CN108902438A - 鳕鱼肽及其酶解提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鳕鱼肽及其酶解提取方法，所述酶解提取方法包括以下步骤：S1、选用新鲜的鳕鱼皮，剪成鱼皮碎片；S2、脂肪酶酶解；S3、木瓜蛋白酶酶解；S4、将活性炭与酶解液混合，脱腥；S5、将脱色液用截留分子量50‑140kD的超滤膜超滤，真空冷冻干燥，即得。本发明鳕鱼肽及其酶解提取方法，以鳕鱼皮为主要原料，保证了来源的安全性和天然性，制得的鳕鱼肽具有较高的活性和消化吸收性，鳕鱼肽具有多种人体代谢和生理调节功能，易消化吸收，有促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂、关节润滑、伤口愈合、抗衰老等作用，能够增加人体皮肤弹性和活力，提高骨强度；能改善骨代谢，增强成骨作用；预防骨质疏松、骨质增生、骨关节肿痛等骨病。
Description
技术领域
本发明涉及食品技术领域，尤其涉及一种鳕鱼肽及其酶解提取方法。
背景技术
胶原是动物体中分布最广、含量最多的一种蛋白质，广泛的存在于动物的皮、骨、腱、膜等结缔组织中。胶原具有三螺旋结构，并且保留了生物活性，三螺旋结构彻底松开，成为3条自由的肽链，且降解成多分散的肽段，因此胶原蛋白是多肽的混合物。研究发现，生命活动中各种生理变化和生化反应都有多肽的参与。
蛋白质经过酶解得到多肽，使其蛋白质的结构发生改变，疏水区的活性官能基团暴露，随着肽键的裂解，小分子蛋白肽和氨基酸增加，从而可以提供质子或电子源，保持较高的氧化还原电位，使其具有清除活性自由基的能力。氧化对需氧生物特别是脊椎动物和人类是一个重要的代谢过程，但是它却导致了自由基的形成。活性氧自由基(ROS)被认为能引起氧化应激。在食品体系中，脂类或蛋白质可能会受到ROS的攻击经历氧化过程，从而导致食品产生不愉快味道，颜色发暗，同时也可能产生潜在的毒性终产物。抗氧化多肽的应用能防止食品成分由于捐献电子给活性氧自由基以及中和活性氧自由基的负面作用而变质。抗氧化肽在医学、化妆品、生物、食品领域有广泛的应用价值。
化学合成抗氧化肽不同程度上损伤人体的肝脏、肾脏等器官，部分国家和地区已经明确限量或禁止使用。因此，研发高效、安全的天然抗氧化剂成为热点。食用级抗氧化肽的安全性要求更高，抗氧化性较其他体内抗氧化生物分子更为显著，可以稳定脂质或含脂质产品。天然的抗氧化多肽因分子量小、易吸收、活性强等特点。目前天然抗氧化肽主要是通过酶解大豆蛋白、奶酪、乳清蛋白、动物胶、面筋等各种食物蛋白获得。最近几年发展到海洋产品如海藻、虾皮、两栖动物裸露皮肤分泌物、真菌等。有关天然抗氧化活性肽的制备方法，现有技术的不足在于大多数蛋白肽酶解过程中通过添加酸或碱调节pH，明显地影响产品的风味，同时产品的灰分较高。
深海鳕鱼皮中含有较高的胶原蛋白质，而且这种蛋白具有促进人体表皮和真皮组织细胞的生长，也能富于人体皮肤弹性和活力。但大部分鳕鱼皮被当作粗蛋白饲料处理掉，造成深海生物资源的浪费。经研究用深海鳕鱼皮做原料，采用海洋生物核心技术萃取胶原蛋白小肽。提高了鳕鱼皮的附加值，也为鳕鱼皮向高档营养食品迈进开拓了一条新途径。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种鳕鱼肽及其酶解提取方法，使鳕鱼皮中的生物多肽得到更广泛的应用。。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种鳕鱼肽的酶解提取方法，包括以下步骤：
