CN108753712A - 一种脂肪干细胞提取方法 - Google Patents

一种脂肪干细胞提取方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108753712A
CN108753712A CN201810721866.XA CN201810721866A CN108753712A CN 108753712 A CN108753712 A CN 108753712A CN 201810721866 A CN201810721866 A CN 201810721866A CN 108753712 A CN108753712 A CN 108753712A
Authority
CN
China
Prior art keywords
parts
stem cell
adipose tissue
fat stem
cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810721866.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN108753712B (zh
Inventor
高雪华
海泉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CHENGDU QINGKE BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
CHENGDU QINGKE BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by CHENGDU QINGKE BIOTECHNOLOGY Co Ltd filed Critical CHENGDU QINGKE BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201810721866.XA priority Critical patent/CN108753712B/zh
Publication of CN108753712A publication Critical patent/CN108753712A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108753712B publication Critical patent/CN108753712B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602Vertebrate cells
    • C12N5/0652Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662Stem cells
    • C12N5/0667Adipose-derived stem cells [ADSC]; Adipose stromal stem cells
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明公开了一种脂肪干细胞提取方法,包括脂肪组织的采集,用表面活性剂对其处理,再用脂肪组织保护剂处理,接种培养等步骤,其中所用的表面活性剂包括以下重量份的组分:羟乙基淀粉550 0.3份、卵磷脂1份、聚山梨酯0.1份和PBS溶液98.6份;所用的脂肪组织保护剂包括以下重量份的组分:海藻糖0.2份、还原型谷胱苷肽0.05份、人血白蛋白2份、组氨酸1份、山梨酸0.025份、VC 0.5份和混合糖电解质注射液96.2份。该脂肪干细胞提取方法可有效解决脂肪干细胞在提取过程中由于脂肪油滴的存在导致细胞贴壁率低和细胞提取率低的问题。

Description

一种脂肪干细胞提取方法
技术领域
本发明涉及脂肪干细胞提取技术领域,具体涉及一种脂肪干细胞提取方法。
背景技术
脂肪源性干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ADSCs)是一类可以自我更新、繁殖的干细胞,具有一般干细胞的多向分化潜能和稳定的体外多代增殖能力。不仅能在不同诱导因子的作用下分化成为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌细胞、神经细胞等,而且还能分泌大量的、多类型的细胞因子及促进血管生成因子和凋亡因子,并能通过旁分泌作用于成纤维细胞,促进其分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原和纤连蛋白,促进胶原合成,可发挥抗炎、抗氧化、抗衰老、损伤修复等作用。脂肪组织储量丰富且获取简便,且无伦理争议,是组织工程研究中理想的种子细胞来源之一。
