CN108998453A - 一种靶向OC-2基因的siRNA及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种靶向OC‑2基因的siRNA及其应用。本发明以ONECUT2 mRNA为靶标，设计两对特异性双链siRNA分子，序列如SEQ ID NO.2～5所示。合成的双链siRNA能与与OC‑2基因序列互补，导入细胞或生物体后，被内源的遗传物质识别，激活RNAi途径，降解mRNA，从而干扰转录后翻译过程，从而使卵巢癌细胞中OC‑2的表达水平显著下调。通过细胞增实验，迁移，侵袭以及小鼠模型实验，结果发现靶向OC‑2蛋白可以显著抑制肿瘤的生长，从而达到抗肿瘤的目的。因此，本发明设计的OC‑2 siRNA分子可用于制备治疗卵巢癌的药物，且具有广阔的应用前景。

Description

一种靶向OC-2基因的siRNA及其应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，特别涉及一种靶向OC-2基因的siRNA及其应用。
背景技术
RNA干扰是一种基因转录后沉默现象(post-transcriptional gene silencing,PTGS)，其在进化过程中高度保守。首先外源性或内源性双链RNA分子加工成21～27个核苷酸长度的双链RNA小分子。这一过程需要核酸酶Dicer的参与。产生的小分子双链RNA中其中一条链与相关的蛋白(主要是Argonaute蛋白)组装形成具有活性的沉默复合体RISC。RISC首先介导siRNA双链解旋，与RISC耦合的单链的siRNA以序列特异的方式与靶mRNA结合，之后由RISC的催化组分切割靶mRNA。切割靶mRNA可以抑制其翻译，最终抑制该基因的表达。RNAi因操作简便、原理清晰、效果明确而发展成为当前相关领域研究的应用最广泛的研究工具。
RNAi在医药领域有广阔的应用前景，如抗病毒、抗肿瘤和抗炎症等。双链干扰核酸可设计成能被Dicer酶剪切的称做Dicer底物的长双链形式或者是短的不需Dicer酶剪切直接作为RISC底物的形式。合成的双链RNA与目的基因序列互补，导入细胞或生物体后，被内源的遗传物质识别，激活RNAi途径。利用这种机制，RNAi使靶基因的表达水平急剧下降。
ONECUT2(One Cut Homeobox 2,OC-2)是1999年发现的新基因，位于人类基因组第18号染色体，属于ONECUT转录因子家族。它是一种转录因子，其蛋白结构包括一个短片段和不典型结构同源域，能与相应基因的DNA序列结合而激活其表达。OC-2参与肝脏、胰腺、免疫系统、视网膜、神经系统、小肠等不同器官和组织的发育和细胞分化。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供了一种靶向OC-2基因的siRNA。本发明以ONECUT2mRNA为靶标，设计其特异性双链siRNA分子，通过大量筛选和实验研究工作，得到了所述的靶向OC-2基因的siRNA。
本发明的另一目的在于提供所述的靶向OC-2基因的siRNA的编码基因。
本发明的再一目的在于提供载有所述的靶向OC-2基因的siRNA的重组表达载体、转基因细胞系或重组菌。
本发明的又一目的在于提供所述的靶向OC-2基因的siRNA或所述的重组表达载体的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种靶向OC-2基因的siRNA，所述的siRNA的正义链或反义链为如下任一组：
(1)OC2siRNA#1
正义链：5’-GUUCUCCGAACGUGUCACGU-3’(SEQ ID NO.2)
反义链：5’-ACGUGACACGUUCGGAGAAC-3’(SEQ ID NO.3)；
(2)OC2siRNA#2
正义链：5’-GCAAGAACCAAACAAAGACAG-3’(SEQ ID NO.4)
反义链：5’-CUGUCUUUGUUUGGUUCUUGC-3’(SEQ ID NO.5)。
上述siRNA经Blast Search检索确认与OC-2以外的人类已知基因序列无同源性；能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA。
所述的OC2siRNA#1干扰的靶序列位于OC-2基因的mRNA编码序列的第1015到1034个碱基之间，即5’-GUUCUCCGAACGUGUCACGU-3’。
