CN108813634A - 一种速食型蛋黄寡肽-磷脂型dha双效膳食补充剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品生物技术领域，具体涉及一种速食型蛋黄寡肽‑磷脂型DHA双效膳食补充剂及其制备方法。通过高密度发酵获得DHA含量为25‑35％的微藻粉，将DHA微藻粉添加至蛋鸡日粮获得DHA含量为200‑400mg/100g的强化鸡蛋，DHA强化蛋黄液经预处理和连续水解，获得DHA强化蛋黄水解物，蛋黄水解物经真空浓缩精制脱腥、乳化均质、喷雾干燥、沸腾造粒，得速食型蛋黄寡肽‑磷脂型DHA双效膳食补充剂。本发明公开的方法具有工艺简单、无环境污染、产品得率高等优点；所得速溶型蛋黄寡肽‑磷脂型DHA双效膳食补充剂的总蛋白含量高于45％，蛋黄寡肽组分在总蛋白中所占比例高于50％，DHA在产品中的含量为1‑3％，麦芽糊精含量为5‑25％，尤其适合亚健康人群、生长发育期的婴幼儿、怀孕或哺乳期的女性、手术后患者、消化吸收障碍人群以及代谢缓慢的老年人等营养需求人群食用。
Description
技术领域
本发明属于食品生物技术领域，具体涉及一种速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂及其制备方法。
背景技术
膳食补充剂，又称营养补充剂，作为饮食的一种辅助手段，可以是由氨基酸、多不饱和脂肪酸、矿物质和维生素组成，或仅由一种或多种膳食成分组成。对于亚健康人群、生长发育期的婴幼儿、怀孕或哺乳期的女性、手术后患者、消化吸收障碍人群以及代谢缓慢的老年人等，速食型膳食补充剂可以快速有效补充营养素，提高以上人群对某些特定营养素的吸收。速食型多效膳食补充剂的开发是现今食品工业的焦点之一。
鸡蛋蛋黄富含蛋白质和卵磷脂，被认为是营养效价最高、氨基酸组成最为均衡的食源性蛋白质来源，同时也是食源性卵磷脂的重要来源之一。近年来，营养强化鸡蛋逐渐引起广大食品研究和应用开发工作者的关注。通过向蛋鸡日粮中添加多不饱和脂肪酸等功能物质，可以获得富含相应功能物质的营养强化鸡蛋，比普通鸡蛋具有更加独特和优良的营养价值。因此，营养强化鸡蛋可以作为膳食补充剂的重要来源之一。
现代营养学研究发现，人类摄食蛋白质后，蛋白质经消化道的蛋白酶作用，最终大多以寡肽的形式被吸收，寡肽可完整进入肠粘膜细胞被小肠吸收，以游离氨基酸形式被吸收的比例较小。游离氨基酸的吸收主要依赖于钠离子转运体系，消耗能量多，载体容易饱和，吸收慢。寡肽的吸收主要依赖于氢离子或钙离子转运体系，消耗能量低，转运速度快，载体不易饱和，吸收速率高于等量的游离氨基酸。因此，寡肽对于婴幼儿、老年人、病后恢复期以及胃肠道功能障碍患者具有更显著的蛋白质强化功能，是膳食补充剂的最佳氨基酸补充形式。同时，蛋黄蛋白水解物已被我国批准为新资源食品，具有促进骨骼生长、促进钙吸收等生理功能。
DHA(二十二碳六烯酸，俗称“脑黄金”)属于ω-3系列长链多不饱和脂肪酸，是人体必需脂肪酸，占大脑脂质的10％左右。人体不能直接从头合成DHA，必须直接或间接从食物中获取。研究表明，DHA具有促进脑部发育、预防神经系统疾病、保护视网膜、改善视力以及预防心血管疾病等生理功能。中国膳食营养素参考摄入量(2013版)建议，0-36月龄婴幼儿的DHA摄入量为100mg/d，成年人的DHA摄入量为200mg/d。然而，据调查，目前中国人均DHA摄入量约为38mg/d，摄入量严重低于膳食指南的建议摄入量。目前市场上，食品或营养食品中DHA的存在形式主要有甘油三酯型、乙酯型和磷脂型三种，其中以甘油三酯和乙酯型为主。研究表明，乙酯型DHA的生物利用度约为20％，甘油三酯型DHA的生物利用度约为50％，而磷脂型DHA的生物利用度高于90％。由此可见，磷脂型DHA是膳食营养补充剂的最佳DHA补充形式。目前，尚未见蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂及其制备方法的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂及其制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用技术方案为：
一种速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂，其特征在于：以裂殖壶菌SD006菌株为出发菌株经高密度发酵、喷雾干燥获得富含DHA的优质微藻粉，所得微藻粉混配在饲料中进行投喂蛋鸡，蛋鸡所产鸡蛋进行破壳分离收集蛋黄液，将其经预处理、连续水解处理得DHA强化蛋黄水解物，DHA强化蛋黄水解物经脱腥精制、乳化均质得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂。
具体为：
