CN108739398B - 一种优良番茄品种离体培养及微芽嫁接方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于农业生产领域，具体涉及一种优良番茄品种茎段离体培养及微芽嫁接方法。包括以下步骤：（1）将选育的具有优良品质番茄品种通过茎段离体诱导、增殖培养获得的有效苗；（2）将具有抗土传病害的番茄砧木品种的种子经诱导培养得到获得无菌砧木苗；（3）将有效苗嫁接在瓶内砧木上，经过培养后，得到生长稳定的嫁接苗，经7‑10d自然光炼苗后，移栽温室穴盘20‑30d后，可移栽到田间定植。移栽到田间定植。该培养方法成本低，番茄产量高，品质优良、抗逆性强，适应性强，便于大面积推广应用。

Description

一种优良番茄品种离体培养及微芽嫁接方法
技术领域
本发明属于农业生产领域，具体涉及一种优良番茄品种茎段离体培养及微芽嫁接方法。
背景技术
番茄富含蛋白质、糖、矿物质及丰富的维生素，其营养丰富，风味鲜美，是设施栽培中的重要作物之一。番茄可以连续开花和坐果，在生产上，采用离体培养可有效的节约成本，能够提高番茄利用率，提高产量和品质。
在我国南方，耕地面积少、土传病害严重、连作障碍等原因都制约着番茄发展。番茄的无土栽培用苗量较大，成本高，且植株易早衰，总产量不高。所以需要一种优良番茄品种茎段离体培养及微芽嫁接方法满足番茄栽培的需求。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种优良番茄品种茎段离体培养及微芽嫁接方法。该培养方法成本低，番茄产量高。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
一种优良番茄品种离体培养及微芽嫁接方法，包括以下步骤：
（1）将选育的具有优良品质的番茄品种通过茎段离体诱导、20-25d增殖培养获得有效苗；
（2）将具有抗土传病害的番茄砧木品种的种子经25-30d诱导培养获得无菌砧木苗；
（3）利用嫁接针将步骤（1）获得的有效苗嫁接在步骤（2）获得的无菌砧木苗上，再经壮苗、生根培养后，得到生长稳定的嫁接苗，经7-10d自然光炼苗，经温室穴盘培养后，移栽到田间定植。
步骤（1）有效苗的具体培养方法为：
1）材料选取与消毒：取出番茄的种子用流水冲洗干净，置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min，置自来水下冲滴0.5h，双蒸水冲荡2-3次，在超净工作台内用体积分数为75%酒精消毒30s，加入0.1wt%次氯酸溶液处理10-13min，无菌水冲3-4遍，用消毒滤纸吸干表面水分后进行接种；
2）诱导培养：经步骤1）处理后的种子，接种于经高温高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间12h/d，光照强度1000-15001x，培养时间25-30d；
3）增殖培养：将经诱导培养所得到的生长良好的芽切成长度为2-3cm，接种于增殖培养基中进行增殖诱导培养，光照时间12h/d，光照强度1500-20001x，增殖培养时间20-25d。
步骤2）所述的芽诱导培养基的配方为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.3mg/LNAA+25g/L糖+6.5g/L
琼脂+1.5g/L活性炭+ 50mg/L氨节青霉素+30mg/L硫酸链霉素，pH5.8。
步骤3）所述的增殖培养基的配方为：MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.lmg/LNAA +0.01mg/LTDZ+25g/L糖+6.5g/L琼脂+1.5g/L活性炭，pH5.8。
步骤（2）具体为：取出优选番茄砧木种子用流水冲洗干净，置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min，自来水下冲滴0.5-1h，双蒸水冲荡2-3次，在超净工作台内用体积分数为75%酒精消毒30s，加入0.1wt%升汞处理10-13min，无菌水冲3-4遍，用消毒滤纸吸干表面水分后接种于经高温高压灭菌的芽诱导培养基中，培养条件为培养室温度23±2℃，光照时间12h/d，光照强度1000-1500 1x，培养时间25-30d，得无菌砧木苗。
