CN108753791A - 绿盲蝽decapentaplegic基因及其RNAi在害虫防控中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种绿盲蝽decapentaplegic基因及其RNAi害虫防控应用，属于害虫防治领域。本发明首次从绿盲蝽中克隆得到decapentaplegic基因，其序列如SEQ ID NO：1所示，以该基因作为RNAi的靶标，设计与合成绿盲蝽decapentaplegic基因不同靶标区域的dsRNA，通过注射、饲喂绿盲蝽decapentaplegic基因的dsRNA，统计注射后7日、连续饲喂7日每日的死亡率，结果显示，注射和饲喂dsRNA的绿盲蝽第7日死亡率达到90％以上，是非常高效的RNAi靶标基因。

Description

绿盲蝽decapentaplegic基因及其RNAi在害虫防控中的应用

技术领域

本发明属于昆虫分子生物学与生理学领域，具体涉及绿盲蝽decapentaplegic基因的cDNA的克隆，绿盲蝽decapentaplegic基因双链RNA(dsRNA)的设计，合成与及其通过RNAi途径防治害虫绿盲蝽的应用。

背景技术

绿盲蝽(Lygus lucorum)，隶属于半翅目，盲蝽科，又称花叶虫，小臭虫。除青海西藏等少数地方，几乎遍布我国所有省份，是我国黄河流域长江流域为害棉花的多种绿盲蝽的优势种，几遍全国各棉区。绿盲蝽为杂食性害虫，寄主范围十分广泛，寄主包括棉花、十字花科蔬菜、豆类、玉米、瓜类、花卉、马铃薯、以及各种果树等，给我国农业和林业造成了巨大损失。2000年以前，绿盲蝽并非是我国棉产区农业生产的主要害虫，其种群数量低，基本不需专门防治。在防治棉花主要害虫绿盲蝽的同时即可将绿盲蝽杀死。近几年来，由于蔬菜、果树以及其他寄主作物种植面积的大幅度增加，给绿盲蝽提供了适宜的越冬场所和多样的寄主，规模化种植转基因Bt棉花有效的减少以绿盲蝽为主的鳞翅目害虫的危害，减少了农药的使用。另外，多种高毒农药的停用，致使绿盲蝽的种群数量迅速上升，并呈灾变的趋势。在很多地区已经成为了农业生产的重要害虫。目前对绿盲蝽的防治主要依靠化学防治，该方法不仅容易导致其产生抗药性，而且对环境造成污染。因此，发展一种经济有效、环境友好的方法控制绿盲蝽具有重要意义。

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA引发的基因沉默现象，其作用机制是通过阻止同源基因的翻译或者转录而实现基因沉默。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生断裂而导致基因表达沉默。基于RNAi技术可以研发RNAi杀虫剂和RNAi转基因作物。RNA杀虫剂就是利用RNA干扰技术暂时性关闭病虫发育过程中的关键基因，阻碍其正常的生长和繁殖，从而达到抑制病原物致病力，阻止害虫生长发育的目的。该技术最大特点是目标害虫专一性强，不会伤害包括天敌在内的任何其他生物，没有改变病虫的基因组，不会对生态系统产生影响；其主要成份是双链RNA，在生物中均普遍存在的化合物，在自然环境中极易降解，因此RNA杀虫剂无毒、无残留，是一种绝对绿色环保、有应用前景的杀虫剂。RNAi转基因作物是将靶标基因的RNAi成分导入作物，害虫在取食作物的时候关键基因会被关闭，从而降低虫口密度达到害虫防控的目的。

2016年以来，加拿大食品检疫局和美国国家环境保护局相应批准了一个以Snf7基因为靶标，通过RNAi技术防治鞘翅目昆虫玉米根萤叶甲(WCR)转基因玉米的商业化，预计2020年RNAi杀虫制剂市场也将被开放。以RNAi为基础的害虫防治是最前沿的害虫防控技术，但除鞘翅目昆虫以外，其他昆虫的高效杀虫靶标基因并不多，因此，寻找合适的杀虫靶标是一项非常紧迫的工作。decapentaplegic可以控制昆虫四肢、翅等多种器官的发育，是参与果蝇及其他多种昆虫发育的关键形态发生素，采用因此decapentaplegic是非常有应用价值的RNAi靶标基因。但现有技术中还没有以decapentaplegic为靶标的RNAi防治技术。

