CN108840815A - 一种荧光标记的氨基酸及其制备方法和用途 - Google Patents

一种荧光标记的氨基酸及其制备方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN108840815A
CN108840815A CN201810535560.5A CN201810535560A CN108840815A CN 108840815 A CN108840815 A CN 108840815A CN 201810535560 A CN201810535560 A CN 201810535560A CN 108840815 A CN108840815 A CN 108840815A
Authority
CN
China
Prior art keywords
amino acid
added
preparation
reaction
fluorescent marker
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810535560.5A
Other languages
English (en)
Inventor
车团结
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
LANZHOU BAIYUAN GENE TECHNOLOGY Co Ltd
Suzhou Baiyuan Gene Technology Co Ltd
Original Assignee
LANZHOU BAIYUAN GENE TECHNOLOGY Co Ltd
Suzhou Baiyuan Gene Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by LANZHOU BAIYUAN GENE TECHNOLOGY Co Ltd, Suzhou Baiyuan Gene Technology Co Ltd filed Critical LANZHOU BAIYUAN GENE TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201810535560.5A priority Critical patent/CN108840815A/zh
Priority to PCT/CN2018/090780 priority patent/WO2019227527A1/zh
Publication of CN108840815A publication Critical patent/CN108840815A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/14—Radicals substituted by nitrogen atoms, not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/06—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
    • G01N21/6456—Spatial resolved fluorescence measurements; Imaging
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
    • C09K2211/1003—Carbocyclic compounds
    • C09K2211/1007—Non-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
    • C09K2211/1018—Heterocyclic compounds
    • C09K2211/1025—Heterocyclic compounds characterised by ligands
    • C09K2211/1029—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing one nitrogen atom as the heteroatom

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明公开了一种荧光标记的氨基酸，具有式I所示的结构：氨基酸分子与式Q所示的荧光染料分子之间形成稳定的共价键结合，在血清等检测环境中的稳定性高，生物相容性高，适于细胞内外的蛋白、多肽等生物分子的检测。上述荧光标记的氨基酸，由于荧光染料分子的斯托克斯位移大，同时具有荧光稳定性好、荧光量子产率高，以及成像结果信噪比高的优点。本发明公开了上述荧光标记的氨基酸的制备方法，反应条件温和，操作简单，反应的选择性高，能够制得高产率的荧光标记的氨基酸。

Description

一种荧光标记的氨基酸及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于医学生物检测技术领域，具体涉及一种荧光标记的氨基酸及其制备方法和用途。
背景技术
荧光标记技术是指将能发射荧光的物质通过共价结合或物理吸附等方式标记于所研究分子的某个基团上，用它的荧光特性来反映研究对象的信息。利用荧光标记试剂与被研究对象(核酸、蛋白、多肽等)吸附或共价结合后其荧光特性发生改变，从而反映出有关研究对象性能的信息。随着现代医学、生物学技术的不断发展，新型荧光标记染料的发现以及各种先进荧光检测技术和仪器，如流式细胞仪(FCM)、激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)等的应用，作为一种非放射性的标记技术，荧光标记具有操作简便、稳定性高、灵敏度高和选择性好等特点，可广泛应用于细胞内外物质检测、组织及活体动物标记成像、药物分析、病理模型研究及疾病早期诊断等，在生物医学研究领域里发挥着重要的作用。
