CN108823200A - 一种病原体dna核酸释放剂 - Google Patents

一种病原体dna核酸释放剂 Download PDF

Info

Publication number
CN108823200A
CN108823200A CN201810755889.2A CN201810755889A CN108823200A CN 108823200 A CN108823200 A CN 108823200A CN 201810755889 A CN201810755889 A CN 201810755889A CN 108823200 A CN108823200 A CN 108823200A
Authority
CN
China
Prior art keywords
nucleic acid
releasing agent
pathogen
acid releasing
dodine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810755889.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108823200B (zh
Inventor
林若琳
张晓玮
彭春梅
张嘉
邓可基
李家导
罗园香
杨芬
石壮壮
陈观芝
蔡佺佑
蔡培宏
颜道宇
王旭川
黄彩兰
李思成
邢兰坤
王星
王法
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GUANGZHOU SUPBIO BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
GUANGZHOU SUPBIO BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GUANGZHOU SUPBIO BIO-TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical GUANGZHOU SUPBIO BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201810755889.2A priority Critical patent/CN108823200B/zh
Publication of CN108823200A publication Critical patent/CN108823200A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108823200B publication Critical patent/CN108823200B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C12Q1/702—Specific hybridization probes for retroviruses
    • C12Q1/703—Viruses associated with AIDS
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C12Q1/706—Specific hybridization probes for hepatitis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种病原体DNA核酸释放剂，本发明通过使用多果定代替传统的胍盐和一部分去污剂的使用，有效地对含有病原体的血清样本进行裂解，释放其中的核酸，并降低对下游实验的抑制，从而显著的提高了病原体的裂解效率，并大大缩短了检测时间，同时病原体DNA充分释放且本身不干扰后续PCR的扩增。本发明不需要像传统的核酸提取试剂盒一样进行裂解、洗涤、洗脱等繁琐的提取步骤，极大提高实验室工作效率，并有效避免了实验操作过程中可能发生污染的环节，同时还减少医疗废弃物的产生。