步骤（3）所述的嫁接具体为：砧木苗勿需挖出，用嫁接针剔除其真叶和生长点，左手摄子轻捏砧木苗子叶节，右手持嫁接针，紧贴砧木一片子叶基部内侧向另一片子叶下方斜插，深度0.5~0.8 cm，嫁接针尖端不要穿破胚轴表皮，以手指能感觉到其尖端压力为度，嫁接针暂不拔出；然后用刀片在接穗子叶节下0.5 cm处呈30°角向下斜切，切口长度0.5~0.8 cm，接着从背面再切一刀，使下胚轴呈不对称楔形；拔出嫁接针，将削好的接穗——有效苗插入砧木小孔中，使两者密接。
步骤（3）所述的温室穴盘培养为：将炼苗后的嫁接苗从试管中取出，洗净根部残留培养基，移栽入装有培养土的培养钵中；穴盘上罩以塑料袋，保持水分，移栽后3～8d浇水1次；待嫁接苗生长稳定后，将上面的塑料袋去除，20~30d后，嫁接苗长大，移栽到田间定植；所述的培养土是由珍珠岩、蛭石、泥炭土、椰糠按质量比1:1:1:1混合而成的。
本发明的有益效果在于：
与传统的繁殖技术相比，提供一种优良番茄品种茎段离体培养及微芽嫁接方法，具有以下优点：15-20天即可萌发生长出健壮的胚芽；再经过20-30天增殖培养和15-20天壮苗培养，嫁接后后3-8天植株稳定，15-30天后可以移栽到田间生长。通过本方法生产的番茄苗与种子繁殖获得的番茄苗进行比较，本方法成本节省50%，获得的苗量增加200%，栽培管理上可以减少用药成本50%，并且产量增加30%。
具体实施方式
为进一步公开而不是限制本发明，以下结合实例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
一种优良番茄品种茎段离体培养及微芽嫁接方法，包括以下步骤：
（1）将具有优良品质的番茄品种通过茎段离体诱导、25d增殖培养获得有效苗；
（2）将具有抗土传病害的番茄砧木品种的种子经25d诱导培养得到砧木苗；
（3）将有效苗嫁接在瓶内砧木上，经过培养后，得到生长稳定的嫁接苗，经7d自然光炼苗，经温室穴盘培养后，移栽到田间定植。
步骤（1）有效苗的具体培养方法为：
1）材料选取与消毒：取出番茄种子用流水冲洗干净，置于饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗，冲洗干净后，自来水下冲滴1h，双蒸水冲荡3次，在超净工作台内用体积分数为75%酒精消毒30s，加入0.1wt%次氯酸溶液处理10min，无菌水冲4遍，用消毒滤纸吸干表面水分后进行接种；
2）诱导培养：经步骤1）处理后的种子，接种于经高温高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间10h/d，光照强度1000 1x，培养时间20d；
3）增殖培养：将经诱导培养所得到的生长良好的丛生芽切开并剪成长度为2-3cm，接种在增殖培养基中，光照时间12h/d，光照强度1500 1x，增殖培养时间25d。
步骤2）所述的芽诱导培养基的配方为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.3mg/LNAA+25g/L糖+6.5g/L琼脂+1.5g/L活性炭+ 200mg/L氨节青霉素+150mg/L硫酸链霉素。
步骤3）所述的增殖培养基的配方为：MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.lmg/LNAA +0.02mg/LTDZ+25g/L糖+6.5g/L琼脂+1.5g/L活性炭。
步骤（2）具体为：取出优良番茄砧木种子用流水冲洗干净，置于饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗，冲洗干净后，自来水下冲滴1h，双蒸水冲荡3次，在超净工作台内用体积分数为75%酒精消毒30s，加入0.1wt%升汞处理10min，无菌水冲4遍，用消毒滤纸吸干表面水分后接种于经高温高压灭菌的芽诱导培养基中，培养条件为培养室温度23±2℃，光照时间10h/d，光照强度1000 1x，培养时间25d，得砧木苗。