蛋白质作为构成生命体系的三大物质基础之一，几乎参与着生命活动的每一个环节，在生命的诞生、成长和繁衍过程中起着决定性的作用。许多疾病的发生也与多肽、蛋白质在体内发生变异有着密切的关系。因此选择与重大疾病密切相关的蛋白质、多肽以及氨基酸残基作为靶标，发展具有高选择性，高灵敏度的检测方法，对生命奥秘的揭示，疾病的早期诊断与药物的筛选有着重大的意义。目前诊断多肽及蛋白质的检测方法主要有免疫标记法，同位素标记法和荧光检测法等，荧光检测法因其具有灵敏度高、选择性好，动态响应范围宽，能在活体内检测等优点在蛋白质检测中得以广泛应用。例如，液相芯片在荧光微球的表面偶联核酸探针分子，荧光微球是在微米级聚合物微球中装入不同发光波长和强度水平组合的荧光材料形成的具有不同荧光信号编码的球体；荧光微球表面可以偶联与目标分子(例如：抗原)结合的探针分子(例如：特异性抗体)，再加入标记有另一种荧光信号的报告分子(例如：特异性抗体)，就构成了液相芯片的反应系统。待测的目标抗原可以同时与探针分子和报告分子结合，利用荧光微球的荧光信号实现对目标抗原的定性分析，利用报告分子的荧光强度实现对目标抗原的定量/半定量检测。
应用液相芯片可同时进行多样品检测，从而实现在一个样本中的多种抗原分子的多元定量分析。但是，目前的液相芯片技术尚存在以下缺陷：1、荧光染料斯托克斯位移一般不超过30nm，荧光染料易淬灭、信号不稳定，且不利于实现不同荧光信号之间的区分；2、液相芯片中需要预先制作荧光微球，再以荧光微球偶联探针分子，导致液相芯片的制作步骤繁琐，另外，受到荧光微球中荧光信号种类的限制，目前仅能实现对100种左右探针分子的荧光标记。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中荧光标记的探针分子存在荧光信号不稳定、无法有效区分不同的荧光信号，以及标记探针分子的荧光信号种类少的缺陷。
为此，本发明提供如下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种荧光标记的氨基酸，具有式I所示的结构：
其中，R1选自烷基、环烷基、芳基和杂环基中的一种，
R2为任一氨基酸侧链基团，
X为卤素。
优选地，上述的荧光标记的氨基酸，具有式II所示的结构：
其中，R1选自烷基、环烷基、芳基和杂环基中的一种，R2为任一氨基酸侧链基团。
优选地，上述的荧光标记的氨基酸，所述R2选自-H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、CH2COOH、-CH2C(O)NH2、-CH2CH2COOH、-CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2C(O)NH2、-CH2CH2SCH3、-CH2CH2CH2NHCH(NH)NH2、-CH2OH、-CH(OH)CH3和-CH2SH。
第二方面，本发明提供了上述的荧光标记的氨基酸的制备方法，包括如下步骤：
S1.将中间体1溶于有机溶剂，加入第一催化剂后搅拌，然后与中间体2和三乙胺混合，搅拌4～6h；将反应溶液洗涤，干燥，浓缩，重结晶，制得中间体3；
S2.中间体3溶于无水乙醚中，冰浴下加入第二催化剂，室温反应0.5～2h，继续加入乙酸乙酯，调节pH为6.5～7.5，过滤，干燥，浓缩，分离得到中间体4；
S3.中间体4溶于无水THF，继续加入三乙胺和甲磺酰氯，搅拌反应3～5h后，洗涤反应溶液，干燥，浓缩，制得中间体5；
S4.将式Q所示的荧光染料溶于DMF，加入碱金属盐，搅拌后，加入中间体5，反应过夜；然后将反应溶液倒入乙酸乙酯，洗涤反应溶液，浓缩，重结晶制得中间体6；
S5.中间体6加入甲苯中，搅拌均匀，加入硅胶，加热回流，反应结束后过滤，清洗硅胶，滤液蒸干，制得式I所示的荧光标记的氨基酸；
反应路线如下所示：
优选地，上述的制备方法，所述中间体1通过下述步骤制得：
将式B所示的氨基酸溶于碱溶液中，氨基酸溶于碱溶液中，向其中逐渐滴加碳酸二叔丁基酯的无水THF溶液，然后依次在冰浴和室温下搅拌，控制反应过程在碱性环境下进行；
反应结束后，去除THF，洗涤反应溶液，干燥，浓缩，制得所述中间体1；
反应路线如下所示：
优选地，上述的制备方法，所述有机溶剂为二氯甲烷，所述第一催化剂为1-羟基苯并三唑和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的混合物，所述第二催化剂为四氢铝锂。
优选地，上述的制备方法，所述式Q所示的荧光染料通过如下步骤制备：
(1)中间体I’-1制备
将苯肼加入冰乙酸中，搅拌，缓慢滴加3-甲基-2-丁酮，滴加完毕后加热至60-65℃，反应3-4小时，萃取，浓缩，精制，得到中间体I’-1；
其中，苯肼和3-甲基-2-丁酮的摩尔比为1：(1.0-1.2)；
(2)中间体I’-2制备
将中间体I’-1和1,2-二溴乙烯加入甲苯中，氮气保护，加热回流反应16-18小时，冷却，析出固体，即中间体I’-2；
其中，中间体I’-1和1,2-二溴乙烯的摩尔比为1：(1.5-2.0)；
(3)中间体I’-4制备
将干燥的N，N-二甲基甲酰胺加到干燥的二氯甲烷中，冰浴下加入三氯氧磷的二氯甲烷溶液，搅拌，加入环己酮，撤去冰浴，加热回流反应2-3小时，将反应液倒入碎冰中，静置过夜，析出固体，即中间体I’-4；
其中，环己酮、N，N-二甲基甲酰胺、三氯氧磷的摩尔比为1：(1.0-1.1)：(1.0-1.05)；
(6)中间体I’-5制备
将中间体I’-2和中间体I’-4加至正丁醇和甲苯的混合液中，加热回流2-3小时，析出固体，过滤得到中间体I’-5；
(7)化合物Q制备
将中间体I’-5与Br-R1-OH发生氨基取代反应，反应过程中加入NaOH，生产化合物Q；
合成路线如下所示：
优选地，上述的制备方法：
所述步骤(1)中，所述苯肼和3-甲基-2-丁酮的摩尔比为1：(1.0-1.2)；
