CN100520398C - 一种骨筋丸制剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种骨筋丸制剂的质量控制方法，该方法采用照薄层色谱法对甘草、益母草、徐长卿进行鉴别，采用高效液相色谱法对甘草酸成分进行含量测定。该质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性均好，确保产品质量的安全、均一、稳定、有效、可控。

Description

骨筋丸制剂的质量控制方法

技术领域：

本发明涉及一种骨筋丸制剂的质量控制方法，属于药品技术的领域。

技术背景：

肥大性脊椎炎，颈椎病是危害当今人民身体健康的一种常见病。

骨筋丸制剂由乳香、没药、白芍、延胡索(醋制)、三七、木香、红花、郁金、独活、牛膝、秦艽、桂枝、血竭、马钱子(制)共十四味药组成；具有活血化瘀，舒筋通络，祛风止痛的功效，用于治疗肥大性脊椎炎，颈椎病、跟骨刺，增生性关节炎，大骨节病等症。其中“骨筋丸胶囊”、“骨筋丸片”在部颁中药成方制剂第十三册上均有记载，该药物在临床上应用多年，在治疗肥大性脊椎炎，颈椎病、跟骨刺，增生性关节炎，大骨节病等症方面取得比较满意的治疗效果，但经我们研究发现，现有骨筋丸制剂存在质量控制标准简单落后，产品质量不易控制的缺点。由于白芍、三七、延胡索、独活、秦艽、马钱子均为骨筋丸制剂中起主要作用的药物，其中马钱子还是毒性药材，而现有制剂质量标准中仅对生物碱类药材和独活药材进行显色反应鉴别，并没有对其他药材进行含量测定或鉴别研究，故现有质量控制方法不能有效控制骨筋丸制剂的质量，从而将影响产品的生产和保证质量。

为有效控制产品质量，我们建立了骨筋丸制剂的新的质量控制方法，该方法采用照薄层色谱法对甘草、益母草、徐长卿进行鉴别，采用高效液相色谱法对甘草酸成分进行含量测定。该质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性均好，确保产品质量的“安全、均一、稳定、有效、可控”。

发明内容：

本发明的目的在于：提供一种骨筋丸制剂的质量控制方法，所述骨筋丸中药制剂是口服制剂，优选的是胶囊剂、片剂或颗粒剂。

本发明的骨筋丸制剂其配方和制法如下：

按照重量组分计算，它主要由乳香20-35份、没药30-60份、白芍70-130份、延胡索(醋制)20-35份、三七30-60份、木香20-35份、红花30-60份、郁金70-130份、独活160-220份、牛膝30-60份、秦艽160-220份、桂枝30-60份、血竭20-35份、马钱子(制)20-35份制备而成。

优选的是，按照重量组分计算，它主要由乳香27份、没药46份、白芍91份、延胡索(醋制)27份、三七46、份木香27份、红花46份、郁金91份、独活183份、牛膝46份、秦艽183份、桂枝46份、血竭27份、马钱子(制)27份制备而成

以上组成可制成药物制剂1000剂，所述1000剂指，制成的成品药物制剂，如制成胶囊制剂1000粒，片剂1000片，颗粒剂1000g，液体制剂1000ml等，

以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减少，如大规模生产可以以公斤为单位，或以吨为单位。

本发明的制剂的制备方法可以采用以下方法：

通过将上述配方的中药原料经过提取或其他方式加工，制成药物活性物质，随后，以该物质为原料，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成胶囊、片剂、口服液、糖浆、颗粒剂。所述活性物质可以通过选自以下方式的方法得到，如：通过粉碎、压榨、煅烧、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、层析等方法得到，这些活性物质可以是浸膏形式的物质，可以是干浸膏也可以是流浸膏，还可以是高纯度提取物，根据制剂的不同需要决定制成不同的浓度。

优选的制备方法如下：

本发明所述制剂均按照部颁中药成方制剂上关于“骨筋丸胶囊”、“骨筋丸片”记载的方法制备胶囊和丸剂，片剂、颗粒剂、口服液等也可根据以上方法按照常规技术制备。

本发明的制剂，在制成制剂时根据需要可以加入药物可接受的载体，这些载体可以是任何适合制成抗栓制剂的载体，如：苯甲酸或钾盐、甘露醇、山梨醇、山梨酸或钾盐、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、尼泊尔甲酯、尼泊尔乙酯、尼泊尔丙酯、尼泊尔丁酯、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素A、维生素C、维生素E、维生素D、氮酮、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、丙二醇、乙醇、土温60-80、司盘-80、蜂蜡、羊毛脂、液体石蜡、十六醇、没食子酸酯类、琼脂、三乙醇胺、碱性氨基酸、尿素、尿囊素、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β—环糊精、磷脂类材料等。

本发明提供的是针对以上骨筋丸制剂的质量控制方法，为控制骨筋丸制剂的质量。针对其特点及本发明配方，我们提供了如下质量控制方法：

对性状进行观察，对内容物进行鉴别，根据药典的方法对内容物进行检查，对含有的龙胆苦苷和士的宁进行含量测定。

其中对性状进行观察，步骤是：

对于胶囊剂：内容物显棕色；气香，味苦、涩；

对于片剂：药物显棕色；气香，味苦、涩；

对于颗粒剂：产品为棕色的颗粒；

对内容物进行鉴别，步骤是：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色；下皮厚壁细胞绿黄色，细胞多角形、类方形或长条形，壁稍弯曲，木化，有的成连珠状增厚，纹孔细密；石细胞淡黄色，类圆形或长圆形，直径约至60μm，壁较厚，纹孔细密；螺纹导管直径16～32μm；淀粉粒甚多，单粒圆形、半圆形或圆多角形，直径4～30μm；复粒由2～10余分粒组成；树脂道碎片含黄色分泌物；梯纹、网纹及螺纹导管直径15～55μm；草酸钙簇晶少见，直径50～80μm；非腺毛单细胞，基部膨大似石细胞，壁极厚，多碎断，木化；胚乳细胞多角形，壁厚，内含脂肪油及糊粉粒；