步骤（3）所述的嫁接具体为：砧木苗勿需挖出，用嫁接针剔除其真叶和生长点，左手轻捏砧木苗子叶节，右手持嫁接针，紧贴砧木一片子叶基部内侧向另一片子叶下方斜插，深度0.5 cm，嫁接针尖端不要穿破胚轴表皮，以手指能感觉到其尖端压力为度，嫁接针暂不拔出；然后用刀片在接穗子叶节下0.5 cm处呈30°角向下斜切，切口长度0.8 cm，接着从背面再切一刀，使下胚轴呈不对称楔形；拔出嫁接针，将削好的接穗——有效苗插入砧木小孔中，使两者密接。
步骤（3）所述的培养为：嫁接后，待嫁接苗长出4片叶后便可进行移栽，将待移栽的嫁接苗在自然光下炼苗1周，在移栽前准备好培养土，配好后高压灭菌，将经过高压灭菌的培养土分装在培养钵中；将嫁接苗从试管中取出，洗净根部的培养液，移栽入培养钵中；把试管中残留的培养液倒入培养钵，用清水浇灌，直到底部有水滴出；培养钵上罩以塑料袋，保持水分，移栽后3d浇水1次；待嫁接苗生长稳定后，将上面的塑料袋去除，30d后，番茄苗长大，移栽到大的培养钵中继续生长；培养土是由珍珠岩、蛭石、泥炭土、椰糠按质量比1:1:1:1混合而成的。
实施例2
一种优良番茄品种茎段离体培养及微芽嫁接方法，包括以下步骤：
（1）将具有优良品质的番茄品种通过茎段离体诱导、20d增殖培养获得有效苗；
（2）将具有抗土传病害的番茄砧木品种的种子经30d诱导培养得到砧木苗；
（3）将有效苗嫁接在瓶内砧木上，经过培养后，得到生长稳定的嫁接苗，经7d自然光炼苗，经温室穴盘培养后，移栽到田间定植。
步骤（1）有效苗的具体培养方法为：
1）材料选取与消毒：取出番茄种子用流水冲洗干净，置于饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗，冲洗干净后，自来水下冲滴1h，双蒸水冲荡3次，在超净工作台内用体积分数为75%酒精消毒30s，加入0.1wt%次氯酸溶液处理10-13min，无菌水冲3遍，用消毒滤纸吸干表面水分后进行接种；
2）诱导培养：经步骤1）处理后的种子，接种于经高温高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间10h/d，光照强度1500 1x，培养时间15d；
3）增殖培养：将经诱导培养所得到的生长良好的丛生芽切开并剪成长度为3cm，接种在增殖培养基中，光照时间12h/d，光照强度2000 1x，增殖培养时间20d。
步骤2）所述的芽诱导培养基的配方为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.3mg/LNAA+25g/L糖+6.5g/L琼脂+1.5g/L活性炭+ 200mg/L氨节青霉素+150mg/L硫酸链霉素。
步骤3）所述的增殖培养基的配方为：MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.lmg/LNAA
+0.02mg/LTDZ+25g/L糖+6.5g/L琼脂+1.5g/L活性炭。
步骤（2）具体为：取出优良番茄砧木种子用流水冲洗干净，置于饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗，冲洗干净后，自来水下冲滴2h，双蒸水冲荡2次，在超净工作台内用体积分数为75%酒精消毒30s，加入0.1wt%升汞处理13min，无菌水冲3遍，用消毒滤纸吸干表面水分后接种于经高温高压灭菌的芽诱导培养基中，培养条件为培养室温度23±2℃，光照时间10h/d，光照强度1500 1x，培养时间30d，得砧木苗。
步骤（3）所述的嫁接具体为：砧木苗勿需挖出，用嫁接针剔除其真叶和生长点，左手轻捏砧木苗子叶节，右手持嫁接针，紧贴砧木一片子叶基部内侧向另一片子叶下方斜插，深度0.8 cm，嫁接针尖端不要穿破胚轴表皮，以手指能感觉到其尖端压力为度，嫁接针暂不拔出；然后用刀片在接穗子叶节下0.5 cm处呈30°角向下斜切，切口长度0.5 cm，接着从背面再切一刀，使下胚轴呈不对称楔形；拔出嫁接针，将削好的接穗——有效苗插入砧木小孔中，使两者密接。
步骤（3）所述的培养为：嫁接后，待嫁接苗长出4片叶后便可进行移栽，将待移栽的嫁接苗在自然光下炼苗1周，在移栽前准备好培养土，配好后高压灭菌，将经过高压灭菌的培养土分装在培养钵中；将嫁接苗从试管中取出，洗净根部的培养液，移栽入培养钵中；把试管中残留的培养液倒入培养钵，用清水浇灌，直到底部有水滴出；培养钵上罩以塑料袋，保持水分，移栽后8d浇水1次；待嫁接苗生长稳定后，将上面的塑料袋去除，30d后，苗木长大，移栽到大的培养钵中继续生长；培养土是由珍珠岩、蛭石、泥炭土、椰糠按质量比1:1:1:1混合而成的。
实施例3
一种优良番茄品种茎段离体培养及微芽嫁接方法，包括以下步骤：
（1）将具有优良品质的番茄品种通过茎段离体诱导、22d增殖培养获得有效苗；
（2）将具有抗土传病害的番茄砧木品种的种子经28d诱导培养得到砧木苗；
（3）将有效苗嫁接在瓶内砧木上，经过培养后，得到生长稳定的嫁接苗，经7d自然光炼苗，经温室穴盘培养后，移栽到田间定植。
步骤（1）有效苗的具体培养方法为：
1）材料选取与消毒：取出番茄种子用流水冲洗干净，置于饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗，冲洗干净后，自来水下冲滴1h，双蒸水冲荡2次，在超净工作台内用体积分数为75%酒精消毒30s，加入0.1wt%次氯酸溶液处理11min，无菌水冲3遍，用消毒滤纸吸干表面水分后进行接种；
2）诱导培养：经步骤1）处理后的种子，接种于经高温高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间10h/d，光照强度1200 1x，培养时间18d；
3）增殖培养：将经诱导培养所得到的生长良好的丛生芽切开并剪成长度为3cm，接种在增殖培养基中，光照时间12h/d，光照强度1800 1x，增殖培养时间22d。
步骤2）所述的芽诱导培养基的配方为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.3mg/LNAA+25g/L糖+6.5g/L琼脂+1.5g/L活性炭+ 200mg/L氨节青霉素+150mg/L硫酸链霉素。
步骤3）所述的增殖培养基的配方为：MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.lmg/LNAA
+0.02mg/LTDZ+25g/L糖+6.5g/L琼脂+1.5g/L活性炭。
步骤（2）具体为：取出优良番茄砧木种子用流水冲洗干净，置于饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗，冲洗干净后，自来水下冲滴1h，双蒸水冲荡3次，在超净工作台内用体积分数为75%酒精消毒30s，加入0.1wt%升汞处理10min，无菌水冲4遍，用消毒滤纸吸干表面水分后接种于经高温高压灭菌的芽诱导培养基中，培养条件为培养室温度23±2℃，光照时间10h/d，光照强度1300 1x，培养时间28d，得砧木苗。
步骤（3）所述的嫁接具体为：砧木苗勿需挖出，用嫁接针剔除其真叶和生长点，左手轻捏砧木苗子叶节，右手持嫁接针，紧贴砧木一片子叶基部内侧向另一片子叶下方斜插，深度0.6cm，嫁接针尖端不要穿破胚轴表皮，以手指能感觉到其尖端压力为度，嫁接针暂不拔出；然后用刀片在接穗子叶节下0.5 cm处呈30°角向下斜切，切口长度0.6 cm，接着从背面再切一刀，使下胚轴呈不对称楔形；拔出嫁接针，将削好的接穗——有效苗插入砧木小孔中，使两者密接。
步骤（3）所述的培养为：嫁接后，待嫁接苗长出4片叶后便可进行移栽，将待移栽的嫁接苗在自然光下炼苗1周，在移栽前准备好培养土，配好后高压灭菌，将经过高压灭菌的培养土分装在培养钵中；将嫁接苗从试管中取出，洗净根部的培养液，移栽入培养钵中；把试管中残留的培养液倒入培养钵，用清水浇灌，直到底部有水滴出；培养钵上罩以塑料袋，保持水分，移栽后6d浇水1次；待嫁接苗生长稳定后，将上面的塑料袋去除，30d后，苗木长大，移栽到大的培养钵中继续生长；培养土是由珍珠岩、蛭石、泥炭土、椰糠按质量比1:1:1:1混合而成的。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (4)