目前脂肪源干细胞的提取方式多采用机械法和酶消化、组织贴壁培养法,酶消化法和机械法等操作过程较繁琐,酶消化法消化时间长,消化后所得脂肪血管基质碎片(stromal vascular fraction,SVF)成分复杂;组织贴壁法操作步骤少,实验处理时间短,且不加入外源胶原酶、细胞因子等,成本较低,但在操作过程中脂肪油滴阻碍细胞贴壁,很难保证组织块全部贴壁,且换液时容易漂浮,细胞提取率不高。
发明内容
针对现有技术中的上述不足,本发明提供了一种脂肪干细胞提取方法,通过本发明提供的脂肪干细胞提取方法可有效解决脂肪干细胞在提取过程中由于脂肪油滴的存在导致细胞贴壁率低和细胞提取率低的问题。
为实现上述目的,本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
一种脂肪干细胞提取方法,包括以下步骤:
(1)采集人体脂肪组织;
(2))将采集的脂肪组织与等体积的表面活性剂充分混匀后离心;
所述表面活性剂包括以下重量份的组分:羟乙基淀粉550 0.3-0.5份、卵磷脂0.5-2.5份、聚山梨酯0.1-0.2份和PBS溶液99.1-99.8份;
(3)取步骤(2)离心后所得的上层脂肪组织,用等体积的脂肪组织保护剂充分混匀后离心;
所述脂肪组织保护剂包括以下重量份的组分:海藻糖0.1-0.3份、还原型谷胱苷肽0.01-0.1份、人血白蛋白1-5份、组氨酸0.5-1份、山梨酸0.02-0.03份、 Vc 0.1-1份和混合糖电解质注射液93.5-98.5份;
(4)将步骤(3)离心后所得的脂肪组织接种于培养瓶中,进行培养;
(5)每隔3-5天更换培养液,待细胞长至培养瓶的30%-80%时,弃去脂肪组织,并用生理盐水清洗培养瓶1-2次,然后加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化2-3min;
(6)取消化后的细胞,按照5000-8000个/cm2的接种比例进行传代扩增培养至P3代,待细胞长至培养瓶的80%-90%时,收集细胞,制得脂肪干细胞。
进一步地,步骤(2)中所用的表面活性剂包括以下重量份的组分:羟乙基淀粉5500.3份、卵磷脂1份、聚山梨酯0.1份和PBS溶液98.6份。
进一步地,步骤(2)中离心转速为1800-2200rpm,离心时间为4-6min。
进一步地,步骤(3)中所用脂肪组织保护剂包括以下重量份的组分:海藻糖0.2份、还原型谷胱苷肽0.05份、人血白蛋白2份、组氨酸1份、山梨酸0.025 份、Vc 0.5份和混合糖电解质注射液96.2份。
进一步地,步骤(3)中离心转速为1800-2200rpm,离心时间为4-6min。
进一步地,步骤(4)中的培养条件为37℃、5%二氧化碳浓度。
进一步地,步骤(5)中每隔4天更换培养液,待细胞长至培养瓶的60%-70%时,弃去脂肪组织。
采取上述方案所产生的有益效果为:
1、本发明提取方法,操作简便,分离过程中不使用胶原酶,避免了异种污染;培养时向其中加入了表面活性剂,可有效去除脂肪组织中的油滴,解决脂肪组织贴壁培养时细胞贴壁率低的问题;还加入了细胞保护液,可减少脂肪组织在离心过程中的损伤,使分离出的脂肪干细胞具有较高的增殖分化潜能,提高脂肪干细胞的提取量和提取效率。
2、提取时所用的表面活性剂由羟乙基淀粉550、卵磷脂和聚山梨酯组成,羟乙基淀粉550是从支链淀粉衍生出来的,其生理和化学特性是由羟乙基的平均分子量决定,平均分子量越大对红细胞的凝聚作用越强,羟乙基淀粉550可有效提高红细胞的沉降速度,使红细胞与其他细胞分离,卵磷脂和聚山梨酯为表面活性剂,能够去除脂肪中的油滴,提高细胞贴壁率,羟乙基淀粉550与卵磷脂和聚山梨酯合用,可有效去除脂肪组织中的杂质,使脂肪细胞能够充分贴壁生长。
3、细胞保护液由海藻糖、还原型谷胱苷肽、人血白蛋白、组氨酸、山梨醇和Vc组成,海藻糖是一种自然界中广泛存在的非还原性双糖,无毒副作用,化学性质十分稳定,除了具有低聚糖的一般特性,还有独特的生物学特性,在严酷环境下可保护生物体的组织和大分子的功能和活性,其具有以下活性:1)稳定生物膜和蛋白质的结构;2)保护生物体免受热和干燥的损伤;3)保护生物体免受缺氧的损伤;海藻糖可保护哺乳动物细胞免受缺氧的损伤;人血白蛋白可作为稳定剂和保护剂作用,并且是细胞培养基的重要成分,具有较强的保护作用,能够促进细胞增长,延长细胞存活时间,并可作为氮源为细胞提供营养,人血白蛋白可与海藻糖协同作用,增强海藻糖对细胞的保护作用,避免细胞受到损伤;