S1、选用新鲜的鳕鱼皮，剪成鱼皮碎片；
S2、将鱼皮碎片放入反应锅中，加水，然后用0.05-0.15mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至8-9，再加入脂肪酶，在温度为35-40℃进行酶解40-70min，过滤，将滤饼用水洗涤2-5次，得到脱脂后的鱼皮碎片；
S3、将脱脂后的鱼皮碎片与水按质量比为1：(2-4)混合得到混合料，向混合料中加入混合料重量0.2-0.5‰的木瓜蛋白酶，在温度为45-65℃进行酶解1-2h，然后置于90-96℃水浴下8-15min灭酶，得到酶解液；
S4、将活性炭与酶解液按质量比为1：(45-55)混合，以转速为200-400r/min搅拌15-30min进行脱腥，用200-500目滤布过滤，得到脱色液；
S5、将脱色液用截留分子量50-140kD的超滤膜超滤，收集滤液，将滤液与冻干保护剂按质量比为1：(0.001-0.003)混合，真空冷冻干燥，即得。
在本发明一个较佳的实施方式中，所述鳕鱼肽的酶解提取方法，包括以下步骤：
S1、选用新鲜的鳕鱼皮，剪成鱼皮碎片；
S2、将鱼皮碎片放入反应锅中，加水，然后用0.05-0.15mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至8-9，再加入脂肪酶，在温度为35-40℃进行酶解40-70min，过滤，将滤饼用水洗涤2-5次，得到脱脂后的鱼皮碎片；
S3、将脱脂后的鱼皮碎片、羟丙基-β-环糊精与水按质量比为1：(0.005-0.015)：(2-4)混合，用胶体磨细磨得到鱼皮浆，向鱼皮浆中加入鱼皮浆重量0.2-0.5‰的木瓜蛋白酶，在温度为45-65℃进行酶解1-2h，然后置于90-96℃水浴下8-15min灭酶，得到酶解液；
S4、将活性炭与酶解液按质量比为1：(45-55)混合，以转速为200-400r/min搅拌15-30min进行脱腥，用200-500目滤布过滤，得到脱色液；
S5、将脱色液用截留分子量50-140kD的超滤膜超滤，收集滤液，将滤液与冻干保护剂按质量比为1：(0.001-0.003)混合，真空冷冻干燥，即得。
所述步骤S1中鱼皮碎片的大小为(1.5-2.5)cm×(1.5-2.5)cm。
所述步骤S2中加水量为所述鱼皮碎片重量的1-3倍。
所述步骤S2中脂肪酶的加入量为鱼皮碎片重量的1-3‰。
所述步骤S5中冻干保护剂为苜蓿多糖和/或地黄多糖。
优选地，所述步骤S5中冻干保护剂为改性苜蓿多糖和/或地黄多糖。进一步优选地，所述步骤S5中冻干保护剂由65-75wt％改性苜蓿多糖和25-35wt％地黄多糖组成。
所述改性苜蓿多糖的制备方法是：将苜蓿多糖加入水中配成质量浓度为8-12％的苜蓿多糖溶液，在温度为35-45℃、转速为200-500r/min搅拌下向苜蓿多糖溶液中滴加2-辛烯基琥珀酸酐，所述2-辛烯基琥珀酸酐的滴加量为苜蓿多糖溶液重量的1-3％，滴加完毕后继续以转速为200-500r/min搅拌反反应50-70min，反应过程中用0.05-0.15mol/L的氢氧化钠水溶液控制反应体系的pH为7.5-8.5，反应结束后加入乙醇沉淀，将沉淀用乙醇洗涤2-5次，再用水洗涤2-5次，然后在温度为50-70℃干燥15-25h，即得。
所述步骤S5中真空冷冻干燥的条件为设定预冻温度为-22～-28℃，当样品温度降到设定温度后保持1-3h，设定升华温度为5-15℃，解析温度为30-40℃，绝对压强为15-35pa，干燥时间为20-30h。
一种鳕鱼肽，由上述酶解提取方法制备而成。