Description

一种病原体DNA核酸释放剂
技术领域
本发明属于分子生物技术领域，具体涉及一种病原体DNA核酸释放剂。
背景技术
现阶段血浆中游离的病毒颗粒可通过PCR方法进行定量，由每毫升血浆的病毒DNA拷贝数表示，实时荧光定量PCR是现在临床最先进的检测方法，该方法目前已相当成熟，然而用于检测前的提取步骤却十分繁琐，裂解、多次洗涤、洗脱等，不仅耗时，且极易污染，同时会产生较多的废弃物，不利于绿色环保。
核酸提取是下游核酸检测、研究或者产品研发的起点，所分离的核酸的质量、纯度和完整性直接影响研究或诊断结果，因此在病毒检测领域，核酸释放剂起着非常重要的作用。理想的核酸释放剂获得的核酸没有蛋白、脂或其他核酸的污染，目前已经有很多专业化的核酸释放剂可以从生物样品得到目的核酸。
如中国专利201510446386.3公开了一种利用微量核酸释放剂提取生物样本中病毒DNA的方法，微量核酸释放剂裂解生物样本(血清或血浆)中病毒DNA同时，佐以促释放剂能更有效地保证裂解、释放效率，微量核酸释放剂在完全释放核酸的同时，还具有封闭样本中对PCR扩增具有干扰作用的蛋白质、药物及溶血等各种因素物质的功能，避免检测过程的假阴性，使得样本提取简便、灵敏、快速，但本发明要经过洗涤的步骤，在洗涤的过程中容易造成核酸丢失，降低了检测的准确性。
目前如广泛存在的HBV病毒(乙型肝炎病毒)，全球乙型肝炎病毒感染者已超过二十亿，无论对于患者还是医生，都需要及时知道有无感染或是治疗效果评估，以不错过最佳治疗或用药时间。因此需要一种能满足乙肝快速筛查和临床诊疗检测等需求的、又快又准的临床诊断产品。
虽然HBV DNA的荧光定量检测方法，已经是一种相对成熟的临床检测方法，但是该方法具有一些缺点，如操作步骤较多，不仅耗时较长，而且易污染，同时会产生较多的废弃物，不利于环境的保护。另外，提取试剂引入的抑制剂，以及洗涤步骤中HBV DNA的损失，都会降低试剂的检出性能。
申请人多年一直致力于HBV检测试剂盒的研究，已有HBV检测类的发明专利201410223058.2，其公开了检测乙型肝炎病毒的PCR引物、引物组、探针以及试剂盒和检测方法，该发明可检测出世界范围内各种不同亚型的乙型肝炎病原体，在血清标本中定量检测限可达2IU/mL。但该发明采用的DNA裂解液为常规裂解液，操作相对不够简单，耗时相对较长。
市面上也有如湖南圣湘生物的一步法的HBV荧光定量方法,如中国专利200910309980.2公开了一种一步法病原体核酸荧光定量PCR检测方法，针对待测病原体核酸选取保守基因序列，设计特异性引物探针，采用一种核酸快速释放试剂提取病原体核酸，直接加入相应的PCR反应液，实现PCR荧光定量检测，该发明操作简单快速，抗污染抗干扰能力强，提取的核酸无损失，所用试剂制造成本低，但无法对血清中低至20IU/mL的HBV DNA进行准确定量。
同样，在近些年PCR(RT-qPCR)已经应用于细胞相关HIV病毒的定量，这种方法具有很高的特异性，但在抗逆转录病毒治疗后，为了能够检测到微量的核算病毒，检测手段的敏感性还需要加强，目前同样需要一种可以精确检测微量病毒拷贝的方法。
多果定(十二烷基胍醋酸盐，Dodine)，是一种含胍基的特殊表面活性剂，主要作为日化用品类表面活性剂，防治果树、蔬菜病害，多果定可用来防治果树、蔬菜、坚果、观赏植物和成荫树上的多种主要霉菌病害。此外，用于工业水处理剂，洗涤剂，种子处理剂和妇女儿童用品等。
本发明公开了一种病原体DNA核酸释放剂，通过使用多果定代替传统的胍盐(异硫氰酸胍或盐酸胍)和一部分去污剂(常用的有Tween-20、Triton X-100、SDS等)的使用，有效地对含有病毒颗粒的血清样本进行裂解，释放其中的核苷酸，并降低对下游实验的抑制，从而显著的提高了病毒的裂解效率，并大大缩短了检测时间。
发明内容
为解决上述问题，本发明通过使用多果定代替传统的胍盐和一部分去污剂的使用，有效地对含有病原体的血清样本进行裂解，释放其中的核酸，并降低对下游实验的抑制，从而显著的提高了病原体的裂解效率，并大大缩短了检测时间。
本发明的目的在于提供一种病原体DNA核酸释放剂。
一种病原体DNA核酸释放剂包括0.1％-30％(V/V)的多果定、1-10％(V/V)TritonX-100、1-10％(V/V)NP-40、10-100mM硫酸铵和10-100mM NaCl；
优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括1％-29％(V/V)的多果定、1-9.5％(V/V)Triton X-100、1-9％(V/V)NP-40、15-100mM硫酸铵和15-100mM NaCl；
更优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括2％-28％(V/V)的多果定、1-9％(V/V)Triton X-100、1.5-9％(V/V)NP-40、20-100mM硫酸铵和20-100mM NaCl；
再优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括3％-27％(V/V)的多果定、1-8.5％(V/V)Triton X-100、2-9％(V/V)NP-40、20-90mM硫酸铵和25-95mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括4％-26％(V/V)的多果定、1.5-8.5％(V/V)Triton X-100、3-9％(V/V)NP-40、20-85mM硫酸铵和25-90mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括5％-25％(V/V)的多果定、2-8.5％(V/V)Triton X-100、3.5-9％(V/V)NP-40、20-80mM硫酸铵和30-90mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括6％-24％(V/V)的多果定、2.5-8.5％(V/V)Triton X-100、4-9％(V/V)NP-40、25-80mM硫酸铵和30-85mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括7％-21％(V/V)的多果定、2.5-8％(V/V)Triton X-100、4.5-9％(V/V)NP-40、20-80mM硫酸铵和35-85mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括8％-20％(V/V)的多果定、3-8％(V/V)Triton X-100、5-9％(V/V)NP-40、20-75mM硫酸铵和35-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括7％-19％(V/V)的多果定、3.5-8％(V/V)Triton