1)以裂殖壶菌SD006菌株为出发菌株，经高密度发酵、喷雾干燥获得富含DHA油脂的微藻粉，微藻粉的DHA含量为25-35％，将富含DHA油脂的微藻粉添加至蛋鸡普通日粮，获得营养强化蛋鸡饲料；
2)将上述获得的营养强化蛋鸡饲料饲养蛋鸡，获得DHA强化鸡蛋，DHA强化鸡蛋的DHA含量为200-400mg/100g，将新鲜的DHA强化鸡蛋清洗、吹干，破壳后分离蛋清和蛋黄，将蛋黄搅拌均匀后，经巴氏杀菌处理，得新鲜DHA强化蛋黄液；
3)将上述获得的新鲜DHA强化蛋黄液进行均质处理，而后分两次加入蛋白水解酶，经过一步和二步连续水解反应后，分离收集滤液，即DHA强化蛋黄水解物；
4)将上述步骤获得的DHA强化蛋黄水解物经真空加热浓缩处理，实现脱腥精制，获得低腥味DHA强化蛋黄水解物；
5)将上述获得的低腥味DHA强化蛋黄水解物中加入麦芽糊精，乳化均质处理后，经喷雾干燥、沸腾造粒，得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂。
一种速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂的制备方法，其特征在于：以裂殖壶菌SD006菌株为出发菌株经高密度发酵、喷雾干燥获得富含DHA的优质微藻粉，所得微藻粉混配在饲料中进行投喂蛋鸡，蛋鸡所产鸡蛋进行破壳分离收集蛋黄液，将其经预处理、连续水解处理得DHA强化蛋黄水解物，DHA强化蛋黄水解物经脱腥精制、乳化均质得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂。
具体为：
1)以裂殖壶菌SD006菌株为出发菌株，经高密度发酵、喷雾干燥获得富含DHA油脂的微藻粉，微藻粉的DHA含量为25-35％，将富含DHA油脂的微藻粉添加至蛋鸡普通日粮，获得营养强化蛋鸡饲料；
2)将上述获得的营养强化蛋鸡饲料饲养蛋鸡，获得DHA强化鸡蛋，DHA强化鸡蛋的DHA含量为200-400mg/100g，将新鲜的DHA强化鸡蛋清洗、吹干，破壳后分离蛋清和蛋黄，将蛋黄搅拌均匀后，经巴氏杀菌处理，得新鲜DHA强化蛋黄液；
3)将上述获得的新鲜DHA强化蛋黄液进行均质处理，而后分两次加入蛋白水解酶，经过一步和二步连续水解反应后，分离收集滤液，即DHA强化蛋黄水解物；
4)将上述步骤获得的DHA强化蛋黄水解物经真空加热浓缩处理，实现脱腥精制，获得低腥味DHA强化蛋黄水解物；
5)将上述获得的低腥味DHA强化蛋黄水解物中加入麦芽糊精，乳化均质处理后，经喷雾干燥、沸腾造粒，得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂。
所述步骤1)中裂殖壶菌的发酵温度为28-35℃，发酵时间为60-80h，在发酵过程中流加50％(w/v)的玉米浆溶液，整个发酵过程中控制体系的葡萄糖浓度为20-60g/L，发酵结束时葡萄糖浓度不高于10g/L。
所述步骤1)中裂殖壶菌的发酵培养基为葡萄糖80-120g/L，酵母提取物15-30g/L，玉米浆5-15g/L，磷酸二氢钾1-8g/L，硫酸镁1-5g/L，柠檬酸钠1-5g/L，海水晶10-30g/L，维生素B1 50-150mg/L，维生素B6 50-200mg/L，维生素B12 5-50mg/L，生物素5-50mg/L。
所述步骤3)中，向新鲜DHA强化蛋黄液A中加入去离子水，料液质量比为1:4-1:9，混合均匀后，将混合液置于均质设备中进行均质处理，即得蛋黄液B，向蛋黄液B中加入碱溶液调节蛋黄液B的pH为7.0-9.0，向蛋黄液B中加入蛋白水解酶A，恒温搅拌，反应结束后，加热终止酶解反应，即得混合液C；其中，碱溶液为饱和氢氧化钙水溶液，水解酶A为胰蛋白酶或碱性蛋白酶，水解酶A与蛋黄液A的质量比为0.5-2.5％，反应温度为50-60℃，反应时间为6-12h。
所述步骤3)中，向上述获得的混合液C中加入蛋白水解酶B，恒温搅拌，反应结束后，加热终止酶解反应，分离收集滤液D，即为DHA强化蛋黄水解物；其中，水解酶B为中性蛋白酶、复合蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶中的两种或多种，水解酶B与蛋黄液A的质量比为1.0-2.5％，反应温度为40-50℃，反应时间为6-12h，水解酶A与水解酶B的总量与蛋黄液A的质量比为1.5-5.0％。
所述步骤3)中，分离方式为低速离心，离心力为1000-3000g，离心温度为5-25℃。
所述步骤4)中滤液D经真空加热浓缩处理得溶液E，即为低腥味DHA强化蛋黄水解物；其中，真空度为0.04-0.08MPa，加热温度为50-80℃，溶液E的固形物含量为20-40％。
所述步骤5)中，溶液E经乳化均质处理得溶液F，均质设备为高压均质机或乳化机中的一种，均质机处理的操作压力为10-30MPa，均质处理的温度为5-25℃，时间为0.5-2.5h，溶液F的粒径范围为200-800nm。
