CN108785336A - 一种银杏酮酯及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种银杏酮酯原料药。本发明还进一步提供了一种银杏酮酯原料药的制备方法及其应用。本发明提供的一种银杏酮酯及其制备方法，通过优选的制备步骤及其条件，能够获得具有优质的银杏酮酯原料药。相比常规方法制备的银杏酮酯，其质量稳定、不合格率低，不同批次的原料药一致性好。

Description

一种银杏酮酯及其制备方法
技术领域
本发明属于中药技术领域，涉及一种银杏酮酯及其制备方法。
背景技术
随着中国人口老龄化程度的不断加剧，人们对心脑血管疾病防治意识逐渐增强。银杏叶为银杏科植物银杏的干燥叶，性甘，苦，涩，平，归心、肺经，《中药志》中记载银杏叶能“敛肺气，平咳喘，止带浊”。银杏酮酯作为原料药，是我国自主研发的银杏叶提取物产品，它是银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶经加工制成的提取物。银杏酮酯为棕黄色至黄棕色的粉末，有特殊香气、味苦，主要用于治疗心脑血管疾病及神经系统疾病，疗效显著。由于银杏酮酯的显著疗效，市场上相关产品在生产过程中掺假、掺杂现象严重，具体如人为添加槲皮素等黄酮苷元，使测得的总黄酮醇苷含量结果明显增高，添加银杏根皮类提取物提高内酯含量。由于市场上存在仿冒银杏酮酯产品的现象存在，为此需要对银杏酮酯做深入研究，使产品质量更加稳定，制定标准将技术和防掺假相结合。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种银杏酮酯及其制备方法，用于解决现有技术中缺乏质量稳定、不合格率低的银杏酮酯原料药的问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种银杏酮酯，由银杏叶经醇提制得，符合下列条件：
1)芦丁(C27H30O16，CAS号为153-18-4)的含量≤4.0％；
2)槲皮素(C15H10O7，CAS号为117-39-5)的含量≤0.4％；
3)白果内酯(C15H18O8，CAS号为33570-04-6)的含量为2.6-4.8％；
4)银杏内酯J(C20H24O10，CAS号为107438-79-9)的含量为0.1-0.5％；
5)乙醇残留的含量≤0.5％；
6)双黄酮的含量≤0.02％，所述双黄酮包括穗花杉双黄酮(Amentoflavone，C30H18O10，CAS号为1617-53-4)、7-去甲基银杏双黄酮(Bilobetin，C31H20O10，CAS号为521-32-4)、白果双黄酮(Ginkgetin，C32H22O10，CAS号为481-46-9)；
7)染料木苷(Genistin，CAS号为529-59-9)的含量为0，银杏内酯M(ginkgolide M，CAS号为15291-78-8)的含量为0。
上述醇提是指采用醇类溶剂对银杏叶提取制备银杏酮酯的方法。
优选地，所述芦丁的含量≤3.2％。
优选地，所述槲皮素的含量≤0.38％。
优选地，所述乙醇残留的含量≤0.2％。
优选地，所述白果内酯的含量为3.6-4.8％。
优选地，所述银杏内酯J的含量为0.3-0.5％。
优选地，所述双黄酮的含量≤0.01％。
优选地，所述银杏酮酯中总黄酮含量以芦丁(C27H30O16)计，为44.0-55.0％。
更优选地，所述银杏酮酯中总黄酮含量以芦丁计，为49.0-55.0％。所述银杏酮酯中总黄酮含量按中国药典2015年版四部通则0401进行计算。
优选地，所述银杏酮酯中萜类内酯含量以白果内酯(C15H18O8，CAS号为33570-04-6)、银杏内酯A(C20H24O9，CAS号为15291-75-5)、银杏内酯B(C20H24O10，CAS号为15291-77-7)和银杏内酯C(C20H24O11，CAS号为15291-76-6)的总量计，为6.0-12.0％。所述萜类内酯含量按干燥品计算。
更优选地，所述银杏酮酯中萜类内酯含量以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的总量计，为9.0-12.0％。
优选地，所述银杏酮酯中总银杏酸的含量≤5mg/kg。
更优选地，所述银杏酮酯中总银杏酸的含量≤1mg/kg。
更优选地，所述银杏酮酯中总银杏酸以银杏酸C13:0(C20H32O3，CAS号为20261-38-5)、银杏酸C15:1(C22H34O3，CAS号为22910-60-7)、银杏酸C17:1(C24H38O3，CAS号为111047-30-4)的总量进行表征。所述总银杏酸的含量按中国药典2015年版四部通则0512和0431进行计算。
优选地，所述银杏酮酯中总黄酮醇苷含量为24.0-35.0％。所述总黄酮醇苷含量按干燥品计算。
更优选地，所述银杏酮酯中总黄酮醇苷含量为30.0-35.0％。
更优选地，所述总黄酮醇苷主要是以槲皮素、山柰素、异鼠李素为苷元形成的苷，含有游离的槲皮素、山柰素和异鼠李素。
更优选地，所述总黄酮醇苷含量按公式(1)进行计算，所述公式(1)为：总黄酮醇苷含量＝(槲皮素含量+山柰素含量+异鼠李素含量)×2.51。
优选地，所述银杏酮酯中槲皮素与山柰素(C16H12O6，CAS号为491-54-3)的色谱峰面积比为0.8-1.2，异鼠李素(C16H12O7，CAS号为207-545-5480-19-3)与槲皮素的色谱峰面积比＞0.15。所述银杏酮酯中银杏黄酮水解后生成3种苷元(槲皮素、山柰素和异鼠李素)具有一定比例关系，该比例关系可在一定程度反映产品原料及工艺正常，可用以控制产品质量。按现有总黄酮醇苷含量测定方法计算槲皮素与山柰素、异鼠李素与槲皮素的色谱峰面积比。
优选地，所述银杏酮酯的指纹图谱包括符合如图1所示的4个共有指纹峰：所述1号峰为芦丁的指纹峰，所述6号峰为槲皮素的指纹峰，所述7号峰为山柰素的指纹峰，所述8号峰为异鼠李素的指纹峰。
优选地，所述银杏酮酯的指纹图谱与供试品的色谱图的相似度≥0.90。当供试品与银杏酮酯的指纹图谱进行相似度比较，按照《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2.0版)计算。
优选地，所述银杏酮酯中所含水分的含量≤5.0％。所述水分按中国药典2015年版四部通则0832第二法进行计算。
优选地，所述银杏酮酯中炽灼残渣的含量≤0.5％。所述炽灼残渣按中国药典2010年版一部附录IX J进行计算。
更优选地，所述银杏酮酯中炽灼残渣的含量≤0.2％。
优选地，所述银杏酮酯中环己烷残留物的含量≤0.002％。所述环己烷残留物的含量按中国药典2015年版四部通则0861第二法进行计算。
更优选地，所述银杏酮酯中环己烷残留物的含量≤0.001％。
上述银杏酮酯中的芦丁含量、槲皮素含量、白果内酯含量、银杏内酯J含量、总黄酮醇苷含量、萜类内酯含量、银杏酮酯的指纹图谱均按中国药典2015年版四部通则0512中高效液相色谱法进行测定。双黄酮含量、总银杏酸含量、银杏内酯M含量、染料木苷含量按照高效液相色谱-质谱法进行测定。
优选地，所述银杏酮酯中铅(Pb)含量≤3.0mg/kg，镉(Cd)含量≤0.2mg/kg，砷(As)含量≤2.0mg/kg，汞(Hg)含量≤0.1mg/kg，铜(Cu)含量≤20mg/kg。