X-100、5.5-9％(V/V)NP-40、25-75mM硫酸铵和40-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括8％-18％(V/V)的多果定、4-8％(V/V)Triton X-100、6-9％(V/V)NP-40、30-75mM硫酸铵和45-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括9％-17％(V/V)的多果定、4-7.5％(V/V)Triton X-100、6.5-9％(V/V)NP-40、35-75mM硫酸铵和40-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括10％-16％(V/V)的多果定、4-7％(V/V)Triton X-100、6-9％(V/V)NP-40、35-70mM硫酸铵和45-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括11％-15％(V/V)的多果定、4-6.5％(V/V)Triton X-100、6.5-9％(V/V)NP-40、40-70mM硫酸铵和50-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括12％-14％(V/V)的多果定、4.5-6.5％(V/V)Triton X-100、7-9％(V/V)NP-40、45-70mM硫酸铵和55-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括13％-14％(V/V)的多果定、5-6.5％(V/V)Triton X-100、8-9％(V/V)NP-40、50-70mM硫酸铵和60-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括13.5％-14％(V/V)的多果定、5-6％(V/V)Triton X-100、8.5-9％(V/V)NP-40、60-70mM硫酸铵和70-80mM NaCl；
一种病原体DNA核酸释放剂中，所述的病原体指血清、脑脊液、生殖道分泌物、尿液中的病原体，如血清中的乙型肝炎病毒(HBV)、生殖道分泌物中的人类乳头瘤病毒(HPV)、生殖道分泌物中的沙眼衣原体(CT)，、生殖道分泌物中的解脲脲原体(UU)、生殖道分泌物中的淋球菌(NG)、生殖道分泌物中的人类疱疹病毒I(HSV-1)等。
本发明的另一个目的在于提供一种改进的病原体DNA的提取方法：
所述病原体DNA提取方法的操作步骤如下：
1)取样本至PCR八连管中；
2)加入病原体DNA核酸释放剂，涡旋混匀，室温孵育；
3)加入PCR反应液，进行扩增；
步骤2)中所用的病原体DNA核酸释放剂具体为：
一种病原体DNA核酸释放剂包括0.1％-30％(V/V)的多果定、1-10％(V/V)TritonX-100、1-10％(V/V)NP-40、10-100mM硫酸铵和10-100mM NaCl；
优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括1％-29％(V/V)的多果定、1-9.5％(V/V)Triton X-100、1-9％(V/V)NP-40、15-100mM硫酸铵和15-100mM NaCl；
更优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括2％-28％(V/V)的多果定、1-9％(V/V)Triton X-100、1.5-9％(V/V)NP-40、20-100mM硫酸铵和20-100mM NaCl；
再优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括3％-27％(V/V)的多果定、1-8.5％(V/V)Triton X-100、2-9％(V/V)NP-40、20-90mM硫酸铵和25-95mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括4％-26％(V/V)的多果定、1.5-8.5％(V/V)Triton X-100、3-9％(V/V)NP-40、20-85mM硫酸铵和25-90mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括5％-25％(V/V)的多果定、2-8.5％(V/V)Triton X-100、3.5-9％(V/V)NP-40、20-80mM硫酸铵和30-90mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括6％-24％(V/V)的多果定、2.5-8.5％(V/V)Triton X-100、4-9％(V/V)NP-40、25-80mM硫酸铵和30-85mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括7％-21％(V/V)的多果定、2.5-8％(V/V)Triton X-100、4.5-9％(V/V)NP-40、20-80mM硫酸铵和35-85mM NaCl；
再又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括8％-20％(V/V)的多果定、3-8％(V/V)Triton X-100、5-9％(V/V)NP-40、20-75mM硫酸铵和35-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括7％-19％(V/V)的多果定、3.5-8％(V/V)Triton X-100、5.5-9％(V/V)NP-40、25-75mM硫酸铵和40-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括8％-18％(V/V)的多果定、4-8％(V/V)Triton X-100、6-9％(V/V)NP-40、30-75mM硫酸铵和45-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括9％-17％(V/V)的多果定、4-7.5％(V/V)Triton X-100、6.5-9％(V/V)NP-40、35-75mM硫酸铵和40-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括10％-16％(V/V)的多果定、4-7％(V/V)Triton X-100、6-9％(V/V)NP-40、35-70mM硫酸铵和45-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括11％-15％(V/V)的多果定、4-6.5％(V/V)Triton X-100、6.5-9％(V/V)NP-40、40-70mM硫酸铵和50-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括12％-14％(V/V)的多果定、4.5-6.5％(V/V)Triton X-100、7-9％(V/V)NP-40、45-70mM硫酸铵和55-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括13％-14％(V/V)的多果定、5-6.5％(V/V)Triton X-100、8-9％(V/V)NP-40、50-70mM硫酸铵和60-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括13.5％-14％(V/V)的多果定、5-6％(V/V)Triton X-100、8.5-9％(V/V)NP-40、60-70mM硫酸铵和70-80mM NaCl；