(2)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加乙醇，温浸，滤过，取滤液，蒸干，加稀盐酸使成酸性，滤过，滤液加碘化铋钾试液，即生成橙红色沉淀；另取滤液，蒸干，加沸水使溶解，趁热滤过，放冷，用氯仿提取1-6次，弃去氯仿层，水溶液用醋酸乙酯提取，提取液点于层析滤纸上，置紫外光灯365nm下观察，显亮蓝色荧光；

(3)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，滤过，滤液用乙醚提取至乙醚层无色，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，水洗涤1-6次，弃去水液，蒸干，残渣加乙醇使溶解，拌入中性氧化铝，水浴上搅拌干燥，装入预先填好的中性氧化铝小柱顶部，以甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液；另取白芍对照药材0.2-1g，加乙醇，振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿：丙酮：甲醇：冰醋酸＝1-10：0.5-5：0.5-5：0.1-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置具塞三角瓶中，加氨水搅拌润湿后，加乙醚，密塞，时时振摇，放置过夜，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸提取1-6次，合并醋酸层，用氨水调pH9～13，再以氯仿提取1-6次，合并氯仿液，用水洗涤1-5次，加无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材，同法制备对照药材溶液：再取延胡索乙素对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：乙醚：醋酸乙酯＝5-20：0.5-5：1-10为展开剂，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加石油醚(60～90℃)，密塞，超声处理，滤过，滤液作为供试品溶液；另取独活对照药材，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：醋酸乙酯＝1-9：9-1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查，步骤是：

应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定；

对含有的龙胆苦苷和士的宁进行含量测定，步骤是：

龙胆苦苷采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈：水＝3：5-8为流动相；流速：0.8-1.5ml/min；柱温：30-60℃；检测波长200-500nm；理论塔板数按龙胆苦苷峰计算，应不低于3000；精密称取龙胆苦苷对照品，用甲醇溶解，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂或颗粒剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用小于0.65μm的滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该制剂中，胶囊剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、片剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、颗粒剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于0.5mg/g；

士的宁采用高效液相色谱法，用硅胶为填充剂；以乙醚：甲醇或乙腈：二乙胺＝10-90：90-10：0.5-3为流动相；流速：0.8-1.5ml/min；柱温：30-60℃；检测波长200-500nm；理论塔板数以士的宁峰计，应不低于2000；精密称取士的宁对照品，用醋酸乙酯溶解，即得对照品溶液；分别取装量差异项下胶囊剂、片剂或颗粒剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿与浓氨试液，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取2-10次，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至8～12，用氯仿提取2-10次，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，摇匀，用小于0.65μm的滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该制剂中，胶囊剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、片剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、颗粒剂中含马钱子以士的宁计，应为0.08～0.25mg/g；

优选的方法为：

对性状进行观察，步骤是：

对于胶囊剂：内容物显棕色；气香，味苦、涩；

对于片剂：药物显棕色；气香，味苦、涩；

对于颗粒剂：产品为棕色的颗粒；

对内容物进行鉴别，步骤是：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色；下皮厚壁细胞绿黄色，细胞多角形、类方形或长条形，壁稍弯曲，木化，有的成连珠状增厚，纹孔细密；石细胞淡黄色，类圆形或长圆形，直径约至60μm，壁较厚，纹孔细密；螺纹导管直径16～32μm；淀粉粒甚多，单粒圆形、半圆形或圆多角形，直径4～30μm；复粒由2～10余分粒组成；树脂道碎片含黄色分泌物；梯纹、网纹及螺纹导管直径15～55μm；草酸钙簇晶少见，直径50～80μm；非腺毛单细胞，基部膨大似石细胞，壁极厚，多碎断，木化；胚乳细胞多角形，壁厚，内含脂肪油及糊粉粒；

(2)分别取胶囊剂、片剂1-5g；或取颗粒剂5-15g，加乙醇10-50ml，温浸10-60分钟，滤过，取滤液1-5ml，蒸干，加稀盐酸使成酸性，滤过，滤液加碘化铋钾试液1～5滴，即生成橙红色沉淀；另取滤液5-15ml，蒸干，加沸水10-20ml使溶解，趁热滤过，放冷，用氯仿提取1-6次，弃去氯仿层，水溶液用醋酸乙酯5-20ml提取，提取液点于层析滤纸上，置紫外光灯365nm下观察，显亮蓝色荧光；

(3)分别取胶囊剂、片剂1-5g，或取颗粒剂5-15g，加乙醇20-100ml，超声处理10-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10-30ml使溶解，滤过，滤液用乙醚提取至乙醚层无色，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，水洗涤1-6次，弃去水液，蒸干，残渣加乙醇0.5-3ml使溶解，拌入中性氧化铝，水浴上搅拌干燥，装入预先填好的中性氧化铝小柱顶部，以甲醇20-100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇溶解使成0.2-1ml，作为供试品溶液；另取白芍对照药材0.2-1g，加乙醇5-30ml，振摇3-15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5-2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各5-25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿：丙酮：甲醇：冰醋酸＝1-10：0.5-5：0.5-5：0.1-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)分别取胶囊剂、片剂1-5g；或取颗粒剂5-15g，置具塞三角瓶中，加氨水搅拌润湿后，加乙醚30-100ml，密塞，时时振摇，放置过夜，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸提取1-6次，合并醋酸层，用氨水调pH9～13，再以氯仿提取1-6次，合并氯仿液，用水洗涤1-5次，加无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材0.3-1g同法制备对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.3-1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-15μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：乙醚：醋酸乙酯＝5-20：0.5-5：1-10为展开剂，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)分别取胶囊剂、片剂0.5-3g；或取颗粒剂3-10g，加石油醚(60～90℃)2-20ml，密塞，超声处理2-20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取独活对照药材0.3-1g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：醋酸乙酯＝1-9：9-1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查，步骤是：