所述银杏酮酯中铅、镉、砷、汞、铜的含量按中国药典2015年版通则2321中记载的铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定。
优选地，所述银杏酮酯中农药残留含量如下：所述银杏酮酯中总六六六(CAS号为58-89-9)含量≤0.2mg/kg，总滴滴涕(CAS号为50-29-3)含量≤0.2mg/kg，五氯硝基苯(CAS号为82-68-8)含量≤0.1mg/kg，敌敌畏(CAS号为62-73-7)含量≤0.5mg/kg，甲胺磷(CAS号为10265-92-6)含量≤0.05mg/kg，乙酰甲胺磷(CAS号为30560-19-1)含量≤0.1mg/kg，乙硫磷(CAS号为563-12-2)含量≤0.5mg/kg，氧乐果(CAS号为1113-02-6)含量≤0.05mg/kg，二嗪磷(CAS号为333-41-5)含量≤0.5mg/kg，杀扑磷(CAS号为950-37-8)含量≤0.05mg/kg，久效磷(CAS号为6923-22-4)含量≤0.1mg/kg，乐果(CAS号为60-51-5)含量≤0.1mg/kg，甲基对硫磷(CAS号为298-00-0)含量≤0.1mg/kg，氯氰菊酯(CAS号为52315-07-8)含量≤1mg/kg，氰戊菊酯(CAS号为51630-58-1)含量≤0.5mg/kg，溴氰菊酯(CAS号为52918-63-5)含量≤0.5mg/kg。
所述银杏酮酯中上述农药残留的含量按中国药典2015年版四部通则2341中记载的农药残留测定法进行测定。
优选地，每1000g所述银杏酮酯中含黄曲霉毒素的总量≤4μg且含黄曲霉毒素B1含量≤2μg，所述黄曲霉毒素包括黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2及黄曲霉毒素B1。
所述银杏酮酯中黄曲霉毒素的含量按中国药典2015年版四部通则2351中记载的黄曲霉毒素测定法进行测定。
优选地，所述银杏叶为干燥的银杏苗圃叶。所述银杏苗圃叶即非成树银杏叶，其以采摘银杏叶为种植目的。
更优选地，所述干燥条件为：干燥温度为140-160℃，干燥时间为6-15分钟。
更优选地，所述银杏苗圃叶符合下列要求：
a)总黄酮醇苷含量≥0.85％；
b)萜类内酯含量≥0.40％；
c)总灰分含量≤10.0％；
d)酸不溶性灰分含量≤2.0％；
e)浸出物含量≥25.0％；
f)槲皮素与山柰素的色谱峰面积比为0.65-1.2，异鼠李素与槲皮素的色谱峰面积比＞0.15；
g)杂质含量≤2.0％；
h)水分含量≤12.0％；
i)二氧化硫残留量≤150mg/kg。
所述银杏苗圃叶中总黄酮醇苷、萜类内酯的定义同上述银杏酮酯。所述银杏苗圃叶中黄酮苷元色谱峰面积比(即槲皮素、山柰素、异鼠李素之间的色谱峰面积比)的定义同上述银杏酮酯。
所述银杏苗圃叶中总灰分含量和酸不溶性灰分含量按中国药典2015年版四部通则2302中记载的灰分测定法进行测定。所述银杏苗圃叶中浸出物含量按中国药典2015年版四部通则2201中记载的浸出物测定法进行测定。所述银杏苗圃叶中杂质含量按中国药典2015年版四部通则2301中记载的杂质测定法进行测定。所述银杏苗圃叶中水分含量按中国药典2015年版四部通则0832中记载的水分测定法进行测定。所述银杏苗圃叶中二氧化硫残留量按中国药典2015年版四部通则2331中记载的二氧化硫残留量测定法进行测定。
上述％均为质量百分比。
本发明第二方面提供一种银杏酮酯的制备方法，包括以下步骤：
1)将碎银杏叶加乙醇水溶液进行加热回流提取后滤过，获得滤液；
2)将滤液浓缩后水沉，取上清液离心，获得离心液；
3)将离心液上大孔树脂柱后进行水洗、溶剂洗脱，获得第一洗脱液，所述第一洗脱液包括低浓度溶剂第一洗脱液和高浓度溶剂第一洗脱液；
4)将低浓度溶剂第一洗脱液上聚酰胺柱后进行水洗、乙醇洗脱，获得第二洗脱液；
5)将第二洗脱液与高浓度溶剂第一洗脱液合并浓缩，再萃取、干燥、粉碎、过筛、混合，即得所需银杏酮酯。
优选地，步骤1)中，所述碎银杏叶为将银杏叶粉碎后获得的碎银杏叶。
优选地，步骤1)中，所述滤液的获得，包括以下步骤：
A)将碎银杏叶加60％乙醇水溶液进行加热回流提取后滤过，获得第一滤液；
B)再将步骤A)滤过后残留的药渣加水进行加热回流提取后滤过，获得第二滤液；
C)将步骤B)中的第二滤液与步骤A)中的第一滤液合并浓缩成稠膏，溶解，静置冷却，滤过，即获得所需滤液。
更优选地，步骤A)中，所述加热回流提取的条件为：提取次数：2次；每次提取时间：3小时。
更优选地，步骤B)中，所述加热回流提取的条件为：提取次数：1次；每次提取时间：0.5小时。
更优选地，步骤B)中，所述水为纯化水。
更优选地，步骤C)中，所述合并浓缩选自合并后浓缩的方式或浓缩后合并的方式中的一种。所述合并后浓缩的方式是将第二滤液与第一滤液进行合并后再进行浓缩。所述浓缩后合并的方式是将第一滤液先开始浓缩，再加入第二滤液合并后继续浓缩。
更优选地，步骤C)中，所述溶解为采用热水溶解。所述热水为加热至60-100℃的纯化水。
优选地，步骤2)中，所述滤液浓缩至无醇味。
优选地，步骤2)中，所述滤液浓缩后的相对密度为1.04-1.08。
优选地，步骤2)中，所述水沉中加入的纯化水为银杏叶粉末的1.5-2.5倍量。具体的，所述加入的纯化水为银杏叶粉末的1.5-2.5倍量是指，每1g的银杏叶粉末中加入纯化水1.5-2.5ml。
优选地，步骤2)中，所述水沉是在5-7℃的冷却水中夹层冷却12-24h。
优选地，步骤2)中，所述离心条件为：离心转速为13000-15000转/分钟，每3-5L上清液的离心时间为0.75-1.25min。
更优选地，所述离心条件为：离心转速为14000转/分钟，每3-5L上清液的离心时间为1.00min。
步骤2)中，上述浓缩、水沉、离心能够保证本发明制备的银杏酮酯的质量条件优化，使银杏酮酯质量更好。
优选地，步骤3)中，所述水洗为先用纯化水正洗1-2小时，再反洗0.5-1.5小时。所述水洗能够保证本发明制备的银杏酮酯中银杏酸、炽灼残渣等质量条件优化，使银杏酮酯质量更好。
更优选地，所述水洗为先用纯化水正洗1.5小时，再反洗1小时。
优选地，步骤3)中，所述溶剂洗脱为依次用18％乙醇水溶液、30％乙醇水溶液及50％乙醇水溶液洗脱，分别获得18％乙醇洗脱液、30％乙醇洗脱液及50％乙醇洗脱液。
优选地，步骤3)中，所述高浓度溶剂第一洗脱液为50％乙醇洗脱液。
优选地，步骤3)中，所述低浓度溶剂第一洗脱液为18％乙醇洗脱液与30％乙醇洗脱液的合并液。
优选地，步骤4)中，所述水洗为采用聚酰胺柱体积的0.5-2倍的纯化水进行正洗。更优选地，所述水洗为采用聚酰胺柱体积的1倍的纯化水进行正洗。所述水洗能够进一步去除银杏酮酯中包括银杏酸在内的杂质。
优选地，步骤4)中，所述低浓度溶剂第一洗脱液在上聚酰胺柱前要浓缩至无醇味。
优选地，步骤4)中，所述第二洗脱液为乙醇洗脱液。
优选地，步骤5)中，所述合并浓缩选自合并后浓缩的方式或浓缩后合并的方式中的一种。所述合并后浓缩的方式是将第二洗脱液与高浓度溶剂第一洗脱液进行合并后再进行浓缩。所述浓缩后合并的方式是将高浓度溶剂第一洗脱液先开始浓缩，再加入第二洗脱液合并后继续浓缩。
优选地，步骤5)中，所述浓缩至无醇味。