发明内容

本发明提供一种绿盲蝽decapentaplegic基因及其在RNAi上的应用，通过注射、饲喂绿盲蝽decapentaplegic基因的dsRNA，统计注射后7日、连续饲喂7日，测定每日的死亡率，结果显示，注射和饲喂dsRNA的绿盲蝽第7日死亡率达到90％以上，是非常高效的RNAi靶标基因。

一种绿盲蝽decapentaplegic基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

一种dsRNA，以上述绿盲蝽decapentaplegic基因全序列或部分序列为靶标合成得到。

所述靶标为绿盲蝽decapentaplegic基因第791-1148位片段。

所述dsRNA，其序列如SEQ ID NO.2所示。

绿盲蝽decapentaplegic基因在害虫防控中的应用。

所述应用为以绿盲蝽decapentaplegic基因全序列或部分序列为靶标设计的dsRNA，将其导入害虫体内，使其致死。

所述靶标为绿盲蝽decapentaplegic基因第791-1148位片段。

所述dsRNA序列如SEQ ID NO.2所示。

所述dsRNA制备成喷洒式杀虫剂，喷洒渗入害虫体内使绿盲蝽致死；或者将dsRNA转入绿盲蝽寄主植物体内，绿盲蝽摄食植物而致死；或者dsRNA制备成饵剂，绿盲蝽摄食而致死。

一种生物制品，含有上述的dsRNA。

所述的生物制品，为喷洒式杀虫剂或饵剂。

本发明的技术方案通过下述方法实现：

以上述基因为靶标使用RNAi的方法防控害虫，主要包括以下步骤：

(1)从绿盲蝽幼虫提取总RNA，反转录合成cDNA，以此cDNA为模板通过decapentaplegic基因

的特异性引物进行PCR扩增，得到扩增片段，纯化PCR产物，回收目的片段，取纯化产物连接到pGME-T载体上，然后转化大肠杆菌感受态细胞Top 10，筛选含目的片段的阳性克隆，将阳性克隆进行序列测定，获得decapentaplegic基因全长序列；

Primer-F：TAATACGACTCACTATAGGGACGGTAAGAACAAGGTTAGA

Primer-R：TAATACGACTCACTATAGGGAGAACGACTTTGCTTTCATC

(2)选取decapentaplegic基因中任意长度片段作为靶标合成dsRNA。

(3)通过显微注射(机械损伤、体表渗入)及饲喂(取食)的方法将dsRNA传递至绿盲蝽体内发挥RNAi功效。

本发明人首次从绿盲蝽中克隆得到的decapentaplegic基因，其序列如SEQ IDNO：1所示，该基因能够作为RNAi的靶标，在绿盲蝽的防治中具有极高的应用价值。

以上述的decapentaplegic基因中选取第791-1148位为例，作为干涉靶标合成dsRNA(见SEQ ID NO.2)。通过注射、饲喂绿盲蝽decapentaplegic基因的dsRNA，统计注射后7日、连续饲喂7日每日的死亡率，以绿色荧光蛋白(GFP)作为对照组进行相同处理。结果显示，注射和饲喂dsRNA的绿盲蝽第7日死亡率达到90％以上。本发明为通过RNAi手段开发RNAi制剂和转基因RNAi植物提供了极高效的靶标基因。不仅限于绿盲蝽，其他物种的decapentaplegic基因也可以作为RNAi靶标基因被应用。

附图说明

图1为注射decapentaplegic基因dsRNA后7日内绿盲蝽的存活率。以GFP(绿色荧光蛋白)

dsRNA为对照。

图2为连续饲喂decapentaplegic基因dsRNA7日每日绿盲蝽的存活率。以GFP(绿色荧光蛋白)dsRNA为对照。

具体实施方式

下面通过具体实施例进一步说明本发明。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为市售常规生化试剂。

实施例1：decapentaplegic基因克隆、decapentaplegic基因dsRNA的制备，显微注射法注射、饲喂法饲喂decapentaplegic基因dsRNA。

基因的生物信息学分析

1.利用生物信息学技术及软件对绿盲蝽转录组数据进行初步的分析，筛选到绿盲蝽decapentaplegic基因，利用BLAST检索数据库，搜索果蝇decapentaplegic基因编码蛋白的氨基酸序列，用绿盲蝽转录组数据作为数据库进行本地BLAST比对查询，确定所选基因的序列。