还原型谷胱苷肽属于负氢离子类物质,由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成,本品能激活多种酶,且能激活细胞内的自由基清除系统,促进糖、脂肪及蛋白质的代谢,从而能够使细胞保持较佳的状态,组织保护剂中添加还原型谷胱苷肽可在保护脂肪干细胞的同时,促进细胞代谢,使细胞维持生物活性;组氨酸具有抗氧化功能,是生命机体的重要物质基础,山梨醇具有提高脂肪干细胞提取成功率的作用,Vc可帮助脂肪细胞维持各种过氧化物酶的活性,防止氧自由基对细胞膜和细胞器造成损伤,还原型谷胱苷肽、组氨酸、山梨醇和Vc可协同作用,对于保护脂肪干细胞,避免其受到外界损伤起到关键作用。
具体实施方式
实施例1
一种脂肪干细胞提取方法,包括以下步骤:
(1)采集人体脂肪组织;
(2)将采集的脂肪组织与等体积的表面活性剂充分混匀后于1800rpm的离心机内离心4min;
所用表面活性剂包括以下重量份的组分:羟乙基淀粉550 0.3份、卵磷脂0.5 份、聚山梨酯0.1份和PBS溶液99.1份;
(3)取步骤(2)离心后的上层脂肪组织,与等体积的脂肪组织保护剂充分混匀后于1800rpm的离心机内离心4min;
所用脂肪组织保护剂包括以下重量份的组分:海藻糖0.1份、还原型谷胱苷肽0.01份、人血白蛋白1份、组氨酸0.5份、山梨酸0.02份、VC 0.1份和混合糖电解质注射液93.5份;
(4)将步骤(3)离心后所得的脂肪组织接种于培养瓶中,每瓶2-3ml,置于37℃、5%二氧化碳浓度的饱和湿度培养箱中培养;
(5)每隔3天更换培养液,待细胞长至培养瓶的30%-40%时,弃去脂肪组织,并用生理盐水清洗培养瓶1次,加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化 2-3min;
(6)取消化后的细胞,按照5000-8000个/cm2的接种比例进行传代扩增培养至P3代,待细胞长至培养瓶的80%-90%时,收集细胞,制得脂肪干细胞。
实施例2
一种脂肪干细胞提取方法,包括以下步骤:
(1)采集人体脂肪组织;
(2)将采集的脂肪组织与等体积的表面活性剂充分混匀后于2200rpm的离心机内离心6min;
所用表面活性剂包括以下重量份的组分:羟乙基淀粉550 0.5份、卵磷脂2.5 份、聚山梨酯0.2份和PBS溶液99.8份;
(3)取步骤(2)离心后的上层脂肪组织,与等体积的脂肪组织保护剂充分混匀后于2200rpm的离心机内离心6min;
所用脂肪组织保护剂包括以下重量份的组分:海藻糖0.3份、还原型谷胱苷肽0.1份、人血白蛋白5份、组氨酸1份、山梨酸0.03份、Vc 1份和混合糖电解质注射液99份;
(4)将步骤(3)离心后所得的脂肪组织接种于培养瓶中,每瓶2-3ml,置于37℃、5%二氧化碳浓度的饱和湿度培养箱中培养;
(5)每隔5天更换培养液,待细胞长至培养瓶的70%-80%时,弃去脂肪组织,并用生理盐水清洗培养瓶2次,加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化 2-3min;
(6)取消化后的细胞,按照5000-8000个/cm2的接种比例进行传代扩增培养至P3代,待细胞长至培养瓶的80%-90%时,收集细胞,制得脂肪干细胞。
实施例3
一种脂肪干细胞提取方法,包括以下步骤:
(1)采集人体脂肪组织;
(2)将采集的脂肪组织与等体积的表面活性剂充分混匀后于2000rpm的离心机内离心5min;
所用表面活性剂包括以下重量份的组分:羟乙基淀粉550 0.3份、卵磷脂1 份、聚山梨酯0.1份和PBS溶液98.6份;
(3)取步骤(2)离心后的上层脂肪组织,与等体积的脂肪组织保护剂充分混匀后于2000rpm的离心机内离心5min;
所用脂肪组织保护剂包括以下重量份的组分:海藻糖0.2份、还原型谷胱苷肽0.05份、人血白蛋白2份、组氨酸1份、山梨酸0.025份、Vc 0.5份和混合糖电解质注射液96.2份;
(4)将步骤(3)离心后所得的脂肪组织接种于培养瓶中,每瓶2-3ml,置于37℃、5%二氧化碳浓度的饱和湿度培养箱中培养;
(5)每隔4天更换培养液,待细胞长至培养瓶的60%-70%时,弃去脂肪组织,并用生理盐水清洗培养瓶2次,加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化 2-3min;
(6)取消化后的细胞,按照5000-8000个/cm2的接种比例进行传代扩增培养至P3代,待细胞长至培养瓶的80%-90%时,收集细胞,制得脂肪干细胞。
对比例1
一种脂肪干细胞提取方法,包括以下步骤:
(1)采集人体脂肪组织;
