CN100520404C - 一种银杏口腔崩解片的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种银杏口腔崩解片的质量控制方法，该质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性均好，可确保产品质量的安全、均一、稳定、有效、可控，保证用药安全和临床疗效。

Description

一种银杏口腔崩解片的检测方法

技术领域：

本发明涉及一种银杏口腔崩解片的质量控制方法，属于药品技术的领域。

技术背景：

心血管病是一种死亡率极高的疾病。据世界卫生组织报告，全球每3个死亡的人中1个死于心血管疾病，且其死亡率还在不断增加。心血管疾病已引起国内外医学界的广泛重视。银杏叶具有拮抗血小板活化因子，抑制血小板聚集，消除氧自由基等作用，是治疗心脑血管疾病尤其是治疗冠心病、心绞痛、急性脑梗塞，以及脑动脉硬化或循环障碍等疾病的一种良药。目前银杏叶制品有多种剂型上市，银杏口腔崩解片是一种速溶型银杏制剂，具有吸收快速和吸收率高的特点，中国专利申请200310123852.1描述了一种银杏口腔崩解片的处方及制备方法，由于口腔崩解制剂的特殊性，其质量控制方法长期以来没有能够很好的解决，对于银杏制剂而言，现有技术尚无针对银杏口腔崩解片的质量控制方法，将银杏制剂的其他剂型的质量控制方法直接用于口腔崩解片，存在检测不准的问题，因此，研究一种有效的精确度高的合理可行的质量控制方法是医药工作者需要解决的问题。

发明内容：

本发明的目的在于：提供一种银杏口腔崩解片的质量控制方法。

银杏口腔崩解片是一种在口腔中即可迅速崩解的片剂制剂，其和普通片剂不同之处在于，其中加入了可帮助在口腔中迅速崩解的药用辅料，如：交联羧甲基纤维素钠，交联聚乙烯吡咯烷酮，交联羧甲淀粉钠，微晶纤维素，低取代羟丙基纤维素，处理琼脂，甘露醇等。银杏口腔崩解片主要成分包括：银杏叶提取物和药用辅料，其中银杏叶提取物和药用辅料的比例为1-10：10-1，银杏提取物和药用辅料可以从市场上买到，银杏提取物也可以根据教科书、药典、专利和技术文献等现有技术资料提供的方法制备得到，只要符合药用标准即可使用。

本发明针对以上银杏口腔崩解片，提供一种质量控制方法。

总黄酮醇苷与萜类内酯是银杏叶的主要有效成分，是银杏叶口腔崩解片治疗心脑血管疾病的主要有效物质，据此，本发明针对银杏口腔崩解片中的总黄酮醇苷与萜类内酯的含量进行测定。本发明选择高效液相色谱法测定制剂中总黄酮醇苷与萜类内酯的含量，

本发明用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以槲皮素对照品、山柰素含量对照品、异鼠李素对照品为对照，以甲醇：0.01-0.1mol磷酸二氢钾溶液＝1-9∶9-1，用磷酸调pH至2-5为流动相测定制剂中总黄酮醇苷的含量。

本发明用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以白果内酯对照品、银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品和银杏内酯C对照品为对照，以正丙醇：四氢呋喃：水＝0.5-5∶5-30∶65-94.5为流动相测定制剂中萜类内酯的含量。

本发明发现，阴性样品色谱图在检测物质位置处无假阳性峰，检测物质和相近的杂质峰分离完全，分离度均大于1.5。

本发明还对制剂中总黄酮醇苷和萜类内酯进行薄层鉴别研究，并选择以银杏叶对照提取物为对照，以甲苯：乙酸乙酯：丙酮：甲酸＝1-20：0.1-5：0.1-5：0.05-0.5为展开剂，鉴别制剂中总黄酮醇苷；以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品为对照，以甲苯：醋酸乙酯：丙酮：甲醇＝5-20∶1-10∶1-10∶0.1-1为展开剂鉴别制剂中萜类内酯。本发明发现，以上鉴别方法分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。

另外，本发明还对该口崩片进行崩解时限测定。在对该制剂崩解时间的影响研究过程中，我们发现，温度对崩解时限的测定有影响，温度升高崩解加快。由于37℃接近于口腔温度，故本发明选择37℃进行崩解时限的测定。

经过研究，本发明采用以下质量控制方法对银杏口腔崩解片的质量进行控制，以保证该制剂在生产过程中控制产品的质量，保证用药安全和临床疗效。

本发明所述质量控制方法包括以下步骤：

对性状进行观察，对内容物进行鉴别，根据药典的方法对内容物进行检查，对有效成分进行含量测定。

对性状进行观察的步骤为：本品为口腔崩解片，药物显白色和咖啡色斑点相间，能在口腔中迅速崩解，无明显苦味和沙砾感；

对内容物进行鉴别步骤为：

(1)取本品，研细，加10-50％HCL：甲醇＝1-9：9-1的混合溶液，加热回流提取，滤过，滤液加蒸馏水，水浴使挥发部分溶液，用乙醚提取1-6次，合并乙醚液，用水洗涤1-5次，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品液；另取银杏叶对照提取物，同法制成对照提取物溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：丙酮：甲酸＝1-20：0.1-5：0.1-5：0.05-0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-10％三氯化铝乙醇溶液，分别置日光及紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照提取物色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(2)照薄层色谱法试验，吸取“含量测定”项下的萜类内酯供试品溶液和对照品溶液，分别点于同一以含1-10％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：醋酸乙酯：丙酮：甲醇＝5-20∶1-10∶1-10∶0.1-1为展开剂，在20℃以下展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏，在140～160℃加热，放冷，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查步骤为：