2.供试昆虫及组织收集

绿盲蝽为中国农业科学院植物保护研究所使用新鲜玉米(Zea mays)及四季豆(Phaseolus vulgaris L)饲养，饲养温度为25-28℃，相对湿度为60％-70％，光照为16:8(L:D)。

3.RNA的提取

a)昆虫总RNA提取的全部过程在无RNase条件下进行。整个提取步骤如下所示：

b)取-70℃保存的昆虫组织，加入已经用液氮预冷的玻璃匀浆器中，立即向匀浆器内加入1mL Trizol试剂，将组织充分研磨磨碎；将研磨好的组织溶液用无RNA酶的枪头转移到无RNA酶的1.5mL离心管中，暂时至于冰上。

c)4℃，12000g离心15min，将上清转移到新的无RNA酶的1.5mL离心管中。

d)将上清在室温下放置5min后，向离心管中加入0.2mL氯仿，用手剧烈震荡15s，再室温静置2-3min。

e)4℃，12000g离心15min，混合物在此后分层，下层为有机相，上层为水相(RNA就在水相中)，用无RNA酶的枪头将上层水相转移到新的无RNA酶的1.5mL离心管中，注意尽量不要吸到中间层，以免造成蛋白质或DNA污染。

f)加入0.5mL异丙醇，混匀后，室温静置10min来沉淀RNA。

g)4℃，12000g离心10min后，观察到的沉淀即为RNA,弃上清(尽量吸净)，加入1mL75％的乙醇(用DEPC水配置，现用现配)，轻轻震荡离心管悬浮沉淀，洗涤沉淀。

h)4℃，7500g离心10min后，弃上清(尽量吸净)，超净台中干燥沉淀5-10min。

i)加入10-20μL RNase-free H₂O(根据RNA量而定)，轻弹离心，使沉淀充分溶解。

j)55-60℃温育后，取1μL样品稀释至5μL，其中2.5μL进行电泳检测，2.5μL用NanoDrop仪器检测；剩余的样品用于cDNA合成或者保存于-70℃冰箱。

5.第一链cDNA的合成

整个反转录过程在无RNA酶污染的条件下进行，操作步骤按Revert Aid FirstStrand cDNA Synthesis Kit进行，具体如下：

a)在无RNA酶的PCR管中依次加入：2μg RNA(根据NanoDrop定量的结果计算应该加入RNA的体积数)，DNaseⅠ1μL，1μL Ribolock RNase Inhibitor，1μL 10×Reaction BufferwithMgCl₂，用RNase-free水将体系补足到10μL；轻微震荡后离心；

b)37℃温育30min后，向体系内加入1μL 50mM EDTA，震荡后离心，然后65℃温育10min,以去除DNA酶I；

c)加入1μL Oligo-dT，用RNase-free H₂O补至12μL；

d)65℃温育5min后，立即置于冰上；

e)依次加入下列试剂，使体系达到20μL：4μL的5×Reaction buffer；2μL的dNTPMix(10mM)；1μL的Revert Aid Reverse Transcriptase和1μL的Ribolock RNaseInhibitor；简单混匀离心；

f)42℃温育1h，然后再70℃温育5min；

g)合成后存于-20℃或者-70℃冰箱，使用前按情况稀释若干倍。

3、靶标基因的克隆

本发明从绿盲蝽decapentaplegic基因选取全长或片段长度进行后续的克隆及dsRNA合成。引物设计：

(1)根据绿盲蝽decapentaplegic基因序列，用Primer Premier 5.0软件设计带有T7启动子的引物，引物设计原则如下：

a)引物设计的区间要在decapentaplegic基因的编码区。

b)全长序列引物设计在编码区两端，非全长序列设计长度任意。

c)中间片段尽量选在靶标基因的特异区域。

d)引物之间不能形成引物二聚体，交叉二聚体。

e)根据以上引物设计原则设计引物后，送至华大基因进行引物合成。

f)示例选取上述SEG ID NO.1序列的开放阅读框第791-1148位。

4.目的片段的PCR扩增、测序及序列分析

以绿盲蝽cDNA为模板，用Prime Star酶扩增decapentaplegic基因。反应体系为50μl：22μl重蒸水，25μl 2×Prime Star Mix，1μl cDNA，1μl F引物(10mM)，1μl R引物(10mM)。反应条件为：98℃预变性30s；98℃变性10s，60℃退火15s，72℃延伸30s，35个循环；最后72℃延伸10min。