1.一种优良番茄品种离体培养及微芽嫁接方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将选育的具有优良品质的番茄品种通过茎段离体诱导、20-25d增殖培养获得有效苗；
(2)将具有抗土传病害的番茄砧木品种的种子经25-30d诱导培养获得无菌砧木苗；
(3)利用嫁接针将步骤(1)获得的有效苗嫁接在步骤(2)获得的无菌砧木苗上，再经壮苗、生根培养后，得到生长稳定的嫁接苗，经7-10d自然光炼苗，经温室穴盘培养后，移栽到田间定植；
步骤(1)有效苗的具体培养方法为：
1)材料选取与消毒：取出番茄的种子用流水冲洗干净，置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min，置自来水下冲滴0.5h，双蒸水冲荡2-3次，在超净工作台内用体积分数为75％酒精消毒30s，加入0.1wt％次氯酸溶液处理10-13min，无菌水冲3-4遍，用消毒滤纸吸干表面水分后进行接种；
2)诱导培养：经步骤1)处理后的种子，接种于经高温高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间12h/d，光照强度1000-1500lx，培养时间25-30d；
所述芽诱导培养基的配方为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.3mg/LNAA+25g/L糖+6.5g/L琼脂+1.5g/L活性炭+50mg/L氨基青霉素+30mg/L硫酸链霉素，pH5.8；
3)增殖培养：将经诱导培养所得到的生长良好的芽切成长度为2-3cm，接种于增殖培养基中进行增殖诱导培养，光照时间12h/d，光照强度1500-2000lx，增殖培养时间20-25d；
步骤(2)具体为：取出优选番茄砧木种子用流水冲洗干净，置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min，自来水下冲滴0.5-1h，双蒸水冲荡2-3次，在超净工作台内用体积分数为75％酒精消毒30s，加入0.1wt％升汞处理10-13min，无菌水冲3-4遍，用消毒滤纸吸干表面水分后接种于经高温高压灭菌的所述芽诱导培养基中，培养条件为培养室温度23±2℃，光照时间12h/d，光照强度1000-1500lx，培养时间25-30d，得无菌砧木苗；
步骤(3)所述的嫁接具体为：砧木苗勿需挖出，用嫁接针剔除其真叶和生长点，左手摄子轻捏砧木苗子叶节，右手持嫁接针，紧贴砧木一片子叶基部内侧向另一片子叶下方斜插，深度0.5～0.8cm，嫁接针尖端不要穿破胚轴表皮，以手指能感觉到其尖端压力为度，嫁接针暂不拔出；然后用刀片在接穗子叶节下0.5cm处呈30°角向下斜切，切口长度0.5～0.8cm，接着从背面再切一刀，使下胚轴呈不对称楔形；拔出嫁接针，将削好的接穗——有效苗插入砧木小孔中，使两者密接。
2.根据权利要求1所述的优良番茄品种离体培养及微芽嫁接方法，其特征在于：步骤3)所述的增殖培养基的配方为：MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.lmg/LNAA+0.01mg/LTDZ+25g/L糖+6.5g/L琼脂+1.5g/L活性炭，pH5.8。
3.根据权利要求1所述的优良番茄品种离体培养及微芽嫁接方法，其特征在于：步骤(3)所述的温室穴盘培养为：将炼苗后的嫁接苗从试管中取出，洗净根部残留培养基，移栽入装有培养土的培养钵中；穴盘上罩以塑料袋，保持水分，移栽后3～8d浇水1次；待嫁接苗生长稳定后，将上面的塑料袋去除，20～30d后，嫁接苗长大，移栽到田间定植。
4.根据权利要求3所述的优良番茄品种离体培养及微芽嫁接方法，其特征在于：所述的培养土是由珍珠岩、蛭石、泥炭土、椰糠按质量比1:1:1:1混合而成的。
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