所述步骤(2)中，所述中间体I’-1和1,2-二溴乙烯的摩尔比为1：(1.5-2.0)；
所述步骤(3)中，所述环己酮、N，N-二甲基甲酰胺、三氯氧磷的摩尔比为1：(1.0-1.1)：(1.0-1.05)。
第三方面，本发明提供了上述的荧光标记的氨基酸在制备荧光探针中的用途。
优选地，上述的用途，所述荧光探针为多肽荧光探针和/或蛋白荧光探针。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的一种荧光标记的氨基酸，具有式I所示的结构。式I所示结构的化合物由任一氨基酸分子与式Q所示的荧光染料分子共价结合形成，其中式Q所示的荧光染料分子的斯托克斯位移大，荧光信号稳定，荧光量子产率高，能够与其他荧光染料分子的发射荧光有效区分开，在荧光成像时具有信噪比高的优点。
式I所示的荧光标记的氨基酸在血清等检测环境中的稳定性高，能够在细胞中长时间保留，同时荧光标记的氨基酸细胞毒性低、生物相容性高，适于可广泛应用于细胞内外生物活性分子检测、组织及活体动物标记成像、药物分析、病理模型研究及疾病早期诊断等。
荧光标记的氨基酸可以直接用于多肽或者蛋白的合成，由于染料分子是直接与氨基酸共价偶联的，因此合成的多肽或蛋白不需要进行荧光偶联修饰，即可发射荧光，作为荧光探针用于细胞内外或者生物活体内的目标抗原分子(例如：病毒、细胞因子、激素、酶、疾病标志物等等)的检测。上述的荧光探针具有荧光量子产率高、荧光性能稳定的优势，同时，在合成荧光探针时，可以灵活地在蛋白或者多肽的特定位置上引入所需数量的上述荧光标记的氨基酸，一方面可以保证合成的具有荧光性能的多肽或蛋白分子的生物活性，另一方面可以通过引入特定数量的荧光染料分子以控制荧光信号强度。
上述荧光标记的氨基酸在应用于液相芯片时，以荧光标记的氨基酸合成的探针分子，无需与荧光微球偶联，简化了液相芯片的制备过程；并且为液相芯片在近红外区域提供了一种新的信号稳定且区分度高的荧光检测信号，增加了探针分子的发光形式。
2.本发明提供的荧光标记的氨基酸的制备方法，合成所需的原料易得，反应条件温和，操作简单，反应的选择性高，反应制备的荧光标记的氨基酸兼具高的荧光产率、荧光稳定性和生物活性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是实施例1中的化合物II-1的1H核磁谱图；
图2是实施例2中的化合物II-2的1H核磁谱图；
图3是实施例3中的化合物Q-1的1H核磁谱图；
图4是本发明实验例1中制备的式II-1所示的化合物在不同浓度下对HEK-293T细胞的细胞生存率影响检测柱状图；
图5是本发明实验例2中制备的式II-2所示的化合物在不同浓度下对HEK-293T细胞的细胞生存率影响检测柱状图；
图6是本发明实验例1中制备的式II-1所示的所示的化合物在PBS或血清中孵育不同时间的化学纯度图；
图7是本发明实验例2中制备的式II-2所示的所示的化合物在PBS或血清中孵育不同时间的化学纯度图；
图8是荧光标记的氨基酸在HEK-293T细胞中的荧光强度检测结果。
具体实施方式
下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。此外，下面所描述的本发明不同实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。
本发明实施例所用的试剂等基础化工原料，均可在国内化工产品市场买到，或在有关中间体制备厂定做。
核磁共振仪(Bruker DRX-500)、高效液相色谱仪(Waters 2445)、γ计数仪(Perkin-Elmer1470)、元素分析仪(Perkin-Elmer 240C)、酶联免疫检测(美国Bio-Rad)、高速离心机(美国贝克曼库尔特J2-HS)。下述实施例中所有涉及的细胞均购自上海生命科学研究院细胞所。
实施例1
本实施例提供一种荧光标记的氨基酸，具有如下式II-1所示的分子结构：
式II-1所示荧光标记的氨基酸合成路线如下所示：
式II-1所示荧光标记的氨基酸的制备方法包括如下步骤：
1、中间体1-1的制备：
将14.9g蛋氨酸(化合物B-1)溶于110mL1M氢氧化钠溶液，冰浴，缓慢滴加50mL含2211g碳酸二叔丁基酯的无水THF(四氢呋喃)溶液，同时用1M的氢氧化钠溶液控制反应液pH在9左右，约1h滴加完毕，冰浴条件下搅拌1h，撤去冰浴，室温搅拌15h。整个过程保持体系pH在9左右，反应完毕后蒸除THF，以石油醚洗涤(100mL×3)，水相用饱和柠檬酸溶液调节pH2～3，以乙酸乙酯萃取(100mL×3)，无水硫酸镁干燥过夜，浓缩得淡黄色油状物20.5g，收率87％。
中间体1-1的结构如下所示：
2、中间体2的制备：
冰浴下，向100mL无水甲醇中滴加9.62mL乙酰氯，冰浴搅拌15分钟，加入6.4g对氨基苯甲酸，冰浴搅拌1小时后回流2小时。浓缩得白色固体，以甲醇-乙醚重结晶得白色粉末6.88g，收率95％。
中间体2的结构如下所示：
3、中间体3-1的制备：
将2.7g中间体1-1溶于100mL二氯甲烷，加入1.5g 1-羟基苯并三唑(HOBT)、2.1g1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，室温搅拌15min，加入1.7g中间体2和2.1mL三乙胺，室温搅拌6小时。将反应液用饱和柠檬酸(50mL×3)洗、饱和碳酸氢钠(50mL×3)洗，饱和食盐水(50mL×1)洗。无水硫酸镁干燥过夜。浓缩，以乙酸乙酯-正己烷重结晶得白色固体3.1g，产率80％，熔点100-102℃。
中间体3-1的结构如下所示：
4、中间体4-1的制备：
将0.76g中间体3-1溶于20mL无水乙醚，冰盐浴下分次加入0.23g四氢铝锂，室温反应1小时。冰浴下，向反应液中加入3mL乙酸乙酯，以2M盐酸调节PH至7。过滤，有机相以饱和食盐水(20mL×3)洗，无水硫酸镁干燥过夜。浓缩，combiflash色谱仪分离得无色油状物0.34g，收率48％。
