CN108840890A - 一种海桐花苷a2的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种海桐花苷A2的制备方法，包括如下步骤：收集海桐叶，阴干，粉碎，用体积分数75％的乙醇水溶液热回流提取，提取多次，过滤，合并滤液浓缩至无醇味；将浓缩至无醇味的提取液上样于DA‑201型大孔吸附树脂柱富集，收集75％乙醇的14‑15BV洗脱液，浓缩至无醇味、冷冻干燥得到富集物冻干粉；取富集物冻干粉用等体积上相和下相混合溶剂超声溶解配制进行HSCCC分离纯化，HSCCC的两相溶剂系统选择体积比为2:16:3:16的正丁醇/乙酸乙酯/异丙醇/水，根据色谱图收集海桐花苷A2对应的洗脱流份，浓缩干燥即分别得到海桐花苷A2。本发明制备方法简单易于工业化生产，制备得到的海桐花苷A2纯度高。
Description
技术领域
本发明属于化学领域，涉及一种海桐花苷A1、海桐花苷A2的制备方法。
背景技术
海桐花苷A1、海桐花苷A2是存在于海桐叶中的天然产物，化学结构如下：
研究发现，海桐花苷A1、海桐花苷A2具有优异的抗肿瘤活性(中国专利201811039559X、2018110400206、2018110400210)，具备开发成抗肿瘤药物的前景。
目前，现有技术尚没有简单、成熟的制备方法用于制备海桐花苷A1、海桐花苷A2。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术不足，提供一种海桐花苷A1、海桐花苷A2的制备方法。
本发明上述目的通过如下技术方案实现：
海桐花苷A1的制备：
一种海桐花苷A1的制备方法，包括如下步骤：
步骤S1，提取：收集海桐Pittosporum tobira叶，阴干，粉碎，用体积分数75％的乙醇水溶液热回流提取，提取多次，过滤，合并滤液浓缩至无醇味；
步骤S2，大孔树脂富集：将浓缩至无醇味的提取液上样于DA-201型大孔吸附树脂柱，先用8BV的30％乙醇以8BV/h的流速洗脱，再用15BV的75％乙醇以8BV/h的流速洗脱，收集14-15BV洗脱液，浓缩至无醇味、冷冻干燥得到富集物冻干粉；
步骤S3，HSCCC分离纯化：
S3.1两相溶剂系统配制
两相溶剂系统选择体积比为2:16:3:16的正丁醇/乙酸乙酯/异丙醇/水，将各溶剂按照体积比例加入分液漏斗中，剧烈振摇使充分混合，后静置分层，上、下相分离，超声待用。
S3.2样品溶液配制
取富集物冻干粉用等体积上相和下相混合溶剂超声溶解配制，即为样品溶液。
S3.3HSCCC分离
将配制好的溶剂系统上相泵入HSCCC螺旋管中作为固定相，待上相完全充满整个柱子，打开高速逆流色谱仪，设置转速900r/min、体积流量1.2mL/min、检测波长213nm，将溶剂系统下相泵入螺旋管中，待流动相开始从检测器尾端持续流出时，表明螺旋管内两相溶剂达到流体动力学平衡；进样阀注入样品溶液，开始记录色谱图并持续泵入流动相分离。
S3.4根据色谱图收集海桐花苷A1对应的洗脱流份，浓缩干燥即分别得到海桐花苷A1。
优选地，步骤S1提取时固液比为1:20。
优选地，步骤S1提取3次，每次1.5h。
优选地，步骤S2中，大孔吸附树脂柱的树脂径高比为1:10。
优选地，步骤S2中采取湿法装柱，拌树脂上样，拌样树脂占树脂总量的1/10。
优选地，步骤S3中，两相溶剂系统配制时，上、下相分离后超声0.5h待用。
优选地，步骤S3中，样品溶液配制时，取富集物冻干粉用10mL上相和10mL下相混合溶剂超声溶解配制成浓度为10mg/mL的溶液。
海桐花苷A2的制备：
一种海桐花苷A2的制备方法，包括如下步骤：
步骤S1，提取：收集海桐Pittosporum tobira叶，阴干，粉碎，用体积分数75％的乙醇水溶液热回流提取，提取多次，过滤，合并滤液浓缩至无醇味；
步骤S2，大孔树脂富集：将浓缩至无醇味的提取液上样于DA-201型大孔吸附树脂柱，先用8BV的30％乙醇以8BV/h的流速洗脱，再用15BV的75％乙醇以8BV/h的流速洗脱，收集14-15BV洗脱液，浓缩至无醇味、冷冻干燥得到富集物冻干粉；
步骤S3，HSCCC分离纯化：
S3.1两相溶剂系统配制
两相溶剂系统选择体积比为2:16:3:16的正丁醇/乙酸乙酯/异丙醇/水，将各溶剂按照体积比例加入分液漏斗中，剧烈振摇使充分混合，后静置分层，上、下相分离，超声待用。
S3.2样品溶液配制
取富集物冻干粉用等体积上相和下相混合溶剂超声溶解配制，即为样品溶液。
S3.3HSCCC分离
将配制好的溶剂系统上相泵入HSCCC螺旋管中作为固定相，待上相完全充满整个柱子，打开高速逆流色谱仪，设置转速900r/min、体积流量1.2mL/min、检测波长213nm，将溶剂系统下相泵入螺旋管中，待流动相开始从检测器尾端持续流出时，表明螺旋管内两相溶剂达到流体动力学平衡；进样阀注入样品溶液，开始记录色谱图并持续泵入流动相分离。
S3.4根据色谱图收集海桐花苷A2对应的洗脱流份，浓缩干燥即分别得到海桐花苷A2。
优选地，步骤S1提取时固液比为1:20。
优选地，步骤S1提取3次，每次1.5h。
优选地，步骤S2中，大孔吸附树脂柱的树脂径高比为1:10。
优选地，步骤S2中采取湿法装柱，拌树脂上样，拌样树脂占树脂总量的1/10。
优选地，步骤S3中，两相溶剂系统配制时，上、下相分离后超声0.5h待用。
优选地，步骤S3中，样品溶液配制时，取富集物冻干粉用10mL上相和10mL下相混合溶剂超声溶解配制成浓度为10mg/mL的溶液。
有益效果：
本发明制备方法简单易于工业化生产，制备得到的海桐花苷A1、A2纯度高。
附图说明
图1为HSCCC分离色谱图；
图2为海桐花苷A1纯度检测HPLC色谱图；
图3为海桐花苷A2纯度检测HPLC色谱图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。
一、实验材料
海桐叶片采集于江苏省南京市中山植物园。
DA-201型大孔吸附树脂购于天津浩聚树脂科技有限公司。
高速逆流色谱仪TEB300B购于上海同田生物技术股份有限公司。
二、实验方法和结果
包括如下步骤：
步骤S1，提取：收集海桐Pittosporum tobira叶，阴干，粉碎，用体积分数75％的乙醇水溶液热回流提取，固液比为1:20，提取3次，每次1.5h，过滤，合并滤液浓缩至无醇味；
步骤S2，大孔树脂富集：将浓缩至无醇味的提取液上样于DA-201型大孔吸附树脂柱，树脂径高比为1:10，拌样树脂占树脂总量的1/10，湿法装柱，拌树脂上样；先用8BV的30％乙醇以8BV/h的流速洗脱，再用15BV的75％乙醇以8BV/h的流速洗脱，收集14-15BV洗脱液，浓缩至无醇味、冷冻干燥得到富集物冻干粉；
步骤S3，HSCCC分离纯化：
S3.1两相溶剂系统配制
两相溶剂系统选择体积比为2:16:3:16的正丁醇/乙酸乙酯/异丙醇/水，将各溶剂按照体积比例加入分液漏斗中，剧烈振摇使充分混合，后静置分层，上、下相分离，超声0.5h待用。
S3.2样品溶液配制
取富集物冻干粉用10mL上相和10mL下相混合溶剂超声溶解配制成浓度为10mg/mL的溶液，即为样品溶液。
S3.3HSCCC分离
将配制好的溶剂系统上相泵入HSCCC螺旋管中作为固定相，待上相完全充满整个柱子，打开高速逆流色谱仪，设置转速900r/min、体积流量1.2mL/min、检测波长213nm，将溶剂系统下相泵入螺旋管中，待流动相开始从检测器尾端持续流出时，表明螺旋管内两相溶剂达到流体动力学平衡；进样阀注入20mL样品溶液，开始记录色谱图并持续泵入流动相分离。
S3.4根据色谱图(图1)分别收集海桐花苷A1、海桐花苷A2对应的洗脱流份，浓缩干燥即分别得到海桐花苷A1、海桐花苷A2。
步骤S4，纯度检测：
色谱仪：LC-20ADXR高压泵；SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器；CTO-20AC柱温箱；CBM-20A系统控制器；SIL-20ACXR自动进样器；
色谱柱：Agilent ZORBAX Extend-C18(250mm×4.6mm，5μm)；
流动相A相：水(含千分之五甲酸)；流动相B相：乙腈(含千分之五甲酸)；
洗脱程序：0-40min，0％→100％B相；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
检测波长：213nm；
进样量：10μL。
纯度检测结果表明，HSCCC分离制备得到的海桐花苷A1、海桐花苷A2的纯度分别为98.3％、98.5％，与标准品比对具有相同的色谱保留行为。纯度检测谱图如图2、3所示。
上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。
Claims (7)
1.一种海桐花苷A2的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤S1，提取：收集海桐Pittosporum tobira叶，阴干，粉碎，用体积分数75％的乙醇水溶液热回流提取，提取多次，过滤，合并滤液浓缩至无醇味；
步骤S2，大孔树脂富集：将浓缩至无醇味的提取液上样于DA-201型大孔吸附树脂柱，先用8BV的30％乙醇以8BV/h的流速洗脱，再用15BV的75％乙醇以8BV/h的流速洗脱，收集14-15BV洗脱液，浓缩至无醇味、冷冻干燥得到富集物冻干粉；
步骤S3，HSCCC分离纯化：
S3.1 两相溶剂系统配制
两相溶剂系统选择体积比为2:16:3:16的正丁醇/乙酸乙酯/异丙醇/水，将各溶剂按照体积比例加入分液漏斗中，剧烈振摇使充分混合，后静置分层，上、下相分离，超声待用。
S3.2 样品溶液配制
取富集物冻干粉用等体积上相和下相混合溶剂超声溶解配制，即为样品溶液。
S3.3 HSCCC分离
将配制好的溶剂系统上相泵入HSCCC螺旋管中作为固定相，待上相完全充满整个柱子，打开高速逆流色谱仪，设置转速900r/min、体积流量1.2mL/min、检测波长213nm，将溶剂系统下相泵入螺旋管中，待流动相开始从检测器尾端持续流出时，表明螺旋管内两相溶剂达到流体动力学平衡；进样阀注入样品溶液，开始记录色谱图并持续泵入流动相分离。
S3.4 根据色谱图收集海桐花苷A2对应的洗脱流份，浓缩干燥即分别得到海桐花苷A2。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S1提取时固液比为1:20。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S1提取3次，每次1.5h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S2中，大孔吸附树脂柱的树脂径高比为1:10。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S2中采取湿法装柱，拌树脂上样，拌样树脂占树脂总量的1/10。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S3中，两相溶剂系统配制时，上、下相分离后超声0.5h待用。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S3中，样品溶液配制时，取富集物冻干粉用10mL上相和10mL下相混合溶剂超声溶解配制成浓度为10mg/mL的溶液。
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|---|---|---|---|---|
| CN110478300A (zh) * | 2019-09-29 | 2019-11-22 | 李世� | 一种富含熊果苷的提取物的制备方法和在祛斑美白方面的应用 |
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2018
- 2018-09-07 CN CN201811044427.6A patent/CN108840890A/zh not_active Withdrawn
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|---|---|---|---|---|
| CN110478300A (zh) * | 2019-09-29 | 2019-11-22 | 李世� | 一种富含熊果苷的提取物的制备方法和在祛斑美白方面的应用 |
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