所述步骤5)中，麦芽糊精在最终蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂产品中的含量为5-25％。
一种速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂的应用，其特征在于：所述蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂作为营养不良人群的营养补充剂应用。
本发明与已有技术相比具有以下显著特点和积极效果：
本发明制剂解决亚健康人群、生长发育期的婴幼儿、怀孕或哺乳期的女性、手术后患者、消化吸收障碍人群以及代谢缓慢的老年人等人群营养不良的问题，为以上人群提供一种速食型的氨基酸和不饱和脂肪酸营养补充剂，实现鸡蛋蛋黄在食品工业中更为广谱化和特殊化的应用。
本发明采用的制备方法具有工艺简单、无环境污染、产品得率高等优点，适于工业化生产。通过向蛋鸡日粮中添加25-35％DHA含量的微藻粉，采用生物转化模式使微藻粉中的甘油酯型DHA转化为蛋黄中的磷脂型DHA，同时提高磷脂和DHA的品质，是本发明中磷脂型DHA膳食补充剂获得的先决条件。
本发明所得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂具有如下特征：蛋白质含量高于45％，蛋黄寡肽(二肽-九肽)组分在总蛋白中所占比例高于50％，DHA在产品中的含量为1-3％，生物活性和肠道吸收利用率高，水溶性和溶解稳定性好，色泽风味佳，可以呈现为粉剂、片剂、胶囊剂或液体乳剂等形式直接食用，也可以作为营养组分应用于特殊人群的营养配方食品中，尤其适合亚健康人群、生长发育期的婴幼儿、怀孕或哺乳期的女性、手术后患者、消化吸收障碍人群以及代谢缓慢的老年人等营养需求人群食用。
本发明通过连续两步蛋白酶水解工艺，实现蛋黄蛋白分子量的降低，获得蛋黄寡肽(二肽-九肽)，所得蛋黄寡肽-磷脂DHA双效膳食补充剂中寡肽(二肽-九肽)组分在总蛋白中所占比例高于50％，生物活性和肠道吸收利用率高，从而可以有效避免后期精制过程中繁琐的分级超滤过程，节约生产成本，缩短生产周期，提高产品得率和产品品质。
本发明通过真空浓缩脱除产品中的部分腥味物质，在不损害产品营养价值的同时，使产品具有更好的风味和适口性，提高产品品质，可以广泛应用于婴幼儿、孕妇以及中老年人配方食品中。
本发明所得蛋黄寡肽-磷脂DHA双效膳食补充剂中富含DHA，本发明的工艺可以从两方面显著抑制多不饱和脂肪酸DHA的氧化变质。首先，本发明所得蛋黄寡肽-磷脂DHA双效膳食补充剂中蛋白质以蛋黄寡肽的形式存在，蛋黄寡肽具有显著的抗氧化作用，从而可以有效防止产品中多不饱和脂肪酸DHA被氧化；另一方面，磷脂是食品加工中常用的抗氧化剂，磷脂型DHA这种赋形形式可以有效防止多不饱和脂肪酸DHA被氧化。蛋黄寡肽和磷脂是本发明产品中自然存在的营养组分，同时在产品中发挥了抗氧化剂的作用，从而可以避免产品中其他抗氧化剂的引入，减少外源食品添加剂的引入，提高产品品质，更利于其在婴幼儿、孕妇以及哺乳期女性营养食品中的应用。
本发明所得蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂的核心营养组分是蛋黄寡肽和卵磷脂，蛋黄寡肽和卵磷脂均为两亲型分子，具有良好的乳化特性，因此可以保证产品体系的稳定性和均一性，从而避免产品中其他乳化剂的引入，减少外源食品添加剂的引入，提高产品品质，更利于其在婴幼儿、孕妇以及哺乳期女性营养食品中的应用。
本发明所得蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂中含有适量的麦芽糊精(5-25％)，在保证产品营养元素补给的同时，有利于保证产品粒度均匀，提高产品在水溶液中的分散性和冲调稳定性。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的解释说明。
实施例1
1)将保存在甘油管中的裂殖壶菌SD006(该菌株详见专利号为201410203041.0专利文件中的记载)菌株接入装有100mL种子培养基(参见表1)的500mL摇瓶，在30℃摇床培养24h，获得一级种子；将一级种子接入装有1L种子培养基(参见表1)的5L发酵罐中，在30℃摇床培养24h，获得二级种子；向50L发酵罐中加入20L发酵培养基(参见表2)，接入活化的二级种子液。发酵过程中，温度控制在28℃，发酵60h。发酵过程中流加50％(w/v)的玉米浆溶液，通过流加2M NaOH或14％柠檬酸溶液维持体系的pH值为6.5。
表1裂殖壶菌产DHA的种子培养基配方
表2裂殖壶菌产DHA的发酵培养基配方