优选地，步骤5)中，所述萃取为采用环己烷作为溶剂的萃取。所述萃取后弃去环己烷萃取液。
优选地，步骤5)中，所述干燥选自喷雾干燥或真空干燥中的一种。
更优选地，所述真空干燥前需要将浓缩液浓缩成稠膏。
优选地，步骤5)中，所述过筛为过80-100目筛。更优选地，所述过筛为过90-100目筛。最优选地，所述过筛为过100目筛。所述过筛能够保证本发明制备的银杏酮酯原料药的粒度更加细，使银杏酮酯质量更好。
优选地，步骤5)中，所述混合的条件为：混合设备：总混机；混合速度：10-12转/分钟；混合时间：1.5-2.5小时。所述混合能够保证本发明制备的银杏酮酯原料药的均匀度更好，使银杏酮酯质量更好。
更优选地，所述混合的条件为：混合设备：总混机；混合速度：11转/分钟；混合时间：2小时。
本发明第三方面提供一种银杏酮酯的制备方法在制备银杏酮酯中的用途。
本发明第四方面提供一种银杏酮酯的制剂，由上述银杏酮酯原料药制备获得。
优选地，所述制剂选自片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、口服液、注射剂或外用药物制剂中的一种。
如上所述，本发明提供的一种银杏酮酯及其制备方法，通过优选的制备步骤及其条件，能够获得具有优质的银杏酮酯原料药。相比常规方法制备的银杏酮酯，其质量稳定、不合格率低，不同批次的原料药一致性好。同时，通过本发明中方法制备的银杏酮酯原料药，其用于制备制剂如片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、口服液、注射剂或外用药物制剂等，稳定性、一致性等性能优异。
附图说明
图1显示为本发明中银杏酮酯的指纹图谱，其中，1：芦丁；6：槲皮素；7：山柰素；8：异鼠李素。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
须知，下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置；所有压力值和范围都是指相对压力。以下使用的试剂均为本领域内的常规试剂。以下使用的仪器均为本领域内的常规仪器。
此外应理解，本发明中提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还可以存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤，除非另有说明；还应理解，本发明中提到的一个或多个设备/装置之间的组合连接关系并不排斥在所述组合设备/装置前后还可以存在其他设备/装置或在这些明确提到的两个设备/装置之间还可以插入其他设备/装置，除非另有说明。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。
实施例1
选取干燥的银杏苗圃叶，将其粉碎后获得的碎银杏叶，加60％乙醇水溶液进行加热回流提取2次，每次3小时，滤过，获得第一滤液。再将滤过后残留的药渣，加水进行加热回流提取1次，提取时间为0.5小时，滤过，获得第二滤液。将第二滤液与第一滤液合并浓缩成稠膏，合并浓缩可选用合并后浓缩的方式或浓缩后合并的方式，用加热至60-100℃的纯化水溶解，静置冷却，滤过，获得滤液。将滤液浓缩至相对密度为1.04-1.08且无醇味，再加入银杏叶粉末的1.5-2.5倍量的纯化水，在5-7℃的冷却水中夹层冷却12-24h，取上清液以14000转/分钟的转速离心，获得离心液。再将离心液上大孔树脂柱，先用纯化水正洗1.5小时，再反洗1小时，然后依次用18％乙醇水溶液、30％乙醇水溶液及50％乙醇水溶液洗脱，分别获得18％乙醇洗脱液、30％乙醇洗脱液及50％乙醇洗脱液，即为第一洗脱液。在第一洗脱液中，50％乙醇洗脱液为高浓度溶剂第一洗脱液，18％乙醇洗脱液与30％乙醇洗脱液的合并液为低浓度溶剂第一洗脱液。再将低浓度溶剂第一洗脱液，浓缩至无醇味，上聚酰胺柱，采用聚酰胺柱体积的1倍的纯化水进行正洗后，用乙醇洗脱，获得乙醇洗脱液，即为第二洗脱液。将第二洗脱液与高浓度溶剂第一洗脱液合并浓缩至无醇味，合并浓缩可选用合并后浓缩的方式或浓缩后合并的方式，浓缩液用环己烷萃取后，弃去环己烷萃取液，再将浓缩液喷雾干燥，或者将浓缩液浓缩成稠膏、真空干燥，干燥物粉碎，过100目筛，在总混机中以11转/分钟速度混合2小时，即得所需银杏酮酯样品1#。
对照例1
选取常规的银杏叶，将其粉碎后获得的碎银杏叶，加60％乙醇水溶液进行加热回流提取2次，每次3小时，滤过，获得第一滤液。再将滤过后残留的药渣，加水进行加热回流提取1次，提取时间为0.5小时，滤过，获得第二滤液。将第二滤液与第一滤液合并浓缩成稠膏，合并浓缩可选用合并后浓缩的方式或浓缩后合并的方式，用加热至60-100℃的纯化水溶解，静置冷却，滤过，获得滤液。再将滤液上大孔树脂柱，依次用18％乙醇水溶液、30％乙醇水溶液及50％乙醇水溶液洗脱，分别获得18％乙醇洗脱液、30％乙醇洗脱液及50％乙醇洗脱液，即为第一洗脱液。在第一洗脱液中，50％乙醇洗脱液为高浓度溶剂第一洗脱液，18％乙醇洗脱液与30％乙醇洗脱液的合并液为低浓度溶剂第一洗脱液。再将低浓度溶剂第一洗脱液，浓缩至无醇味，上聚酰胺柱，用乙醇洗脱，获得乙醇洗脱液，即为第二洗脱液。将第二洗脱液与高浓度溶剂第一洗脱液合并浓缩至无醇味，合并浓缩可选用合并后浓缩的方式或浓缩后合并的方式，浓缩液用环己烷萃取后，弃去环己烷萃取液，再将浓缩液喷雾干燥，或者将浓缩液浓缩成稠膏、真空干燥，干燥物粉碎，即得所需银杏酮酯对照样品1*。
对照例2
将常规的银杏叶、银杏根皮、槐角混合后粉碎，获得的碎银杏，加60％乙醇水溶液进行加热回流提取2次，每次3小时，滤过，获得第一滤液。再将滤过后残留的药渣，加水进行加热回流提取1次，提取时间为0.5小时，滤过，获得第二滤液。将第二滤液与第一滤液合并浓缩成稠膏，合并浓缩可选用合并后浓缩的方式或浓缩后合并的方式，用加热至60-100℃的纯化水溶解，静置冷却，滤过，获得滤液。再将滤液上大孔树脂柱，依次用18％乙醇水溶液、30％乙醇水溶液及50％乙醇水溶液洗脱，分别获得18％乙醇洗脱液、30％乙醇洗脱液及50％乙醇洗脱液，即为第一洗脱液。在第一洗脱液中，50％乙醇洗脱液为高浓度溶剂第一洗脱液，18％乙醇洗脱液与30％乙醇洗脱液的合并液为低浓度溶剂第一洗脱液。再将低浓度溶剂第一洗脱液，浓缩至无醇味，上聚酰胺柱，用乙醇洗脱，获得乙醇洗脱液，即为第二洗脱液。将第二洗脱液与高浓度溶剂第一洗脱液合并浓缩至无醇味，合并浓缩可选用合并后浓缩的方式或浓缩后合并的方式，浓缩液用环己烷萃取后，弃去环己烷萃取液，再将浓缩液喷雾干燥，或者将浓缩液浓缩成稠膏、真空干燥，干燥物粉碎，即得所需银杏酮酯对照样品2*。
实施例2
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，分别取0.1g粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇-70％乙醇(1：1)的混合溶液10ml，振荡提取(频率为每分钟500次)30分钟，取出，离心，取上清液；或滤过，取续滤液，即得供试品溶液A1、A2、A3。
同时，分别取芦丁对照品、槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含芦丁250μg，槲皮素25μg的混合溶液，即得对照品溶液。
将供试品溶液A1、A2、A3与对照品溶液分别精密吸取10μl，按中国药典2015年版四部通则0512中高效液相色谱法进行测定。高效液相色谱法的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.4％磷酸溶液为流动相B；按下表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为400nm。理论板数按芦丁峰计算应不低于8000。
表1
经测定可知，银杏酮酯样品1#中芦丁的含量为3.0％，数值≤3.2％；槲皮素的含量为0.36％，数值≤0.38％。而银杏酮酯对照样品1*中芦丁的含量为3.5％，数值≤4.0％；槲皮素的含量为0.39％，数值≤0.4％。而银杏酮酯对照样品2*中芦丁的含量为5.5％，数值＞4.0％；槲皮素的含量为0.59％，数值＞0.4％。由上述含量数值可知，银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*中芦丁和槲皮素的含量均在规定的数值范围内，可见无掺假外来物质，产品工艺正常，产品质量好。银杏酮酯样品1#由于制备方法中的水洗等步骤，银杏酮酯样品1#中芦丁和槲皮素的含量均小于银杏酮酯对照样品1*，可见银杏酮酯样品1#的产品质量优于银杏酮酯对照样品1*。而银杏酮酯对照样品2*中芦丁和槲皮素的含量超出规定的数值范围，掺假外来物质，产品质量差。
实施例3
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，分别取1g，进行喷雾干燥后。采用在真空烘箱中≤80°温度下干燥2小时；或将流浸膏浓缩至相对密度1.2，然后采用进风温度160-165°，出风温度95-100°进行干燥。
经测定可知，银杏酮酯样品1#中乙醇残留的含量为0.18％，数值≤0.2％。而银杏酮酯对照样品1*中乙醇残留的含量为0.43％，数值≤0.5％。而银杏酮酯对照样品2*中乙醇残留的含量为0.47％，数值≤0.5％。由上述含量可知，银杏酮酯样品1#、银杏酮酯对照样品1*、2*中乙醇残留量均符合控制要求，但银杏酮酯样品1#中乙醇残留最少，品质最佳，银杏酮酯对照样品1*、2*中乙醇残留量彼此相差不大，但比银杏酮酯样品1#多，品质次之。
实施例4
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，分别取0.1g粉末，精密称定，置50ml具塞离心管中，加入30％乙醇15ml，摇匀，再加乙醚20ml，摇匀，放置片刻，小心打开盖子，放气后再旋紧盖子，涡旋振荡(每分钟3000次)1分钟，离心10分钟(每分钟4000转)，分取上清液，残渣再加乙醚如上操作3次，每次15ml，合并4次乙醚液，减压浓缩至近干(切勿蒸干)，加甲醇适量超声使溶解，并完全转移至5ml量瓶中，离心，取上清液；或过0.45μm的滤膜，取续滤液，即得供试品溶液B1、B2、B3。
同时，分别取白果内酯对照品、银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品、银杏内酯C对照品和银杏内酯J对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含1.0mg、0.3mg、0.7mg和0.4mg的混合溶液，即得对照品溶液。
分别精密吸取对照品溶液5μl、10μl及供试品溶液B1、B2、B3各10μl，按中国药典2015年版四部通则0512中高效液相色谱法进行测定，并用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯J的含量。高效液相色谱法的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以水为流动相B；按下表2中的规定进行梯度洗脱；用蒸发光散射检测器检测。理论板数按白果内酯峰计算应不低于10000。
表2
经测定可知，银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*中萜类内酯含量按干燥品计算，以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的总量计，分别为11.5％、8.0％，符合规定的6.0-12.0％数据范围。而银杏酮酯对照样品2*中萜类内酯含量按干燥品计算，以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的总量计，为4.3％，低于规定的6.0-12.0％数据范围。由于萜类内酯是银杏中特有的成分，是银杏酮酯制剂活血化瘀，治疗心绞痛、冠心病和脑动脉硬化疾病的主要药效成分，需要符合规定的数据范围，可见银杏酮酯对照样品2*的治疗效果差。而银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*均有较好的治疗效果，但银杏酮酯样品1#中萜类内酯含量更高，能够符合规定的9.0-12.0％数据范围，相对于银杏酮酯对照样品1*，其治疗效果更佳。
同时，经测定可知，银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*中白果内酯的含量分别为4.6％、2.8％，符合规定的2.6-4.8％数据范围。而银杏酮酯对照样品2*中白果内酯的含量为1.8％，低于规定的2.6-4.8％数据范围。由于白果内酯会使银杏酮酯具备抗PAF作用还有对神经具有营养功能，可见银杏酮酯对照样品2*的治疗效果差。而银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*均有较好的治疗效果，但银杏酮酯样品1#中白果内酯含量更高，能够符合规定的3.6-4.8％数据范围，相对于银杏酮酯对照样品1*，其治疗效果更佳。
另外，经测定可知，银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*中银杏内酯J的含量分别为0.41％、0.22％，符合规定的0.1-0.5％数据范围。而银杏酮酯对照样品2*中银杏内酯J的含量为0.05％，低于规定的0.1-0.5％数据范围。由于银杏内酯J也会使银杏酮酯具备抗PAF作用，可见银杏酮酯对照样品2*的治疗效果差。而银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*均有较好的治疗效果，但银杏酮酯样品1#中银杏内酯J含量更高，能够符合规定的0.3-0.5％数据范围，相对于银杏酮酯对照样品1*，其治疗效果更佳。
实施例5
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，分别取0.1g粉末，精密称定，用乙醇5mL超声提取10min，再在3000rpm下离心10min，取上清液，重复上述超声提取3次，合并上清液并定容至25mL容量瓶，即得供试品溶液C1、C2、C3。
同时，分别取穗花杉双黄酮对照品、7-去甲基银杏双黄酮对照品、白果双黄酮对照品适量，精密称定，加乙醇制成具有一定浓度的穗花杉双黄酮、7-去甲基银杏双黄酮、白果双黄酮的混合溶液，即得对照品溶液。
将供试品溶液C1、C2、C3与对照品溶液分别精密吸取10μl，按中国药典2015年版四部通则0512和0431中高效液相色谱-质谱法进行测定。高效液相色谱-质谱法的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1％冰醋酸溶液(90:10)为流动相，等度洗脱，待测成分全部出峰后以甲醇-1％冰醋酸溶液(99:1)充分清洗至少10倍柱体积；采用三重四极杆质谱检测器，电喷雾离子化(ESI)负离子模式下多反应监测(MRM)。
经测定可知，银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*中双黄酮的含量分别为0.005％、0.016％，即穗花杉双黄酮、7-去甲基银杏双黄酮、白果双黄酮的总含量均≤0.02％。而银杏酮酯对照样品2*中双黄酮的含量分别为0.042％，即穗花杉双黄酮、7-去甲基银杏双黄酮、白果双黄酮的总含量＞0.02％。由于双黄酮具有致敏性，必须控制其含量，银杏酮酯对照样品2*中双黄酮含量超出限量范围，会使患者更易过敏。而银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*中双黄酮含量均在限量范围内，但银杏酮酯样品1#的双黄酮含量更低，能够达到≤0.01％，更不易致敏。
实施例6
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，分别取0.1g粉末，精密称定，用50％甲醇5mL超声提取10min，再在3000rpm下离心10min，取上清液，重复上述超声提取3次，合并上清液并定容至25mL容量瓶，即得供试品溶液D1、D2、D3。
同时，分别取染料木苷对照品、银杏内酯M对照品适量，精密称定，加甲醇制成具有一定浓度的染料木苷、银杏内酯M的混合溶液，即得对照品溶液。
将供试品溶液D1、D2、D3与对照品溶液分别精密吸取10μl，按中国药典2015年版四部通则0512和0431中高效液相色谱-质谱法进行测定。高效液相色谱-质谱法的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1％冰醋酸溶液(90:10)为流动相，等度洗脱，待测成分全部出峰后以甲醇-1％冰醋酸溶液(99:1)充分清洗至少10倍柱体积；采用三重四极杆质谱检测器，电喷雾离子化(ESI)负离子模式下多反应监测(MRM)。
经测定可知，银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*中均不含有染料木苷、银杏内酯M。而银杏酮酯对照样品2*含有染料木苷、银杏内酯M。由于染料木苷是槐角中的成分，银杏内酯M是银杏根皮中存在的成分，上述成分在银杏叶中均不含有。因此，在银杏酮酯对照样品2*中检测出上述成分，则意味着在银杏酮酯对照样品2*中非法添加了槐角和银杏根皮，掺假外来物质。而银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*无掺假外来物质，产品质量好。
实施例7
取芦丁对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加70％乙醇70ml，于水浴上微热使溶解，放冷，加70％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。
然后，精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，分别置10ml量瓶中，各加水至3ml，加醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.5)和0.1mol/L三氯化铝溶液各2ml，摇匀，加70％乙醇至刻度，摇匀；以相应的溶液为空白。照紫外－可见分光光度法(中国药典2015年版四部通则0401)试验，在270nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线。
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，分别取25mg，精密称定，置50ml量瓶中，用70％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取0.5ml，置10ml量瓶中，加水至3ml，加醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.5)和0.1mol/L三氯化铝溶液各2ml，摇匀，加70％乙醇至刻度，摇匀；照紫外－可见分光光度法(中国药典2015年版四部通则0401)试验，在270nm波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中相当于芦丁的重量，计算，即得。
经测定可知，银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*中总黄酮含量以芦丁(C27H30O16)计，含量分别为54.1％、45.2％，符合规定的44.0-55.0％数据范围。而银杏酮酯对照样品2*中黄酮含量以芦丁(C27H30O16)计，含量为38.1％，低于规定的44.0-55.0％数据范围。由于总黄酮是除总黄酮醇苷以外还含有游离黄酮的富有活性的物质，一定含量的总黄酮在银杏酮酯中，会使银杏酮酯具有良好的治疗效果。因此，银杏酮酯对照样品2*的治疗效果差。而银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*均有较好的治疗效果，但银杏酮酯样品1#中总黄酮含量更高，能够符合规定的49.0-55.0％数据范围，相对于银杏酮酯对照样品1*，其治疗效果更佳。
实施例8
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，分别取0.4g粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理(功率180W，频率42kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得供试品溶液D1、D2、D3。
同时，分别取银杏酸C13:0对照品、银杏酸C15:1对照品、银杏酸C17:1对照品适量，精密称定，加甲醇制成各含0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml的系列混合溶液，作为对照品溶液。
将供试品溶液D1、D2、D3与对照品溶液分别精密吸取1μl，按中国药典2015年版四部通则0512和0431中高效液相色谱-质谱法进行测定。高效液相色谱-质谱法的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1％冰醋酸溶液(90:10)为流动相，等度洗脱，待测成分全部出峰后以甲醇-1％冰醋酸溶液(99:1)充分清洗至少10倍柱体积；采用三重四极杆质谱检测器，电喷雾离子化(ESI)负离子模式下多反应监测(MRM)，监测离子对见下表3。供试品溶液若检出与对照品保留时间相同的色谱峰，且所选择的离子丰度比与相当浓度对照品溶液的离子丰度比符合下表4规定，可判定具有该成分。
表3
表4
经测定可知，银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*中总银杏酸的含量分别为0.8mg/kg、4.3mg/kg，均≤5mg/kg。而银杏酮酯对照样品2*中总银杏酸的含量为11.3mg/kg，不仅＞5mg/kg，更大于＞10mg/kg。由于银杏酸具有致敏作用，长期服用银杏制剂，会造成银杏酸积累，对人体造成伤害。因此必须控制其在银杏酮酯中的含量，使银杏酸在银杏酮酯中保持低含量。银杏酮酯对照样品2*中总银杏酸含量超出限量范围，会对人体造成伤害。银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*中总银杏酸含量均在限量范围内，但银杏酮酯样品1#由于制备方法中的水洗等步骤，使总银杏酸含量更低，能够达到≤1mg/kg，更不易致敏。
实施例9
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，分别取75mg，精密称定，精密加入甲醇-25％盐酸溶液(4：1)的混合溶液50ml，称定重量，置85～90℃水浴中加热回流30分钟，取出，迅速冷却至室温，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液E1、E2、E3。
同时，分别取槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含84μg、120μg、24μg的混合溶液，即得对照品溶液。
将供试品溶液与对照品溶液分别精密吸取10μl，按中国药典2015年版四部通则0512中高效液相色谱法进行测定。高效液相色谱法的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液(49：51)为流动相；等度洗脱；检测波长为368nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于4000。山柰素峰与异鼠李素峰的分离度应大于1.5。
并将银杏酮酯中总黄酮醇苷含量按公式(1)进行计算，所述公式(1)为：总黄酮醇苷含量＝(槲皮素含量+山柰素含量+异鼠李素含量)×2.51。
经测定可知，银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*中总黄酮醇苷含量按干燥品计算，含量分别为33.8％、26.7％，符合规定的24.0-35.0％数据范围。而银杏酮酯对照样品2*中总黄酮醇苷含量按干燥品计算，含量为20.3％，低于规定的24.0-35.0％数据范围。由于总黄酮醇苷是含有游离黄酮的富有活性的物质，一定含量的总黄酮醇苷在银杏酮酯中，会使银杏酮酯具有良好的治疗效果。因此，银杏酮酯对照样品2*的治疗效果差。而银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*均有较好的治疗效果，但银杏酮酯样品1#中总黄酮醇苷含量更高，能够符合规定的30.0-35.0％数据范围，相对于银杏酮酯对照样品1*，其治疗效果更佳。
另外，将供试品溶液E1、E2、E3与对照品溶液分别精密吸取10μl，按上述高效液相色谱法进行测定。经测定可知，银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*中槲皮素与山柰素的色谱峰面积比分别为0.91、1.02，符合规定的0.8-1.2数据范围；异鼠李素与槲皮素的色谱峰面积比分别为0.21、0.22，均＞0.15。而银杏酮酯对照样品2*中槲皮素与山柰素的色谱峰面积比分别为0.61，低于规定的0.8-1.2数据范围；异鼠李素与槲皮素的色谱峰面积比为0.13，＜0.15。由上述比例关系可知，银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*无掺假外来物质，产品工艺正常，产品质量好，而银杏酮酯对照样品2*添加槲皮素，掺假外来物质，产品质量差。
实施例10
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，分别取50mg，精密称定，加75％甲醇10ml，超声处理(功率300W，频率50KHz)10分钟，离心(每分钟4000转)5分钟，取上清液，即得供试品溶液F1、F2、F3。
同时，分别取芦丁、槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得对照品溶液。
将供试品溶液与对照品溶液分别精密吸取10μl，按中国药典2015年版四部通则0512中高效液相色谱法进行测定。高效液相色谱法的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为15cm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，按照下表5中的规定进行梯度洗脱，检测波长为360nm；柱温为30℃；流速为每分钟1.0ml。理论板数按芦丁峰计算应不低于10000。
表5
当供试品与银杏酮酯的指纹图谱进行相似度比较，按照《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2.0版)计算。所述银杏酮酯的指纹图谱包括符合如图1所示的4个共有指纹峰：所述1号峰为芦丁的指纹峰，所述6号峰为槲皮素的指纹峰，所述7号峰为山柰素的指纹峰，所述8号峰为异鼠李素的指纹峰。经测定可知，银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*的指纹图谱与供试品的色谱图的相似度分别为0.98、0.92，均≥0.90。而银杏酮酯对照样品2*的指纹图谱与供试品的色谱图的相似度为0.3，＜0.90。由上述相似度可知，银杏酮酯样品1#和银杏酮酯对照样品1*无掺假外来物质，产品质量好，而银杏酮酯对照样品2掺假外来物质，产品质量差。
实施例11
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，分别按中国药典2015年版四部通则0832第二法进行计算银杏酮酯中所含水分的含量。
由于水分高了会结块，会影响产品质量，因此必须控制其在银杏酮酯中的含量，使水分在银杏酮酯中保持低含量。经测定可知，银杏酮酯样品1#、银杏酮酯对照样品1*、银杏酮酯对照样品2*中所含水分的含量均≤5.0％。
实施例12
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，分别按中国药典2010年版一部附录IX J进行计算银杏酮酯中炽灼残渣的含量。
由于炽灼残渣高了说明杂质含量高，会影响产品质量，因此必须控制其在银杏酮酯中的含量，使炽灼残渣在银杏酮酯中保持低含量。经测定可知，银杏酮酯样品1#、银杏酮酯对照样品1*、银杏酮酯对照样品2*中炽灼残渣的含量分别为0.12％、0.44％、0.45％，均≤0.5％。但银杏酮酯样品1#由于制备方法中的水洗等步骤，会使炽灼残渣含量更低，能够达到≤0.2％，其产品质量更好。
实施例13
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，分别取0.8g，精密称定，置20ml顶空瓶中，精密加入二甲基甲酰胺5ml，密封瓶口，振摇使溶解，摇匀，即得供试品溶液G1、G2、G3。
同时，取环己烷适量，精密称定，加二甲基甲酰胺制成每1ml含1.8μg的溶液，作为对照品溶液。精密量取5ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，摇匀，即得对照品溶液。
将供试品溶液G1、G2、G3与对照品溶液分别精密吸取气化后的气体1ml，按中国药典2015年版四部通则0861第二法，注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。
由于环己烷是化学溶剂，残留过多会对人体造成伤害，因此必须控制其在银杏酮酯中的含量，使环己烷在银杏酮酯中保持低含量。经测定可知，银杏酮酯样品1#、银杏酮酯对照样品1*、银杏酮酯对照样品2*中环己烷残留物的含量分别为0.0003％、0.0018％、0.0019％，均≤0.002％。但银杏酮酯样品1#由于制备方法中的水洗等步骤，会使环己烷残留物的含量更低，能够达到≤0.001％，其产品质量更好，更不易对人体造成伤害。
实施例14
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，按中国药典2015年版通则2321记载的铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定样品中铅、镉、砷、汞、铜的含量。
经测定可知，银杏酮酯样品1#、银杏酮酯对照样品1*、银杏酮酯对照样品2*中铅含量分别为0.5mg/kg、2.2mg/kg、2.3mg/kg，均≤3.0mg/kg；镉含量分别为0.08mg/kg、0.15mg/kg、0.16mg/kg，均≤0.2mg/kg；砷含量分别为0.6mg/kg、1.7mg/kg、1.8mg/kg，均≤2.0mg/kg；汞含量分别为0.02mg/kg、0.08mg/kg、0.09mg/kg，均≤0.1mg/kg；铜含量分别为6mg/kg、16mg/kg、17mg/kg，均≤20mg/kg。由于重金属有毒，对于银杏酮酯，其含量越低，产品质量越好。银杏酮酯样品1#、银杏酮酯对照样品1*、银杏酮酯对照样品2*中重金属元素含量均在限量范围内，产品质量符合要求。但银杏酮酯样品1#的重金属元素含量最低，其产品质量最好。
实施例15
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，按中国药典2015年版四部通则2341中记载的农药残留测定法进行测定农药残留含量。
经测定可知，银杏酮酯样品1#、银杏酮酯对照样品1*、银杏酮酯对照样品2*中总六六六含量分别为0.01mg/kg、0.08mg/kg、0.16mg/kg，均≤0.2mg/kg；总滴滴涕含量分别为0.02mg/kg、0.09mg/kg、0.15mg/kg，均≤0.2mg/kg；五氯硝基苯含量分别为0.008mg/kg、0.03mg/kg、0.08mg/kg，均≤0.1mg/kg；敌敌畏含量分别为0.08mg/kg、0.13mg/kg、0.34mg/kg，均≤0.5mg/kg；甲胺磷含量分别为0.011mg/kg、0.023mg/kg、0.041mg/kg，均≤0.05mg/kg；乙酰甲胺磷含量分别为0.01mg/kg、0.032mg/kg、0.086mg/kg，均≤0.1mg/kg；乙硫磷含量分别为0.07mg/kg、0.16mg/kg、0.32mg/kg，均≤0.5mg/kg；氧乐果含量分别为0.009mg/kg、0.014mg/kg、0.038mg/kg，均≤0.05mg/kg；二嗪磷含量分别为0.04mg/kg、0.17mg/kg、0.41mg/kg，均≤0.5mg/kg；杀扑磷含量分别为0.007mg/kg、0.021mg/kg、0.039mg/kg，均≤0.05mg/kg；久效磷含量分别为0.011mg/kg、0.041mg/kg、0.087mg/kg，均≤0.1mg/kg；乐果含量分别为0.018mg/kg、0.053mg/kg、0.091mg/kg，均≤0.1mg/kg；甲基对硫磷含量分别为0.008mg/kg、0.033mg/kg、0.071mg/kg，均≤0.1mg/kg；氯氰菊酯含量分别为0.06mg/kg、0.43mg/kg、0.61mg/kg，均≤1mg/kg；氰戊菊酯含量分别为0.11mg/kg、0.23mg/kg、0.41mg/kg，均≤0.5mg/kg；溴氰菊酯含量分别为0.09mg/kg、0.24mg/kg、0.38mg/kg，均≤0.5mg/kg。由于农药残留有毒，对于银杏酮酯，其含量越低，产品质量越好。银杏酮酯样品1#、银杏酮酯对照样品1*、银杏酮酯对照样品2*中农药残留含量均在限量范围内，产品质量符合要求。但银杏酮酯样品1#的农药残留含量最低，其产品质量最好。
实施例16
将实施例1中制备获得的银杏酮酯样品1#，对照例1、2中制备获得的银杏酮酯对照样品1*、2*，按中国药典2015年版四部通则2351中记载的黄曲霉毒素测定法进行测定黄曲霉毒素含量，黄曲霉毒素包括黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2及黄曲霉毒素B1。
经测定可知，每1000g银杏酮酯样品1#、银杏酮酯对照样品1*、银杏酮酯对照样品2*中，含黄曲霉毒素的总量分别为0.8μg、2.1μg、3.8μg，均≤4μg。同时，每1000g银杏酮酯样品1#、银杏酮酯对照样品1*、银杏酮酯对照样品2*中，含黄曲霉毒素B1含量分别为0.3μg、1.0μg、1.6μg，均≤2μg。由于黄曲霉毒素易致癌，对于银杏酮酯，其含量越低，产品质量越好。银杏酮酯样品1#、银杏酮酯对照样品1*、银杏酮酯对照样品2*中黄曲霉毒素含量均在限量范围内，产品质量符合要求。但银杏酮酯样品1#的黄曲霉毒素含量最低，其产品质量最好。
实施例17
取实施例1作为药材原料的银杏苗圃叶，在140-160℃干燥6-15分钟后，作为原料样品1；同时取对照例1作为药材原料的常规银杏叶，作为原料样品2。
分别将原料样品1、原料样品2按实施例9中方法测定总黄酮醇苷含量和黄酮苷元色谱峰面积比，按实施例4中记载的方法测定萜类内酯含量，按中国药典2015年版四部通则2302中记载的灰分测定法测定总灰分含量和酸不溶性灰分含量，按中国药典2015年版四部通则2201中记载的浸出物测定法测定浸出物含量，按中国药典2015年版四部通则2301中记载的杂质测定法测定杂质含量，按中国药典2015年版四部通则0832中记载的水分测定法测定水分含量，按中国药典2015年版四部通则2331中记载的二氧化硫残留量测定法测定二氧化硫残留量。
经测定可知，原料样品1、原料样品2中总黄酮醇苷含量分别为1.34％、0.54％，原料样品2中总黄酮醇苷含量虽然符合药典中总黄酮醇苷含量≥0.40％的规定，但不符合本发明中的总黄酮醇苷含量≥0.85％的规定，而原料样品1中总黄酮醇苷含量不仅≥0.40％，而且≥0.85％，其总黄酮醇苷含量更高，原料质量更好。
经测定可知，原料样品1、原料样品2中萜类内酯含量分别为0.62％、0.33％，原料样品2中萜类内酯含量虽然符合药典中萜类内酯含量≥0.25％的规定，但不符合本发明中的萜类内酯含量≥0.40％的规定，而原料样品1中萜类内酯含量不仅≥0.25％，而且≥0.40％，其萜类内酯含量更高，原料质量更好。
经测定可知，原料样品1、原料样品2中槲皮素与山柰素的色谱峰面积比分别为0.87、0.55，原料样品1符合本发明规定的0.65-1.2数据范围，而原料样品2不符合本发明规定的0.65-1.2数据范围。原料样品1、原料样品2中异鼠李素与槲皮素的色谱峰面积比分别为0.21、0.14，原料样品1符合本发明规定的＞0.15，而原料样品2不符合本发明规定的＞0.15。由上述比例关系可知，作为原料，原料样品1的原料质量优于原料样品2。
经测定可知，原料样品1、原料样品2中二氧化硫残留量分别为11mg/kg、88mg/kg，均≤150mg/kg，原料样品1、原料样品2中二氧化硫残留量均在限量范围内，原料质量符合要求。但原料样品1的二氧化硫残留量更低，其原料质量更好。
同时，经测定可知，原料样品1、原料样品2中总灰分含量分别为3.8％、6.9％，均≤10.0％。原料样品1、原料样品2中酸不溶性灰分含量分别为0.68％、1.54％，均≤2.0％。原料样品1、原料样品2中浸出物含量分别为44.1％、28.2％，均≥25.0％。原料样品1、原料样品2中杂质含量分别为0.57％、1.33％，均≤2.0％。原料样品1、原料样品2中水分含量分别为5.3％、10.1％，均≤12.0％。可见，原料样品1、原料样品2中的上述含量均在规定的限量范围内，原料质量符合要求。但原料样品1的相关含量指标均优于原料样品2，因而原料样品1的原料质量更好。通过原料样品1，能够生成质量更好的银杏酮酯原料药样品。
综上所述，本发明提供的一种银杏酮酯及其制备方法，通过优选的制备步骤及其条件，能够获得具有优质的银杏酮酯。相比常规方法制备的银杏酮酯，其质量稳定、不合格率低，不同批次的原料药一致性好。所以，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (13)

1.一种银杏酮酯原料药，由银杏叶经醇提制得，符合下列条件：
1)芦丁的含量≤4.0％；
2)槲皮素的含量≤0.4％；
3)白果内酯的含量为2.6-4.8％；
4)银杏内酯J的含量为0.1-0.5％；
5)乙醇残留的含量≤0.5％；
6)双黄酮的含量≤0.02％，所述双黄酮包括穗花杉双黄酮、7-去甲基银杏双黄酮、白果双黄酮；
7)染料木苷的含量为0，银杏内酯M的含量为0。
2.根据权利要求1所述的一种银杏酮酯原料药，其特征在于，所述银杏酮酯原料药中总黄酮含量以芦丁计，为44.0-55.0％；所述银杏酮酯原料药中萜类内酯含量以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的总量计，为6.0-12.0％。
3.根据权利要求1所述的一种银杏酮酯原料药，其特征在于，所述银杏酮酯原料药中总银杏酸的含量≤5mg/kg，所述银杏酮酯原料药中总银杏酸以银杏酸C13:0、银杏酸C15:1、银杏酸C17:1的总量计。
4.根据权利要求1所述的一种银杏酮酯原料药，其特征在于，所述银杏酮酯原料药中总黄酮醇苷含量为24.0-35.0％；所述银杏酮酯原料药中槲皮素与山柰素的色谱峰面积比为0.8-1.2，异鼠李素与槲皮素的色谱峰面积比＞0.15。
5.根据权利要求1所述的一种银杏酮酯原料药，其特征在于，所述银杏酮酯原料药还符合下列条件中的一项或多项：
A1)水分的含量≤5.0％；
A2)炽灼残渣的含量≤0.5％；
A3)环己烷残留物的含量≤0.002％。
A4)铅含量≤3.0mg/kg，镉含量≤0.2mg/kg，砷含量≤2.0mg/kg，汞含量≤0.1mg/kg，铜含量≤20mg/kg；
A5)农药残留含量如下：总六六六含量≤0.2mg/kg，总滴滴涕含量≤0.2mg/kg，五氯硝基苯含量≤0.1mg/kg，敌敌畏含量≤0.5mg/kg，甲胺磷含量≤0.05mg/kg，乙酰甲胺磷含量≤0.1mg/kg，乙硫磷含量≤0.5mg/kg，氧乐果含量≤0.05mg/kg，二嗪磷含量≤0.5mg/kg，杀扑磷含量≤0.05mg/kg，久效磷含量≤0.1mg/kg，乐果含量≤0.1mg/kg，甲基对硫磷含量≤0.1mg/kg，氢氯菊酯含量≤1mg/kg，氰戊菊酯含量≤0.5mg/kg，溴氰菊酯含量≤0.5mg/kg；
A6)每1000g所述银杏酮酯原料药中含黄曲霉毒素的总量≤4μg且含黄曲霉毒素B1含量≤2μg，所述黄曲霉毒素包括黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2及黄曲霉毒素B1。
6.根据权利要求1所述的一种银杏酮酯原料药，其特征在于，所述银杏叶为干燥的银杏苗圃叶，所述银杏苗圃叶符合下列要求：
B1)总黄酮醇苷含量≥0.85％；
B2)萜类内酯含量≥0.40％；
B3)总灰分含量≤10.0％；
B4)酸不溶性灰分含量≤2.0％；
B5)浸出物含量≥25.0％；
B6)槲皮素与山柰素的色谱峰面积比为0.65-1.2，异鼠李素与槲皮素的色谱峰面积比＞0.15；
B7)杂质含量≤2.0％；
B8)水分含量≤12.0％；
B9)二氧化硫残留量≤150mg/kg。
7.根据权利要求1-6任一所述银杏酮酯原料药的制备方法，包括以下步骤：
A)将碎银杏叶加乙醇水溶液进行加热回流提取后滤过，获得滤液；
B)将滤液浓缩后水沉，取上清液离心，获得离心液；
C)将离心液上大孔树脂柱后进行水洗、溶剂洗脱，获得第一洗脱液，所述第一洗脱液包括低浓度溶剂第一洗脱液和高浓度溶剂第一洗脱液；
D)将低浓度溶剂第一洗脱液上聚酰胺柱后进行水洗、乙醇洗脱，获得第二洗脱液；
E)将第二洗脱液与高浓度溶剂第一洗脱液合并浓缩，再萃取、干燥、粉碎、过筛、混合，即得所需银杏酮酯。
8.根据权利要求7所述的一种银杏酮酯原料药的制备方法，其特征在于，步骤A)中，所述滤液的获得，包括以下步骤：
C1)将碎银杏叶加60％乙醇水溶液进行加热回流提取后滤过，获得第一滤液；
C2)再将步骤C1)滤过后残留的药渣加水进行加热回流提取后滤过，获得第二滤液；
C3)将步骤C2)中的第二滤液与步骤C1)中的第一滤液合并浓缩成稠膏，溶解，静置冷却，滤过，即获得所需滤液。
9.根据权利要求7所述的一种银杏酮酯原料药的制备方法，其特征在于，步骤C)中，所述水洗为先用纯化水正洗1-2小时，再反洗0.5-1.5小时；步骤D)中，所述水洗为采用聚酰胺柱体积的0.5-2倍的纯化水进行正洗。
10.根据权利要求7所述的一种银杏酮酯原料药的制备方法，其特征在于，步骤E)中，包含有以下条件中一项或多项：
F1)所述过筛为过80-100目筛；
F2)所述混合的条件为：混合设备：总混机；混合速度：10-12转/分钟；混合时间：1.5-2.5小时。
11.根据权利要求7-10任一所述的制备方法在制备银杏酮酯原料药中的用途。
12.一种银杏酮酯的制剂，由根据权利要求1-6任一所述银杏酮酯原料药制备获得。
13.根据权利要求12所述的一种银杏酮酯的制剂，其特征在于，所述制剂选自片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、口服液、注射剂或外用药物制剂中的一种。
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