应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定；

对含有的龙胆苦苷和士的宁进行含量测定，步骤是：

龙胆苦苷采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈：水＝3：5-8为流动相；流速：0.8-1.5ml/min；柱温：30-60℃；检测波长200-500nm；理论塔板数按龙胆苦苷峰计算，应不低于3000；精密称取龙胆苦苷对照品，用甲醇溶解使每1ml中含龙胆苦苷0.03-0.1mg，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.1-1g；或取颗粒剂1-2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30-100ml，密塞，称定重量，超声处理5-50分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用小于0.65μm的滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3-15μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、片剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、颗粒剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于0.5mg/g；

士的宁采用高效液相色谱法，用硅胶为填充剂；以乙醚：甲醇或乙腈：二乙胺＝10-90：90-10：0.5-3为流动相；流速：0.8-1.5ml/min；柱温：30-60℃；检测波长200-500nm；理论塔板数以士的宁峰计，应不低于2000；精密称取士的宁对照品，用醋酸乙酯溶解制成每1ml含0.05-2mg的溶液，即得对照品溶液；分别取装量差异项下胶囊剂、片剂2-5g；或取颗粒剂5-15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿20-100ml与浓氨试液2-10ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置10-50小时，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液5-15ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取2-10次，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至8～12，用氯仿提取2-10次，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用小于0.65μm的滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3-25μl，注入液相色谱仪测定含量；该制剂中，胶囊剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、片剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、颗粒剂中含马钱子以士的宁计，应为0.08～0.25mg/g；

本发明的方法是经过研究得到的，本发明认为，秦艽为骨筋丸制剂中发挥主要作用的药物，其中龙胆苦苷为秦艽中主要有效成分，故本制剂应对秦艽中所含龙胆苦苷的含量进行测定。但是如何测定制剂中龙胆苦苷的含量是本发明的难点所在，经实验研究，我们选择高效液相色谱法，以甲醇或乙腈：水＝3：5-8为流动相测定制剂中龙胆苦苷的含量。另外马钱子也是本制剂中发挥主要作用的药物，且马钱子为毒性药材，如果制剂中马钱子含量控制不好，还会对患者产生不良影响。由于士的宁是马钱子中主要有效成分，故本发明中，应以士的宁作为检测指标，对制剂中马钱子的含量进行控制，经过研究，本发明采用高效液相色谱法，用硅胶为填充剂；以乙醚：甲醇或乙腈：二乙胺＝10-90：90-10：0.5-3为流动相测定制剂中士的宁的含量，结果，阴性样品色谱图在检测物质位置处无假阳性峰，检测物质和相近的杂质峰分离完全，分离度>1.5。

另外，由于本制剂中乳香、没药、延胡索、马钱子、三七、血竭以粉末入药，其中乳香、没药、血竭均为树脂分泌物，无明显显微特征，故本发明对制剂中延胡索、马钱子、三七进行粉末显微特征鉴别。另外，本发明还对制剂中独活药材和生物碱类药材进行显色反应鉴别。同时，本发明还对白芍、延胡索和独活进行薄层鉴别研究，并选择以白芍对照药材为对照，以氯仿：丙酮：甲醇：冰醋酸＝1-10：0.5-5：0.5-5：0.1-1为展开剂鉴别制剂中白芍药材；以延胡索对照药材为对照，以环己烷：乙醚：醋酸乙酯＝5-20：0.5-5：1-10为展开剂鉴别制剂中延胡索黄芩药材；以独活对照药材为对照，以环己烷：醋酸乙酯＝1-9：9-1为展开剂鉴别制剂中独活药材。结果其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。故采用本发明质量控制方法可有效控制这种骨筋丸制剂的质量，从而保证该制剂的临床疗效。

本发明的质量控制方法是经过大量的筛选得到的最佳方案，以下实验研究为本发明的优选过程。

一、龙胆苦苷含量测定方法研究

1、供试品溶液制备方法研究：

取药物，研细，分别以浸泡、水浴回流提取、超声波提取、索氏回流提取等方法提取1小时后测定其含量，结果见下表：

试验结果表明，浸泡提取没有对其制剂中龙胆苦苷提取完全，超声提取、水浴回流提取、索氏回流提取均能将制剂中龙胆苦苷提取完全，且三者相差极小，为了操作简便，选用超声提取方法。

2、流动相的选择：

流动相1：以甲醇、水不同比例的混合溶液为流动相。

流动相2：以乙腈、水不同比例的混合溶液为流动相。

流动相3：以乙腈、磷酸、三乙胺、水不同比例的混合溶液为流动相。

流动相4：以甲醇、水、乙腈不同比例的混合溶液为流动相。

结果：以甲醇或乙腈：水＝1-9：9-1为流动相；阴性样品色谱图在龙胆苦苷峰位置处无假阳性峰，龙胆苦苷峰和相近的杂质峰分离完全(分离度>1.5)，即在该条件下龙胆苦苷峰与其他组分分离完全。最佳流动相为：甲醇：水＝3：7。

3、重现性试验

取药品，按本发明中含量测定项下供试液的制备方法，分别制备5份供试液，进样，测定峰面积，结果见下表。

结果表明，该方法重现性良好。

4、回收率试验

采用加样回收法，分别精密称取5份已测定含量的样品适量，置具塞锥形瓶中，精密加入龙胆苦苷对照品溶液(以甲醇为溶剂，0.0256mg/ml)50ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜(0.45μm)滤过，制得供试液。分别精密吸取5μl注入液相色谱仪，记录色谱，测定含量，计算回收率，平均回收率为99.43％，RSD为1.61％。证明该方法可行。

二、士的宁含量测定方法研究

1、供试品溶液制备方法研究：

根据士的宁在碱性条件下易于被有机溶剂提取的特性，我们在试验中选择了常用于提取生物碱的氯仿-浓氨或甲醇-浓氨为提取液，结果见下表：

试验结果表明，用氯仿-浓氨为提取剂能将士的宁提取完全。

2、流动相的选择：，

流动相1：以正己烷、二氯甲烷、甲醇、浓氨试液不同比例的混合溶液为流动相。

流动相2：以乙醚、乙腈、二乙胺不同比例的混合溶液为流动相。

流动相3：以乙醚、甲醇、二乙胺不同比例的混合溶液为流动相。

流动相4：以甲醇、乙腈、水、冰醋酸不同比例的混合溶液为流动相。

结果：以乙醚：甲醇或乙腈：二乙胺＝10-90：90-10：0.5-3为流动相；阴性样品色谱图在士的宁峰位置处无假阳性峰，士的宁峰和相近的杂质峰分离完全(分离度>1.5)，即在该条件下士的宁峰与其他组分分离完全。最佳流动相为：乙醚：甲醇：二乙胺＝80：20：1。