所述的OC2siRNA#2干扰的靶序列位于OC-2基因的mRNA编码序列的第1277到1297个碱基之间，即5’-GCAAGAACCAAACAAAGACAG-3’。
所述的靶向OC-2基因的siRNA的编码基因，其核苷酸序列为：
(1)OC2siRNA#1
正义链：5’-GTTCTCCGAACGTGTCACGT-3’(SEQ ID NO.6)
反义链：5’-ACGTGACACGTTCGGAGAAC-3’(SEQ ID NO.7)；
(2)OC2siRNA#2
正义链：5’-GCAAGAACCAAACAAAGACAG-3’(SEQ ID NO.8)
反义链：5’-CTGTCTTTGTTTGGTTCTTGC-3’(SEQ ID NO.9)。
含有靶向OC-2基因的siRNA的编码基因的重组表达载体、转基因细胞系或重组菌。
所述的表达载体优选为原核表达载体或真核表达载体，更优选地，所述表达载体为真核表达载体。
所述的重组表达载体的表达载体为pGPU6-GFP-Neo载体，构建得到的重组表达载体为pGPU6-GFP-Neo-siRNA#1或pGPU6-GFP-Neo-siRNA#2。
所述的靶向OC-2基因的siRNA或重组表达载体在制备抑制癌细胞增殖、迁移、浸润和侵袭的产品中的应用。
所述癌细胞为卵巢癌细胞，优选为人卵巢癌细胞株COV504或SKOV3。
所述的靶向OC-2基因的siRNA或重组表达载体在制备抗肿瘤药物中应用。体外实验证明，本发明的siRNA分子的反义链可特异性地与OC-2基因的mRNA结合，降解mRNA，从而干扰转录后翻译过程，抑制肿瘤细胞增殖，转移和侵袭，达到治疗肿瘤的目的。
所述的肿瘤为卵巢癌。
所述的靶向OC-2基因的siRNA或重组表达载体在制备肿瘤早期检测试剂中的应用；作为非诊断和治疗目的中肿瘤生物标记物。
一种抗肿瘤药物，其活性成分为所述的靶向OC-2基因的siRNA或重组表达载体。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明设计的靶向OC-2基因的siRNA，转染所述的siRNA的卵巢癌细胞OC-2的表达量显著下降了75％～80％，显著降低卵巢癌细胞内OC-2的表达水平。
(2)在体外实验中，卵巢癌细胞被本发明的siRNA干扰后，其增殖速率，迁移和侵袭能力显著降低。
(3)体内实验中OC-2siRNA能够高效抑制实体瘤的生长。经OC-2siRNA转染后，荷瘤小鼠体内肿瘤的平均体积为对照组的1/10。因此，本发明设计的OC-2siRNA分子可用于制备治疗结卵巢癌的药物，具有良好的应用前景。
附图说明
图1是通过Western Blot检测OC-2siRNA对OC-2基因的沉默效果分析图；其中，图A是转染OC-2siRNA质粒后COV-504和SKOV3细胞OC-2蛋白Western Blot曝光图；图B是COV-504细胞内OC-2蛋白表达量灰度分析；图C是SKOV3细胞内OC-2表达量灰度分析。
图2是CCK-8法检测转染OC-2siRNA质粒后COV-504和SKOV3细胞在不同时间点的增殖抑制率结果分析图；其中，图A是COV-504细胞在12h，24h，36h，48h的增殖抑制率；图B是SKOV3细胞在12h，24h，36h，48h的增殖抑制率；
图3是Transwell实验检测转染OC-2siRNA质粒后COV-504和SKOV3细胞的迁移能力结果分析图；其中，图A和图C转染OC-2siRNA质粒后COV-504和SKOV3细胞的迁移情况(24h)；图B和图D是COV-504和SKOV3细胞迁移率统计图。
图4是划痕实验检测转染OC-2siRNA质粒后COV-504和SKOV3细胞的迁移能力结果分析图；其中，图A和图C转染OC-2siRNA质粒后COV-504和SKOV3细胞划痕24h后的迁移情况，图B和图D是COV-504和SKOV3细胞迁移抑制率统计图。
图5是侵袭实验检测转染OC-2siRNA质粒后COV-504和SKOV3细胞的侵袭能力结果分析图；其中，图A和图C转染OC-2siRNA质粒后COV-504和SKOV3细胞的侵袭情况(24h)；图B和图D是COV-504和SKOV3细胞迁移率统计图。
图6是沉默OC-2基因对BALB/C裸鼠成瘤能力的影响结果分析图，将转染了siRNA#1的COV-504卵巢癌细胞注射到裸鼠左肩，21天后，处死裸鼠并剥离皮下肿瘤，进行拍照(图A)；图B是肿瘤的生长曲线；图C是实验组和对照组肿瘤重量统计分析。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
1、细胞培养