2)发酵结束后，将发酵罐中的裂殖壶菌发酵液经离心处理后，分离去除上清，微藻藻体沉淀经喷雾干燥后即得微藻粉，微藻粉的DHA含量为30％。将富含DHA油脂的微藻粉添加至蛋鸡普通日粮，微藻粉的添加量为5％(w/w)，即得营养强化蛋鸡饲料，采用上述获得的营养强化饲料替代普通日粮饲养蛋鸡，饲喂10d后，蛋鸡生产的鸡蛋即为DHA强化鸡蛋，鸡蛋的DHA含量为300mg/100g。
3)取新鲜DHA强化鸡蛋10kg，洗净，分离蛋清和蛋黄，得DHA强化蛋黄液3kg，将蛋黄液搅拌均匀，经巴氏杀菌(65℃/5min)处理后，即得蛋黄液A。
4)向蛋黄液A中加入去离子水12kg，置于高压均质机中均质处理0.5h，均质压力为30MPa，均质过程中控制体系温度为5℃，即得蛋黄液B；将蛋黄液B置于反应罐中，向蛋黄液B中加入饱和氢氧化钙溶液，调节蛋黄液B的pH为9.0，向蛋黄液B中加入碱性蛋白酶75g，反应温度控制在50℃，搅拌反应6h；反应结束后，将蛋黄液B于90℃条件下加热20min，终止酶解反应，即得混合液C；
5)向混合液C中加入中性蛋白酶30g、风味蛋白酶20g和木瓜蛋白酶25g，反应温度控制在50℃，搅拌反应6h，反应结束后，将混合液C于90℃条件下加热20min，终止酶解反应，混合液C经低速离心分离滤液和沉淀，离心力为2000g，离心温度为5℃，收集滤液，即为滤液D；
6)将滤液D在真空条件下加热浓缩，真空度为0.04MPa，加热温度为80℃，浓缩至溶液的固形物含量为20％，即得溶液E；
7)向溶液E中加入麦芽糊精80g，置于高压均质机中均质处理0.5h，均质压力为30MPa，均质过程中控制体系温度为5℃；均质处理后，溶液E经喷雾干燥(进风温度为180℃，出风温度为90℃)、沸腾造粒和过筛，即得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂粉末；
8)将上述所得膳食补充剂粉末按照10g/份包装，即得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂粉剂产品。
经检测，上述所得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂产品的蛋白质含量为50％，其中寡肽(二肽～九肽)在总蛋白中所占比例为52％；产品的DHA含量为1.8％；产品的麦芽糊精含量为5％，粒径为20-40目，溶解性和分散性好，色泽风味佳。
上述获得蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂中总蛋白质含量的检测参考国标GB 5009.5-2016。
上述获得蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂中油脂含量的检测参考国标GB5009.6-2016。
上述获得蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂中DHA含量的检测采用气相色谱-串联质谱方法，具体如下所述：
1)色谱条件
气相色谱仪为Agilent 7820，载气为高纯N2，进样口选择分流模式，分流比为20:1，温度为240℃；色谱柱选用HP-INNOWax石英毛细管柱(30m×320μm×0.25μm)，选择恒压模式，压力设定值为9.06psi，流速为1.19mL/min；气相分析过程中利用柱温箱加热，进行梯度升温，步骤如下：起始温度为170℃，保持5min，之后按照3℃/min的速度升至210℃，然后在210℃下保持30min，整个过程持续时间为48.3min，平衡时间3min；检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，参数：温度300℃，H2流量30mL/min，空气流量400mL/min。
2)结果计算
依据DHA标准品的出峰时间确定样品谱图中的DHA样品峰。依据检测器对待测物的响应(峰高或峰面积)与待测物的量(或浓度)成正比的原理对DHA进行定量分析。通过峰面积积分和归一化处理得到DHA的含量。
上述获得蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效补充剂中蛋黄寡肽的分子量分布检测采用凝胶排阻色谱法，具体如下所述：
色谱条件如下：色谱柱：Superdex-peptide 10/300GL；进样量：50μL；样品浓度：5mg/mL；流动相：30％乙腈(含0.1％三氟乙酸)；流速：0.5mL/min；柱温：室温；紫外检测波长：220nm。选用抑肽酶(6512Da)、维生素B12(1355Da)、马尿酰-组氨酸-亮氨酸(429Da)和谷氨酸(147Da)作为分子量标准品。
实施例2
1)将保存在甘油管中的裂殖壶菌SD006(201410203041.0)菌株接入装有100mL种子培养基(参见表1)的500mL摇瓶，在30℃摇床培养24h，获得一级种子；将一级种子接入装有1L种子培养基(参见表1)的5L发酵罐中，在30℃摇床培养24h，获得二级种子；向50L发酵罐中加入20L发酵培养基(参见表3)，接入活化的二级种子液。发酵过程中，温度控制在35℃，发酵80h。发酵过程中流加50％(w/v)的玉米浆溶液，通过流加2M NaOH或14％柠檬酸溶液维持体系的pH值为6.5。