3、重现性试验

取药品，按本发明中含量测定项下供试液的制备方法，分别制备5份供试液，进样，测定峰面积，平均含量为0.1556％，RSD为2.41％。结果见下表：

结果表明，该方法重现性良好。

4、回收率试验

采用加样回收法，分别精密称取5份已测定含量的样品(平均含量为0.1556％)适量，置具塞锥形瓶中，精密加入士的宁对照品溶液(0.055mg/ml，以氯仿为溶剂)50ml与浓氨试液6ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液10ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取5次，每次15ml，合并硫酸液，加浓氨试液调节PH值至9～10，用氯仿提取5次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用滤膜(0.45μm)滤过，制得供试液。分别精密吸取5μl注入液相色谱仪，记录色谱，测定含量，计算回收率，平均回收率为99.66％，RSD为2.67％。证明该方法可行。

三、白芍薄层鉴别研究

以白芍对照药材鉴别方中白芍药材。

供试品溶液制备方法一：取本品，加乙醇振摇提取，滤过，滤液蒸干，残渣用适量乙醇溶解，作为供试品溶液。同法制备缺白芍药材的阴性供试品溶液。

供试品溶液制备方法二：取本品内容物加乙醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用乙醚提取至乙醚层无色，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇提取液，水洗，弃去水液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，拌入少许中性氧化铝，水浴上搅拌干燥，装入预先填好的中性氧化铝小柱少许中性氧化铝小柱(200～300目，1g，内径10～15mm)顶部，以甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇溶解使成0.5ml，作为供试品溶液。同法制备缺白芍药材的阴性供试品溶液。

展开剂选择：分别以氯仿、丙酮、甲醇和冰醋酸不同比例的混合溶液；以氯仿、丙酮和冰醋酸不同比例的混合溶液；以正己烷、醋酸乙酯不同比例的混合溶液为展开剂。

结果：采用方法二制备供试品溶液，以氯仿：丙酮：甲醇：冰醋酸＝1-10：0.5-5：0.5-5：0.1-1为展开剂，分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为氯仿：丙酮：甲醇：冰醋酸＝5：2：1：0.2。

四、延胡索薄层鉴别研究

以延胡索对照药材鉴别方中延胡索药材

供试品溶液制备方法一：取本品，加石油醚(60～90℃)超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺延胡索药材的阴性供试品溶液。

供试品溶液制备方法二：取本品，加氯仿(用氨水适量润湿)超声处理，滤液用醋酸溶液洗涤，合并醋酸液，用氨水调pH9～10，用氯仿提取，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺延胡索药材的阴性供试品溶液。

供试品溶液制备方法三：取本品，加氨水适量搅拌润湿后，加乙醚，密塞，时时振摇，放置过夜，滤取上清液，用10％醋酸提取，合并醋酸层，用氨水调pH10～11，再以氯仿提取，合并氯仿液，用水洗至中性，加适量无水硫酸钠，滤过，滤过蒸干，加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺延胡索药材的阴性供试品溶液。

展开剂选择：分别以氯仿、醋酸乙酯、甲醇不同比例的混合溶液；以石油醚、乙醚、醋酸乙酯不同比例的混合溶液；以环己烷、乙醚、醋酸乙酯不同比例的混合溶液为展开剂。

结果；采用方法三制备供试品溶液，以环己烷：乙醚：醋酸乙酯＝5-20：0.5-5：1-10为展开剂，分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为环己烷：乙醚：醋酸乙酯＝9：2：4。

五、独活薄层鉴别研究

以独活对照药材鉴别方中独活药材

供试品溶液制备方法一：取本品，加乙醚浸渍过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺独活药材的阴性供试品溶液。

供试品溶液制备方法二：取本品，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醚提取，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺独活药材的阴性供试品溶液。

供试品溶液制备方法三：取本品，加石油醚(60～90℃)超声处理，滤过，滤液作为供试品溶液。同法制备缺独活药材的阴性供试品溶液。

展开剂选择：分别以环己烷、乙醚不同比例的混合溶液；以甲苯、醋酸乙酯不同比例的混合溶液；以环己烷、醋酸乙酯不同比例的混合溶液为展开剂。

结果：采用方法三制备供试品溶液，以环己烷：醋酸乙酯＝1-9：9-1为展开剂，分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为环己烷：环己烷：醋酸乙酯＝5：1.5。

本发明的优点在于：本发明的质量控制方法保证了本发明的制剂的质量检测标准能够较全面有效控制制剂的质量特征，具有准确性和先进性，可作为质量控制和考察工艺的稳定性的有效技术手段。对提高产品质量有重大意义。

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1

骨筋丸胶囊剂、片剂或颗粒剂的质量控制方法。

对性状进行观察，步骤是；

对于胶囊剂：内容物显棕色；气香，味苦、涩；

对于片剂；药物显棕色；气香，味苦、涩；

对于颗粒剂：产品为棕色的颗粒；

对内容物进行鉴别，步骤是：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色；下皮厚壁细胞绿黄色，细胞多角形、类方形或长条形，壁稍弯曲，木化，有的成连珠状增厚，纹孔细密；石细胞淡黄色，类圆形或长圆形，直径约至60μm，壁较厚，纹孔细密；螺纹导管直径16～32μm；淀粉粒甚多，单粒圆形、半圆形或圆多角形，直径4～30μm；复粒由2～10余分粒组成；树脂道碎片含黄色分泌物；梯纹、网纹及螺纹导管直径15～55μm；草酸钙簇晶少见，直径50～80μm；非腺毛单细胞，基部膨大似石细胞，壁极厚，多碎断，木化；胚乳细胞多角形，壁厚，内含脂肪油及糊粉粒；