黄酮苷元峰面积比：按“含量测定”项下的总黄酮醇苷色谱计算，槲皮素与山柰素的峰面积比应为0.5～2.0；

崩解时限：取50ml的烧杯6只，置37℃的水浴中，各加水1-10ml，放置5-20分钟，使温度平衡，取本品6片分别加入每只烧杯中，计时，轻轻摇动烧杯，以能判断出未崩解的片芯为准，测定完全崩解的时间，应在60秒内崩解；如有一片崩解时间超过60秒，但不超过90秒，应另取6片重新测定，12片中崩解时间超过60秒，但不超过90秒的片剂不得多于2片；

其他：应符合中国药典片剂项下有关的各项规定；

对有效成分进行含量测定步骤为：

总黄酮醇苷的测定：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.01-0.1mol磷酸二氢钾溶液＝1-9∶9-1，用磷酸调pH至2-5为流动相；检测波长为200-500nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山柰素与异鼠李素的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素、山柰素和异鼠李素对照品，各加甲醇溶解，即得对照品溶液；取本品，研细，加入甲醇，回流提取，放冷，加入25％盐酸溶液，摇匀，置水浴中加热回流，迅速冷却至室温，用甲醇稀释，摇匀，用0.65μm或小于0.65μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮醇苷的含量；本品每片含总黄酮醇苷不得少于9mg；

总黄酮醇苷含量＝槲皮素含量×2.51+山柰素含量×2.51+异鼠李素×2.51

萜类内酯的测定：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以正丙醇：四氢呋喃：水＝0.5-5∶5-30∶65-94.5为流动相；用蒸发光散射检测器；理论板数按白果内酯峰计算应不低于2500，白果内酯与银杏内酯C的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品，各加甲醇溶解，即得对照品溶液；取本品，研细，精密加入甲醇，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液，回收甲醇，残渣加水，置水浴中温热使溶散，加1-5％盐酸溶液，用乙酸乙酯振摇提取2-8次，合并提取液，用1-10％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯洗涤；合并乙酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤1-5次，合并水洗液，用乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣用丙酮溶解，摇匀，用0.65μm或小于0.65μm的滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量；本品每片含萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量之和计不得少于2mg。

本发明的方法，优选的是：

对性状进行观察的步骤为：本品为口腔崩解片，药物显白色和咖啡色斑点相间，能在口腔中迅速崩解，无明显苦味和沙砾感；

对内容物进行鉴别步骤为：

(1)取本品，约相当于含总黄酮醇苷10-50mg，研细，加10-50％HCL：甲醇＝1-9：9-1的混合溶液10-100ml，加热回流0.5-5小时，滤过，滤液加10-50ml的蒸馏水，后蒸至5-30ml，用乙醚提取1-6次，合并乙醚液，用水洗涤1-5次，蒸干，残渣加0.5-3ml甲醇使溶解，作为供试品液；另取银杏叶对照提取物0.05-0.5g，同法制成对照提取物溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：丙酮：甲酸＝1-20：0.1-5：0.1-5：0.05-0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-10％三氯化铝乙醇溶液，分别置日光及紫外灯200-500nm下检视；供试品色谱中，在与对照提取物色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(2)照薄层色谱法试验，吸取“含量测定”项下的萜类内酯供试品溶液和对照品溶液各5-25μl，分别点于同一以含1-10％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：醋酸乙酯：丙酮：甲醇＝5-20∶1-10∶1-10∶0.1-1为展开剂，在20℃以下展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏5-30分钟，在140～160℃加热10-60分钟，放冷，置紫外光灯200-500nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；根据药典的方法对内容物进行检查步骤为：

黄酮苷元峰面积比：按“含量测定”项下的总黄酮醇苷色谱计算，槲皮素与山柰素的峰面积比应为0.5～2.0；

崩解时限：取50ml的烧杯6只，置37℃的水浴中，各加水1-10ml，放置5-20分钟，使温度平衡，取本品6片分别加入每只烧杯中，计时，轻轻摇动烧杯，以能判断出未崩解的片芯为准，测定完全崩解的时间，应在60秒内崩解；如有一片崩解时间超过60秒，但不超过90秒，应另取6片重新测定，12片中崩解时间超过60秒，但不超过90秒的片剂不得多于2片；

其他：应符合中国药典片剂项下有关的各项规定；

对有效成分进行含量测定步骤为：

总黄酮醇苷：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.01-0.1mol磷酸二氢钾溶液＝1-9∶9-1，用磷酸调pH至2-5为流动相；检测波长为200-500nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山柰素与异鼠李素的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素、山柰素和异鼠李素对照品，各加甲醇制成每1ml分别含0.01-0.1mg、0.01-0.1mg和0.01-0.05mg的溶液，即得对照品溶液；取本品10片，精密称定，研细，取相当于总黄酮醇苷9.6mg的细粉，加入甲醇10-30ml，回流提取10-50分钟，放冷，加入25％盐酸溶液1-10ml，摇匀，置水浴中加热回流10-60分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至50ml，摇匀，用0.65μm或小于0.65μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-25μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮醇苷的含量；本品每片含总黄酮醇苷不得少于9mg；