表3裂殖壶菌产DHA的发酵培养基配方
2)发酵结束后，发酵罐中的裂殖壶菌发酵液经离心处理后，分离去除上清，微藻藻体沉淀经喷雾干燥后即得微藻粉，微藻粉的DHA含量为28％。将富含DHA油脂的微藻粉添加至蛋鸡普通日粮，微藻粉的添加量为1％(w/w)，即得营养强化蛋鸡饲料，采用上述获得的营养强化饲料替代普通日粮饲养蛋鸡，饲喂10d后，蛋鸡生产的鸡蛋即为DHA强化鸡蛋，鸡蛋中的DHA含量为200mg/100g。
3)取新鲜DHA强化鸡蛋10kg，洗净，分离蛋清和蛋黄，得DHA强化蛋黄液3kg，将蛋黄液搅拌均匀，经巴氏杀菌(63℃/5min)处理后，即得蛋黄液A。
4)向蛋黄液A中加入去离子水27kg，置于乳化机中均质处理2.5h，均质压力为10MPa，均质过程中控制体系温度为25℃，即得蛋黄液B；将蛋黄液B置于反应罐中，向蛋黄液B中加入饱和氢氧化钙溶液，调节蛋黄液B的pH为7.0，向蛋黄液B中加入碱性蛋白酶15g，反应温度控制在60℃，搅拌反应12h；反应结束后，将蛋黄液B于90℃条件下加热20min，终止酶解反应，即得混合液C；
5)向混合液C中加入复合蛋白酶30g、风味蛋白酶25g和菠萝蛋白酶20g，反应温度控制在40℃，搅拌反应12h；反应结束后，将混合液C于90℃条件下加热20min，终止酶解反应，混合液C经低速离心分离滤液和沉淀，离心力为5000g，离心温度为25℃，收集滤液，即为滤液D；
6)将滤液D在真空条件下加热浓缩，真空度为0.08MPa，加热温度为50℃，浓缩至溶液的固形物含量为30％，即得溶液E；
7)向溶液E中加入麦芽糊精260g，置于乳化机中均质处理2.5h，均质压力为10MPa，均质过程中控制体系温度为25℃；均质处理后，溶液E经喷雾干燥(进风温度为180℃，出风温度为90℃)、挤压制粒和过筛，即得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂粉末；
8)将上述所得膳食补充剂粉末按照1200mg/片压片、包装，即得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂片剂产品。
经检测，上述所得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂产品的蛋白质含量为43％，其中寡肽(二肽～九肽)在总蛋白中所占比例为56％；产品的DHA含量为1.2％；产品的麦芽糊精含量为15％；粒径为20-40目，色泽风味佳。
实施例3
1)将保存在甘油管中的裂殖壶菌SD006(201410203041.0)菌株接入装有100mL种子培养基(参见表1)的500mL摇瓶，在30℃摇床培养24h，获得一级种子；将一级种子接入装有1L种子培养基(参见表1)的5L发酵罐中，在30℃摇床培养24h，获得二级种子；向50L发酵罐中加入20L发酵培养基(参见表4)，接入活化的二级种子液。发酵过程中，温度控制在30℃，发酵80h。发酵过程中流加50％(w/v)的玉米浆溶液，通过流加2M NaOH或14％柠檬酸溶液维持体系的pH值为6.5。
表4裂殖壶菌产DHA的发酵培养基配方
2)发酵结束后，发酵罐中的裂殖壶菌发酵液经离心处理后，分离去除上清，微藻藻体沉淀经喷雾干燥后即得微藻粉，微藻粉的DHA含量为35％。将富含DHA油脂的微藻粉添加至蛋鸡普通日粮，微藻粉的添加量为10％(w/w)，即得营养强化蛋鸡饲料，采用上述获得的营养强化饲料替代普通日粮饲养蛋鸡，饲喂10d后，蛋鸡生产的鸡蛋即为DHA强化鸡蛋，鸡蛋中的DHA含量为400mg/100g。
3)取新鲜DHA强化鸡蛋10kg，洗净，分离蛋清和蛋黄，得DHA强化蛋黄液3kg，将蛋黄液搅拌均匀，经巴氏杀菌(65℃/3min)处理后，即得蛋黄液A。
4)向蛋黄液A中加入去离子水15kg，置于高压均质机中均质处理1.0h，均质压力为20MPa，均质过程中控制体系温度为10℃，即得蛋黄液B；将蛋黄液B置于反应罐中，向蛋黄液B中加入饱和氢氧化钙溶液，调节蛋黄液B的pH为8.0，向蛋黄液B中加入碱性蛋白酶40g和胰蛋白酶35g，反应温度控制在55℃，搅拌反应8h；反应结束后，将蛋黄液B于90℃条件下加热20min，终止酶解反应，即得混合液C；
5)向混合液C中加入复合蛋白酶15g和风味蛋白酶15g，反应温度控制在45℃，搅拌反应10h，反应结束后，将混合液C于90℃条件下加热20min，终止酶解反应，混合液C经低速离心分离滤液和沉淀，离心力为3000g，离心温度为15℃，收集滤液，即为滤液D；
6)将滤液D在真空条件下加热浓缩，真空度为0.06MPa，加热温度为60℃，浓缩至溶液的固形物含量为40％，即得溶液E；