(2)分别取胶囊剂、片剂各3g，或取颗粒剂10g；加乙醇20ml，温浸30分钟，滤过，取滤液2ml，蒸干，加稀盐酸使成酸性，滤过，滤液加碘化铋钾试液1～2滴，即生成橙红色沉淀；另取滤液10ml，蒸干，加沸水15ml使溶解，趁热滤过，放冷，用氯仿提取二次，每次10ml，弃去氯仿层，水溶液用醋酸乙酯10ml提取，提取液点于层析滤纸上，置紫外光灯365nm下观察，显亮蓝色荧光；

(3)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂10g；加乙醇40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液用乙醚提取至乙醚层无色，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取三次，每次20ml，合并正丁醇提取液，水洗涤3次，每次20ml，弃去水液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，拌入中性氧化铝，水浴上搅拌干燥，装入预先填好的中性氧化铝小柱(200～300目，1g，内径10～15mm)顶部，以甲醇40ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇溶解使成0.5ml，作为供试品溶液；另取白芍对照药材0.5g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照药材溶液8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿：丙酮：甲醇：冰醋酸＝5：2：1：0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂10g；置具塞三角瓶中，加氨水搅拌润湿后，加乙醚60ml，密塞，时时振摇，放置过夜，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取，分别为20ml、20ml、10ml，合并醋酸层，用氨水调pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取，分别为20ml、20ml、10ml，合并氯仿液，用水洗涤3次，每次30ml，加无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：乙醚：醋酸乙酯＝9：2：4为展开剂，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)分别取胶囊剂、片剂各1g，或取颗粒剂5g；加石油醚(60～90℃)5ml，密塞，超声处理5分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取独活对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：醋酸乙酯＝5：1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；根据药典的方法对内容物进行检查，步骤是：

应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定；

对含有的龙胆苦苷和士的宁进行含量测定，步骤是：

龙胆苦苷采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：水＝3：7为流动相；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长254nm；理论塔板数按龙胆苦苷峰计算，应不低于3000；精密称取龙胆苦苷对照品，用甲醇溶解使每1ml中含龙胆苦苷0.05mg，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.2g；或取颗粒剂1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜0.45μm滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、片剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、颗粒剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于0.5mg/g；

士的宁采用高效液相色谱法，用硅胶为填充剂；以乙醚：甲醇：二乙胺＝80：20：1为流动相；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长254nm；理论塔板数以士的宁峰计，应不低于2000；精密称取士的宁对照品，用醋酸乙酯溶解制成每1ml含0.1mg的溶液，即得对照品溶液；分别取装量差异项下胶囊剂、片剂3.5g；或取颗粒剂10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿50ml与浓氨试液6ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液10ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取5次，每次15ml，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至9～10，用氯仿提取5次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用滤膜0.45μm滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪测定含量；该制剂中，胶囊剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、片剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、颗粒剂中含马钱子以士的宁计，应为0.08～0.25mg/g。

实施例2：

对性状进行观察，步骤是：

对于胶囊剂：内容物显棕色；气香，味苦、涩；

对于片剂：药物显棕色；气香，味苦、涩；

对于颗粒剂：产品为棕色的颗粒；

对内容物进行鉴别，步骤是：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色；下皮厚壁细胞绿黄色，细胞多角形、类方形或长条形，壁稍弯曲，木化，有的成连珠状增厚，纹孔细密；石细胞淡黄色，类圆形或长圆形，直径约至60μm，壁较厚，纹孔细密；螺纹导管直径16～32μm；淀粉粒甚多，单粒圆形、半圆形或圆多角形，直径4～30μm；复粒由2～10余分粒组成；树脂道碎片含黄色分泌物；梯纹、网纹及螺纹导管直径15～55μm；草酸钙簇晶少见，直径50～80μm；非腺毛单细胞，基部膨大似石细胞，壁极厚，多碎断，木化；胚乳细胞多角形，壁厚，内含脂肪油及糊粉粒；

(2)分别取胶囊剂、片剂5g；或取颗粒剂15g，加乙醇50ml，温浸60分钟，滤过，取滤液5ml，蒸干，加稀盐酸使成酸性，滤过，滤液加碘化铋钾试液5滴，即生成橙红色沉淀；另取滤液15ml，蒸干，加沸水20ml使溶解，趁热滤过，放冷，用氯仿提取6次，弃去氯仿层，水溶液用醋酸乙酯20ml提取，提取液点于层析滤纸上，置紫外光灯365nm下观察，显亮蓝色荧光；

(3)分别取胶囊剂、片剂5g，或取颗粒剂15g，加乙醇100ml，超声处理60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，滤过，滤液用乙醚提取至乙醚层无色，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取6次，合并正丁醇提取液，水洗涤6次，弃去水液，蒸干，残渣加乙醇3ml使溶解，拌入中性氧化铝，水浴上搅拌干燥，装入预先填好的中性氧化铝小柱顶部，以甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇溶解使成1ml，作为供试品溶液；另取白芍对照药材1g，加乙醇30ml，振摇15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿：丙酮：甲醇：冰醋酸＝10：0.5：5：1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)分别取胶囊剂、片剂5g；或取颗粒剂15g，置具塞三角瓶中，加氨水搅拌润湿后，加乙醚100ml，密塞，时时振摇，放置过夜，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸提取6次，合并醋酸层，用氨水调pH13，再以氯仿提取6次，合并氯仿液，用水洗涤5次，加无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材1g同法制备对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：乙醚：醋酸乙酯＝5：5：1为展开剂，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)分别取胶囊剂、片剂3g；或取颗粒剂10g，加石油醚(60～90℃)20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取独活对照药材1g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：醋酸乙酯＝1：9为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查，步骤是：

应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定；

对含有的龙胆苦苷和士的宁进行含量测定，步骤是：

龙胆苦苷采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：水＝3：8为流动相；流速：1.5ml/min；柱温：60℃；检测波长500nm；理论塔板数按龙胆苦苷峰计算，应不低于3000；精密称取龙胆苦苷对照品，用甲醇溶解使每1ml中含龙胆苦苷0.1mg，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂1g；或取颗粒剂2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100ml，密塞，称定重量，超声处理50分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用0.65μm的滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、片剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、颗粒剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于0.5mg/g；