(2)将采集的脂肪组织与等体积的无菌生理盐水充分混匀后于2000rpm的离心机内离心5min;
(3)重复步骤(2)操作1次;
(4)将步骤(3)离心后所得的脂肪组织接种于培养瓶中,每瓶2-3ml,置于37℃、5%二氧化碳浓度的饱和湿度培养箱中培养;
(5)每隔4天更换培养液,待细胞长至培养瓶的60%-70%时,弃去脂肪组织,并用生理盐水清洗培养瓶2次,加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化 2-3min;
(6)取消化后的细胞,按照5000-8000个/cm2的接种比例进行传代扩增培养至P3代,待细胞长至培养瓶的80%-90%时,收集细胞,制得脂肪干细胞。
对比例2
一种脂肪干细胞培养方法,包括以下步骤:
(1)采集人体脂肪组织;
(2)将采集的脂肪组织与等体积的表面活性剂充分混匀后于2000rpm的离心机内离心5min;
所用表面活性剂包括以下重量份的组分:卵磷脂1份、聚山梨酯0.1份和 PBS溶液98.6份;
(3)取步骤(2)离心后的上层脂肪组织,与等体积的脂肪组织保护剂充分混匀后于2000rpm的离心机内离心5min;
所用脂肪组织保护剂包括以下重量份的组分:海藻糖0.2份、组氨酸1份、山梨酸0.025份、Vc 0.5份和混合糖电解质注射液96.2份;
(4)将步骤(3)离心后所得的脂肪组织接种于培养瓶中,每瓶2-3ml,置于37℃、5%二氧化碳浓度的饱和湿度培养箱中培养;
(5)每隔4天更换培养液,待细胞长至培养瓶的60%-70%时,弃去脂肪组织,并用生理盐水清洗培养瓶2次,加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化 2-3min;
(6)取消化后的细胞,按照5000-8000个/cm2的接种比例进行传代扩增培养至P3代,待细胞长至培养瓶的80%-90%时,收集细胞,制得脂肪干细胞。
实验例
为了避免随机性,分别对实施例1-3和对比例1-2的培养方法进行三组实验,分别对培养前后的脂肪干细胞进行统计,记录P0代和P3代的细胞数量,计算出细胞的成活率,详见表1;取实施例1-3和对比例1-2的P3代细胞,检测其主要表面标志物CD73、CD90、CD105、CD11b、CD19、CD34、CD45和HLA-DR,其中CD73、CD90、CD105表达量应≥95%,CD11b、CD19、CD34、CD45、 HLA-DR表达量≤2%,详见表2。
表1:
由表可知,按照实施例1-3的方法培养出的脂肪干细胞成活率相对较高,尤其是按照实施例3的方法培养出的脂肪干细胞,成活率最高。
表2:
由表可知,按照实施例1-3的方法提取所得的细胞流式表型等均稳定,能够满足临床应用需求。

Claims (7)

1.一种脂肪干细胞提取方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)采集人体脂肪组织;
(2))将采集的脂肪组织与等体积的表面活性剂充分混匀后离心;
所述表面活性剂包括以下重量份的组分:羟乙基淀粉550 0.3-0.5份、卵磷脂0.5-2.5份、聚山梨酯0.1-0.2份和PBS溶液99.1-99.8份;
(3)取步骤(2)离心后所得的上层脂肪组织,用等体积的脂肪组织保护剂充分混匀后离心;
所述脂肪组织保护剂包括以下重量份的组分:海藻糖0.1-0.3份、还原型谷胱苷肽0.01-0.1份、人血白蛋白1-5份、组氨酸0.5-1份、山梨酸0.02-0.03份、Vc 0.1-1份和混合糖电解质注射液93.5-98.5份;
(4)将步骤(3)离心后所得的脂肪组织接种于培养瓶中,进行培养;
(5)每隔3-5天更换培养液,待细胞长至培养瓶的30%-80%时,弃去脂肪组织,并用生理盐水清洗培养瓶1-2次,然后加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化2-3min;
(6)取消化后的细胞,按照5000-8000个/cm2的接种比例进行传代扩增培养至P3代,待细胞长至培养瓶的80%-90%时,收集细胞,制得脂肪干细胞。
2.如权利要求1所述的脂肪干细胞提取方法,其特征在于,步骤(2)中所用的表面活性剂包括以下重量份的组分:羟乙基淀粉550 0.3份、卵磷脂1份、聚山梨酯0.1份和PBS溶液98.6份。
3.如权利要求1所述的脂肪干细胞提取方法,其特征在于,步骤(2)中离心转速为1800-2200rpm,离心时间为4-6min。
4.如权利要求1所述的脂肪干细胞提取方法,其特征在于,步骤(3)中所用脂肪组织保护剂包括以下重量份的组分:海藻糖0.2份、还原型谷胱苷肽0.05份、人血白蛋白2份、组氨酸1份、山梨酸0.025份、VC 0.5份和混合糖电解质注射液96.2份。