PCR产物用溶解在1×TAE缓冲液的1％琼脂糖凝胶电泳进行检测。检测正确的PCR产物，用琼脂糖凝胶回收试剂盒进行回收(操作步骤按试剂盒内附带的说明书进行)，回收的片段连接到Blunt载体上(操作步骤按试剂盒内附带的说明书进行)，连接体系转化DH5α感受态细胞(转化步骤按感受态细胞附带的说明书进行)，挑取8个阳性克隆进行进行质粒回收后送测序公司测序。其全长序列如SEQ ID NO.1所示。

5、dsRNA模板的制备

以带有靶标基因片段的质粒为模板，用聚合酶扩增。反应体系为50μl：22μl重蒸水，25μl 2×Prime Star Mix，1μl cDNA，1μl F引物(10mM)，1μl R引物(10mM)。反应条件为：98℃预变性30s；98℃变性10s，40-65℃退火15s，72℃延伸30s，35个循环；最后72℃延伸10min。将1μl PCR产物用溶解在1×TAE缓冲液的1％琼脂糖凝胶电泳进行检测。如果所得条带长度与目的片段长度一致，并且结果显示为单一明亮的条带，则将剩余的PCR产物进行酚氯仿抽提与纯化。

PCR产物的酚氯仿抽提的步骤：

a)将需要纯化的PCR产物用无RNA酶的H₂O定容至200μl

b)加入等体积(200μl)的酚氯仿试剂(一定取酚氯仿试剂的下层，并且拿试剂瓶时要平稳，不能晃动)。

c)温和混匀，在4℃离心机下离心(12000rpm，4℃)15min.

d)4.取上清，加入1/10体积(20μl)的3M乙酸钠(pH5.2)和2倍体积(400μl)的100％乙醇(-20℃贮存)，温和混匀后放于-20℃静置沉淀至少3小时或者过夜。

e)在4℃离心机下离心(12000rpm，4℃)30min.

f)白色沉淀积于离心管底部，弃上清液(为防止沉淀一起被吸出，可保留些许上清液)，加入75％乙醇(-20℃贮存)轻轻混匀，洗涤沉淀

g)在4℃离心机下离心(7500rpm，4℃)5min.

h)将乙醇慢慢吸出(注意不要吸出沉淀)，接近沉淀的残留液体用10μl移液枪慢慢吸出。将离心管开盖放入37℃恒温培养箱干燥，10min左右，待乙醇全部挥发。

i)加入5μl RNase-free H₂O轻弹管底，让沉淀充分均匀溶解于无RNA酶的H₂O。

j)取1μl溶液溶于4μl无RNA酶的H₂O中，用浓度测量仪器检测浓度和OD值。用凝胶电泳检测产物单一性，如果检测条带是单一明亮的条带，并且其OD值为：

260/280:1.8-2.0

260/230:1.8-2.0

则说明PCR产物质量良好，可以作为下一步合成dsRNA的模板使用。

6、dsRNA的合成

a)将ATP，CTP，GTP，UTP(100mM)放于冰上慢慢融化，5×反转录缓冲液室温融化，T7RNA聚合酶放于-20℃贮存，随用随拿，用完立即放入-20℃环境下贮存。溶解以后轻弹管底，瞬时离心，将试剂离心到管底。

b)按以下比例将试剂混合：

按以下比例将试剂混合：

轻弹混匀，瞬时离心。放入37℃金属浴中4小时。

c)从金属浴中取出离心管，放入75℃金属浴中5min，然后放置室温冷却(切勿放在冰上)。吸出1μl，稀释5倍，凝胶电泳检测产物条带。

d)去除DNA和ssRNA.按照比例加入下列试剂：

充分混匀，轻弹管底，瞬时离心后，放入金属浴37℃30min，加入EDTA试剂1μl,65℃金属浴中放置5min终止反应。取1μl产物，稀释5倍，凝胶电泳检测产物单一性，浓度检测仪器检测浓度和OD值。如果检测条带是单一明亮的条带，并且其OD值为：