士的宁采用高效液相色谱法，用硅胶为填充剂；以乙醚：乙腈：二乙胺＝90：90：0.5为流动相；流速：1.5ml/min；柱温：60℃；检测波长500nm；理论塔板数以士的宁峰计，应不低于2000；精密称取士的宁对照品，用醋酸乙酯溶解制成每1ml含2mg的溶液，即得对照品溶液；分别取装量差异项下胶囊剂、片剂5g；或取颗粒剂15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿100ml与浓氨试液10ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置50小时，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液15ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取10次，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至12，用氯仿提取10次，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用0.65μm的滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3μl，注入液相色谱仪测定含量；该制剂中，胶囊剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、片剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、颗粒剂中含马钱子以士的宁计，应为0.08～0.25mg/g；

实施例3：

对性状进行观察，步骤是：

对于胶囊剂：内容物显棕色；气香，味苦、涩；

对于片剂：药物显棕色；气香，味苦、涩；

对于颗粒剂：产品为棕色的颗粒；

对内容物进行鉴别，步骤是：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色；下皮厚壁细胞绿黄色，细胞多角形、类方形或长条形，壁稍弯曲，木化，有的成连珠状增厚，纹孔细密；石细胞淡黄色，类圆形或长圆形，直径约至60μm，壁较厚，纹孔细密；螺纹导管直径16～32μm；淀粉粒甚多，单粒圆形、半圆形或圆多角形，直径4～30μm；复粒由2～10余分粒组成；树脂道碎片含黄色分泌物；梯纹、网纹及螺纹导管直径15～55μm；草酸钙簇晶少见，直径50～80μm；非腺毛单细胞，基部膨大似石细胞，壁极厚，多碎断，木化；胚乳细胞多角形，壁厚，内含脂肪油及糊粉粒；

(2)分别取胶囊剂、片剂1g；或取颗粒剂5g，加乙醇10ml，温浸10分钟，滤过，取滤液1ml，蒸干，加稀盐酸使成酸性，滤过，滤液加碘化铋钾试液1滴，即生成橙红色沉淀；另取滤液5ml，蒸干，加沸水10ml使溶解，趁热滤过，放冷，用氯仿提取1次，弃去氯仿层，水溶液用醋酸乙酯5ml提取，提取液点于层析滤纸上，置紫外光灯365nm下观察，显亮蓝色荧光；

(3)分别取胶囊剂、片剂1g，或取颗粒剂5g，加乙醇20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，滤过，滤液用乙醚提取至乙醚层无色，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取1次，合并正丁醇提取液，水洗涤1次，弃去水液，蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，拌入中性氧化铝，水浴上搅拌干燥，装入预先填好的中性氧化铝小柱顶部，以甲醇20ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇溶解使成0.2ml，作为供试品溶液；另取白芍对照药材0.2g，加乙醇5ml，振摇3分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿：丙酮：甲醇：冰醋酸＝1：5：0.5：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)分别取胶囊剂、片剂1g；或取颗粒剂5g，置具塞三角瓶中，加氨水搅拌润湿后，加乙醚30ml，密塞，时时振摇，放置过夜，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸提取1次，合并醋酸层，用氨水调pH9，再以氯仿提取1次，合并氯仿液，用水洗涤次，加无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材0.3g同法制备对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各15μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：乙醚：醋酸乙酯＝20：0.5：10为展开剂，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)分别取胶囊剂、片剂0.5g；或取颗粒剂10g，加石油醚(60～90℃)2ml，密塞，超声处理2分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取独活对照药材1g，同法制备对照药材溶液：照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：醋酸乙酯＝9：1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查，步骤是：

应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定；

对含有的龙胆苦苷和士的宁进行含量测定，步骤是：

龙胆苦苷采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：水＝3：5为流动相；流速：0.8ml/min；柱温：30℃；检测波长200nm；理论塔板数按龙胆苦苷峰计算，应不低于3000；精密称取龙胆苦苷对照品，用甲醇溶解使每1ml中含龙胆苦苷0.03mg，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.1g；或取颗粒剂1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30ml，密塞，称定重量，超声处理5分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用0.25μm的滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、片剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、颗粒剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于0.5mg/g；

士的宁采用高效液相色谱法，用硅胶为填充剂；以乙醚：甲醇：二乙胺＝10：10：3为流动相；流速：0.8ml/min；柱温：30℃；检测波长200nm；理论塔板数以士的宁峰计，应不低于2000；精密称取士的宁对照品，用醋酸乙酯溶解制成每1ml含0.05mg的溶液，即得对照品溶液；分别取装量差异项下胶囊剂、片剂2g；或取颗粒剂5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿20ml与浓氨试液2ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置10小时，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液5ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取2次，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至8，用氯仿提取2-10次，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用0.2μm的滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各25μl，注入液相色谱仪测定含量；该制剂中，胶囊剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、片剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、颗粒剂中含马钱子以士的宁计，应为0.08～0.25mg/g；

Claims (3)

1、一种骨筋丸制剂的检测方法，所述骨筋丸制剂由如下重量份的中药原料制成：乳香 20-35份、没药 30-60份、白芍 70-130份、醋制延胡索 20-35份、三七 30-60份、木香 20-35份、红花 30-60份、郁金 70-130份、独活 160-220份、牛膝 30-60份、秦艽 160-220份、桂枝 30-60份、血竭 20-35份、制马钱子 20-35份，其特征在于，步骤如下：对性状进行观察，对内容物进行鉴别，根据药典的方法对内容物进行检查，对含有的龙胆苦苷和士的宁进行含量测定，其中对性状进行观察，步骤是：