总黄酮醇苷含量＝槲皮素含量×2.51+山奈素含量×2.51+异鼠李素×2.51

萜类内酯：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以正丙醇：四氢呋喃：水＝0.5-5∶5-30∶65-94.5为流动相；用蒸发光散射检测器；理论板数按白果内酯峰计算应不低于2500，白果内酯与银杏内酯C的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品，各加甲醇制成每1ml分别含1-3mg、0.5-2mg、0.5-2mg、和0.5-2mg的混合溶液，即得对照品溶液；取本品20片，精密称定，研细，取约相当于萜类内酯19.2mg的粉末，精密称定，精密加入甲醇20-100ml，称定重量，超声处理10-60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液10-30ml，回收甲醇，残渣加水5-20ml，置水浴中温热使溶散，加1-5％盐酸溶液1-5滴，用乙酸乙酯振摇提取2-8次，合并提取液，用1-10％醋酸钠溶液10-30ml洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯5-20ml洗涤；合并乙酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤1-5次，合并水洗液，用乙酸乙酯5-20ml洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣用丙酮溶解并转移至5ml量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，用0.65μm或小于0.65μm的滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液10μl、15μl，供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量；本品每片含萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量之和计不得少于2mg。

以上所述本品为本发明的口腔崩解片，测定时需要将其溶解于溶剂中，作为供试液，常规的方法是，取1-10g加10-100ml溶剂溶解。

本发明最优选的方法列在本发明实施例中。

本发明的质量控制方法是经过大量的筛选得到的最佳方案，以下实验研究为本发明的优选过程。

一、总黄酮醇苷含量测定方法研究

1、供试品溶液制备方法研究：

方法1：取本品，研细，精密加入甲醇，超声处理，放冷，用甲醇定容，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加甲醇10ml、25％盐酸溶液5ml，摇匀，置水浴中加热回流提取，迅速冷却至室温，用甲醇定容，摇匀，用微孔滤膜0.45μm滤过，取滤液，即得。

方法2：取本品，研细，精密加入甲醇回流提取，放冷，精密加入25％盐酸溶液，摇匀，置水浴中加热回流，迅速冷却至室温，用甲醇定容，摇匀，用微孔滤膜0.45μm滤过，取滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液及方法1、2制备的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算总黄酮醇苷的含量。结果见下表。

结果表明，方法1操作过程中，由于滤过比较困难，造成主要成分损失较大，方法2先将样品水解，提取主要成分，提取完全，明显优于方法1，所以采用方法2作为供试品制备方法。

2、流动相的选择：

流动相1：以0.4％磷酸溶液、甲醇不同比例的混合溶液为流动相。

流动相2：以甲醇、磷酸二氢钾溶液不同比例的混合溶液为流动相。

结果：以甲醇：0.01-0.1mol磷酸二氢钾溶液＝1-9∶9-1，用磷酸调pH至2-5为流动相；阴性样品色谱图在槲皮素峰、山柰素峰、异鼠李素峰位置处无假阳性峰，槲皮素峰、山柰素峰、异鼠李素峰和相近的杂质峰分离完全(分离度>1.5)，且山柰素与异鼠李素的分离度应大于1.5。最佳流动相为：以甲醇：0.05mol磷酸二氢钾溶液＝50∶50，磷酸调pH至3.5。

3、重现性试验

取药品，按本发明中含量测定项下供试液的制备方法，分别制备6份供试液，测定，计算总黄酮苷的平均值及相对标准偏差。结果见下表：

结果表明，该方法重现性良好。

4、精密度试验：取对照品溶液20μl，连续进样5次，计算其峰面积的平均值及相对标准偏差。结果见下表：

结果表明，精密度良好。

5、回收率试验

对照品的制备：取槲皮素对照品5.38mg置50ml量瓶，加甲醇溶解，摇匀，定容至刻度，作为对照品储备液，精密吸取5ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为槲皮素的对照品；取山柰素对照品6.36mg置50ml量瓶，加甲醇溶解，摇匀，定容至刻度，作为对照品储备液，精密吸取5ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为山柰素的对照品；取异鼠李素对照品4.12mg置100ml量瓶，加甲醇溶解，摇匀，定容至刻度，精密吸取25ml置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品储备液，精密吸取5ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为异鼠李素的对照品。

供试品的制备：取本品细粉适量，精密称定9份，分别置100ml锥形瓶中，各加入甲醇20ml及槲皮素对照品储备液1ml、2ml、3ml各3份，按照总黄酮醇苷含量测定项下供试品溶液的制备方法操作，作为槲皮素回收测定供试品。

同法制备山柰素及异鼠李素回收测定供试品。

依法测定，结果见下表。

根据实验结果可知，该方法可行。

二、萜类内酯含量测定方法研究

1、供试品溶液制备方法研究：

超声处理、索氏提取、加热回流三种方法的比较试验表明，三种样品处理方法对含量测定没有显著性差异，因为超声处理相对操作简单方便，所以选择该方法。结果见下表。

2、流动相的选择：

流动相1：以甲醇、水不同比例的混合溶液为流动相。

流动相2：以正丙醇、四氢呋喃、水不同比例的混合溶液为流动相。

结果：以正丙醇：四氢呋喃：水＝0.5-5∶5-30∶65-94.5为流动相，阴性样品色谱图在白果内酯峰、银杏内酯A峰、银杏内酯B峰和银杏内酯C峰位置处无假阳性峰；白果内酯峰、银杏内酯A峰、银杏内酯B峰、银杏内酯C峰和相近的杂质峰分离完全(分离度>1.5)，且白果内酯与银杏内酯C的分离度应大于1.5。最佳流动相为：正丙醇：四氢呋喃：水＝1∶15∶84。