7)向溶液E中加入麦芽糊精400g，置于高压均质机中均质处理1.0h，均质压力为20MPa，均质过程中控制体系温度为10℃；均质处理后，溶液E经喷雾干燥(进风温度为180℃，出风温度为90℃)、沸腾制粒和过筛，即得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂粉末；
8)将上述所得膳食补充剂粉末按照1000mg/粒制备胶囊、包装，即得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂胶囊粒剂产品。
经检测，上述所得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂产品的蛋白质含量为48％，其中寡肽(二肽～九肽)在总蛋白中所占比例为58％；产品的DHA含量为2.4％；产品的麦芽糊精含量为25％；粒径为20-40目，色泽风味佳。
实施例4
1)将保存在甘油管中的裂殖壶菌SD006(201410203041.0)菌株接入装有100mL种子培养基(参见表1)的500mL摇瓶，在30℃摇床培养24h，获得一级种子；将一级种子接入装有1L种子培养基(参见表1)的5L发酵罐中，在30℃摇床培养24h，获得二级种子；向50L生物反应器中加入20L发酵培养基(参见表5)，接入活化的二级种子液。发酵过程中，温度控制在32℃，发酵75h。发酵过程中，在24-48h内流加50％(w/v)的玉米浆溶液，通过流加2M NaOH或14％柠檬酸溶液维持体系的pH值为6.5。
表5裂殖壶菌产DHA的发酵培养基配方
2)发酵结束后，发酵罐中的裂殖壶菌发酵液经离心处理后，分离去除上清，微藻藻体沉淀经喷雾干燥后即得微藻粉，微藻粉的DHA含量为25％。将富含DHA油脂的微藻粉添加至蛋鸡普通日粮，微藻粉的添加量为3.5％(w/w)，即得营养强化蛋鸡饲料，采用上述获得的营养强化饲料替代普通日粮饲养蛋鸡，饲喂10d后，蛋鸡生产的鸡蛋即为DHA强化鸡蛋，鸡蛋中的DHA含量为350mg/100g。
3)取新鲜DHA强化鸡蛋10kg，洗净，分离蛋清和蛋黄，得DHA强化蛋黄液3kg，将蛋黄液搅拌均匀，经巴氏杀菌(63℃/5min)处理后，即得蛋黄液A。
4)向蛋黄液A中加入去离子水20kg，置于高压均质机中均质处理2.0h，均质压力为15MPa，均质过程中控制体系温度为15℃，即得蛋黄液B；将蛋黄液B置于反应罐中，向蛋黄液B中加入饱和氢氧化钙溶液，调节蛋黄液B的pH为8.5，向蛋黄液B中加入胰蛋白酶15g，反应温度控制在52℃，搅拌反应10h；反应结束后，将蛋黄液B于90℃条件下加热20min，终止酶解反应，即得混合液C；
5)向混合液C中加入中性蛋白酶20g和复合蛋白酶10g，反应温度控制在48℃，搅拌反应11h，反应结束后，将混合液C于90℃条件下加热20min，终止酶解反应，混合液C经低速离心分离滤液和沉淀，离心力为4000g，离心温度为20℃，收集滤液，即为滤液D；
6)将滤液D在真空条件下加热浓缩，真空度为0.07MPa，加热温度为70℃，浓缩至溶液的固形物含量为10％，即得溶液E；
7)向溶液E中加入麦芽糊精150g，置于高压均质机中均质处理2.0h，均质压力为15MPa，均质过程中控制体系温度为15℃；均质处理后，即得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂液体乳剂。
8)将上述所得膳食补充剂按照180mL/份装罐、包装，即得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂液体乳剂产品。
经检测，上述所得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂产品的蛋白质含量(干基)为47％，其中寡肽(二肽～九肽)在总蛋白中所占比例为57％；产品的DHA含量(干基)为2.1％；产品的麦芽糊精含量(干基)为9％；粒径为20-40目，乳液稳定性好，色泽风味佳。
实施例5
本发明获得的蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂可以广泛应用于婴幼儿营养食品中，具体以采用上述实施例获得的产物制备膳食冲剂为例：
所述配方食品由以下原料按照相应质量比重组成：65g蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂，15g大米粉，5g核桃粉，5g水溶性膳食纤维，4g叶黄素，5g乳钙，0.5g牛磺酸，0.5g葡萄糖酸锌，30mg维生素C，0.5mg维生素D，0.5mg维生素B2，2mg维生素E和0.5mg维生素A，将以上组分混匀均质，过筛，按照30g/份包装，即得速食型婴幼儿营养食品。
实施例6
本发明获得的蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂可以广泛应用于中老年营养食品中，具体以采用上述实施例获得的产物制备膳食冲剂为例：
所述配方食品由以下原料按照相应质量比重组成：50g蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂，5g叶黄素，3g褪黑素，5g乳钙，5g蓝莓粉，5g蜂蜜，7g葛根提取物，20g水溶性膳食纤维，0.5mg维生素D和0.2mg维生素A，将以上组分混匀均质，过筛，按照30g/份包装，即得速食型中老年营养食品。
实施例7
本发明获得的蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂可以广泛应用于亚健康人群营养食品中，具体以采用上述实施例获得的产物制备膳食冲剂为例：
所述配方食品由以下原料按照相应质量比重组成：60g蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂，20g水溶性膳食纤维，10g灵芝提取物，5g乳钙，4g蓝莓粉，0.5g牛磺酸，0.5g葡萄糖酸锌，30mg维生素C，0.5mg维生素D，0.5mg维生素B1，0.5mg维生素B2，0.5mg维生素B6，0.5mg维生素B12，将以上组分混匀均质，过筛，按照30g/份包装，即得速食型亚健康人群营养食品。
实施例8
本发明获得的蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂可以广泛应用于术后患者的营养食品中，具体以采用上述实施例获得的产物制备膳食冲剂为例：
所述配方食品由以下原料按照相应质量比重组成：60g蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂，2g胡萝卜素，30g水溶性膳食纤维，5g低聚果糖，3g乳钙，0.2mg维生素A，0.5mg维生素D，2mg维生素E，30mg维生素C，0.5mg维生素B1，0.5mg维生素B2，0.5mg维生素B6，0.5mg维生素B12，5mg铁，5mg锌和0.01mg硒，将以上组分混匀均质，过筛，按照30g/份包装，即得速食型术后患者营养食品。
实施例9
本发明获得的蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂可以广泛应用于孕妇及哺乳期妇女的营养食品中，具体以采用上述实施例获得的产物制备膳食冲剂为例：
所述配方食品由以下原料按照相应质量比重组成：70g蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂，15g水溶性膳食纤维，5g低聚果糖，5g红枣粉，3.5g乳钙，0.5g牛磺酸，0.5g葡萄糖酸锌，0.5g葡萄糖酸铁，2mg叶酸，0.2mg维生素A，0.5mg维生素D，2mg维生素E，30mg维生素C，将以上组分混匀均质，过筛，按照30g/份包装，即得速食型孕妇及哺乳期妇女营养食品。
Claims (10)
1.一种速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂，其特征在于：以裂殖壶菌SD006菌株为出发菌株经高密度发酵、喷雾干燥获得富含DHA的优质微藻粉，所得微藻粉混配在饲料中进行投喂蛋鸡，蛋鸡所产鸡蛋进行破壳分离收集蛋黄液，将其经预处理、连续水解处理得DHA强化蛋黄水解物，DHA强化蛋黄水解物经脱腥精制、乳化均质得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂。
2.按权利要求1所述的速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂，其特征在于：
1)以裂殖壶菌SD006菌株为出发菌株，经高密度发酵、喷雾干燥获得富含DHA油脂的微藻粉，微藻粉的DHA含量为25-35％，将富含DHA油脂的微藻粉添加至蛋鸡普通日粮，获得营养强化蛋鸡饲料；
2)将上述获得的营养强化蛋鸡饲料饲养蛋鸡，获得DHA强化鸡蛋，DHA强化鸡蛋的DHA含量为200-400mg/100g，将新鲜的DHA强化鸡蛋清洗、吹干，破壳后分离蛋清和蛋黄，将蛋黄搅拌均匀后，经巴氏杀菌处理，得新鲜DHA强化蛋黄液；
3)将上述获得的新鲜DHA强化蛋黄液进行均质处理，而后分两次加入蛋白水解酶，经过一步和二步连续水解反应后，分离收集滤液，即DHA强化蛋黄水解物；
4)将上述步骤获得的DHA强化蛋黄水解物经真空加热浓缩处理，实现脱腥精制，获得低腥味DHA强化蛋黄水解物；
5)将上述获得的低腥味DHA强化蛋黄水解物中加入麦芽糊精，乳化均质处理后，经喷雾干燥、沸腾造粒，得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂。