本发明的再一目的在于提供一种检测病原体DNA的PCR检测方法；
所述的病原体指血清、脑脊液、生殖道分泌物、尿液中的病原体，如血清中的乙型肝炎病毒(HBV)、生殖道分泌物中的人类乳头瘤病毒(HPV)、生殖道分泌物中的沙眼衣原体(CT)，、生殖道分泌物中的解脲脲原体(UU)、生殖道分泌物中的淋球菌(NG)、生殖道分泌物中的人类疱疹病毒I(HSV-1)等；
所述检测方法的具体步骤为：
(1)提取病原体DNA
1)取样本5-15μL至0.2mLPCR八连管中；
2)加入所述的核酸释放剂，涡旋混匀，室温孵育；
3)加入PCR反应液，进行扩增；
(2)结果检测：
采用荧光定量PCR进行检测，对结果进行分析。
步骤(1)中所述的一种病原体DNA核酸释包括0.1％-30％(V/V)的多果定、1-10％(V/V)Triton X-100、1-10％(V/V)NP-40、10-100mM硫酸铵和10-100mM NaCl；
优选地，所述一种病原体DNA包括1％-29％(V/V)的多果定、1-9.5％(V/V)TritonX-100、1-9％(V/V)NP-40、15-100mM硫酸铵和15-100mM NaCl；
更优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括2％-28％(V/V)的多果定、1-9％(V/V)Triton X-100、1.5-9％(V/V)NP-40、20-100mM硫酸铵和20-100mM NaCl；
再优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括3％-27％(V/V)的多果定、1-8.5％(V/V)Triton X-100、2-9％(V/V)NP-40、20-90mM硫酸铵和25-95mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括4％-26％(V/V)的多果定、1.5-8.5％(V/V)Triton X-100、3-9％(V/V)NP-40、20-85mM硫酸铵和25-90mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括5％-25％(V/V)的多果定、2-8.5％(V/V)Triton X-100、3.5-9％(V/V)NP-40、20-80mM硫酸铵和30-90mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括6％-24％(V/V)的多果定、2.5-8.5％(V/V)Triton X-100、4-9％(V/V)NP-40、25-80mM硫酸铵和30-85mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括7％-21％(V/V)的多果定、2.5-8％(V/V)Triton X-100、4.5-9％(V/V)NP-40、20-80mM硫酸铵和35-85mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括8％-20％(V/V)的多果定、3-8％(V/V)Triton X-100、5-9％(V/V)NP-40、20-75mM硫酸铵和35-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括7％-19％(V/V)的多果定、3.5-8％(V/V)Triton X-100、5.5-9％(V/V)NP-40、25-75mM硫酸铵和40-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括8％-18％(V/V)的多果定、4-8％(V/V)Triton X-100、6-9％(V/V)NP-40、30-75mM硫酸铵和45-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括9％-17％(V/V)的多果定、4-7.5％(V/V)Triton X-100、6.5-9％(V/V)NP-40、35-75mM硫酸铵和40-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括10％-16％(V/V)的多果定、4-7％(V/V)Triton X-100、6-9％(V/V)NP-40、35-70mM硫酸铵和45-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括11％-15％(V/V)的多果定、4-6.5％(V/V)Triton X-100、6.5-9％(V/V)NP-40、40-70mM硫酸铵和50-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括12％-14％(V/V)的多果定、4.5-6.5％(V/V)Triton X-100、7-9％(V/V)NP-40、45-70mM硫酸铵和55-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括13％-14％(V/V)的多果定、5-6.5％(V/V)Triton X-100、8-9％(V/V)NP-40、50-70mM硫酸铵和60-80mM NaCl；
又优选地，所述一种病原体DNA核酸释放剂包括13.5％-14％(V/V)的多果定、5-6％(V/V)Triton X-100、8.5-9％(V/V)NP-40、60-70mM硫酸铵和70-80mM NaCl；
其中，PCR反应体系具体为：
其中，PCR反应程序具体为：
第一步：37℃，5分钟；第二步：95℃,10分钟；第三步，95℃，15秒，62-68℃，15秒，72℃，20秒，5-15个循环；第四步：95℃，15秒，60℃，1分钟，40个循环；60℃时采集荧光。