3、重现性试验

取药品，按本发明中含量测定项下供试液的制备方法，分别制备6份供试液，测定，计算总黄酮苷的平均值及相对标准偏差。结果见下表：

结果表明，该方法重现性良好。

4、精密度试验：取供试品溶液，连续进样5次，每次10μl，计算银杏内酯的平均峰面积及RSD，结果见下表。

结果表明，实验方法具有良好的重复性。

5、回收率试验

对照品溶液的制备：分别精密称取银杏内酯A，B，C及白果内酯对照品适量，加甲醇制成每1ml各含1mg，1mg，1mg，2mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取批号为031210的供试品20片，精密称定，研细，精密称取约相当于萜类内酯25mg的粉末，共称定6份，再分别加入银杏内酯A，B，C及白果内酯对照品贮备液5ml(精密称取银杏内酯A，B，C及白果内酯对照品适量，加甲醇制成每1ml各含1mg，1mg，1mg，2mg的溶液，即得)。依法操作。

测定法：分别精密取对照品溶液10μl，15μl；取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算银杏内酯A，B，C及白果内酯的含量，即得。计算平均回收率及RSD。结果见下表：

三、银杏叶提取物薄层鉴别研究

供试品溶液制备方法一：取本品，研细，加正丁醇15ml，置水浴中温浸15分钟并时时振摇，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品液。另取空白辅料适量，同法制成空白阴性对照液。

供试品溶液制备方法二：取本品，研细，加25％HCL：甲醇＝1：4的混合溶液，加热回流1小时，滤过，滤液加30ml的蒸馏水，后蒸至20ml，用乙醚提取3次，每次15ml，合并乙醚液，用水洗涤3次，每次20ml，蒸干，残渣加1ml甲醇使溶解，作为供试品液；另取空白辅料适量，同法制成空白阴性对照液。

展开剂选择：分别以醋酸乙酯、丁酮、甲醇、水不同比例的混合溶液；以甲苯、乙酸乙酯、丙酮、甲酸不同比例的混合溶液为展开剂。

结果：采用方法二制备供试品溶液，以甲苯：乙酸乙酯：丙酮：甲酸＝1-20：0.1-5：0.1-5：0.05-0.5为展开剂，分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为甲苯：乙酸乙酯：丙酮：甲酸＝9：2：0.5：0.2。

四、萜类内酯薄层鉴别研究

供试品溶液制备方法一：取本品20片，研细，置于滤纸筒中，烧瓶中加60ml丙酮，于水浴中进行索氏提取2小时，取出，在真空旋转蒸发器中减压浓缩至干，残渣先用醋酸甲酯20ml溶解，加水10ml萃取，收集醋酸甲酯层液。在水层中加醋酸甲酯20ml进行第二次萃取，收集醋酸甲酯层液，并与前一次提取液合并，于真空旋转蒸发器中减压浓缩至干，最后残渣用丙酮溶解，滤过，收集滤液，即得。

供试品溶液制备方法二：取本品20片，研细，精密加入甲醇50ml。称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，离心，精密量取上清液20ml，回收甲醇，残渣加水10ml，置水浴中温热使溶散，加2％盐酸溶液2滴，用醋酸乙酯振摇提取4次(15ml、10ml、10ml、10ml)，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，再用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次20ml，合并水洗液，用醋酸乙酯10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣用丙酮溶解，摇匀，即得。

展开剂选择：分别以甲苯、醋酸乙酯、丙酮、甲醇不同比例的混合溶液；以甲苯、醋酸乙酯、甲醇不同比例的混合溶液；以环己烷、醋酸乙酯、丙酮、水不同比例的混合溶液为展开剂。

结果：采用方法二制备供试品溶液，以甲苯：醋酸乙酯：丙酮：甲醇＝5-20∶1-10∶1-10∶0.1-1为展开剂，分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为甲苯：醋酸乙酯：丙酮：甲醇＝10∶5∶5∶0.6。

本发明的优点在于：本发明的质量控制方法通过使用高效液相色谱法测定有效成分的含量；利用薄层色谱法鉴别该其中的有效成分，形成了新的质量控制方法(标准)。该方法保证了本发明的制剂的质量检测标准能够较全面有效控制制剂的质量特征，具有准确性和先进性，可作为质量控制和考察工艺的稳定性的有效技术手段。对提高产品质量有重大意义。

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1：

1000片口腔崩解片配方：

银杏提取物                      150g

乙基纤维素                      20g

甘露醇                          58g

微晶纤维素                      40g

交联羧甲基纤维素钠(CCN_z)        16g

枸橼酸                          5g

碳酸氢钠                        5g

阿司帕坦                        2g

薄荷香精                        2g

硬脂酸镁                        2g

质量控制方法如下：

性状为：本品为口腔崩解片，药物显白色和咖啡色斑点相间，能在口腔中迅速崩解，无明显苦味和沙砾感；

鉴别包括：

(1)取本品，约相当于含总黄酮醇苷30mg，研细，加25％HCL：甲醇＝1：4的混合溶液20ml，加热回流1小时，滤过，滤液加30ml的蒸馏水，后蒸至20ml，用乙醚提取3次，每次15ml合并乙醚液，用水洗涤3次，每次20ml，蒸干，残渣加1ml甲醇使溶解，作为供试品液；另取银杏叶对照提取物0.1g，同法制成对照提取物溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：丙酮：甲酸＝9：2：0.5：0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，分别置日光及紫外灯254nm或365nm下检视；供试品色谱中，在与对照提取物色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(2)照薄层色谱法试验，吸取含量测定项下的萜类内酯供试品溶液和对照品溶液各15μl，分别点于同一以含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：醋酸乙酯：丙酮：甲醇＝10：5：5：0.6为展开剂，在15℃以下展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏15分钟，在140～160℃加热30分钟，放冷，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

检查包括：

黄酮苷元峰面积比：按含量测定项下的总黄酮醇苷色谱计算，槲皮素与山柰素的峰面积比应为0.8~1.5；

崩解时限：取50ml的烧杯6只，置37℃的水浴中，各加水2ml，放置10分钟，使温度平衡，取本品6片分别加入每只烧杯中，计时，轻轻摇动烧杯，以能判断出未崩解的片芯为准，测定完全崩解的时间，应在60秒内崩解；如有一片崩解时间超过60秒，但不超过90秒，应另取6片重新测定，12片中崩解时间超过60秒，但不超过90秒的片剂不得多于2片；

其他：应符合中国药典片剂项下有关的各项规定；

含量测定包括：

总黄酮醇苷：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.05mol磷酸二氢钾溶液＝50∶50，磷酸调pH至3.5为流动相；检测波长为360nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山柰素与异鼠李素的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素、山柰素和异鼠李素对照品，各加甲醇制成每1ml分别含0.03mg、0.03mg和0.02mg的溶液，即得对照品溶液；取本品10片，精密称定，研细，取相当于总黄酮醇苷9.6mg的细粉，置100ml锥形瓶中，加入甲醇20ml，回流提取20分钟，放冷，加入25％盐酸溶液5ml，摇匀，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.45μm滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮醇苷的含量；本品每片含总黄酮醇苷不得少于9.6mg；

总黄酮醇苷含量＝槲皮素含量×2.51+山柰素含量×2.51+异鼠李素×2.51

萜类内酯：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以正丙醇：四氢呋喃：水＝1∶15∶84为流动相；用蒸发光散射检测器；理论板数按白果内酯峰计算应不低于2500，白果内酯与银杏内酯C的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品，各加甲醇制成每1ml分别含2mg、1mg、1mg、和1mg的混合溶液，即得对照品溶液；取本品20片，精密称定，研细，取约相当于萜类内酯19.2mg的粉末，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液20ml，回收甲醇，残渣加水10ml，置水浴中温热使溶散，加2％盐酸溶液2滴，用乙酸乙酯振摇提取4次，分别为5ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯10ml洗涤；合并乙酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次20ml，合并水洗液，用乙酸乙酯10ml洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至于，残渣用丙酮溶解并转移至5ml量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.45μm滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液10μl、15μl，供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量；本品每片含萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量之和计不得少于2.4mg。

实施例2：

1000片口腔崩解片配方：

银杏叶提取物                         40.0g

聚丙烯酸树脂IV                       10.0g

乙基纤维素                           10.0g

甘露醇                               100.0g

羧甲淀粉钠                           2.0g

交联聚乙烯吡咯烷酮                   20.0g

低取代羟丙基纤维素                   25.0g

微晶纤维素                           15g

阿司帕坦                             5.0g

微粉硅胶                             10g

硬脂酸镁                 2.5g

质量控制方法如下：

性状为：本品为口腔崩解片，药物显白色和咖啡色斑点相间，能在口腔中迅速崩解，无明显苦味和沙砾感；

鉴别包括：

(1)取本品，约相当于含总黄酮醇苷50mg，研细，加50％HCL：甲醇＝9：1的混合溶液100ml，加热回流5小时，滤过，滤液加50ml的蒸馏水，后蒸至30ml，用乙醚提取6次，合并乙醚液，用水洗涤5次，蒸干，残渣加3ml甲醇使溶解，作为供试品液；另取银杏叶对照提取物0.5g，同法制成对照提取物溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：丙酮：甲酸＝20：0.1：5：0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％三氯化铝乙醇溶液，分别置日光及紫外灯500nm下检视；供试品色谱中，在与对照提取物色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(2)照薄层色谱法试验，吸取“含量测定”项下的萜类内酯供试品溶液和对照品溶液各25μl，分别点于同一以含10％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：醋酸乙酯：丙酮：甲醇＝20：10：10：1为展开剂，在20℃以下展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏30分钟，在160℃加热10分钟，放冷，置紫外光灯500nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

检查包括：

黄酮苷元峰面积比：按“含量测定”项下的总黄酮醇苷色谱计算，槲皮素与山柰素的峰面积比应为0.5～1.0；

崩解时限：取50ml的烧杯6只，置37℃的水浴中，各加水10ml，放置20分钟，使温度平衡，取本品6片分别加入每只烧杯中，计时，轻轻摇动烧杯，以能判断出未崩解的片芯为准，测定完全崩解的时间，应在60秒内崩解；如有一片崩解时间超过60秒，但不超过90秒，应另取6片重新测定，12片中崩解时间超过60秒，但不超过90秒的片剂不得多于2片；

其他：应符合中国药典片剂项下有关的各项规定；

含量测定包括：

总黄酮醇苷：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.1mol磷酸二氢钾溶液＝1∶9，用磷酸调pH至5为流动相；检测波长为500nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山柰素与异鼠李素的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素、山柰素和异鼠李素对照品，各加甲醇制成每1ml分别含0.1mg、0.1mg和0.05mg的溶液，即得对照品溶液；取本品10片，精密称定，研细，取相当于总黄酮醇苷9.6mg的细粉，加入甲醇30ml，回流提取50分钟，放冷，加入25％盐酸溶液10ml，摇匀，置水浴中加热回流60分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至50ml，摇匀，用0.65μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮醇苷的含量；本品每片含总黄酮醇苷不得少于9mg；

总黄酮醇苷含量＝槲皮素含量×2.51+山柰素含量×2.51+异鼠李素×2.51

萜类内酯：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以正丙醇：四氢呋喃：水＝5∶5∶94.5为流动相；用蒸发光散射检测器；理论板数按白果内酯峰计算应不低于2500，白果内酯与银杏内酯C的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品，各加甲醇制成每1ml分别含3mg、2mg、2mg、和2mg的混合溶液，即得对照品溶液；取本品20片，精密称定，研细，取约相当于萜类内酯19.2mg的粉末，精密称定，精密加入甲醇100ml，称定重量，超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液30ml，回收甲醇，残渣加水20ml，置水浴中温热使溶散，加5％盐酸溶液1滴，用乙酸乙酯振摇提取8次，合并提取液，用10％醋酸钠溶液10ml洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯20ml洗涤；合并乙酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤5次，合并水洗液，用乙酸乙酯20ml洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣用丙酮溶解并转移至5ml量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，用0.65μm的滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液10μl、15μl，供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量；本品每片含萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量之和计不得少于2mg。

实施例3：

1000片口腔崩解片配方：

银杏提取物                              100g

乙基纤维素                              15g

甘露醇                                  50g

微晶纤维素                              35g

交联羧甲基纤维素钠(CCN_z)                10g

枸橼酸                                  5g

碳酸氢钠                                5g

阿司帕坦                                5g

薄荷香精                                3g

微粉硅胶                                10g

硬脂酸镁                                3g

质量控制方法如下：

性状为：本品为口腔崩解片，药物显白色和咖啡色斑点相间，能在口腔中迅速崩解，无明显苦味和沙砾感；

鉴别包括：

(1)取本品，约相当于含总黄酮醇苷10mg，研细，加10％HCL：甲醇＝1：9的混合溶液10-ml，加热回流0.5小时，滤过，滤液加10ml的蒸馏水，后蒸至5ml，用乙醚提取1次，合并乙醚液，用水洗涤1次，蒸干，残渣加0.5ml甲醇使溶解，作为供试品液；另取银杏叶对照提取物0.05g，同法制成对照提取物溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：丙酮：甲酸＝1：5：0.1：0.05为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，分别置日光及紫外灯200nm下检视；供试品色谱中，在与对照提取物色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(2)照薄层色谱法试验，吸取“含量测定”项下的萜类内酯供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一以含1％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：醋酸乙酯：丙酮：甲醇＝5∶1∶1∶0.1为展开剂，在20℃以下展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏5分钟，在140℃加热60分钟，放冷，置紫外光灯200nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

检查包括：

黄酮苷元峰面积比；按“含量测定”项下的总黄酮醇苷色谱计算，槲皮素与山柰素的峰面积比应为1.0～2.0；

崩解时限：取50ml的烧杯6只，置37℃的水浴中，各加水10ml，放置5分钟，使温度平衡，取本品6片分别加入每只烧杯中，计时，轻轻摇动烧杯，以能判断出未崩解的片芯为准，测定完全崩解的时间，应在60秒内崩解；如有一片崩解时间超过60秒，但不超过90秒，应另取6片重新测定，12片中崩解时间超过60秒，但不超过90秒的片剂不得多于2片；

其他：应符合中国药典片剂项下有关的各项规定；

含量测定包括：

总黄酮醇苷：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.01mol磷酸二氢钾溶液＝9∶1，用磷酸调pH至2为流动相；检测波长为200nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山奈素与异鼠李素的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素、山柰素和异鼠李素对照品，各加甲醇制成每1ml分别含0.01mg、0.01mg和0.01mg的溶液，即得对照品溶液；取本品10片，精密称定，研细，取相当于总黄酮醇苷9.6mg的细粉，加入甲醇10ml，回流提取10分钟，放冷，加入25％盐酸溶液1ml，摇匀，置水浴中加热回流10分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至50ml，摇匀，用0.25μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各25μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮醇苷的含量；本品每片含总黄酮醇苷不得少于9mg；

总黄酮醇苷含量＝槲皮素含量×2.51+山柰素含量×2.51+异鼠李素×2.51

萜类内酯：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以正丙醇：四氢呋喃：水＝0.5∶30∶65为流动相；用蒸发光散射检测器；理论板数按白果内酯峰计算应不低于2500，白果内酯与银杏内酯C的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品，各加甲醇制成每1ml分别含1mg、0.5mg、0.5mg、和0.5mg的混合溶液，即得对照品溶液；取本品20片，精密称定，研细，取约相当于萜类内酯19.2mg的粉末，精密称定，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液10ml，回收甲醇，残渣加水5ml，置水浴中温热使溶散，加1％盐酸溶液5滴，用乙酸乙酯振摇提取2次，合并提取液，用1％醋酸钠溶液30ml洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯5ml洗涤；合并乙酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤1次，合并水洗液，用乙酸乙酯5ml洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣用丙酮溶解并转移至5ml量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，用0.2μm的滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液10μl、15μl，供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量；本品每片含萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量之和计不得少于2mg。

Claims (6)

1、一种银杏叶口腔崩解片的检测方法，包括对性状进行观察，根据药典的方法对内容物进行检查，对内容物中的总黄酮醇苷和萜类内酯进行鉴别，对含有的总黄酮醇苷与萜类内酯进行含量测定；其特征在于，

所述包括对性状进行观察，步骤为：本品为口腔崩解片，药物显白色和咖啡色斑点相间，能在口腔中迅速崩解，无明显苦味和沙砾感；

所述根据药典的方法对内容物进行检查，步骤为：

黄酮苷元峰面积比：按“含量测定”项下的总黄酮醇苷色谱计算，槲皮素与山柰素的峰面积比应为0.5～2.0；

崩解时限：取50ml的烧杯6只，置37℃的水浴中，各加水1-10ml，放置5-20分钟，使温度平衡，取本品6片分别加入每只烧杯中，计时，轻轻摇动烧杯，以能判断出未崩解的片芯为准，测定完全崩解的时间，应在60秒内崩解；如有一片崩解时间超过60秒，但不超过90秒，应另取6片重新测定，12片中崩解时间超过60秒，但不超过90秒的片剂不得多于2片；

其他：应符合中国药典片剂项下有关的各项规定；

所述对内容物中的总黄酮醇苷和萜类内酯进行鉴别，步骤为：

(1)取本品，研细，加10-50％HCL：甲醇＝1-9：9-1的混合溶液，加热回流提取，滤过，滤液加蒸馏水，水浴使挥发部分溶液，用乙醚提取1-6次，合并乙醚液，用水洗涤1-5次，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品液；另取银杏叶对照提取物，同法制成对照提取物溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：丙酮：甲酸＝1-20：0.1-5：0.1-5：0.05-0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-10％三氯化铝乙醇溶液，分别置日光及紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照提取物色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(2)照薄层色谱法试验，吸取“含量测定”项下的萜类内酯供试品溶液和对照品溶液，分别点于同一以含1-10％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯∶醋酸乙酯：丙酮：甲醇＝5-20∶1-10∶1-10∶0.1-1为展开剂，在20℃以下展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏，在140～160℃加热，放冷，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

所述对含有的总黄酮醇苷与萜类内酯进行含量测定，步骤为：

总黄酮醇苷的测定：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.01-0.1mol磷酸二氢钾溶液＝1-9∶9-1，用磷酸调pH至2-5为流动相；检测波长为200-500nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山柰素与异鼠李素的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素、山柰素和异鼠李素对照品，各加甲醇溶解，即得对照品溶液；取本品，研细，加入甲醇，回流提取，放冷，加入25％盐酸溶液，摇匀，置水浴中加热回流，迅速冷却至室温，用甲醇稀释，摇匀，用0.65μm或小于0.65μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮醇苷的含量；本品每片含总黄酮醇苷不得少于9mg；

总黄酮醇苷含量＝槲皮素含量×2.51+山柰素含量×2.51+异鼠李素×2.51

萜类内酯的测定：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以正丙醇：四氢呋喃：水＝0.5-5∶5-30∶65-94.5为流动相；用蒸发光散射检测器；理论板数按白果内酯峰计算应不低于2500，白果内酯与银杏内酯C的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品，各加甲醇溶解，即得对照品溶液；取本品，研细，精密加入甲醇，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液，回收甲醇，残渣加水，置水浴中温热使溶散，加1-5％盐酸溶液，用乙酸乙酯振摇提取2-8次，合并提取液，用1-10％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯洗涤；合并乙酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤1-5次，合并水洗液，用乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣用丙酮溶解，摇匀，用0.65μm或小于0.65μm的滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量；本品每片含萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量之和计不得少于2mg。

2、权利要求1的方法，其特征在于，

对性状进行观察的步骤为：本品为口腔崩解片，药物显白色和咖啡色斑点相间，能在口腔中迅速崩解，无明显苦味和沙砾感；

对内容物进行鉴别步骤为：

(1)取本品相当于含总黄酮醇苷10-50mg，研细，加10-50％HCL：甲醇＝1-9：9-1的混合溶液10-100ml，加热回流0.5-5小时，滤过，滤液加10-50ml的蒸馏水，后蒸至5-30ml，用乙醚提取1-6次，合并乙醚液，用水洗涤1-5次，蒸干，残渣加0.5-3ml甲醇使溶解，作为供试品液；另取银杏叶对照提取物0.05-0.5g，同法制成对照提取物溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：丙酮：甲酸＝1-20：0.1-5：0.1-5：0.05-0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-10％三氯化铝乙醇溶液，分别置日光及紫外灯200-500nm下检视；供试品色谱中，在与对照提取物色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(2)照薄层色谱法试验，吸取“含量测定”项下的萜类内酯供试品溶液和对照品溶液各5-25μl，分别点于同一以含1-10％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：醋酸乙酯：丙酮：甲醇＝5-20∶1-10∶1-10∶0.1-1为展开剂，在20℃以下展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏5-30分钟，在140～160℃加热10-60分钟，放冷，置紫外光灯200-500nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查步骤为：

黄酮苷元峰面积比：按“含量测定”项下的总黄酮醇苷色谱计算，槲皮素与山柰素的峰面积比应为0.5～2.0；

崩解时限：取50ml的烧杯6只，置37℃的水浴中，各加水1-10ml，放置5-20分钟，使温度平衡，取本品6片分别加入每只烧杯中，计时，轻轻摇动烧杯，以能判断出未崩解的片芯为准，测定完全崩解的时间，应在60秒内崩解；如有一片崩解时间超过60秒，但不超过90秒，应另取6片重新测定，12片中崩解时间超过60秒，但不超过90秒的片剂不得多于2片；

其他：应符合中国药典片剂项下有关的各项规定；

对有效成分进行含量测定步骤为：

总黄酮醇苷：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.01-0.1mol磷酸二氢钾溶液＝1-9∶9-1，用磷酸调pH至2-5为流动相；检测波长为200-500nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山柰素与异鼠李素的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素、山柰素和异鼠李素对照品，各加甲醇制成每1ml分别含0.01-0.1mg、0.01-0.1mg和0.01-0.05mg的溶液，即得对照品溶液；取本品10片，精密称定，研细，取相当于总黄酮醇苷9.6mg的细粉，加入甲醇10-30ml，回流提取10-50分钟，放冷，加入25％盐酸溶液1-10ml，摇匀，置水浴中加热回流10-60分钟，迅速冷却至室温，用甲醇稀释至50ml，摇匀，用0.65μm或小于0.65μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-25μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮醇苷的含量；本品每片含总黄酮醇苷不得少于9mg；

总黄酮醇苷含量＝槲皮素含量×2.51+山柰素含量×2.51+异鼠李素×2.51

萜类内酯：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以正丙醇：四氢呋喃：水＝0.5-5∶5-30∶65-94.5为流动相；用蒸发光散射检测器；理论板数按白果内酯峰计算应不低于2500，白果内酯与银杏内酯C的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品，各加甲醇制成每1ml分别含1-3mg、0.5-2mg、0.5-2mg、和0.5-2mg的混合溶液，即得对照品溶液；取本品20片，精密称定，研细，取相当于萜类内酯19.2mg的粉末，精密称定，精密加入甲醇20-100ml，称定重量，超声处理10-60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液10-30ml，回收甲醇，残渣加水5-20ml，置水浴中温热使溶散，加1-5％盐酸溶液1-5滴，用乙酸乙酯振摇提取2-8次，合并提取液，用1-10％醋酸钠溶液10-30ml洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯5-20ml洗涤；合并乙酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤1-5次，合并水洗液，用乙酸乙酯5-20ml洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣用丙酮溶解并转移至5ml量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，用0.65μm或小于0.65μm的滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液10μl、15μl，供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量；本品每片含萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量之和计不得少于2mg。

3、权利要求1的方法，其特征在于，

步骤如下：

性状为：本品为口腔崩解片，药物显白色和咖啡色斑点相间，能在口腔中迅速崩解，无明显苦味和沙砾感；

鉴别包括：

(1)取本品相当于含总黄酮醇苷30mg，研细，加25％HCL：甲醇＝1：4的混合溶液20ml，加热回流1小时，滤过，滤液加30ml的蒸馏水，后蒸至20ml，用乙醚提取3次，每次15ml合并乙醚液，用水洗涤3次，每次20ml，蒸干，残渣加1ml甲醇使溶解，作为供试品液；另取银杏叶对照提取物0.1g，同法制成对照提取物溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：丙酮：甲酸＝9：2：0.5：0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，分别置日光及紫外灯254nm或365nm下检视；供试品色谱中，在与对照提取物色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(2)照薄层色谱法试验，吸取“含量测定”项下的萜类内酯供试品溶液和对照品溶液各15μl，分别点于同一以含4％醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯：醋酸乙酯：丙酮：甲醇＝10∶5∶5∶0.6为展开剂，在15℃以下展开，取出，晾干，用醋酐蒸汽熏15分钟，在140～160℃加热30分钟，放冷，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

检查包括：

黄酮苷元峰面积比：按“含量测定”项下的总黄酮醇苷色谱计算，槲皮素与山柰素的峰面积比应为0.8～1.5；

崩解时限：取50ml的烧杯6只，置37℃的水浴中，各加水2ml，放置10分钟，使温度平衡，取本品6片分别加入每只烧杯中，计时，轻轻摇动烧杯，以能判断出未崩解的片芯为准，测定完全崩解的时间，应在60秒内崩解；如有一片崩解时间超过60秒，但不超过90秒，应另取6片重新测定，12片中崩解时间超过60秒，但不超过90秒的片剂不得多于2片；

其他：应符合中国药典片剂项下有关的各项规定；

含量测定包括：

总黄酮醇苷：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.05mol磷酸二氢钾溶液＝50∶50，磷酸调pH至3.5为流动相；检测波长为360nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山柰素与异鼠李素的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素、山柰素和异鼠李素对照品，各加甲醇制成每1ml分别含0.03mg、0.03mg和0.02mg的溶液，即得对照品溶液；取本品10片，精密称定，研细，取相当于总黄酮醇苷9.6mg的细粉，置100ml锥形瓶中，加入甲醇20ml，回流提取20分钟，放冷，加入25％盐酸溶液5ml，摇匀，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.45μm滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮醇苷的含量；本品每片含总黄酮醇苷不得少于9.6mg；

总黄酮醇苷含量＝槲皮素含量×2.51+山柰素含量×2.51+异鼠李素×2.51

萜类内酯：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以正丙醇：四氢呋喃：水＝1∶15∶84为流动相；用蒸发光散射检测器；理论板数按白果内酯峰计算应不低于2500，白果内酯与银杏内酯C的分离度应大于1.5；分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品，各加甲醇制成每1ml分别含2mg、1mg、1mg、和1mg的混合溶液，即得对照品溶液；取本品20片，精密称定，研细，取相当于萜类内酯19.2mg的粉末，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液20ml，回收甲醇，残渣加水10ml，置水浴中温热使溶散，加2％盐酸溶液2滴，用乙酸乙酯振摇提取4次，分别为5ml、10ml、10ml、10ml，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯10ml洗涤；合并乙酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次20ml，合并水洗液，用乙酸乙酯10ml洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣用丙酮溶解并转移至5ml量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.45μm滤过，取滤液，即得供试品溶液；

分别精密吸取对照品溶液10μl、15μl，供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量；本品每片含萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量之和计不得少于2.4mg。

4、权利要求1-3的方法，其特征在于，所述银杏叶口腔崩解片由银杏叶提取物和适合制成口腔崩解片的药用辅料制备而成。

5、权利要求4的方法，其特征在于，其中所述银杏叶提取物和药用辅料的比例为1-10：10-1。

6、权利要求1-3的方法，其特征在于，所述银杏叶提取物是符合药品标准的产品。