3.一种权利要求1所述的速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂的制备方法，其特征在于：以裂殖壶菌SD006菌株为出发菌株经高密度发酵、喷雾干燥获得富含DHA的优质微藻粉，所得微藻粉混配在饲料中进行投喂蛋鸡，蛋鸡所产鸡蛋进行破壳分离收集蛋黄液，将其经预处理、连续水解处理得DHA强化蛋黄水解物，DHA强化蛋黄水解物经脱腥精制、乳化均质得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂。
4.按权利要求3所述的速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂的制备方法，其特征在于：
1)以裂殖壶菌SD006菌株为出发菌株，经高密度发酵、喷雾干燥获得富含DHA油脂的微藻粉，微藻粉的DHA含量为25-35％，将富含DHA油脂的微藻粉添加至蛋鸡普通日粮，获得营养强化蛋鸡饲料；
2)将上述获得的营养强化蛋鸡饲料饲养蛋鸡，获得DHA强化鸡蛋，DHA强化鸡蛋的DHA含量为200-400mg/100g，将新鲜的DHA强化鸡蛋清洗、吹干，破壳后分离蛋清和蛋黄，将蛋黄搅拌均匀后，经巴氏杀菌处理，得新鲜DHA强化蛋黄液；
3)将上述获得的新鲜DHA强化蛋黄液进行均质处理，而后分两次加入蛋白水解酶，经过一步和二步连续水解反应后，分离收集滤液，即DHA强化蛋黄水解物；
4)将上述步骤获得的DHA强化蛋黄水解物经真空加热浓缩处理，实现脱腥精制，获得低腥味DHA强化蛋黄水解物；
5)将上述获得的低腥味DHA强化蛋黄水解物中加入麦芽糊精，乳化均质处理后，经喷雾干燥、沸腾造粒，得速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂。
5.按权利要求4所述的速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂的制备方法，其特征在于：
所述步骤1)中裂殖壶菌的发酵温度为28-35℃，发酵时间为60-80h，在发酵过程中流加50％(w/v)的玉米浆溶液，整个发酵过程中控制体系的葡萄糖浓度为20-60g/L，发酵结束时葡萄糖浓度不高于10g/L。
6.按权利要求4所述的速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂的制备方法，其特征在于：所述步骤3)中，向新鲜DHA强化蛋黄液A中加入去离子水，料液质量比为1:4-1:9，混合均匀后，将混合液置于均质设备中进行均质处理，即得蛋黄液B，向蛋黄液B中加入碱溶液调节蛋黄液B的pH为7.0-9.0，向蛋黄液B中加入蛋白水解酶A，恒温搅拌，反应结束后，加热终止酶解反应，即得混合液C；其中，碱溶液为饱和氢氧化钙水溶液，水解酶A为胰蛋白酶或碱性蛋白酶，水解酶A与蛋黄液A的质量比为0.5-2.5％，反应温度为50-60℃，反应时间为6-12h。
7.按权利要求4或6所述的速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂的制备方法，其特征在于：所述步骤3)中，向上述获得的混合液C中加入蛋白水解酶B，恒温搅拌，反应结束后，加热终止酶解反应，分离收集滤液D，即为DHA强化蛋黄水解物；其中，水解酶B为中性蛋白酶、复合蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶中的两种或多种，水解酶B与蛋黄液A的质量比为1.0-2.5％，反应温度为40-50℃，反应时间为6-12h，水解酶A与水解酶B的总量与蛋黄液A的质量比为1.5-5.0％。
8.按权利要求4所述的速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂的制备方法，其特征在于：所述步骤4)中滤液D经真空加热浓缩处理得溶液E，即为低腥味DHA强化蛋黄水解物；其中，真空度为0.04-0.08MPa，加热温度为50-80℃，溶液E的固形物含量为20-40％。
9.按权利要求4所述的速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂的制备方法，其特征在于：所述步骤5)中，溶液E经乳化均质处理得溶液F，均质设备为高压均质机或乳化机中的一种，均质机处理的操作压力为10-30MPa，均质处理的温度为5-25℃，时间为0.5-2.5h，溶液F的粒径范围为200-800nm。
10.一种权利要求1所述的速食型蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂的应用，其特征在于：所述蛋黄寡肽-磷脂型DHA双效膳食补充剂作为营养不良人群的营养补充剂应用。
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