260/280:1.8-2.0

260/230:1.8-2.0

则说明dsRNA质量良好，可以进行下一步dsRNA酚氯仿抽提。

7、dsRNA的酚氯仿抽提

a)将需要纯化的dsRNA(～60μl)用无RNA酶的H₂O定容至200μl(可根据实际需要等比例扩大体系)。

b)加入1/2体积(100μl)的水饱和酚试剂(一定取水饱和酚试剂的下层，并且拿试剂瓶时要平稳，不能晃动)和1/2体积的氯仿(100μl)。

c)轻轻混匀，在4℃离心机下离心(12000rpm，4℃)15min。

d)取上层水相，加入的等体积氯仿(200μl)，轻轻混匀，在4℃离心机下离心(12000rpm，4℃)15min。

e)取上层水相，加入1/10体积(20μl)的3M乙酸钠(pH5.2)和2.5倍体积(500μl)的100％乙醇(-20℃贮存)，温和混匀后放于-20℃静置沉淀至少3小时或者过夜。

f)在4℃离心机下离心(12000rpm，4℃)30min。

g)白色沉淀积于离心管底部，弃上清液(为防止沉淀一起被吸出，可保留些许上清液)，加入80％乙醇(-20℃贮存)轻轻混匀，洗涤沉淀。

h)在4℃离心机下离心(7500rpm，4℃)5min。

i)将乙醇慢慢吸出(注意不要吸出沉淀)，接近沉淀的残留液体用10μl移液枪慢慢吸出。将离心管开盖放入37℃恒温培养箱干燥，10min左右，待乙醇全部挥发。

j)加入5μl无RNA酶的H₂O轻弹管底，让沉淀充分均匀的溶解于无RNA酶的H₂O中。

k)取1μl溶解的dsRNA产物稀释于4μl DEPC H₂O中，用凝胶电泳检测产物单一性，并用浓度检测仪器检测浓度和OD值。如果检测的条带是单一明亮的条带，并且其OD值为：

260/280:1.8-2.0

260/230:1.8-2.0

则证明dsRNA质量良好，可以进行后续绿盲蝽RNAi生物测定实验。

8、3龄(3L)绿盲蝽的准备

本发明中所选绿盲蝽为3L若虫，现以3L若虫的收集方法如下：收集1L初孵若虫(200～300头)，放入养虫盒中，盒中放入干净滤纸和一根去皮的新鲜玉米，约4天后所有1L若虫成长为3L若虫，准备铺好滤纸和7～8粒新鲜玉米粒的塑料培养皿，每个培养皿里放15只3L若虫，放若虫时，用软毛刷轻轻挑取，以免对若虫造成不必要的机械损伤。

9、靶标基因的RNAi防控效果测定

以绿色荧光蛋白基因(GFP)双链dsRNA作为对照，将所述dsRNA用显微注射法注入绿盲蝽若虫体内、或将dsRNA混合到人工饲料中饲喂绿盲蝽三龄幼虫，用以模拟机械损伤、物理渗透、取食等不同传递方法下，靶标基因的RNAi防控效率。统计统计注射后7日、连续饲喂7日每日的死亡率。

结果显示，注射dsRNA以及饲喂dsRNA的绿盲蝽第7日死亡率达均到90％以上，是非常高效的RNAi靶标基因。注射法模拟的是通过喷洒dsRNA制剂，昆虫在机械损伤、物理渗透等作用下，dsRNA通过表皮或气孔等进入昆虫血淋巴系统发挥杀虫效应的过程；饲喂法模拟的是昆虫通过取食植物表面残留的dsRNA、饵料中的dsRNA、转基因作物中植物合成的dsRNA后，dsRNA通过消化系统进入昆虫体内发挥杀虫效应的过程。实验证明绿盲蝽decapentaplegic基因通过两种途径的RNAi杀虫效果均十分出色，具有极高的应用前景。

序列表

<110> 中国农业科学院植物保护研究所

<120> 绿盲蝽decapentaplegic基因及其RNAi在害虫防控中的应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1249

<212> DNA

<213> 绿盲蝽(Lygus lucorum)