对于胶囊剂：内容物显棕色；气香，味苦、涩；

对于片剂：药物显棕色；气香，味苦、涩；

对于颗粒剂：产品为棕色的颗粒；

对内容物进行鉴别，步骤是：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色；下皮厚壁细胞绿黄色，细胞多角形、类方形或长条形，壁稍弯曲，木化，有的成连珠状增厚，纹孔细密；石细胞淡黄色，类圆形或长圆形，直径约至60μm，壁较厚，纹孔细密；螺纹导管直径16～32μm；淀粉粒甚多，单粒圆形、半圆形或圆多角形，直径4～30μm；复粒由2～10余分粒组成；树脂道碎片含黄色分泌物；梯纹、网纹及螺纹导管直径15～55μm；草酸钙簇晶少见，直径50～80μm；非腺毛单细胞，基部膨大似石细胞，壁极厚，多碎断，木化；胚乳细胞多角形，壁厚，内含脂肪油及糊粉粒；

(2)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加乙醇，温浸，滤过，取滤液，蒸干，加稀盐酸使成酸性，滤过，滤液加碘化铋钾试液，即生成橙红色沉淀；另取滤液，蒸干，加沸水使溶解，趁热滤过，放冷，用氯仿提取1-6次，弃去氯仿层，水溶液用醋酸乙酯提取，提取液点于层析滤纸上，置紫外光灯365nm下观察，显亮蓝色荧光；

(3)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，滤过，滤液用乙醚提取至乙醚层无色，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，水洗涤1-6次，弃去水液，蒸干，残渣加乙醇使溶解，拌入中性氧化铝，水浴上搅拌干燥，装入预先填好的中性氧化铝小柱顶部，以甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液；另取白芍对照药材0.2-1g，加乙醇，振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿：丙酮：甲醇：冰醋酸＝1-10：0.5-5：0.5-5：0.1-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置具塞三角瓶中，加氨水搅拌润湿后，加乙醚，密塞，时时振摇，放置过夜，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸提取1-6次，合并醋酸层，用氨水调pH9～13，再以氯仿提取1-6次，合并氯仿液，用水洗涤1-5次，加无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材，同法制备对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：乙醚：醋酸乙酯＝5-20：0.5-5：1-10为展开剂，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加60～90℃的石油醚，密塞，超声处理，滤过，滤液作为供试品溶液；另取独活对照药材，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：醋酸乙酯＝1-9：9-1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查，步骤是：

应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定；

对含有的龙胆苦苷和士的宁进行含量测定，步骤是：

龙胆苦苷采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈：水＝3：5-8为流动相；流速：0.8-1.5ml/min；柱温：30-60℃；检测波长200-500nm；理论塔板数按龙胆苦苷峰计算，应不低于3000；精密称取龙胆苦苷对照品，用甲醇溶解，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂或颗粒剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用小于0.65μm的滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该制剂中，胶囊剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、片剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、颗粒剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于0.5mg/g；士的宁采用高效液相色谱法，用硅胶为填充剂；以乙醚：甲醇或乙腈：二乙胺＝10-90：90-10：0.5-3为流动相；流速：0.8-1.5ml/min；柱温：30-60℃；检测波长200-500nm；理论塔板数以士的宁峰计，应不低于2000；精密称取士的宁对照品，用醋酸乙酯溶解，即得对照品溶液；分别取装量差异项下胶囊剂、片剂或颗粒剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿与浓氨试液，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液，置分液漏斗中，用3→100的硫酸溶液提取2-10次，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至8～12，用氯仿提取2-10次，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，摇匀，用小于0.65μm的滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该制剂中，胶囊剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、片剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、颗粒剂中含马钱子以士的宁计，应为0.08～0.25mg/g。

2、权利要求1的检测方法，其特征在于，

对性状进行观察，步骤是：

对于胶囊剂：内容物显棕色；气香，味苦、涩；

对于片剂：药物显棕色；气香，味苦、涩；

对于颗粒剂：产品为棕色的颗粒；

对内容物进行鉴别，步骤是：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色；下皮厚壁细胞绿黄色，细胞多角形、类方形或长条形，壁稍弯曲，木化，有的成连珠状增厚，纹孔细密；石细胞淡黄色，类圆形或长圆形，直径约至60μm，壁较厚，纹孔细密；螺纹导管直径16～32μm；淀粉粒甚多，单粒圆形、半圆形或圆多角形，直径4～30μm；复粒由2～10余分粒组成；树脂道碎片含黄色分泌物；梯纹、网纹及螺纹导管直径15～55μm；草酸钙簇晶少见，直径50～80μm；非腺毛单细胞，基部膨大似石细胞，壁极厚，多碎断，木化；胚乳细胞多角形，壁厚，内含脂肪油及糊粉粒；

(2)分别取胶囊剂、片剂1-5g；或取颗粒剂5-15g，加乙醇10-50ml，温浸10-60分钟，滤过，取滤液1-5ml，蒸干，加稀盐酸使成酸性，滤过，滤液加碘化铋钾试液1～5滴，即生成橙红色沉淀；另取滤液5-15ml，蒸干，加沸水10-20ml使溶解，趁热滤过，放冷，用氯仿提取1-6次，弃去氯仿层，水溶液用醋酸乙酯5-20ml提取，提取液点于层析滤纸上，置紫外光灯365nm下观察，显亮蓝色荧光；

(3)分别取胶囊剂、片剂1-5g，或取颗粒剂5-15g，加乙醇20-100ml，超声处理10-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10-30ml使溶解，滤过，滤液用乙醚提取至乙醚层无色，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，水洗涤1-6次，弃去水液，蒸干，残渣加乙醇0.5-3ml使溶解，拌入中性氧化铝，水浴上搅拌干燥，装入预先填好的中性氧化铝小柱顶部，以甲醇20-100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇溶解使成0.2-1ml，作为供试品溶液；另取白芍对照药材0.2-1g，加乙醇5-30ml，振摇3-15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5-2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照药材溶液各5-25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿：丙酮：甲醇：冰醋酸＝1-10：0.5-5：0.5-5：0.1-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)分别取胶囊剂、片剂1-5g；或取颗粒剂5-15g，置具塞三角瓶中，加氨水搅拌润湿后，加乙醚30-100ml，密塞，时时振摇，放置过夜，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸提取1-6次，合并醋酸层，用氨水调pH9～13，再以氯仿提取1-6次，合并氯仿液，用水洗涤1-5次，加无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材0.3-1g同法制备对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.3-1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-15μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：乙醚：醋酸乙酯＝5-20：0.5-5：1-10为展开剂，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)分别取胶囊剂、片剂0.5-3g；或取颗粒剂3-10g，加60～90℃的石油醚2-20ml，密塞，超声处理2-20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取独活对照药材0.3-1g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：醋酸乙酯＝1-9：9-1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查，步骤是：