本发明鳕鱼肽及其酶解提取方法，以鳕鱼皮为主要原料，保证了来源的安全性和天然性，制得的鳕鱼肽具有较高的活性和消化吸收性，鳕鱼肽能够增加人体皮肤弹性和活力，还可促进骨的形成，增强低钙水平下的骨胶原结构，从而提高了骨强度；能改善骨代谢，增强成骨作用；预防骨质疏松、骨质增生、骨关节肿痛等骨病。
具体实施方式
清除自由基能力进行测定：
样品液的制备：称取鳕鱼肽10.00g，加去离子水300mL，混合均匀，于50℃水浴超声波处理20min，所述超声波处理的超声功率为300W、超声频率为35kHz，得到样品液。
羟基自由基(·OH)清除实验：采用芬顿体系邻二氮菲-Fe2+氧化法进行测定，取1.5mL 1mmol/L的邻二氮菲放入试管中，加入4.5mL 100mmol/L的pH7.4磷酸盐缓冲溶液，混合均匀，加入1mL 1mmol/L FeSO4溶液，立即混匀，分别加入1mL样品液，然后加入1mL质量分数为0.1％的H2O2水溶液启动反应，于37℃保温60分钟，509nm处测定吸光值。同时设置损伤管(加入1mL蒸馏水代替样品液，1mL质量分数为0.1％的H2O2水溶液启动反应)和未损伤管(加入2mL蒸馏水代替样品液和质量分数为0.1％的H2O2水溶液)，其中损伤管和未损管以磷酸盐缓冲溶液为空白对照，加药管以同浓度加磷酸盐缓冲溶液的加药管为空白对照。每个浓度平行操作3次，取平均值。按下式计算羟基自由基的清除率：
·OH的清除率(％)＝(A加药－A损伤)/(A未损－A损伤)×100。
溶解性测试。采用电子天平(美国Denver公司提供，型号为TB-114)称取1g鳕鱼肽置于250mL的烧杯中，再加入50℃的水50ml，用玻璃棒以转速为60r/min进行搅拌，计量鳕鱼肽全部溶解的时间。
实施例中原料介绍：
鳕鱼皮为黑线鳕的鱼皮，黑线鳕拉丁学名：Melanogrammus aeglefinus(Linnaeus,1758)。
木瓜蛋白酶为南宁东恒华道生物科技有限责任公司提供的食品级木瓜蛋白酶，酶活力为6万U/g。
活性炭为温县鸿宇活性炭厂提供的椰壳活性炭，粒度为50目。
2-辛烯基琥珀酸酐，CAS号：26680-54-6。
地黄多糖按照申请号为201410272686.X的中国专利中实施例2所示方法制备。
苜蓿多糖按照申请号为201610415782.4的中国专利中实施例1所示方法制备。
胶体磨为浙江百力仕龙野轻工设备有限公司提供的型号为JML-50的胶体磨，转速为2800r/min。
脂肪酶为南宁庞博生物工程有限公司提供的型号为PB26的脂肪酶，酶活力为5万U/g。
羟丙基-β-环糊精为武汉拉那白医药化工有限公司提供的食品级羟丙基-β-环糊精(CAS号：94035-02-6)。
实施例1
鳕鱼肽的酶解提取方法，包括以下步骤：
S1、选用新鲜的鳕鱼皮，剪成大小为2cm×2cm的鱼皮碎片；
S2、将鱼皮碎片放入反应锅中，加水，其中加水量为所述鱼皮碎片重量的2倍，然后用0.1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至8.5，再加入脂肪酶，所述步骤S2中脂肪酶的加入量为鱼皮碎片重量的2‰，在温度为38℃进行酶解60min，采用300目滤布过滤，将滤饼用水洗涤3次，每次洗涤水用量为滤饼重量的30％，得到脱脂后的鱼皮碎片；
S3、将脱脂后的鱼皮碎片与水按质量比为1：3混合得到混合料，向混合料中加入混合料重量0.3‰的木瓜蛋白酶，在温度为58℃进行酶解1.5h，然后置于95℃水浴下保温10min灭酶，得到酶解液；