本发明提供一种病原体DNA核酸释放剂，所述的病原体指血清、脑脊液、生殖道分泌物、尿液中的病原体，如血清中的乙型肝炎病毒(HBV)、生殖道分泌物中的人类乳头瘤病毒(HPV)、生殖道分泌物中的沙眼衣原体(CT)、生殖道分泌物中的解脲脲原体(UU)、生殖道分泌物中的淋球菌(NG)、生殖道分泌物中的人类疱疹病毒I(HSV-1)等。
本发明的有益效果为：
本发明提供一种病原体DNA核酸释放剂，使病原体DNA充分释放且本身不干扰后续PCR的扩增。该方法不需要像传统的核酸提取试剂盒一样进行裂解、洗涤、洗脱等繁琐的提取步骤，极大提高实验室工作效率，并有效避免了实验操作过程中可能发生污染的环节，同时还减少医疗废弃物的产生。该方法减少了提取过程中病原体DNA的损失，定量限为50IU/mL，检出限为25IU/mL，达到HBV超敏检测的性能水平。
且本发明提供的核酸释放剂组成成分，使得核酸释放剂的稳定性更好，可在低温如5℃、常温如20℃和高温如40℃的环境下，6个月内依然保持非常好的稳定性。
本领域常规提取需要45分钟，而采用本发明的病原体DNA核酸释放剂进行裂解，可将提取时间缩短至10-15分钟。
对于HIV有DNA(前病毒)也有RNA，对于全血中分离的PBMC样本，直接用全血不行,抑制剂太多的问题，可以使用本发明进行检测。
对血清、脑脊液、生殖道分泌物、尿液中的病原体，如血清中的乙型肝炎病毒(HBV)、生殖道分泌物中的人类乳头瘤病毒(HPV)、生殖道分泌物中的沙眼衣原体(CT)，、生殖道分泌物中的解脲脲原体(UU)、生殖道分泌物中的淋球菌(NG)、生殖道分泌物中的人类疱疹病毒I(HSV-1)等均可以应用本发明的病原体DNA核酸释放剂进行检测。
基于上述优点，本发明在病原体DNA检测领域具有广泛的应用前景。
附图说明
图1为实施例3中对HBV DNA滴度为25IU/mL的血清标准品的检测效果。
图2为实施例4中对HBV DNA滴度为50IU/mL的血清标准品的检测效果。
图3为实施例5中对HBV DNA滴度为50000000、5000000、500000、50000、5000、500、50IU/mL的梯度稀释血清标准品的效果。
图4为实施例6中检测HCV RNA、HIV RNA、TB DNA的特异性实验的结果。
图5为实施例9中对HIV DNA滴度为25IU/mL的血清标准品的检测效果。
图6为实施例10中对HIV DNA滴度为50IU/mL的血清标准品的检测效果。
图7为实施例11中对HIV DNA滴度为50000000、5000000、500000、50000、5000、500、50IU/mL的梯度稀释血清标准品的效果。
图8为实施例12中检测HBV DNA、HIV RNA、CT DNA的特异性实验的结果。
图9为实施例15中对CT DNA滴度为25IU/mL的血清标准品的检测效果。
图10为实施例16中对CT DNA滴度为50IU/mL的血清标准品的检测效果。
图11为实施例17中对CT DNA滴度为50000000、5000000、500000、50000、5000、500、50IU/mL的梯度稀释血清标准品的效果。
图12为实施例18中检测HBV DNA、HIV RNA、HIV DNA的特异性实验的结果。
具体实施方式
以下实施例仅处于说明性目的，而不是想要限制本发明的范围。
实施例1含本发明病原体DNA核酸释放剂的一种血清中HBV DNA的实时荧光定量检测试剂盒
该试剂盒包括：
乙型肝炎病毒HBV的检测引物组；
乙型肝炎病毒HBV的检测探针；
和本发明的病原体DNA核酸释放剂；
所述的病原体DNA核酸释放剂包括14％(V/V)的多果定、6％(V/V)Triton X-100、9％(V/V)NP-40、60mM硫酸铵和80mM NaCl；
所述的乙型肝炎病毒HBV的检测引物组由以下引物序列组成：
引物序列1：GGCAACGGCCTGGTCTGTGCCAAGTGT，
引物序列2：GGCAACGGTCAGGTCTCTGCCAAGTGT，
引物序列3：TGACGCAACCCCCACTG，
引物序列4：GCTGCGAGCAAAACAAG，
引物序列5：GCGCAGGATCCAGTTGGCAGCACA，
引物序列6：GTCCCGCGCAGGATCCAGTTGGCAGC；
所述的乙型肝炎病毒HBV的检测探针序列为：CCGATCCATACTGCGGAACT；
所述的乙型肝炎病毒HBV的检测探针序列5’端标记的荧光基团为FAM，探针序列3’端标记的淬灭基团为TAMRA。
所述的实时荧光定量检测试剂盒还包括内控探针和内控引物组；
所述的内控探针的核苷酸序列为：ATGCCCTCCCCCATGCCATCCT；
内控探针序列所标记的荧光基团为HEX；
所述的内控引物组的核苷酸序列为：
内控引物序列7：CGGGGTCACCCACACTGTGCCCATCTACG，
内控引物序列8：GGTCACCCACACTGTGCCCATCTACG，
内控引物序列9：CCACACTGTGCCCATCTACGA，
内控引物序列10：GCGCTCGGTGAGGATCTTC；
所述的实时荧光定量检测试剂盒还包括PCR反应液，所述的PCR反应液包括：15-25mM Tris-HCl pH8.0，15-25mM KCl，2.5-5mM(NH4)SO4，2-5mM MgCl2，0.5-2mM dNTP/UTPMix。
所述的实时荧光定量检测试剂盒还包括强阳性对照品、临界阳性对照品、阴性对照品和阳性定量参考品。
实施例2一种血清中HBV DNA的实时荧光定量检测方法
该实施例采用实施例1中的实时荧光定量检测试剂盒对血清中HBV DNA进行实时荧光定量检测；
所述实时荧光定量检测方法包括以下步骤：
(1)、血清HBV DNA样本的获取：
a.将血清送检管震荡10秒，彻底混匀后立即取200μL至1.5mL灭菌离心管中，随后加入20μL磁珠、20μL carrier RNA、300μL裂解液，颠倒混匀，50℃振荡温育6分钟；
b.把离心管转移至磁力架上放置6分钟收集磁珠，吸弃上清液；
c.短暂离心收集管壁的液滴，把离心管转移至磁力架上放置1分钟，小心吸弃所有的残液，打开管盖干燥6分钟；
d.加入50μL洗脱液涡旋混匀20秒，静置3分钟，转移离心管至磁力架上放置3分钟收集磁珠；
e.把样品转移至新的离心管中，并保存于-20℃，作为实时荧光定量PCR反应的DNA模板；
(2)、结果检测：采用实时荧光定量PCR进行检测，对结果进行分析，所述实时荧光定量PCR程序为：
第一步：37℃，5分钟；第二步：95℃，10分钟；第三步：95℃，15秒，62℃，15秒，72℃，20秒，5个循环；第四步：95℃，15秒，60℃，1分钟，40个循环；60℃时采集荧光。
所述的实时荧光定量PCR反应体系为：
PCR反应液，43.2μl；5U/μl Taq酶，0.8μl；1U/μlUNG酶，0.06μl；步骤(1)得到的DNA模板，6μl；
其中，步骤(1)a中所述的裂解液包括5％(V/V)的多果定、6％(V/V)Tween-20、20mM柠檬酸钠和20mM NaCl；