应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定；

对含有的龙胆苦苷和士的宁进行含量测定，步骤是：

龙胆苦苷  采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈：水＝3：5-8为流动相；流速：0.8-1.5ml/min；柱温：30-60℃；检测波长200-500nm；理论塔板数按龙胆苦苷峰计算，应不低于3000；精密称取龙胆苦苷对照品，用甲醇溶解使每1ml中含龙胆苦苷0.03-0.1mg，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.1-1g；或取颗粒剂1-2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30-100ml，密塞，称定重量，超声处理5-50分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用小于0.65μm的滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3-15μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、片剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、颗粒剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于0.5mg/g；

士的宁  采用高效液相色谱法，用硅胶为填充剂；以乙醚：甲醇或乙腈：二乙胺＝10-90：90-10：0.5-3为流动相；流速：0.8-1.5ml/min；柱温：30-60℃；检测波长200-500nm；理论塔板数以士的宁峰计，应不低于2000；精密称取士的宁对照品，用醋酸乙酯溶解制成每1ml含0.05-2mg的溶液，即得对照品溶液；分别取装量差异项下胶囊剂、片剂2-5g；或取颗粒剂5-15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿20-100ml与浓氨试液2-10ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置10-50小时，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液5-15ml，置分液漏斗中，用3→100的硫酸溶液提取2-10次，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至8～12，用氯仿提取2-10次，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用小于0.65μm的滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3-25μl，注入液相色谱仪测定含量；该制剂中，胶囊剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、片剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、颗粒剂中含马钱子以士的宁计，应为0.08～0.25mg/g。

3、权利要求1的检测方法，其特征在于，步骤如下：

对性状进行观察，步骤是：

对于胶囊剂：内容物显棕色；气香，味苦、涩；

对于片剂：药物显棕色；气香，味苦、涩；

对于颗粒剂：产品为棕色的颗粒；

对内容物进行鉴别，步骤是：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，置显微镜下观察：糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色；下皮厚壁细胞绿黄色，细胞多角形、类方形或长条形，壁稍弯曲，木化，有的成连珠状增厚，纹孔细密；石细胞淡黄色，类圆形或长圆形，直径约至60μm，壁较厚，纹孔细密；螺纹导管直径16～32μm；淀粉粒甚多，单粒圆形、半圆形或圆多角形，直径4～30μm；复粒由2～10余分粒组成；树脂道碎片含黄色分泌物；梯纹、网纹及螺纹导管直径15～55μm；草酸钙簇晶少见，直径50～80μm；非腺毛单细胞，基部膨大似石细胞，壁极厚，多碎断，木化；胚乳细胞多角形，壁厚，内含脂肪油及糊粉粒；

(2)分别取胶囊剂、片剂各3g，或取颗粒剂10g；加乙醇20ml，温浸30分钟，滤过，取滤液2ml，蒸干，加稀盐酸使成酸性，滤过，滤液加碘化铋钾试液1～2滴，即生成橙红色沉淀；另取滤液10ml，蒸干，加沸水15ml使溶解，趁热滤过，放冷，用氯仿提取二次，每次10ml，弃去氯仿层，水溶液用醋酸乙酯10ml提取，提取液点于层析滤纸上，置紫外光灯365nm下观察，显亮蓝色荧光；

(3)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂10g；加乙醇40ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液用乙醚提取至乙醚层无色，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取三次，每次20ml，合并正丁醇提取液，水洗涤3次，每次20ml，弃去水液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，拌入中性氧化铝，水浴上搅拌干燥，装入预先填好的200～300目，1g，内径10～15mm的中性氧化铝小柱顶部，以甲醇40ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇溶解使成0.5ml，作为供试品溶液；另取白芍对照药材0.5g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照药材溶液8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿：丙酮：甲醇：冰醋酸＝5：2：1：0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂10g；置具塞三角瓶中，加氨水搅拌润湿后，加乙醚60ml，密塞，时时振摇，放置过夜，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取，分别为20ml、20ml、10ml，合并醋酸层，用氨水调pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取，分别为20ml、20ml、10ml，合并氯仿液，用水洗涤3次，每次30ml，加无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：乙醚：醋酸乙酯＝9：2：4为展开剂，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(5)分别取胶囊剂、片剂各1g，或取颗粒剂5g；加60～90℃的石油醚5ml，密塞，超声处理5分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取独活对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷：醋酸乙酯＝5：1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查，步骤是：

应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定；

对含有的龙胆苦苷和士的宁进行含量测定，步骤是：

龙胆苦苷  采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：水＝3：7为流动相；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长254nm；理论塔板数按龙胆苦苷峰计算，应不低于3000；精密称取龙胆苦苷对照品，用甲醇溶解使每1ml中含龙胆苦苷0.05mg，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.2g；或取颗粒剂1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜0.45μm滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、片剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于5mg/g、颗粒剂中含秦艽以龙胆苦苷计，不得少于0.5mg/g；

士的宁  采用高效液相色谱法，用硅胶为填充剂；以乙醚：甲醇：二乙胺＝80：20：1为流动相；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长254nm；理论塔板数以士的宁峰计，应不低于2000；精密称取士的宁对照品，用醋酸乙酯溶解制成每1ml含0.1mg的溶液，即得对照品溶液；分别取装量差异项下胶囊剂、片剂3.5g；或取颗粒剂10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿50ml与浓氨试液6ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液10ml，置分液漏斗中，用3→100的硫酸溶液提取5次，每次15ml，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至9～10，用氯仿提取5次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用滤膜0.45μm滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪测定含量；该制剂中，胶囊剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、片剂中含马钱子以士的宁计，应为0.8～2.5mg/g、颗粒剂中含马钱子以士的宁计，应为0.08～0.25mg/g。