "一株产尿酸氧化酶菌株的分离及酶特性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ》 *
咸静女等: "微生物尿酸氧化酶的筛选、酶学性质及重组表达", 《生物工程学报》 *
黄宗国等: "《中国海洋物种和图集 上 中国海洋物种多样性 上》", 31 May 2012, 北京：海洋出版社 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109897805A (zh) * 2019-04-04 2019-06-18 大连大学 一种产肌氨酸氧化酶菌株的筛选方法
CN114317308A (zh) * 2020-09-30 2022-04-12 宁波倍益嘉生物科技有限公司 一种降嘌呤和尿酸的益生菌株、组合物及其应用
CN114317308B (zh) * 2020-09-30 2023-10-31 宁波倍益嘉生物科技有限公司 一种降嘌呤和尿酸的益生菌株、组合物及其应用
CN112831448A (zh) * 2021-04-02 2021-05-25 新疆医科大学 用于筛选肠道降解尿酸菌株的高尿酸培养基及其制备方法
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