其中，步骤(2)中所述的PCR反应液包括：15-25mM Tris-HCl pH8.0，15-25mM KCl，2.5-5mM(NH4)SO4，2-5mM MgCl2，0.5-2mM dNTP/UTP Mix，200-600nM引物组，100-300nM探针，200-600nM内控引物，100-300nM内控探针。
实施例3
本实施例采用实施例1的实时荧光定量检测试剂盒和实施例2的实时荧光定量检测方法对HBV DNA滴度为25IU/mL的血清标准品进行检测，检测效果如图1所示。
实施例4
本实施例采用实施例1的实时荧光定量检测试剂盒和实施例2的实时荧光定量检测方法对HBV DNA滴度为50IU/mL的血清标准品进行检测，检测效果如图2所示。
实施例5
本实施例采用实施例1的实时荧光定量检测试剂盒和实施例2的实时荧光定量检测方法对HBV DNA滴度依次为50000000、5000000、500000、50000、5000、500、50IU/mL的梯度稀释血清标准品进行检测，检测效果如图3所示，从左到右依次为50000000、5000000、500000、50000、5000、500、50IU/mL的检测线。
实施例6
本实施例采用实施例1的实时荧光定量检测试剂盒和实施例2的实时荧光定量检测方法
检测HCV RNA、HIV RNA、TB DNA的特异性，检测结果如图4所示，可见应用本发明病原体DNA核酸释放剂的实时荧光定量检测试剂盒具有明显的特异性。
实施例7含本发明病原体DNA核酸释放剂的一种血清中HIV DNA的实时荧光定量检测试剂盒
该试剂盒包括：
HIV病毒的检测引物组；
HIV病毒的检测探针；
和本发明的病原体DNA核酸释放剂；
所述的病原体DNA核酸释放剂包括14％(V/V)的多果定、6％(V/V)Triton X-100、9％(V/V)NP-40、60mM硫酸铵和80mM NaCl；
所述的HIV病毒的检测引物组由以下引物序列组成：
引物序列11:TCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCT；
引物序列12：TGCGCGCTTCAAGCCGAGTCCTGCGT；
引物序列13：AGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCT；
引物序列15：AGCAAGCCGAGTCCTGCGTCGAGA；
引物序列16：AGCCTCAATAAAGCTTGCCT；
引物序列17：CCGCCACTGCTAGAGATTTTCCA；
对应的检测探针序列为：TCTGGTAACTAGAGATCCCT；
所述的HIV病毒的检测探针序列5’端标记的荧光基团为FAM，探针序列3’端标记的淬灭基团为TAMRA；
所述的实时荧光定量检测试剂盒还包括PCR反应液，所述的PCR反应液包括：15-25mM Tris-HCl pH8.0，15-25mM KCl，2.5-5mM(NH4)SO4，2-5mM MgCl2，0.5-2mM dNTP/UTPMix。
所述的实时荧光定量检测试剂盒还包括强阳性对照品、临界阳性对照品、阴性对照品和阳性定量参考品。
实施例8一种血清中HIV DNA的实时荧光定量检测方法
该实施例采用实施例7中的实时荧光定量检测试剂盒对血清中HIV DNA进行实时荧光定量检测；
所述实时荧光定量检测方法同实施例2相同。
实施例9
本实施例采用实施例7的实时荧光定量检测试剂盒和实施例8的实时荧光定量检测方法对HIV DNA滴度为25IU/mL的血清标准品进行检测，检测效果如图5所示。
实施例10
本实施例采用实施例7的实时荧光定量检测试剂盒和实施例8的实时荧光定量检测方法对HIV DNA滴度为50IU/mL的血清标准品进行检测，检测效果如图6所示。
实施例11
本实施例采用实施例7的实时荧光定量检测试剂盒和实施例8的实时荧光定量检测方法对HBV DNA滴度依次为50000000、5000000、500000、50000、5000、500、50IU/mL的梯度稀释血清标准品进行检测，检测效果如图7所示，从左到右依次为50000000、5000000、500000、50000、5000、500、50IU/mL的检测线。
实施例12
本实施例采用实施例7的实时荧光定量检测试剂盒和实施例8的实时荧光定量检测方法
检测HBV DNA、HIV RNA、CT DNA的特异性，检测结果如图8所示，可见应用本发明病原体DNA核酸释放剂的实时荧光定量检测试剂盒具有明显的特异性。
实施例13
含本发明病原体DNA核酸释放剂的一种血清中CT DNA的实时荧光定量检测试剂盒
该试剂盒包括：
沙眼衣原体CT的检测引物组；
沙眼衣原体CT的检测探针；
和本发明的病原体DNA核酸释放剂；
所述的病原体DNA核酸释放剂包括14％(V/V)的多果定、6％(V/V)Triton X-100、9％(V/V)NP-40、60mM硫酸铵和80mM NaCl；
所述的CT DNA的检测引物组由以下引物序列组成：
引物序列18：GCTAAGGCGCGAAAGCAA，
引物序列19：GGTTGAGACCATCCACATCAAGT，
对应的检测探针序列为：ATACCCTGGTAGTCCTTGCCGTAAACGATG；
所述的CT DNA的检测探针序列5’端标记的荧光基团为FAM，探针序列3’端标记的淬灭基团为TAMRA；
所述的实时荧光定量检测试剂盒还包括PCR反应液，所述的PCR反应液包括：15-25mM Tris-HCl pH8.0，15-25mM KCl，2.5-5mM(NH4)SO4，2-5mM MgCl2，0.5-2mM dNTP/UTPMix；
所述的实时荧光定量检测试剂盒还包括强阳性对照品、临界阳性对照品、阴性对照品和阳性定量参考品。
实施例14一种血清中HIV DNA的实时荧光定量检测方法
该实施例采用实施例13中的实时荧光定量检测试剂盒对血清中CT DNA进行实时荧光定量检测；
所述实时荧光定量检测方法同实施例2相同。
实施例15
本实施例采用实施例13的实时荧光定量检测试剂盒和实施例14的实时荧光定量检测方法对CT DNA滴度为25IU/mL的血清标准品进行检测，检测效果如图9所示。
实施例16
本实施例采用实施例13的实时荧光定量检测试剂盒和实施例14的实时荧光定量检测方法对CT DNA滴度为50IU/mL的血清标准品进行检测，检测效果如图10所示。
实施例17
本实施例采用实施例13的实时荧光定量检测试剂盒和实施例14的实时荧光定量检测方法对CT DNA滴度依次为50000000、5000000、500000、50000、5000、500、50IU/mL的梯度稀释血清标准品进行检测，检测效果如图11所示，从左到右依次为50000000、5000000、500000、50000、5000、500、50IU/mL的检测线。
实施例18
本实施例采用实施例13的实时荧光定量检测试剂盒和实施例14的实时荧光定量检测方法检测HBV DNA、HIV RNA、CT DNA的特异性，检测结果如图12所示，可见应用本发明病原体DNA核酸释放剂的实时荧光定量检测试剂盒具有明显的特异性。