中间体4-1的结构如下所示：
5、中间体5-1的制备：
将0.26g中间体4-1溶于40mL无水THF，冰浴下加入0.3mL三乙胺和0.18mL甲磺酰氯，5℃以下搅拌反应，4小时后反应结束。反应液以0.5M盐酸(20mL×3)洗、饱和食盐水洗(20mL×1)，无水硫酸镁干燥。浓缩得黄色油状物0.28g，粗产率80％，无需提纯，直接用于下一步反应。
中间体5-1的结构如下所示：
6、中间体6-1的制备：
将0.25g式Q-1所示的荧光染料溶于10mL DMF，加入0.5g无水碳酸钾，室温搅拌15分钟后，加入0.5g中间体5-1，反应过夜。将反应液倒入100mL乙酸乙酯中，以饱和碳酸钾溶液(50mL×5)洗，饱和食盐水(50mL×1)洗。浓缩，以乙酸乙酯-正己烷重结晶得中间体6-1，产率59％。
荧光染料分子结构如下所示：
中间体6-1的化学结构如下所示：
7、化合物II-1的制备：
向中间体6-1加入6ml甲苯中，室温下搅拌2h，加入硅胶，然后加热回流，反应结束后过滤，清洗硅胶，滤液蒸干，制得式II-1所示的荧光标记的氨基酸，收率92％。
式II-1所示的荧光标记的氨基酸具体结构如下：
式II-1所示荧光标记的氨基酸的1H核磁谱图如图1所示，式II-1所示荧光标记的氨基酸的元素分析计算值:C47H54Br3N5O2S+
质谱(MS+)：989.15(M+)
m/z:993.15(100.0％),991.15(98.8％),994.15(53.1％),992.16(51.0％),995.15(36.7％),989.15(33.3％),996.15(19.1％),990.16(17.2％),993.16(13.7％),995.16(13.0％),991.16(4.9％),997.16(4.4％),992.15(3.4％),994.16(3.2％),996.16(2.4％),997.14(1.4％),997.15(1.2％)。
元素分析:C,56.86；H,5.48；Br,24.15；N,7.05；O,3.22；S,3.23。
实施例2
本实施例提供一种荧光标记的氨基酸，具有如下式II-2所示的分子结构：
式II-2所示荧光标记的氨基酸合成路线如下所示：
式II-2所示荧光标记的氨基酸的制备方法包括如下步骤：
1、中间体1-2的制备：
将12.8g的化合物B-2溶于100mL1M氢氧化钠溶液，冰浴，缓慢滴加50mL含1890g碳酸二叔丁基酯的无水THF(四氢呋喃)溶液，同时用1M的氢氧化钠溶液控制反应液pH在9左右，约1h滴加完毕，冰浴条件下搅拌1h，撤去冰浴，室温搅拌15h。整个过程保持体系pH在9左右，反应完毕后蒸除THF，以石油醚洗涤(100mL×3)，水相用饱和柠檬酸溶液调节pH 2～3，以乙酸乙酯萃取(100mL×3)，无水硫酸镁干燥过夜，浓缩得中间体1-2，收率82％。
中间体1-2的结构如下所示：
2、中间体2的制备：
中间体2的制备步骤同实施例1。
3、中间体3-2的制备：
将2.6g中间体1-2溶于100mL二氯甲烷，加入2.2g 1-羟基苯并三唑(HOBT)、3.2g1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，室温搅拌25min，加入2.4g中间体2和1.8mL三乙胺，室温搅拌4小时。将反应液用饱和柠檬酸(50mL×3)洗、饱和碳酸氢钠(50mL×3)洗，饱和食盐水(50mL×1)洗。无水硫酸镁干燥过夜。浓缩，以乙酸乙酯-正己烷重结晶得中间体3-1，产率83％，中间体3-2的结构如下所示：
4、中间体4-2的制备：
将0.86g中间体3-2溶于30mL无水乙醚，冰盐浴下分次加入0.35g四氢铝锂，室温反应1小时。冰浴下，向反应液中加入5mL乙酸乙酯，以2M盐酸调节PH至6.5。过滤，有机相以饱和食盐水(20mL×3)洗，无水硫酸镁干燥过夜。浓缩，combiflash色谱仪分离得中间体4-2，收率50％。
中间体4-2的结构如下所示：
5、中间体5-2的制备：
将0.32g中间体4-2溶于40mL无水THF，冰浴下加入0.35mL三乙胺和0.22mL甲磺酰氯，12℃以下搅拌反应，3小时后反应结束。反应液以0.5M盐酸(20mL×3)洗、饱和食盐水洗(20mL×1)，无水硫酸镁干燥。浓缩得中间体5-2的粗产物，无需提纯，直接用于下一步反应。
中间体5-2的结构如下所示：
6、中间体6-2的制备：
将0.33g式Q-1所示的荧光染料溶于10mL DMF，加入0.7g无水碳酸钾，室温搅拌15分钟后，加入0.8g中间体5-2，反应过夜。将反应液倒入100mL乙酸乙酯中，以饱和碳酸钾溶液(50mL×5)洗，饱和食盐水(50mL×1)洗。浓缩，以乙酸乙酯-正己烷重结晶得中间体6-2，产率56％。
荧光染料分子结构如下所示：
中间体6-2的化学结构如下所示：
7、化合物II-2的制备：
向中间体6-2加入6ml甲苯中，室温下搅拌2h，加入硅胶，然后加热回流，反应结束后过滤，清洗硅胶，滤液蒸干，制得式II-2所示的荧光标记的氨基酸，收率89％。
式II-2所示的荧光标记的氨基酸具体结构如下：
式II-2所示荧光标记的氨基酸的1H核磁谱图如图2所示，式II-2所示荧光标记的氨基酸的元素分析计算值:C48H56Br3N5O2+
质谱(MS+)：971.20(M+)
m/z:973.20(100.0％),975.19(96.8％),974.20(52.5％),976.20(51.4％),971.20(34.1％),977.19(32.3％),978.20(19.1％),972.20(18.6％),975.20(14.6％),977.20(13.6％),973.21(4.6％),979.20(4.4％),976.21(2.3％),974.19(1.8％),976.19(1.8％)。
元素分析:C,59.15；H,5.79；Br,24.59；N,7.19；O,3.28。
实施例3
本实施例提供一种荧光染料分子，具有下述式Q-1所示的结构：
其制备方法如下：