5.如权利要求1所述的脂肪干细胞提取方法,其特征在于,步骤(3)中离心转速为1800-2200rpm,离心时间为4-6min。
6.如权利要求1所述的脂肪干细胞提取方法,其特征在于,步骤(4)中的培养条件为37℃、5%二氧化碳浓度。
7.如权利要求1所述的脂肪干细胞提取方法,其特征在于,步骤(5)中每隔4天更换培养液,待细胞长至培养瓶的60%-70%时,弃去脂肪组织。
CN201810721866.XA 2018-07-04 2018-07-04 一种脂肪干细胞提取方法 Active CN108753712B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810721866.XA CN108753712B (zh) 2018-07-04 2018-07-04 一种脂肪干细胞提取方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810721866.XA CN108753712B (zh) 2018-07-04 2018-07-04 一种脂肪干细胞提取方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108753712A true CN108753712A (zh) 2018-11-06
CN108753712B CN108753712B (zh) 2022-11-01

Family

ID=63975844

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810721866.XA Active CN108753712B (zh) 2018-07-04 2018-07-04 一种脂肪干细胞提取方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108753712B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109735490A (zh) * 2019-03-06 2019-05-10 福建省海西细胞生物工程有限公司 一种脂肪干细胞提取方法
CN109845728A (zh) * 2019-03-25 2019-06-07 西安医斯美生物科技有限公司 临床应用级别的脂肪组织冻存液及冻存方法
CN111821252A (zh) * 2020-08-12 2020-10-27 辽宁盛京干细胞科技有限公司 一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102732477A (zh) * 2012-06-15 2012-10-17 江苏瑞思坦生物科技有限公司 人脂肪干细胞无血清基础培养基
CN103484427A (zh) * 2013-08-28 2014-01-01 中国人民解放军南京军区福州总医院 一种经卵磷脂处理的脂肪基质血管组分制备技术
CN104164403A (zh) * 2014-07-25 2014-11-26 大连大学 一种提取及培养脂肪干细胞的方法
CN104922059A (zh) * 2015-05-21 2015-09-23 北京青藤谷禧干细胞科技研究院有限公司 一种脐带间充质干细胞注射液及其制备方法和应用
CN105886462A (zh) * 2014-08-27 2016-08-24 瑞安市普罗生物科技有限公司 用于ADSCs培养的组合物及ADSCs培养方法
CN107823632A (zh) * 2017-11-10 2018-03-23 南京九圣生物科技股份有限公司 一种骨髓间充质干细胞注射液及制备方法
CN108056095A (zh) * 2017-12-28 2018-05-22 重庆斯德姆生物技术有限公司 一种脂肪间充质干细胞运输保护液及其应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102732477A (zh) * 2012-06-15 2012-10-17 江苏瑞思坦生物科技有限公司 人脂肪干细胞无血清基础培养基
CN103484427A (zh) * 2013-08-28 2014-01-01 中国人民解放军南京军区福州总医院 一种经卵磷脂处理的脂肪基质血管组分制备技术
CN104164403A (zh) * 2014-07-25 2014-11-26 大连大学 一种提取及培养脂肪干细胞的方法
CN105886462A (zh) * 2014-08-27 2016-08-24 瑞安市普罗生物科技有限公司 用于ADSCs培养的组合物及ADSCs培养方法