人卵巢癌细胞株COV-504、SKOV3均购买自ATCC菌种中心。细胞用含10％FBS的DMEM培养基(Gibco公司)培养，所述的培养基中加入青霉素和链霉素(Invitrogen公司)，其终浓度分别为100U/mL和100μg/mL，培养于37℃二氧化碳培养箱。
2、siRNA载体构建
用在线设计软件(siDirect version 2.0和TargetScan)设计靶OC-2(基因库登录号：NM_004852.2)基因的siRNA序列OC-2siRNA。
根据siRNA的设计原则和OC-2基因编码区的核苷酸序列，寻找长度为21nt的候选区域，选择GC含量为40％～50％的siRNA序列，并用NCBI BlAST进行比对，以确保没有同源性。
编码OC-2mRNA的碱基序列961～1300核苷酸序列如下(SEQ ID NO.1)：
……
CCAGTCGCGAGCGGCCACCCTCGTCCTCATCGGGCTCGCAGGTGGCCACGTCGGGCCAGCTGGAAGAAATCAACACCAAAGAGGTGGCCCAGCGCATCACAGCGGAGCTGAAGCGCTACAGTATCCCCCAGGCGATCTTTGCGCAGAGGGTGCTGTGCCGGTCTCAGGGGACTCTCTCCGACCTGCTCCGGAATCCAAAACCGTGGAGTAAACTCAAATCTGGCAGGGAGACCTTCCGCAGGATGTGGAAGTGGCTTCAGGAGCCCGAGTTCCAGCGCATGTCCGCCTTACGCCTGGCAGCGTGCAAACGCAAAGAGCAA GAACCAAACA AAGACAGGAA
……
最终选择的1号靶序列为GTTCTCCGAACGTGTCACGT，对应编码区1015～1034核苷酸位点。选取的2号靶序列为GCAAGAACCAAACAAAGACAG，对应编码区1277～1297核苷酸位点。
合成的编码OC2siRNA#1的核苷酸序列如下(SEQ ID NO.6～7)：
正义链：5’-GTTCTCCGAACGTGTCACGT-3’，
反义链：5’-ACGTGACACGTTCGGAGAAC-3’；
合成的编码OC2siRNA#2的核苷酸序列如下(SEQ ID NO.8～9)：
正义链：5’-GCAAGAACCAAACAAAGACAG-3’，
反义链：5’-CTGTCTTTGTTTGGTTCTTGC-3’。
将上述序列委托上海吉玛公司进行化学合成。同时，该公司提供阴性对照NCsiRNA(negative control siRNA)，合成的编码NC siRNA的核苷酸序列如下(SEQ ID NO.10～11)：
正义链：5’-GTTCTCCGAACGTGTCACGT-3’，
反义链：5’-ACGTGACACGTTCGGAGAAC-3’。
将设计的两条靶向OC-2的siRNA(siRNA#1和siRNA#2)，分别插入到pGPU6-GFP-Neo载体(购自上海吉玛制药技术有限公司)，构建成pGPU6-GFP-Neo-siRNA#1和pGPU6-GFP-Neo-siRNA#2。以siRNA NC作为阴性对照。
3、siRNA体外转染
将OC-2蛋白高表达的细胞株(SKOV3和COV-504)培养至对数生长期，按6孔板接种密度为5×105/孔接种细胞，将其分为实验组和阴性对照组。所述的实验组包括OC-2siRNA#1转染组、OC-2siRNA#2转染组。阴性对照组为siRNANC转染组。siRNA的转染步骤按Lipofectamine 2000(Invitrogen公司)的说明书进行操作。siRNA转染实验组和对照组细胞后，37℃培养6h后，培养液换成含10％FBS(Gibco公司)的DMEM培养基(Gibco公司)，继续培养并进行后续的实验。
所有的实验均重复3次，结果均用平均值±SD表示，用SPSS19.0进行统计学分析。统计学差异用单因素方差分析和双侧t检验。P<0.05表明差异显著。在所有的图表中，“*”表示P<0.05。“**”表示P<0.01。
实施例2OC-2siRNA对卵巢癌细胞OC-2蛋白表达量的影响
(1)siRNA体外转染结束后，继续培养细胞48h，收获细胞，通过Western Blot鉴定OC-2蛋白的表达量。
(2)将样品蛋白裂解液进行SDS-PAGE电泳。
(3)电泳完成后取出分离胶，将海绵、滤纸(3层)、分离胶、已用甲醇活化的PVDF膜、滤纸(3层)、海绵依次叠放于转膜板负极面(黑色面)上，排除气泡。
(4)在冰浴条件下以100V恒压转膜60min，取出PVDF膜，用含5％脱脂奶粉的1×PBST 37℃封闭2h，1×PBST洗膜3次(每次5min)。
(5)一抗孵育：加入以1:1,000体积比稀释的兔抗人OC-2蛋白抗体(Abcam公司，1：1000稀释)，4℃孵育12h。
(6)1×PBST洗膜3次(每次3min)。
(7)二抗孵育：加入以1:5,000体积比稀释的辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG二抗(EarthOx公司，1：4000稀释)，37℃孵育1h。
(8)1×PBST洗膜5次(每次3min)。
(9)加入ECL化学发光底物溶液显色(Millipore)，于凝胶成像仪中获取发光图像。
结果如图1所示，转染siOC2#1的COV-504和SKOV3细胞OC-2表达量下降了75％～77％(P<0.01)。转染siOC2#2的COV-504和SKOV3细胞OC-2表达量下降了78％～80％(P<0.01)(图A，B)。这些数据表明OC-2siRNA能够显著抑制卵巢癌细胞OC-2的表达。
实施例3OC-2siRNA对卵巢癌细胞增殖的影响
用CCK-8法在不同时间点检测细胞增殖活力，以检测沉默OC-2基因对卵巢癌细胞增殖的影响。用实施例1的方法将转染siRNA((siRNA#1，siRNA#2，siRNANC))后的SKOV3和COV-504细胞铺到96孔细胞培养板中，接种密度为3×103个/孔，重复3个孔，置二氧化碳培养箱继续培养。转染siRNA NC组为阴性对照组。分别测定转染12h、24h、36h和48h时的实验组细胞和对照组细胞的OD450值，所述测定方法为：将混合的100μL DMEM(Gibco公司)和10μLCCK8(Cell Counting Kit-8，Dojingo公司)加入到每孔中，培养箱孵育1h，在波长450nm处用酶标仪(BioTex)测定OD值，制定生长曲线。
结果如图2所示，转染OC-2siRNA#1的COV-504和SKOV3细胞在48h时的增殖抑制率达到24％～25％(P<0.01)，转染OC-2siRNA#2的COV-504和SKOV3细胞增殖抑制率达到20％～22％(P<0.01)(图2A，2B)。这些结果表明，OC-2沉默可以显着抑制卵巢癌细胞增殖速率。
实施例4OC-2siRNA对卵巢癌细胞迁移的影响
将转染OC-2siRNA的卵巢癌细胞接种至6孔板中，待卵巢癌细胞的汇合度在70～80％，转染OC-2siRNA质粒，24h后取部分细胞做Transwell实验，另取一部分细胞做划痕实验，以此来验证沉默OC-2基因对卵巢癌细胞迁移能力的影响。
1.Transwell细胞迁移实验
(1)Transwell(8μm，BD Biosciences)小室每孔加入200μL转染OC-2siRNA和siRNANC质粒的SKOV3和COV-504细胞(1×105个/mL)，小室下室加入含10％胎牛血清的700μLDMEM，37℃培养24h后，用棉签擦去微孔膜上层的和未侵袭人基底膜的细胞，将侵袭至下层面的细胞用75％的酒精进行固定15min，结晶紫染色15min，1×PBS清洗3次，洗去多余的结晶紫。
(2)拍照观察：200倍倒置显微镜下观察，拍照，随机计数5个视野，取均值，计算穿过小室的卵巢癌细胞。
结果如图3A，3C所示，转染OC-2siRNA#1的COV-504和SKOV3细胞的迁移率比对照组降低了66％～72％(P<0.01)(图3B)，而转染OC-2siRNA#2的COV-504和SKOV3细胞的迁移率下降了70～75％(P<0.01)(图3D)。这些结果说明OC-2siRNA能显著抑制卵巢癌细胞的迁移能力。
2.划痕试验
(1)按实施例1的方法进行SKOV3和COV-504细胞培养和siRNA体外转染，随后细胞放置于37℃培养箱中继续培养24h，吸出培养基，用无菌10μL小Tip头在每个孔中长满的单层细胞上迅速而轻轻划线，每条划痕宽约1mm。然后用无菌的1×PBS冲洗去掉脱落的细胞，加入含0.5％FBS(Gibco公司)的DMEM培养基(Gibco公司)继续培养，处理组和对照孔各设3个复孔。
(2)拍照观察：随机选取5～6个视野，记录位置并持续观察比较0h、24h各组卵巢癌COV-504和SKOV3细胞迁移入划痕的距离，以检测卵巢癌细胞划痕修复速度。
结果如图4A，4C所示，转染OC-2siRNA#1的COV-504和SKOV3细胞的迁移抑制率达到83％～86％(P<0.01)(图4B)。转染OC-2siRNA#2的COV-504和SKOV3细胞的迁移抑制率达到86％～89％(P<0.01)(图4D)。这些数据也充分说明了OC-2siRNA确实能够显著抑制卵巢癌细胞的迁移能力。
实施例5OC-2siRNA对卵巢癌细胞侵袭能力的影响
(1)先将Matrigel置于4℃中融化过夜，同时将所用Tip头、0.5mL EP管和8μmTranswell小室在冰上预冷30min。
(2)Matrigel胶用预冷的无血清DMEM培养基按1:3稀释备用，所有操作在冰上进行。
(3)每个小室内加入45μL Matrigel胶稀释液(尽量不出现气泡，否则重新铺孔)，先平放于冰上10min，再置于室温15min，最后平放于37℃培养箱30min。
(4)待Matrigel胶凝固后，吸出小室内残余溶液，每孔加入100μL无血清DMEM培养基，37℃孵育30min，吸去培养基(水化基底膜)。
(5)将转染OC-2siRNA的SKOV3和COV-504细胞，消化并制成细胞悬液，调整细胞浓度为2.5×105个/mL。下室加入含10％胎牛血清的DMEM培养基约600μL，上室加入细胞悬液200μL。放置于配套的24孔板上，每组设置3个复孔。
(6)将细胞置于5％CO2、37℃培养箱中孵育24h。
(7)吸去小室内培养液，用1×PBS洗涤3次；70％乙醇固定20min；0.1％结晶紫染色15～30min；1×PBS冲洗3遍以上；用棉签擦去上室内未迁移的细胞以及Matrigel胶。
(8)显微镜400×视野下随机取5个视野，计数，取平均数作为实验结果。拍照存档。
迁移率＝(实验组迁移细胞数/NC对照组迁移细胞数)×100％
结果如图5A，5C显示，转染OC-2siRNA#1的COV-504和SKOV3细胞侵袭率分别下降69％～74％(P<0.01)(图5B)，转染OC-2siRNA#2的COV-504和SKOV3细胞侵袭率分别下降了71％～76％(P<0.01)(图5D)。这些结果也表明了OC-2siRNA能够显著抑制卵巢癌细胞的侵袭能力。
实施例6COV-504裸鼠模型构建
(1)购5～6周龄雌性裸鼠于南方医科大学实验动物中心，饲养于暨南大学医学院实验动物中心。
(2)动物置于专用培养箱内，安放于层流式超净架内。饲养条件为：25℃～27℃、45％～50％、高度除尘除菌、无特殊支原体(SPF)环境。
(3)提前24h转染OC-2siRNA#1真核表达质粒和siRNA阴性对照质粒于卵巢癌COV-504细胞。
(4)调整转染的COV-504细胞浓度为l×l07个/mL，混合Matrigel胶，以l×l06细胞/只接种于裸鼠左前肢背部皮下。观察3周，期间每隔3～4天分别测量每只裸鼠的体重以及成瘤后体积变化情况。具体成瘤体积测量方法为：度量肿瘤最长径a值和最短径b值，根据公式V＝0.52×ab2，计算肿瘤体积，绘制生长曲线图，并做统计学检验。
(6)饲养3周后处死裸鼠，剥离皮下肿瘤，称重，测量体积。
结果如图6所示，从OC-2siRNA实验组和对照组siRNA NC剥离下的肿瘤来看，OC-2siRNA实验组的肿瘤抑制率能够达到90％左右，远远小于对照组的肿瘤大小(图6A)具体来看，OC-2siRNA组在第7天显示出对肿瘤生长的显着抑制(P<0.05)，而对照组肿瘤持续生长(图6B)。与对照组相比，OC-2沉默组肿瘤的平均重量显着降低(P<0.01)(图6C)。因此，OC-2siRNA分子可用于制备治疗卵巢癌的药物，来抑制肿瘤的生长。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 暨南大学
<120> 一种靶向OC-2基因的siRNA及其应用
<160> 11
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 340
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ccagtcgcga gcggccaccc tcgtcctcat cgggctcgca ggtggccacg tcgggccagc 60
tggaagaaat caacaccaaa gaggtggccc agcgcatcac agcggagctg aagcgctaca 120
gtatccccca ggcgatcttt gcgcagaggg tgctgtgccg gtctcagggg actctctccg 180
acctgctccg gaatccaaaa ccgtggagta aactcaaatc tggcagggag accttccgca 240
ggatgtggaa gtggcttcag gagcccgagt tccagcgcat gtccgcctta cgcctggcag 300
cgtgcaaacg caaagagcaa gaaccaaaca aagacaggaa 340
<210> 2
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
guucuccgaa cgugucacgu 20
<210> 3
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
acgugacacg uucggagaac 20
<210> 4
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gcaagaacca aacaaagaca g 21
<210> 5
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
cugucuuugu uugguucuug c 21
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gttctccgaa cgtgtcacgt 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
acgtgacacg ttcggagaac 20
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gcaagaacca aacaaagaca g 21
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
ctgtctttgt ttggttcttg c 21
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gttctccgaa cgtgtcacgt 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
acgtgacacg ttcggagaac 20

Claims (10)

1.一种靶向OC-2基因的siRNA，其特征在于，所述的siRNA的正义链或反义链为如下任一组：
(1)OC2siRNA#1
正义链：5’-GUUCUCCGAACGUGUCACGU-3’，
反义链：5’-ACGUGACACGUUCGGAGAAC-3’；
(2)OC2siRNA#2
正义链：5’-GCAAGAACCAAACAAAGACAG-3’，
反义链：5’-CUGUCUUUGUUUGGUUCUUGC-3’。
2.权利要求1所述的靶向OC-2基因的siRNA的编码基因，其核苷酸序列为：
(1)OC2siRNA#1
正义链：5’-GTTCTCCGAACGTGTCACGT-3’，
反义链：5’-ACGTGACACGTTCGGAGAAC-3’；
(2)OC2siRNA#2
正义链：5’-GCAAGAACCAAACAAAGACAG-3’，
反义链：5’-CTGTCTTTGTTTGGTTCTTGC-3’。
3.含有权利要求2所述的靶向OC-2基因的siRNA的编码基因的重组表达载体、转基因细胞系或重组菌。
4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于：
所述的表达载体为原核表达载体或真核表达载体。
5.权利要求1所述的靶向OC-2基因的siRNA或权利要求3～4任一项所述的重组表达载体在制备抑制癌细胞增殖、迁移、浸润和侵袭的产品中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：
所述癌细胞为卵巢癌细胞；
所述的表达载体为pGPU6-GFP-Neo载体。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：
所述的癌细胞为人卵巢癌细胞株COV504或SKOV3。
8.权利要求1所述的靶向OC-2基因的siRNA或权利要求3～4任一项所述的重组表达载体在制备抗肿瘤药物或肿瘤早期检测试剂中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：
所述的肿瘤为卵巢癌。
10.一种抗肿瘤药物，其特征在于：
其活性成分为权利要求1所述的靶向OC-2基因的siRNA或权利要求3～4任一项所述的重组表达载体。
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