Claims (10)

1.一种病原体DNA核酸释放剂，其特征在于：包括多果定、Triton X-100、NP-40、硫酸铵和NaCl。
2.一种如权利要求1所述的病原体DNA核酸释放剂，其特征在于：包括0.1％-30％(V/V)的多果定、1-10％(V/V)Triton X-100、1-10％(V/V)NP-40、10-100mM硫酸铵和10-100mMNaCl。
3.一种如权利要求1所述的病原体DNA核酸释放剂,其特征在于：包括7％-19％(V/V)的多果定、3.5-8％(V/V)Triton X-100、5.5-9％(V/V)NP-40、25-75mM硫酸铵和40-80mMNaCl。
4.一种如权利要求1所述的病原体DNA核酸释放剂,其特征在于：包括11％-15％(V/V)的多果定、4-6.5％(V/V)Triton X-100、6.5-9％(V/V)NP-40、40-70mM硫酸铵和50-80mMNaCl。
5.一种如权利要求1所述的病原体DNA核酸释放剂,其特征在于：包括12％-14％(V/V)的多果定、4.5-6.5％(V/V)Triton X-100、7-9％(V/V)NP-40、45-70mM硫酸铵和55-80mMNaCl。
6.一种如权利要求1所述的病原体DNA核酸释放剂,其特征在于：包括13％-14％(V/V)的多果定、5-6.5％(V/V)Triton X-100、8-9％(V/V)NP-40、50-70mM硫酸铵和60-80mMNaCl。
7.一种如权利要求1所述的病原体DNA核酸释放剂,其特征在于：包括13.5％-14％(V/V)的多果定、5-6％(V/V)Triton X-100、8.5-9％(V/V)NP-40、60-70mM硫酸铵和70-80mMNaCl。
8.一种应用权利要求1所述的病原体DNA核酸释放剂提取病原体DNA的方法：
其特征在于：所述的病原体的DNA提取方法具体包括以下步骤：
1)取样本至PCR八连管中；
2)加入病原体DNA核酸释放剂，涡旋混匀，室温孵育；
3)加入PCR反应液，进行PCR扩增；
所述的步骤2)中所用的病原体DNA核酸释放剂，其特征在于：
包括0.1％-30％(V/V)的多果定、1-10％(V/V)Triton X-100、1-10％(V/V)NP-40、10-100mM硫酸铵和10-100mM NaCl。
9.一种应用权利要求1所述的病原体DNA核酸释放剂的检测病原体DNA的PCR检测方法；
所述的PCR反应体系具体为：
PCR反应液，43.2μl；5U/ul Taq酶，0.8μl；1U/ul UNG酶，0.06μl；DNA模板，6μl；
其中，PCR反应程序具体为：
第一步：37℃，5分钟；第二步：95℃,10分钟；第三步，95℃，15秒，62-68℃，15秒，72℃，20秒，5-15个循环；第四步：95℃，15秒，60℃，1分钟，40个循环；60℃时采集荧光。
10.如权利要求1所述的一种病原体DNA核酸释放剂，所述的病原体指血清、脑脊液、生殖道分泌物、尿液中的病原体，如血清中的乙型肝炎病毒(HBV)、生殖道分泌物中的人类乳头瘤病毒(HPV)、生殖道分泌物中的沙眼衣原体(CT)，、生殖道分泌物中的解脲脲原体(UU)、生殖道分泌物中的淋球菌(NG)、生殖道分泌物中的人类疱疹病毒I(HSV-1)等。
CN201810755889.2A 2018-07-11 2018-07-11 一种病原体dna核酸释放剂 Active CN108823200B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810755889.2A CN108823200B (zh) 2018-07-11 2018-07-11 一种病原体dna核酸释放剂