(1)中间体I’-1制备
将苯肼加入冰乙酸中，搅拌，缓慢滴加3-甲基-2-丁酮，滴加完毕后加热至62.5℃，反应3-4小时，萃取，浓缩，精制，得到中间体I’-1；
其中，苯肼和3-甲基-2-丁酮的摩尔比为1：1.1；
(2)中间体I’-2制备
将中间体I’-1和1,2-二溴乙烯加入甲苯中，氮气保护，加热回流反应17小时，冷却，析出固体，即中间体I’-2；
其中，中间体Ⅰ-1和1,2-二溴乙烯的摩尔比为1：1.75；
(3)中间体I’-4制备
将干燥的N，N-二甲基甲酰胺加到干燥的二氯甲烷中，冰浴下加入三氯氧磷的二氯甲烷溶液，搅拌，加入环己酮，撤去冰浴，加热回流反应2.5小时，将反应液倒入碎冰中，静置过夜，析出固体，即中间体I’-4；
其中，环己酮、N，N-二甲基甲酰胺、三氯氧磷的摩尔比为1：1.05：1.025；
(4)中间体I’-5制备
将中间体I’-2和中间体I’-4加至正丁醇和甲苯的混合液中，加热回流2.5小时，析出固体，过滤得到中间体I’-5。
(5)化合物Q-1制备
中间体I’-5为原料进行常规的氨基取代反应。取中间体I’-5加入溴代甲醇进行反应，并加入NaOH，制得所需化合物Q-1。化合物Q-1的1H核磁谱图如图3所示。
元素分析计算值:C35H38Br2N3O+
质谱(MS+)：674.14(M+)
m/z:676.14(100.0％),674.14(49.5％),678.13(46.8％),677.14(36.9％),675.14(19.5％),679.14(18.1％),678.14(7.3％),680.14(3.5％),677.13(1.1％)。
元素分析:C,62.14；H,5.66；Br,23.62；N,6.21；O,2.37。
实验例1荧光染料的荧光性质检测
1、准确称取待测定化合物Q-1，用体积分数为50％的乙醇溶液制成浓度为1.0×10-5mol/L的溶液，测定其荧光光谱，得到化合物近红外光谱中的最大吸收波长λabs。
2、利用测定的近红外光谱中的最大吸收波长，作为荧光光谱的激发波长，测定荧光光谱。称量待测化合物，配制浓度为1.0×10-6mol/L的乙醇：水(50:50，v/v)溶液，测定其发射光谱，计算斯托克位移，如表1所示。
3、测定荧光染料的摩尔消光系数
利用紫外可见吸收光谱测定化合物的摩尔消光系数。计算式如式(1)所示：
A＝εcl 式(1)
其中，A代表吸收强度，ε为摩尔吸光系数，c是化合物的浓度，l为检测用的石英池的厚度。
3、测定荧光染料的荧光量子产率
在20℃下测定荧光染料的荧光量子产率，以硫酸奎宁(溶剂为0.1M的H2SO4，量子产率为0.56)作为参比物，通过测量荧光染料和参比物质的稀溶液在相同激发条件下得到的荧光积分强度和该激发波长下的紫外吸收值，来计算荧光量子产率。产物溶解于无水乙醇中。
计算公式如式(2)所示：
其中，其中Φ为待测物的量子产率，下标R代表参比物。I为荧光积分强度，A为紫外吸收值。η为溶剂折射率。一般要求吸光度A、AR均小于0.1。
表1实施例2所述荧光染料的光谱学性质
如表1所示，式Q-1所示的荧光染料的荧光量子产率＞85％，斯托克位移大，适于标记氨基酸等生物分子制备荧光探针，实现荧光性能稳定、荧光量子率高且成像信噪比高的核酸分子检测。
实验例2荧光标记的氨基酸的毒性检测
1.细胞毒性实验
通过MTT实验测定标记式II-1所示的化合物和式II-2所示的化合物在HEK-293T(人源胚胎肾细胞)中的细胞毒性，包括如下步骤：
(1)以每孔5×103个细胞/100μL的密度将HEK-293T细胞接种于96孔板中，培养基为DMEM，在37℃下含5％的CO2的恒温培养箱中培养过夜；
(2)将实施例1制备的式II-1所示的化合物，以及实施例2制备的式II-2所示的化合物用二甲基亚砜(DMSO)溶解，配制成浓度为0.1mol/L的母液，用DMEM培养基稀释成浓度分别为80μmol/L、40μmol/L、20μmol/L、10μmol/L和5μmol/L的溶液，备用；另取DMEM培养基加入等体积的去离子水稀释，其中含荧光标记的氨基酸的浓度为0μmol/L；
(3)将步骤(1)中的96孔板中原有培养基更换为上述步骤(2)中配制的药浓度分别为0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L的DMEM培养基，每孔200μL，每个药物浓度设置6个复孔。随后将96孔板放入37℃下含5％的CO2恒温培养箱中分别孵育3h、6h、12h和24h。孵育结束后，向每孔中加入20μL的MTT(5mg/mL)继续培养4h。培养结束后，吸去培养基，向每孔中加入150μL的DMSO，并在摇床上震荡10min，直至结晶完全溶解。用酶标记测定490nm下每孔的吸光度值，实验结果为至少三次独立实验的平均值。
不同药物浓度与孵育时间下，式II-1所示的化合物对HEK-293T细胞生存率影响的柱状图如图4所示，式II-2所示的化合物对HEK-293T细胞生存率影响的柱状图如图4所示。随着药物作用时间延长与化合物浓度的增大，细胞生存率变化并不明显，且在24h内，无论式II-1所示的化合物还是式II-2所示的化合物孵育后的细胞生存率均大于90％，所以可以判定荧光标记的氨基酸对HEK-293T细胞是安全低毒的，具有良好的生物兼容性。
实验例3荧光标记氨基酸的稳定性实验
(1)取4份800μL的PBS(pH＝7.4)缓冲液和200μL的实施例1制备的式II-1所示的化合物溶液分别混合，在37℃下加热0.5h、1h、2h、3h、4h。取上述少量溶液稀释，通过放射性高效液相检测标记产物的稳定性，高效液相条件：以水(含有体积浓度为0.1％的TFA)为流动相A，以CH3CN(含有体积浓度为0.1％的TFA)为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0min→3min，流动相II-1：流动相B的体积比由80:20→80:20；3min→25min，流动相II-1：流动相B的体积比由80:20→10:90；25min→30min，流动相II-1：流动相B的体积比由10:90→80:20，控制流动相的流速为1mL/min，控制柱温25℃。再取4份800μL老鼠血清(购自碧云天)和200μL的实施例1制备的式II-1所示的化合物溶液分别混合，在37℃下加热0.5h、1h、2h、3h、4h，然后取100μL上述溶液，加入100μL乙腈，用高速离心机在10000g下离心5min，取上层清液，通过高效液相色谱检测标记产物的稳定性，高效液相条件：以水(含有体积浓度为0.1％的TFA)为流动相II-1，以CH3CN(含有体积浓度为0.1％的TFA)为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0min→3min，流动相A：流动相B的体积比由80:20→80:20；3min→25min，流动相A：流动相B的体积比由80:20→10:90；25min→30min，流动相A：流动相B的体积比由10:90→80:20，控制流动相的流速为1mL/min，控制柱温25℃。图6为式II-1所示的化合物在PBS或血清中孵育不同时间的液相色谱检测的化学纯度图。
(2)采用步骤(1)中的检测方法，测定式II-2所示的化合物在PBS或血清中孵育不同时间后的化学纯度，结果如图7所示。
由图6和图7可知，随着孵育时间的增加，式II-1所示的化合物和式II-2所示的化合物在PBS与血清中放射性化学纯度略有下降，在4h的时候，PBS与血清中的化学纯度仍大于95％。这表明荧光标记的氨基酸在体外具有良好的稳定性，有利于进一步的体内实验研究。
实验例4荧光标记的氨基酸的荧光强度检测图
(1)将HEK-293T细胞在5％CO2，温度为37℃的培养箱中培养至对数期；
(2)以1×105个/孔接种于已含有玻片(玻片用75％乙醇浸泡5min以消毒，玻片购自Assitent公司)的12孔板中，培养过夜；
(3)吸去细胞上清，分别加入用培养基稀释的终浓度为1mg/ml的实施例1制备的式A所示荧光标记的核苷酸和实施例3制备的式D所示荧光标记的核苷酸，细胞培养箱中继续培养24h；
(4)终止培养，将孔板中的玻片移至新的12孔板中，加入PBST(含0.1％的Tween-20)漂洗3-4次；加入4％多聚甲醛室温固定15min，PBST漂洗3-4次；加入终浓度为1μg/ml的DAPI(购自美国Cell signaling公司)溶液37℃孵育15min，PBS漂洗3-4次；封片，激光共聚焦显微镜(购自日本奥林巴斯公司)下观察。
图8显示荧光标记的氨基酸在HEK-293T细胞中的荧光强度检测结果，图中自左向右(7A-7C)依次代表式II-1所示荧光标记的氨基酸在HEK-293T细胞中的荧光检测结果，式II-2所示荧光标记的氨基酸在HEK-293T细胞中的荧光检测结果，和HEK-293T细胞的DAPI染色结果。由图8可知，式II-1以及式II-2所示荧光标记的氨基酸孵育后的细胞中，均能检测到明显的荧光，说明HEK-293T细胞能够摄入上述荧光标记的氨基酸，且荧光标记的氨基酸的具有较高的荧光发光强度。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种荧光标记的氨基酸，其特征在于，具有式I所示的结构：
其中，R1选自烷基、环烷基、芳基和杂环基中的一种，
R2为任一氨基酸侧链基团，
X为卤素。
2.根据权利要求1所述的荧光标记的氨基酸，其特征在于，具有式II所示的结构：
其中，R1选自烷基、环烷基、芳基和杂环基中的一种，R2为任一氨基酸侧链基团。
3.根据权利要求1或2所述的荧光标记的氨基酸，其特征在于，所述R2选自-H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、 -CH2COOH、-CH2C(O)NH2、-CH2CH2COOH、-CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2C(O)NH2、-CH2CH2SCH3、-CH2CH2CH2NHCH(NH)NH2、-CH2OH、-CH(OH)CH3和-CH2SH。
4.一种如权利要求1-3任一项所述的荧光标记的氨基酸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.将中间体1溶于有机溶剂，加入第一催化剂后搅拌，然后与中间体2和三乙胺混合，搅拌4～6h；将反应溶液洗涤，干燥，浓缩，重结晶，制得中间体3；
S2.中间体3溶于无水乙醚中，冰浴下加入第二催化剂，室温反应0.5～2h，继续加入乙酸乙酯，调节pH为6.5～7.5，过滤，干燥，浓缩，分离得到中间体4；
S3.中间体4溶于无水THF，继续加入三乙胺和甲磺酰氯，搅拌反应3～5h后，洗涤反应溶液，干燥，浓缩，制得中间体5；
S4.将式Q所示的荧光染料溶于DMF，加入碱金属盐，搅拌后，加入中间体5，反应过夜；然后将反应溶液倒入乙酸乙酯，洗涤反应溶液，浓缩，重结晶制得中间体6；
S5.中间体6加入甲苯中，搅拌均匀，加入硅胶，加热回流，反应结束后过滤，清洗硅胶，滤液蒸干，制得式I所示的荧光标记的氨基酸；
反应路线如下所示：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述中间体1通过下述步骤制得：
将式B所示的氨基酸溶于碱溶液中，氨基酸溶于碱溶液中，向其中逐渐滴加碳酸二叔丁基酯的无水THF溶液，然后依次在冰浴和室温下搅拌，控制反应过程在碱性环境下进行；
反应结束后，去除THF，洗涤反应溶液，干燥，浓缩，制得所述中间体1；
反应路线如下所示：
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为二氯甲烷，所述第一催化剂为1-羟基苯并三唑和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的混合物，所述第二催化剂为四氢铝锂。
7.根据权利要求4-6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述式Q所示的荧光染料通过如下步骤制备：
(1)中间体I’-1制备
将苯肼加入冰乙酸中，搅拌，缓慢滴加3-甲基-2-丁酮，滴加完毕后加热至60-65℃，反应3-4小时，萃取，浓缩，精制，得到中间体I’-1；
其中，苯肼和3-甲基-2-丁酮的摩尔比为1：(1.0-1.2)；
(2)中间体I’-2制备
将中间体I’-1和1,2-二溴乙烯加入甲苯中，氮气保护，加热回流反应16-18小时，冷却，析出固体，即中间体I’-2；
其中，中间体I’-1和1,2-二溴乙烯的摩尔比为1：(1.5-2.0)；
(3)中间体I’-4制备
将干燥的N，N-二甲基甲酰胺加到干燥的二氯甲烷中，冰浴下加入三氯氧磷的二氯甲烷溶液，搅拌，加入环己酮，撤去冰浴，加热回流反应2-3小时，将反应液倒入碎冰中，静置过夜，析出固体，即中间体I’-4；
其中，环己酮、N，N-二甲基甲酰胺、三氯氧磷的摩尔比为1：(1.0-1.1)：(1.0-1.05)；
(4)中间体I’-5制备
将中间体I’-2和中间体I’-4加至正丁醇和甲苯的混合液中，加热回流2-3小时，析出固体，过滤得到中间体I’-5；
(5)化合物Q制备
将中间体I’-5与Br-R1-OH发生氨基取代反应，反应过程中加入NaOH，生产化合物Q；
合成路线如下所示：
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：
所述步骤(1)中，所述苯肼和3-甲基-2-丁酮的摩尔比为1：(1.0-1.2)；
所述步骤(2)中，所述中间体I’-1和1,2-二溴乙烯的摩尔比为1：(1.5-2.0)；
所述步骤(3)中，所述环己酮、N，N-二甲基甲酰胺、三氯氧磷的摩尔比为1：(1.0-1.1)：(1.0-1.05)。
9.权利要求1-3任一项所述的荧光标记的氨基酸在制备荧光探针中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述荧光探针为多肽荧光探针和/或蛋白荧光探针。
CN201810535560.5A 2018-05-29 2018-05-29 一种荧光标记的氨基酸及其制备方法和用途 Pending CN108840815A (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810535560.5A CN108840815A (zh) 2018-05-29 2018-05-29 一种荧光标记的氨基酸及其制备方法和用途
PCT/CN2018/090780 WO2019227527A1 (zh) 2018-05-29 2018-06-12 一种荧光标记的氨基酸及其制备方法和用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810535560.5A CN108840815A (zh) 2018-05-29 2018-05-29 一种荧光标记的氨基酸及其制备方法和用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108840815A true CN108840815A (zh) 2018-11-20

Family

ID=64210100

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810535560.5A Pending CN108840815A (zh) 2018-05-29 2018-05-29 一种荧光标记的氨基酸及其制备方法和用途

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN108840815A (zh)
WO (1) WO2019227527A1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019227527A1 (zh) * 2018-05-29 2019-12-05 苏州百源基因技术有限公司 一种荧光标记的氨基酸及其制备方法和用途
JP2021523243A (ja) * 2018-05-29 2021-09-02 蘇州百源基因技術有限公司 蛍光染料及びその製造方法並びに応用
CN117736135A (zh) * 2024-02-19 2024-03-22 西北农林科技大学深圳研究院 一种蛋白质位点特异性修饰的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101255129A (zh) * 2008-03-26 2008-09-03 太仓市茜泾化工有限公司 一种花菁的合成工艺
CN101723874A (zh) * 2008-10-31 2010-06-09 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 花菁类化合物及其在生物样品染色中的用途
CN101952247A (zh) * 2007-12-20 2011-01-19 爱克发印艺公司 用于制备中位取代的花菁染料、份菁染料和氧杂菁染料的中间体化合物
CN104478783A (zh) * 2014-10-30 2015-04-01 顾新华 一种用于蛋白质荧光标记的化合物的合成方法
CN105111773A (zh) * 2015-08-19 2015-12-02 大连理工大学 一类氨基菁类荧光染料及其制备方法和应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014149069A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-25 Purdue Research Foundation Synthesis and composition of amino acid linking groups conjugated to compounds used for the targeted imaging of tumors
CN108840815A (zh) * 2018-05-29 2018-11-20 苏州百源基因技术有限公司 一种荧光标记的氨基酸及其制备方法和用途

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101952247A (zh) * 2007-12-20 2011-01-19 爱克发印艺公司 用于制备中位取代的花菁染料、份菁染料和氧杂菁染料的中间体化合物
CN101255129A (zh) * 2008-03-26 2008-09-03 太仓市茜泾化工有限公司 一种花菁的合成工艺
CN101723874A (zh) * 2008-10-31 2010-06-09 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 花菁类化合物及其在生物样品染色中的用途
CN104478783A (zh) * 2014-10-30 2015-04-01 顾新华 一种用于蛋白质荧光标记的化合物的合成方法
CN105111773A (zh) * 2015-08-19 2015-12-02 大连理工大学 一类氨基菁类荧光染料及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GABOR PATONAY: "Use of fluorescent NIR dyes in silica nanoparticles and as enzyme substrates in bioanalytical applications", 《PROC. OF SPIE》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019227527A1 (zh) * 2018-05-29 2019-12-05 苏州百源基因技术有限公司 一种荧光标记的氨基酸及其制备方法和用途
JP2021523243A (ja) * 2018-05-29 2021-09-02 蘇州百源基因技術有限公司 蛍光染料及びその製造方法並びに応用
JP7010290B2 (ja) 2018-05-29 2022-01-26 蘇州百源基因技術有限公司 蛍光染料及びその製造方法並びに応用
CN117736135A (zh) * 2024-02-19 2024-03-22 西北农林科技大学深圳研究院 一种蛋白质位点特异性修饰的方法
CN117736135B (zh) * 2024-02-19 2024-05-07 西北农林科技大学深圳研究院 一种蛋白质位点特异性修饰的方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2019227527A1 (zh) 2019-12-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108840815A (zh) 一种荧光标记的氨基酸及其制备方法和用途
CN108440475A (zh) 一种区分不同极性脂滴的比率型荧光探针及其制备方法和应用
CN107235946A (zh) 一种谷胱甘肽荧光探针及其制备方法和应用
CN110003060A (zh) 一种丙二腈衍生物类近红外硫化氢荧光探针及其制备方法与应用
CN108329302A (zh) 一种硫化物特异性响应的半花菁类近红外荧光探针化合物及其制备方法和应用
CN110498799B (zh) 一种荧光探针及其制备方法和用途
CN106632326A (zh) 双芘修饰苝酰亚胺衍生物荧光探针及其合成方法和应用
JP2009524580A (ja) 蛍光性膜インターカレート・プローブおよびその使用方法
CN110498758B (zh) 用于识别谷胱甘肽的近红外荧光探针及其制备和应用
CN108844931A (zh) Lzq荧光探针在同时检测so2和hsa中的应用
CN106432164B (zh) 一种香豆素衍生物docopa及其制备方法和应用
CN112062755B (zh) 用于检测天冬氨酰氨肽酶的近红外荧光分子探针、制备方法及用途
CN105884713A (zh) 一种荧光增强型硫化氢分子荧光探针及其制备方法和应用
CN108314690A (zh) 双杯[4]芳烃衍生物的金属配合物及其合成方法和应用
CN104910894A (zh) 一种苯并咪唑类hERG钾离子通道的小分子荧光探针及其制备方法与应用
CN111675724A (zh) 一种萤光素酶底物及其制备方法和应用
CN109503550B (zh) 2-氮杂芳基-6-取代氨基喹唑啉酮化合物及其制备方法和应用
CN108218817B (zh) 一种区分GSH、Cys、SO2荧光探针及其制备方法和应用
CN108752406A (zh) 一种荧光标记的核苷酸及其制备方法和用途
CN108329336A (zh) 双杯[4]芳烃衍生物的金属配合物及其合成方法和应用
CN109311914A (zh) 用于细胞器特异性分子成像的镧系元素工具箱
CN110105280B (zh) 一种基于1,8-萘二甲酰亚胺的水溶性荧光探针及其制备方法和应用
CN108147992A (zh) 可标记深红荧光活性酯
KR102172084B1 (ko) 금 나노클러스터와 이의 제조방법 및 이를 포함하는 혈당 센서
KR101915744B1 (ko) 염료 화합물 및 이의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20181120

RJ01 Rejection of invention patent application after publication