S4、将活性炭与酶解液按质量比为1：50混合，以转速为300r/min搅拌25min进行脱腥，用300目滤布过滤，得到脱色液；
S5、将脱色液用截留分子量100kD的超滤膜超滤，收集滤液，将滤液与冻干保护剂按质量比为1：0.002混合，得到混合液，将混合液进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的条件为控制混合液的高度为6mm，设定预冻温度为-25℃，当样品温度降到设定温度后保持2h，设定升华温度为10℃，解析温度为36℃，绝对压强为25pa，干燥时间为24h，即得鳕鱼肽。
所述步骤S5中冻干保护剂为改性苜蓿多糖。
所述改性苜蓿多糖的制备方法是：将苜蓿多糖加入水中配成质量浓度为10％的苜蓿多糖溶液，在温度为40℃、转速为300r/min搅拌下向苜蓿多糖溶液中滴加2-辛烯基琥珀酸酐，所述2-辛烯基琥珀酸酐的滴加速度为0.2g/s，所述2-辛烯基琥珀酸酐的滴加量为苜蓿多糖溶液重量的2％，滴加完毕后继续以转速为300r/min搅拌反反应60min，反应过程中用0.1mol/L的氢氧化钠水溶液控制反应体系的pH为8，反应结束后加入乙醇沉淀，将沉淀用乙醇洗涤3次，每次洗涤乙醇用量为沉淀重量的30％；再用水洗涤3次，每次洗涤水用量为沉淀重量的30％；然后将洗涤后的沉淀在温度为60℃干燥20h，即得改性苜蓿多糖。
实施例2
鳕鱼肽的酶解提取方法，包括以下步骤：
S1、选用新鲜的鳕鱼皮，剪成大小为2cm×2cm的鱼皮碎片；
S2、将鱼皮碎片放入反应锅中，加水，其中加水量为所述鱼皮碎片重量的2倍，然后用0.1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至8.5，再加入脂肪酶，所述步骤S2中脂肪酶的加入量为鱼皮碎片重量的2‰，在温度为38℃进行酶解60min，采用300目滤布过滤，将滤饼用水洗涤3次，每次洗涤水用量为滤饼重量的30％，得到脱脂后的鱼皮碎片；
S3、将脱脂后的鱼皮碎片、羟丙基-β-环糊精与水按质量比为1：0.01：3混合，再用胶体磨细磨得到鱼皮浆，向鱼皮浆中加入鱼皮浆重量0.3‰的木瓜蛋白酶，在温度为58℃进行酶解1.5h，然后置于95℃水浴下保温10min灭酶，得到酶解液；
S4、将活性炭与酶解液按质量比为1：50混合，以转速为300r/min搅拌25min进行脱腥，用300目滤布过滤，得到脱色液；
S5、将脱色液用截留分子量100kD的超滤膜超滤，收集滤液，将滤液与冻干保护剂按质量比为1：0.002混合，得到混合液，将混合液进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的条件为控制混合液的高度为6mm，设定预冻温度为-25℃，当样品温度降到设定温度后保持2h，设定升华温度为10℃，解析温度为36℃，绝对压强为25pa，干燥时间为24h，即得鳕鱼肽。
所述步骤S5中冻干保护剂为改性苜蓿多糖。
所述改性苜蓿多糖的制备方法是：将苜蓿多糖加入水中配成质量浓度为10％的苜蓿多糖溶液，在温度为40℃、转速为300r/min搅拌下向苜蓿多糖溶液中滴加2-辛烯基琥珀酸酐，所述2-辛烯基琥珀酸酐的滴加速度为0.2g/s，所述2-辛烯基琥珀酸酐的滴加量为苜蓿多糖溶液重量的2％，滴加完毕后继续以转速为300r/min搅拌反反应60min，反应过程中用0.1mol/L的氢氧化钠水溶液控制反应体系的pH为8，反应结束后加入乙醇沉淀，将沉淀用乙醇洗涤3次，每次洗涤乙醇用量为沉淀重量的30％；再用水洗涤3次，每次洗涤水用量为沉淀重量的30％；然后将洗涤后的沉淀在温度为60℃干燥20h，即得改性苜蓿多糖。
对比例1
鳕鱼肽的酶解提取方法，包括以下步骤：
S1、选用新鲜的鳕鱼皮，剪成大小为2cm×2cm的鱼皮碎片；
S2、将鱼皮碎片放入反应锅中，加水，其中加水量为所述鱼皮碎片重量的2倍，然后用0.1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至8.5，再加入脂肪酶，所述步骤S2中脂肪酶的加入量为鱼皮碎片重量的2‰，在温度为38℃进行酶解60min，采用300目滤布过滤，将滤饼用水洗涤3次，每次洗涤水用量为滤饼重量的30％，得到脱脂后的鱼皮碎片；
S3、将脱脂后的鱼皮碎片与水按质量比为1：3混合，再用胶体磨细磨得到鱼皮浆，向鱼皮浆中加入鱼皮浆重量0.3‰的木瓜蛋白酶，在温度为58℃进行酶解1.5h，然后置于95℃水浴下保温10min灭酶，得到酶解液；
S4、将活性炭与酶解液按质量比为1：50混合，以转速为300r/min搅拌25min进行脱腥，用300目滤布过滤，得到脱色液；
S5、将脱色液用截留分子量100kD的超滤膜超滤，收集滤液，将滤液与冻干保护剂按质量比为1：0.002混合，得到混合液，将混合液进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的条件为控制混合液的高度为6mm，设定预冻温度为-25℃，当样品温度降到设定温度后保持2h，设定升华温度为10℃，解析温度为36℃，绝对压强为25pa，干燥时间为24h，即得鳕鱼肽。
所述步骤S5中冻干保护剂为改性苜蓿多糖。
所述改性苜蓿多糖的制备方法是：将苜蓿多糖加入水中配成质量浓度为10％的苜蓿多糖溶液，在温度为40℃、转速为300r/min搅拌下向苜蓿多糖溶液中滴加2-辛烯基琥珀酸酐，所述2-辛烯基琥珀酸酐的滴加速度为0.2g/s，所述2-辛烯基琥珀酸酐的滴加量为苜蓿多糖溶液重量的2％，滴加完毕后继续以转速为300r/min搅拌反反应60min，反应过程中用0.1mol/L的氢氧化钠水溶液控制反应体系的pH为8，反应结束后加入乙醇沉淀，将沉淀用乙醇洗涤3次，每次洗涤乙醇用量为沉淀重量的30％；再用水洗涤3次，每次洗涤水用量为沉淀重量的30％；然后将洗涤后的沉淀在温度为60℃干燥20h，即得改性苜蓿多糖。
实施例3
鳕鱼肽的酶解提取方法，包括以下步骤：
S1、选用新鲜的鳕鱼皮，剪成大小为2cm×2cm的鱼皮碎片；
S2、将鱼皮碎片放入反应锅中，加水，其中加水量为所述鱼皮碎片重量的2倍，然后用0.1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至8.5，再加入脂肪酶，所述步骤S2中脂肪酶的加入量为鱼皮碎片重量的2‰，在温度为38℃进行酶解60min，采用300目滤布过滤，将滤饼用水洗涤3次，每次洗涤水用量为滤饼重量的30％，得到脱脂后的鱼皮碎片；
S3、将脱脂后的鱼皮碎片、羟丙基-β-环糊精与水按质量比为1：0.01：3混合，再用胶体磨细磨得到鱼皮浆，向鱼皮浆中加入鱼皮浆重量0.3‰的木瓜蛋白酶，在温度为58℃进行酶解1.5h，然后置于95℃水浴下保温10min灭酶，得到酶解液；
S4、将活性炭与酶解液按质量比为1：50混合，以转速为300r/min搅拌25min进行脱腥，用300目滤布过滤，得到脱色液；
S5、将脱色液用截留分子量100kD的超滤膜超滤，收集滤液，将滤液与冻干保护剂按质量比为1：0.002混合，得到混合液，将混合液进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的条件为控制混合液的高度为6mm，设定预冻温度为-25℃，当样品温度降到设定温度后保持2h，设定升华温度为10℃，解析温度为36℃，绝对压强为25pa，干燥时间为24h，即得鳕鱼肽。
所述步骤S5中冻干保护剂为苜蓿多糖。
实施例4
鳕鱼肽的酶解提取方法，包括以下步骤：
S1、选用新鲜的鳕鱼皮，剪成大小为2cm×2cm的鱼皮碎片；
S2、将鱼皮碎片放入反应锅中，加水，其中加水量为所述鱼皮碎片重量的2倍，然后用0.1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至8.5，再加入脂肪酶，所述步骤S2中脂肪酶的加入量为鱼皮碎片重量的2‰，在温度为38℃进行酶解60min，采用300目滤布过滤，将滤饼用水洗涤3次，每次洗涤水用量为滤饼重量的30％，得到脱脂后的鱼皮碎片；
S3、将脱脂后的鱼皮碎片、羟丙基-β-环糊精与水按质量比为1：0.01：3混合，再用胶体磨细磨得到鱼皮浆，向鱼皮浆中加入鱼皮浆重量0.3‰的木瓜蛋白酶，在温度为58℃进行酶解1.5h，然后置于95℃水浴下保温10min灭酶，得到酶解液；
S4、将活性炭与酶解液按质量比为1：50混合，以转速为300r/min搅拌25min进行脱腥，用300目滤布过滤，得到脱色液；
S5、将脱色液用截留分子量100kD的超滤膜超滤，收集滤液，将滤液与冻干保护剂按质量比为1：0.002混合，得到混合液，将混合液进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的条件为控制混合液的高度为6mm，设定预冻温度为-25℃，当样品温度降到设定温度后保持2h，设定升华温度为10℃，解析温度为36℃，绝对压强为25pa，干燥时间为24h，即得鳕鱼肽。
所述步骤S5中冻干保护剂为地黄多糖。
实施例5
鳕鱼肽的酶解提取方法，包括以下步骤：
S1、选用新鲜的鳕鱼皮，剪成大小为2cm×2cm的鱼皮碎片；
S2、将鱼皮碎片放入反应锅中，加水，其中加水量为所述鱼皮碎片重量的2倍，然后用0.1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至8.5，再加入脂肪酶，所述步骤S2中脂肪酶的加入量为鱼皮碎片重量的2‰，在温度为38℃进行酶解60min，采用300目滤布过滤，将滤饼用水洗涤3次，每次洗涤水用量为滤饼重量的30％，得到脱脂后的鱼皮碎片；
S3、将脱脂后的鱼皮碎片、羟丙基-β-环糊精与水按质量比为1：0.01：3混合，再用胶体磨细磨得到鱼皮浆，向鱼皮浆中加入鱼皮浆重量0.3‰的木瓜蛋白酶，在温度为58℃进行酶解1.5h，然后置于95℃水浴下保温10min灭酶，得到酶解液；
S4、将活性炭与酶解液按质量比为1：50混合，以转速为300r/min搅拌25min进行脱腥，用300目滤布过滤，得到脱色液；
S5、将脱色液用截留分子量100kD的超滤膜超滤，收集滤液，将滤液与冻干保护剂按质量比为1：0.002混合，得到混合液，将混合液进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的条件为控制混合液的高度为6mm，设定预冻温度为-25℃，当样品温度降到设定温度后保持2h，设定升华温度为10℃，解析温度为36℃，绝对压强为25pa，干燥时间为24h，即得鳕鱼肽。
所述步骤S5中冻干保护剂由70wt％改性苜蓿多糖和30wt％地黄多糖混合而成。
所述改性苜蓿多糖的制备方法是：将苜蓿多糖加入水中配成质量浓度为10％的苜蓿多糖溶液，在温度为40℃、转速为300r/min搅拌下向苜蓿多糖溶液中滴加2-辛烯基琥珀酸酐，所述2-辛烯基琥珀酸酐的滴加速度为0.2g/s，所述2-辛烯基琥珀酸酐的滴加量为苜蓿多糖溶液重量的2％，滴加完毕后继续以转速为300r/min搅拌反反应60min，反应过程中用0.1mol/L的氢氧化钠水溶液控制反应体系的pH为8，反应结束后加入乙醇沉淀，将沉淀用乙醇洗涤3次，每次洗涤乙醇用量为沉淀重量的30％；再用水洗涤3次，每次洗涤水用量为沉淀重量的30％；然后将洗涤后的沉淀在温度为60℃干燥20h，即得改性苜蓿多糖。
测试例1
将实施例1-5和对比例1制备的鳕鱼肽的溶解性和清除自由基能力进行测试，具体结果见表1。
表1：溶解性和清除自由基能力测试结果表
测试例2
将实施例1-5和对比例1制备的鳕鱼肽的祛皱性能进行测试。
皮肤弹性的测定采用吸力法，以恒定负压模式，即测试探头在皮肤表面施加负压将皮肤吸入探针孔，负压消失后皮肤形变恢复，皮肤形变随负压和时间变化可通过测试仪中发射光和接受光的装置测得，该装置可反映皮肤被吸入深度，这样可得到皮肤拉伸长度随时间变化的曲线图，用Uf表示皮肤最大拉伸量，Ue表示恒定负压加到皮肤上0.1秒时皮肤的拉伸量，Ur表示无负压0.1S后皮肤恢复量，Uv＝Uf-Ue黏弹性部分，Ua表示取消负压到下次连续测试再加负压皮肤的恢复量，R2＝Ua/Uf，R2为一个反映皮肤弹力的参数，R2值越大则皮肤弹性越好，越接近1弹性越好。
选择年龄40-60岁的受试者，男女各半，随机分成6组，每组30名。受试者具有皱纹、皮肤松弛或者皮肤干燥等皮肤衰老现象。受试者无严重系统疾病，无活动性过敏性疾病，也没有接受过皮肤治疗、美容以及其他可能影响结果的测试。受试者在性别、年龄、病情等方面无显著差异(P>0.05)，具有可比性。
试验方法：测试对象每日食用3次鳕鱼肽，每次3克，进行测试。
在使用本发明的鳕鱼肽之前，在脸部用皮肤弹性测试仪(德国CK公司提供，型号为MPA580)检测脸部弹性值；在食用30天后再次分别检测脸部弹性值。每个试验区域检测5次弹性R2，并取其平均值。
具体测试数据见表2。
表2：祛皱性能测试结果表
| 弹性值 | |
| 实施例1 | 0.70 |
| 实施例2 | 0.78 |
| 实施例3 | 0.73 |
| 实施例4 | 0.76 |
| 实施例5 | 0.84 |
| 对比例1 | 0.74 |
本发明酶解提取方法，对工艺进行研究，最大限度保护了多肽的生物活性，鳕鱼肽具有多种人体代谢和生理调节功能，易消化吸收，有促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂、关节润滑、伤口愈合、抗衰老等作用，是一种高生物吸收利用度的胶原多肽，可在医药领域、保健领域、食品领域、化妆品领域中广泛应用。
Claims (10)
1.一种鳕鱼肽的酶解提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、选用新鲜的鳕鱼皮，剪成鱼皮碎片；
S2、将鱼皮碎片放入反应锅中，加水，然后用0.05-0.15mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至8-9，再加入脂肪酶，在温度为35-40℃进行酶解40-70min，过滤，将滤饼用水洗涤2-5次，得到脱脂后的鱼皮碎片；
S3、将脱脂后的鱼皮碎片与水按质量比为1：(2-4)混合得到混合料，向混合料中加入混合料重量0.2-0.5‰的木瓜蛋白酶，在温度为45-65℃进行酶解1-2h，然后置于90-96℃水浴下8-15min灭酶，得到酶解液；
S4、将活性炭与酶解液按质量比为1：(45-55)混合，以转速为200-400r/min搅拌15-30min进行脱腥，用200-500目滤布过滤，得到脱色液；
S5、将脱色液用截留分子量50-140kD的超滤膜超滤，收集滤液，将滤液与冻干保护剂按质量比为1：(0.001-0.003)混合，真空冷冻干燥，即得。
2.一种鳕鱼肽的酶解提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、选用新鲜的鳕鱼皮，剪成鱼皮碎片；
S2、将鱼皮碎片放入反应锅中，加水，然后用0.05-0.15mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH至8-9，再加入脂肪酶，在温度为35-40℃进行酶解40-70min，过滤，将滤饼用水洗涤2-5次，得到脱脂后的鱼皮碎片；
S3、将脱脂后的鱼皮碎片、羟丙基-β-环糊精与水按质量比为1：(0.005-0.015)：(2-4)混合，用胶体磨细磨得到鱼皮浆，向鱼皮浆中加入鱼皮浆重量0.2-0.5‰的木瓜蛋白酶，在温度为45-65℃进行酶解1-2h，然后置于90-96℃水浴下8-15min灭酶，得到酶解液；
S4、将活性炭与酶解液按质量比为1：(45-55)混合，以转速为200-400r/min搅拌15-30min进行脱腥，用200-500目滤布过滤，得到脱色液；
S5、将脱色液用截留分子量50-140kD的超滤膜超滤，收集滤液，将滤液与冻干保护剂按质量比为1：(0.001-0.003)混合，真空冷冻干燥，即得。
3.如权利要求2所述鳕鱼肽的酶解提取方法，其特征在于，所述步骤S1中鱼皮碎片的大小为(1.5-2.5)cm×(1.5-2.5)cm。
4.如权利要求2所述鳕鱼肽的酶解提取方法，其特征在于，所述步骤S2中加水量为所述鱼皮碎片重量的1-3倍。
5.如权利要求2所述鳕鱼肽的酶解提取方法，其特征在于，所述步骤S2中脂肪酶的加入量为鱼皮碎片重量的1-3‰。
6.如权利要求2所述鳕鱼肽的酶解提取方法，其特征在于，所述步骤S5中冻干保护剂为苜蓿多糖和/或地黄多糖。
7.如权利要求2所述鳕鱼肽的酶解提取方法，其特征在于，所述步骤S5中冻干保护剂为改性苜蓿多糖和/或地黄多糖。
8.如权利要求7所述鳕鱼肽的酶解提取方法，其特征在于，所述改性苜蓿多糖的制备方法是：将苜蓿多糖加入水中配成质量浓度为8-12％的苜蓿多糖溶液，在温度为35-45℃、转速为200-500r/min搅拌下向苜蓿多糖溶液中滴加2-辛烯基琥珀酸酐，所述2-辛烯基琥珀酸酐的滴加量为苜蓿多糖溶液重量的1-3％，滴加完毕后继续以转速为200-500r/min搅拌反反应50-70min，反应过程中用0.05-0.15mol/L的氢氧化钠水溶液控制反应体系的pH为7.5-8.5，反应结束后加入乙醇沉淀，将沉淀用乙醇洗涤2-5次，再用水洗涤2-5次，然后在温度为50-70℃干燥15-25h，即得。
9.如权利要求2所述鳕鱼肽的酶解提取方法，其特征在于，所述步骤S5中真空冷冻干燥的条件为设定预冻温度为-22～-28℃，当样品温度降到设定温度后保持1-3h，设定升华温度为5-15℃，解析温度为30-40℃，绝对压强为15-35pa，干燥时间为20-30h。
10.一种鳕鱼肽，其特征在于，采用权利要求1-9中任一项所述酶解提取方法制备而成。
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