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810755889.2A CN108823200B (zh) 2018-07-11 2018-07-11 一种病原体dna核酸释放剂

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108823200A true CN108823200A (zh) 2018-11-16
CN108823200B CN108823200B (zh) 2020-06-19

Family

ID=64136976

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810755889.2A Active CN108823200B (zh) 2018-07-11 2018-07-11 一种病原体dna核酸释放剂

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108823200B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112266910A (zh) * 2020-12-04 2021-01-26 南京求臻基因科技有限公司 一种核酸释放剂及其核酸释放方法
CN113025686A (zh) * 2021-03-12 2021-06-25 江苏吉诺思美精准医学科技有限公司 一种病毒rna释放剂、试剂盒及其应用
CN117106772A (zh) * 2023-10-25 2023-11-24 青岛金域医学检验实验室有限公司 一种用于病毒核酸检测的样本释放剂

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102851394A (zh) * 2012-08-30 2013-01-02 湖南圣湘生物科技有限公司 一种检测肠道病毒71型rna的方法及试剂盒
CN103642942A (zh) * 2013-12-12 2014-03-19 东北制药集团辽宁生物医药有限公司 一种丙型肝炎病毒（hcv）高精确核酸定量检测试剂盒
CN105483283A (zh) * 2014-10-11 2016-04-13 上海仁度生物科技有限公司 丙型肝炎病毒hcv实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102851394A (zh) * 2012-08-30 2013-01-02 湖南圣湘生物科技有限公司 一种检测肠道病毒71型rna的方法及试剂盒
CN103642942A (zh) * 2013-12-12 2014-03-19 东北制药集团辽宁生物医药有限公司 一种丙型肝炎病毒（hcv）高精确核酸定量检测试剂盒
CN105483283A (zh) * 2014-10-11 2016-04-13 上海仁度生物科技有限公司 丙型肝炎病毒hcv实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112266910A (zh) * 2020-12-04 2021-01-26 南京求臻基因科技有限公司 一种核酸释放剂及其核酸释放方法
CN113025686A (zh) * 2021-03-12 2021-06-25 江苏吉诺思美精准医学科技有限公司 一种病毒rna释放剂、试剂盒及其应用
CN113025686B (zh) * 2021-03-12 2023-07-28 江苏吉诺思美精准医学科技有限公司 一种病毒rna释放剂、试剂盒及其应用
CN117106772A (zh) * 2023-10-25 2023-11-24 青岛金域医学检验实验室有限公司 一种用于病毒核酸检测的样本释放剂
CN117106772B (zh) * 2023-10-25 2024-01-26 青岛金域医学检验实验室有限公司 一种用于病毒核酸检测的样本释放剂

Also Published As

Publication number Publication date
CN108823200B (zh) 2020-06-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111254228B (zh) 一种检测新型冠状病毒和流感病毒的试剂盒
CN105695631B (zh) 人免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒快速联检试剂盒及其制备和应用
CN108823200A (zh) 一种病原体dna核酸释放剂
CN100368560C (zh) 一种呼吸道病原体的实时荧光聚合酶链式反应检测方法
CN112813203B (zh) 基于荧光定量pcr技术的新冠病毒核酸及突变基因检测试剂盒及其应用
CN107513575B (zh) 一种检测布鲁菌感染的预处理试剂盒及其应用
CN105483283B (zh) 丙型肝炎病毒hcv实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒
CN113005226A (zh) 检测SARS-CoV-2的寡核苷酸和试剂盒
CN115873993B (zh) 一种检测乙型肝炎病毒9个基因型的试剂盒及其应用
CN109402239A (zh) 一种用于实时荧光定量pcr的免提取直接扩增试剂及其应用
WO2021010239A1 (ja) Ｒｎａウイルス検出方法
CN109182600A (zh) 一种同步检测乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒1型的荧光定量pcr试剂盒
CN101144771A (zh) 检测人类免疫缺陷病毒的方法及试剂盒
CN105779644B (zh) 人巨细胞病毒的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒
CN101886139A (zh) 一种新型甲型流感病毒h1n1亚型双色荧光pcr检测方法及其试剂盒
CN101985664B (zh) 检测a型流感病毒的核苷酸序列和试剂盒
CN108085413A (zh) 一种用于同时检测三种禽病毒病的高通量试剂盒及其检测方法和应用
CN101967522A (zh) 一种乙型肝炎病毒cccDNA双色荧光PCR检测方法及其试剂盒的应用
CN103060453A (zh) 淋球菌ng检测试剂盒
CN104846116B (zh) 检测人类免疫缺陷病毒1型的pcr引物组、探针及其试剂盒和检测方法
CN108796133A (zh) 一种血清中hbv dna的实时荧光定量检测试剂盒及其检测方法
CN109321683A (zh) 一种a型塞尼卡病毒检测引物、试剂盒、病毒检测方法和应用
CN106011308A (zh) 丙型肝炎病毒基因分型检测试剂盒、寡核苷酸及其应用
CN105567867B (zh) 人类免疫缺陷病毒1型实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒
Lu et al. RT-PCR detection of the expression of the polymerase gene of a novel reptilian herpesvirus in tumor tissues of green turtles with fibropapilloma

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant