CN108823155A - 一种脐带血干细胞的制备和提取方法 - Google Patents

一种脐带血干细胞的制备和提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种脐带血干细胞的制备和提取方法，包括以下步骤，保存备份；干细胞提取，取部分对应标号的脐带血水浴加热，将冷冻的脐带血缓慢解冻，从脐带血中提取血浆，使用血液分离机提取脐带血干细胞；健康检测，将脐带血干细胞接种在含有诱导因子的培养基中进行培养，诱导分化2天后检测细胞活性；健康检测；筛选，将诱导分化后细胞活性较差的脐带血从冷冻室内取出弃用，将细胞活性良好的脐带血继续放入冷冻室中保存，本发明涉及生物工程技术领域。该脐带血干细胞的制备和提取方法，能够有效的去除健康状况较差的脐带血干细胞，降低脐带血基因缺失可能引起的问题，同时简化了去除脐带血中杂质的过程，降低了成本。

Description

一种脐带血干细胞的制备和提取方法
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，具体为一种脐带血干细胞的制备和提取方法。
背景技术
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞，根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞，根据干细胞的发育潜能分为三类:全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞(专能干细胞)，干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。但是现有的干细胞提取方法不能保证干细胞的健康状况，去除脐带血中杂质的方法比较复杂。
发明内容
（一）解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种脐带血干细胞的制备和提取方法，解决了现有的干细胞提取方法不能保证干细胞的健康状况，去除脐带血中杂质的方法比较复杂的问题。
（二）技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种脐带血干细胞的制备和提取方法，包括以下步骤，
（1）保存备份，提取脐带血并保存在冷冻室中；
（2）干细胞提取，取部分对应标号的脐带血水浴加热，将冷冻的脐带血缓慢解冻，从脐带血中提取血浆，使用血液分离机提取脐带血干细胞；
（3）健康检测，将脐带血干细胞接种在含有诱导因子的培养基中进行培养，诱导分化2天后检测细胞活性；
（4）筛选，将诱导分化后细胞活性较差的脐带血从冷冻室内取出弃用，将细胞活性良好的脐带血继续放入冷冻室中保存。
优选的，所述脐带血提取后应在冷冻室内冷冻隔离6～12个月。
优选的，所述脐带血提取后应进行原代培养和传代培养。
优选的，所述原代培养和传代培养的培养基采用DMEM/F12基础培养基，并添加ITS、青霉素和链霉素，并且ITS、青霉素和链霉素的添加量分别为5ng/ml、100u/ml和100u/ml。
优选的，所述脐带血的水浴加热温度为35～37℃。
优选的，所述脐带血保存在冷冻室内时应将脐带血标号。
优选的，所述冷冻室的温度应为2～6℃。
优选的，所述干细胞提取时应保持环境为37℃，CO2含量为95％。
优选的，所述脐带血提取血浆前应进行离心处理取出破碎细胞。
优选的，所述脐带血干细胞诱导分化时添加的分化剂为转化生长因子β1和白介素10。
（三）有益效果
本发明提供了一种脐带血干细胞的制备和提取方法。具备以下有益效果：
（1）、该脐带血干细胞的制备和提取方法，通过将脐带血干细胞接种在含有诱导因子的培养基中进行培养，诱导分化2天后检测细胞活性，将诱导分化后细胞活性较差的脐带血从冷冻室内取出弃用，所述脐带血提取后应在冷冻室内冷冻隔离6～12个月，能够有效的去除健康状况较差的脐带血干细胞，降低脐带血基因缺失可能引起的问题。
（2）、该脐带血干细胞的制备和提取方法，通过脐带血提取血浆前应进行离心处理取出破碎细胞，简化了去除脐带血中杂质的过程，降低了成本。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例一
一种脐带血干细胞的制备和提取方法，其特征在于：包括以下步骤，
（1）保存备份，提取脐带血并保存在冷冻室中；
（2）干细胞提取，取部分对应标号的脐带血水浴加热，将冷冻的脐带血缓慢解冻，从脐带血中提取血浆，使用血液分离机提取脐带血干细胞；
（3）健康检测，将脐带血干细胞接种在含有诱导因子的培养基中进行培养，诱导分化2天后检测细胞活性；
（4）筛选，将诱导分化后细胞活性较差的脐带血从冷冻室内取出弃用，将细胞活性良好的脐带血继续放入冷冻室中保存。
脐带血提取后应在冷冻室内冷冻隔离6个月。
脐带血提取后应进行原代培养和传代培养。
原代培养和传代培养的培养基采用DMEM/F12基础培养基，并添加ITS、青霉素和链霉素，并且ITS、青霉素和链霉素的添加量分别为5ng/ml、100u/ml和100u/ml。
脐带血的水浴加热温度为35℃。
脐带血保存在冷冻室内时应将脐带血标号。
冷冻室的温度应为2℃。
干细胞提取时应保持环境为37℃，CO2含量为95％。
脐带血提取血浆前应进行离心处理取出破碎细胞。
脐带血干细胞诱导分化时添加的分化剂为转化生长因子β1和白介素10。
实施例二
一种脐带血干细胞的制备和提取方法，其特征在于：包括以下步骤，
（1）保存备份，提取脐带血并保存在冷冻室中；
（2）干细胞提取，取部分对应标号的脐带血水浴加热，将冷冻的脐带血缓慢解冻，从脐带血中提取血浆，使用血液分离机提取脐带血干细胞；
（3）健康检测，将脐带血干细胞接种在含有诱导因子的培养基中进行培养，诱导分化2天后检测细胞活性；
（4）筛选，将诱导分化后细胞活性较差的脐带血从冷冻室内取出弃用，将细胞活性良好的脐带血继续放入冷冻室中保存。
脐带血提取后应在冷冻室内冷冻隔离9个月。
脐带血提取后应进行原代培养和传代培养。
原代培养和传代培养的培养基采用DMEM/F12基础培养基，并添加ITS、青霉素和链霉素，并且ITS、青霉素和链霉素的添加量分别为5ng/ml、100u/ml和100u/ml。
脐带血的水浴加热温度为36℃。
脐带血保存在冷冻室内时应将脐带血标号。
冷冻室的温度应为4℃。
干细胞提取时应保持环境为37℃，CO2含量为95％。
脐带血提取血浆前应进行离心处理取出破碎细胞。
脐带血干细胞诱导分化时添加的分化剂为转化生长因子β1和白介素10。
实施例三
一种脐带血干细胞的制备和提取方法，其特征在于：包括以下步骤，
（1）保存备份，提取脐带血并保存在冷冻室中；
（2）干细胞提取，取部分对应标号的脐带血水浴加热，将冷冻的脐带血缓慢解冻，从脐带血中提取血浆，使用血液分离机提取脐带血干细胞；
（3）健康检测，将脐带血干细胞接种在含有诱导因子的培养基中进行培养，诱导分化2天后检测细胞活性；
（4）筛选，将诱导分化后细胞活性较差的脐带血从冷冻室内取出弃用，将细胞活性良好的脐带血继续放入冷冻室中保存。
脐带血提取后应在冷冻室内冷冻隔离12个月。
脐带血提取后应进行原代培养和传代培养。
原代培养和传代培养的培养基采用DMEM/F12基础培养基，并添加ITS、青霉素和链霉素，并且ITS、青霉素和链霉素的添加量分别为5ng/ml、100u/ml和100u/ml。
脐带血的水浴加热温度为37℃。
脐带血保存在冷冻室内时应将脐带血标号。
冷冻室的温度应为6℃。
干细胞提取时应保持环境为37℃，CO2含量为95％。
脐带血提取血浆前应进行离心处理取出破碎细胞。
脐带血干细胞诱导分化时添加的分化剂为转化生长因子β1和白介素10。
从上述表格可以看出，与普通脐带血干细胞的制备和提取方法相比，本发明具有明显的能够有效的去除健康状况较差的脐带血干细胞的能力，同时降低脐带血基因缺失可能引起的问题，保证脐带血干细胞的活性，降低了去除脐带血中杂质的成本，接种致病率低。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (10)

1.一种脐带血干细胞的制备和提取方法，其特征在于：包括以下步骤，
（1）保存备份，提取脐带血并保存在冷冻室中；
（2）干细胞提取，取部分对应标号的脐带血水浴加热，将冷冻的脐带血缓慢解冻，从脐带血中提取血浆，使用血液分离机提取脐带血干细胞；
（3）健康检测，将脐带血干细胞接种在含有诱导因子的培养基中进行培养，诱导分化2天后检测细胞活性；
（4）筛选，将诱导分化后细胞活性较差的脐带血从冷冻室内取出弃用，将细胞活性良好的脐带血继续放入冷冻室中保存。
2.根据权利要求1所述的一种脐带血干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述脐带血提取后应在冷冻室内冷冻隔离6～12个月。
3.根据权利要求1所述的一种脐带血干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述脐带血提取后应进行原代培养和传代培养。
4.根据权利要求3所述的一种脐带血干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述原代培养和传代培养的培养基采用DMEM/F12基础培养基，并添加ITS、青霉素和链霉素，并且ITS、青霉素和链霉素的添加量分别为5ng/ml、100u/ml和100u/ml。
5.根据权利要求1所述的一种脐带血干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述脐带血的水浴加热温度为35～37℃。
6.根据权利要求1所述的一种脐带血干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述脐带血保存在冷冻室内时应将脐带血标号。
7.根据权利要求1所述的一种脐带血干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述冷冻室的温度应为2～6℃。
8.根据权利要求1所述的一种脐带血干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述干细胞提取时应保持环境为37℃，CO2含量为95％。
9.根据权利要求1所述的一种脐带血干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述脐带血提取血浆前应进行离心处理取出破碎细胞。
10.根据权利要求1所述的一种脐带血干细胞的制备和提取方法，其特征在于：所述脐带血干细胞诱导分化时添加的分化剂为转化生长因子β1和白介素10。
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