<400> 1

atctccttct ctcgtgacgt ataagtgtta tcggtttttt ctatcagtgt gataagtgat 60

actcatgatt taccgttgtg gactccgcgg catcaagatg atccggttgg ggcgctggta 120

gggggagcga tccctaccat ggttggattg gtgatggtgg cagcgtcgct gttggcggtg 180

atgagctcgg cgcaagatga actcggtgga cgggaagccc tagagagctc cctcctccag 240

ctgctgggtc tgccgcgccg cccccgggct ccctccaggc gccgcccccc ggtcatccct 300

ccggagatga tcgctctcta caagcaacag acggggctcg acctcgacac cgctgctctt 360

ccacttccgg gccgattcgt ccggtccgcc aacaccgtcc ggagctacca acactcgggg 420

tctcctggga aatccggaag caaatttaga ttacatttca acacgagcga aattcccgat 480

ggcgagactg tcacagccgc cgaacttaaa ctctggttgg atgacggagc gagacgagtc 540

gctgtccacg acatcattag gcccggagtc aaaggaaaga acaagcctct tctaaggcta 600

ctagattcta agaatatttt ggagaaaggt ccagtaagtt tagatgtcca gccggccgct 660

gagcgatggg cgagtaaaaa agacaccaac cacggcctga tagtcgaagt gacgatgggc 720

gacaagcgga cgcgaacgaa gcgaacgccg caagacttga gcagacacac actgttcgtt 780

tacctcgacg acggtaagaa caaggttaga agcatggaag aggttttgga gcgatccaaa 840

agagctccaa tggggaagaa gcatcgaagg aaagatggaa gttccatgtg caagaggcat 900

ccgctgtacg tggatttcaa agacgtcgga tgggacgact ggatagtcgc gcctccaggc 960

tacgacgcgt actactgcca cggcgaatgc acctttcctc tggcggacca tctgaattcg 1020

accaaccacg ccatagtcca gactctggtg aacagcgtga accccggagc ggttcccaag 1080

gcctgctgcg ttcccactca gctctcatca atctctatgc tgtacctgga tgaaagcaaa 1140

gtcgttctca agaactacca ggacatggca gtcgtgggct gcggatgccg gtgagaaccg 1200

tcccttcctc cctcccattc gtacctcaaa atgtgatatt tgtacagcg 1249

<210> 2

<211> 358

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

acgguaagaa caagguuaga agcauggaag agguuuugga gcgauccaaa agagcuccaa 60

uggggaagaa gcaucgaagg aaagauggaa guuccaugug caagaggcau ccgcuguacg 120

uggauuucaa agacgucgga ugggacgacu ggauagucgc gccuccaggc uacgacgcgu 180

acuacugcca cggcgaaugc accuuuccuc uggcggacca ucugaauucg accaaccacg 240

ccauagucca gacucuggug aacagcguga accccggagc gguucccaag gccugcugcg 300

uucccacuca gcucucauca aucucuaugc uguaccugga ugaaagcaaa gucguucu 358

<210> 3

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

taatacgact cactataggg acggtaagaa caaggttaga 40

<210> 4

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

taatacgact cactataggg agaacgactt tgctttcatc 40

Claims (10)

1.一种绿盲蝽decapentaplegic基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种dsRNA，以权利要求1所述的绿盲蝽decapentaplegic基因全序列或部分序列为靶标合成得到。

3.根据权利要求2所述的dsRNA，所述靶标为绿盲蝽decapentaplegic基因第791-1148位片段。

4.根据权利要求3所述的dsRNA，其序列如SEQ ID NO.2所示。

5.权利要求1所述的绿盲蝽decapentaplegic基因在害虫防控中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，为以权利要求1所述的绿盲蝽decapentaplegic基因全序列或部分序列为靶标设计的dsRNA，将其导入害虫体内，使其致死。

7.根据权利要求6所述的应用，所述dsRNA序列如SEQ ID NO.2所示。

8.根据权利要求6所述的应用，所述dsRNA制备成喷洒式杀虫剂，喷洒渗入害虫体内使绿盲蝽致死；或者将dsRNA转入绿盲蝽寄主植物体内，绿盲蝽摄食植物而致死；或者dsRNA制备成饵剂，绿盲蝽摄食而致死。

9.一种生物制品，含有权利要求2-4任一所述的dsRNA。

10.根据权利要求9所述的生物制品，为喷洒式杀虫剂或饵剂。