CN104922059A (zh) * 2015-05-21 2015-09-23 北京青藤谷禧干细胞科技研究院有限公司 一种脐带间充质干细胞注射液及其制备方法和应用
CN107823632A (zh) * 2017-11-10 2018-03-23 南京九圣生物科技股份有限公司 一种骨髓间充质干细胞注射液及制备方法
CN108056095A (zh) * 2017-12-28 2018-05-22 重庆斯德姆生物技术有限公司 一种脂肪间充质干细胞运输保护液及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JUNG EUN LEE等: "Adipogenic Differentiation of Human Adipose Tissue–Derived Stem Cells Obtained from Cryopreserved Adipose Aspirates", 《DERMATOL SURG》 *
吴尉等: "人脂肪干细胞的提取和鉴定", 《中国组织工程研究》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109735490A (zh) * 2019-03-06 2019-05-10 福建省海西细胞生物工程有限公司 一种脂肪干细胞提取方法
CN109845728A (zh) * 2019-03-25 2019-06-07 西安医斯美生物科技有限公司 临床应用级别的脂肪组织冻存液及冻存方法
CN109845728B (zh) * 2019-03-25 2021-07-23 西安医斯美生物科技有限公司 临床应用级别的脂肪组织冻存液及冻存方法
CN111821252A (zh) * 2020-08-12 2020-10-27 辽宁盛京干细胞科技有限公司 一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108753712B (zh) 2022-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103667187B (zh) 一种人脂肪干细胞的分离培养方法和干细胞库的构建方法
CN103070161B (zh) 一种脂肪间充质干细胞冻存液及冻存方法
CN101919380A (zh) 一种改进的间充质干细胞保护液及其用途
CN102660497A (zh) 脐带组织冻存、复苏以及分离和扩增干细胞的方法
CN108753712A (zh) 一种脂肪干细胞提取方法
CN102100152A (zh) 一种蛹虫草子实体的人工培养方法及其培养基
CN105586309A (zh) 一种获得安全、有效的脐带间充质干细胞的方法
CN106318906A (zh) 一种大规模培养人脐带间充质干细胞的方法
CN104762259A (zh) 一种间充质干细胞的培养基及其大规模培养方法
CN102660503A (zh) 从脐带中分离和扩增间充质干细胞的方法
CN103688759A (zh) 一种以蚕蛹为载体培养人工虫草的方法
CN103409365B (zh) 一种短须裂腹鱼心脏细胞系的构建和超低温冷冻保存方法
CN101705219B (zh) 可高效水解淡水鱼及鱼类下脚料的蛋白酶生产方法
CN104651305A (zh) 一种利用脐带间充质干细胞获取生物活性蛋白的方法
CN109735490A (zh) 一种脂肪干细胞提取方法
CN105248150A (zh) 一种提高蛹虫草子实体中虫草素含量的方法
CN104630142A (zh) 一种牛脐带间充质干细胞的分离及培养方法
CN103497892A (zh) 一种细胞培养基材及其制备方法和应用
CN108977367B (zh) 一株黑曲霉菌株及其在降解油茶饼粕中茶皂素的应用
CN117063780A (zh) 一种冬虫夏草子囊孢子采收培养基及其采收方法
CN102321569B (zh) 一种石鲽肝脏细胞系的构建方法
CN103688760A (zh) 一种以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法
CN103232950A (zh) 刺参希瓦氏菌hs7菌株及用途
CN110373384A (zh) 一种无血清脂肪干细胞培养基及脂肪干细胞的培养方法
CN105238747A (zh) 人工模拟骨髓微环境培养骨髓间充质干细胞的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant