CN108728376A - 枯草芽胞杆菌、其制剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种枯草芽胞杆菌，其保藏编号为CGMCC No.8925。本发明还提供了一种枯草芽胞杆菌制剂及其应用。本发明提供的枯草芽胞杆菌制剂活菌含量高，活菌含量(芽胞)达2.0×10¹¹cfu/g，保质期长，对小麦全蚀病、根腐病和纹枯病均有显著防治效果，大田试验对小麦全蚀病的防治效果达68％以上，对小麦根腐病的防治效果达72％以上，对小麦纹枯病的防治效果达70％以上。

Description

枯草芽胞杆菌、其制剂及其应用

技术领域

本发明属于枯草芽胞杆菌技术领域，尤其涉及一种枯草芽胞杆菌、其制剂及其应用。

背景技术

小麦作为世界上分布最广的三大粮食作物之一，产量和种植面积居于栽培谷物的首位，我国每年种植小麦的面积约3000万公顷。小麦在我国的种植历史悠久，迄今已有5000多年历史，其中河南、河北、山东、湖北、江苏、安徽等省是我国小麦的主要产区。近年来，小麦的生产受到许多真菌病害的影响，特别是小麦根茎部的真菌病害，近些年有进一步扩大发展的趋势，对小麦的产量和品质造成了很大的危害。

小麦根茎部主要真菌病害包括小麦根腐病、小麦纹枯病和小麦全蚀病，这三种主要病害都属于土传真菌病害，并且发生在小麦的各个生长时期。这些病害的发生均能造成小麦的严重减产，而且这些病害经常混合发生，在小麦苗期引起的症状也不太容易区分，这就造成了早期防治的困难。研究表明，引起小麦纹枯病的病原菌主要是禾谷丝核菌(Rhizotonia cerealis)，引起小麦根腐病的病原菌主要为禾旋孢腔菌(Cochliobolussativus)，引起小麦全蚀病的病原菌为禾顶囊壳小麦变种(Gaeumannomyces graminisvar.tritici)。

生物防治绿色环保，病原菌不易产生耐药性。芽胞杆菌(Bacillus spp.)在自然界中广泛存在，为非致病细菌，对人畜无毒无害；在植物根际土壤及植株体内有效定殖，对多种植物病原菌有广谱拮抗活性；调节土壤微环境，促进作物生长。芽胞杆菌突出的特征是能够产生抗逆耐热的芽胞，有利于菌种筛选、菌剂制备、在环境中存活定殖，田间防效显著，较非芽胞杆菌和真菌生防菌性能优良。芽胞杆菌生防制剂生产工艺较简单，应用前景广阔。

目前小麦根部真菌病害生防菌剂的开发应用尚属薄弱环节，拮抗菌剂的类型、品种、功能、质量等方面与实际生产需要还存在一定差距，如菌种不适于大规模生产或生产成本高，价格昂贵；产品稳定性差、保质期短，不利于储藏和运输；产品活菌含量低，作用效果不显著等；产品功能单一，实际生产应用困难。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供枯草芽胞杆菌、其制剂及其应用，本发明提供的枯草芽胞杆菌制剂活菌含量高，保质期长，对小麦全蚀病、小麦根腐病和小麦纹枯病均有显著防治效果。

本发明提供了一种枯草芽胞杆菌，其保藏编号为CGMCC No.8925。

本发明提供的枯草芽胞杆菌菌落圆形，边缘整齐，表面不光滑有皱褶，不产生色素；革兰氏阳性，菌体杆状，芽胞呈椭圆形中生；菌株呈氧化酶阳性；可利用葡萄糖、甘露醇、乳糖，不利用葡萄糖产气；V-P反应、明胶液化、酪素水解及淀粉水解反应阳性，脲酶酶反应阴性；可耐受10％NaCl，硝酸盐还原反应阳性。将拮抗细菌Z-5菌株菌体形态、菌落特征及生理生化试验结果与《伯杰氏细菌鉴定手册》进行对照，初步鉴定Z-5菌株为Bacillus spp.。

利用通用引物27f/1495r扩增其16S rDNA，PCR产物测序结果在NCBI数据库中用Blast进行分析，与模式菌株进行同源性比较，用MEGA5.0软件构建系统发育树。结果表明，其与Bacillus subtilis NRRLB23049同处于一个分支。根据16S rDNA序列相似性分析，确定其属于枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)。

本发明还提供了一种枯草芽胞杆菌制剂，由上述技术方案所述的枯草芽胞杆菌经发酵、离心、喷雾干燥获得。

在一个实施例中，所述枯草芽胞杆菌固体制剂中活菌含量＞1.5×10¹¹cfu/g。

上述技术方案所述的枯草芽胞杆菌制剂在防治小麦根部真菌病害中的应用，具体而言，所述小麦根部真菌病害为小麦全蚀病、小麦根腐病或/和小麦纹枯病。优选的，所述小麦根部真菌病害为小麦全蚀病、小麦根腐病和小麦纹枯病。

对上述枯草芽胞杆菌菌剂防治小麦根部真菌病害效果进行调查，小麦播种后7d开始出苗，10d后基本上全部出苗。对试验小区麦田的出苗情况调查结果发现，菌剂组和药剂组出苗情况较好，叶色浓绿，麦苗粗壮健壮。发病对照地块小麦出苗较为稀疏矮小，叶尖发黄。小麦过冬返青后，菌剂组和药剂组小麦植株长势较好，叶色绿，对照组小麦植株稀疏，长势较弱，叶尖泛黄。在拔节期对小麦植株的生长情况进行调查发现，菌剂组麦苗长势较好，植株健壮、稠密，叶片浓绿、肥厚，株高较对照组明显增高。生防菌处理的小麦全蚀病病情指数明显降低，为6.03，较对照组的18.96显著下降，防治效果达68.20％，好于药剂组的55.85％；生防菌处理组小麦纹枯病病情指数为5.69，未处理发病地块病情指数为20.13，防治效果为71.73％，优于药剂组的61.25％；生防菌处理小麦根腐病病情指数为6.98，未处理发病地块病情指数为25.06，生防菌防治效果为72.15％，优于药剂组的58.90％。在小麦乳熟期对全蚀病防治效果调查显示，和对照组相比，菌剂组株高和产量增加显著，小麦产量由657.53g/m²增加到790.46g/m²，效果显著；小麦根腐病防治效果调查显示，菌剂处理组株高和产量增加显著，产量由发病地块对照组的653.61g/m²增加到菌剂处理组的791.30g/m²，效果显著；小麦纹枯病防治效果调查显示，菌剂处理组株高和产量增加显著，产量由发病地块对照组的679.78g/m²增加到菌剂处理组的779.93g/m²，效果显著。

本发明提供的枯草芽胞杆菌制剂活菌含量高，活菌含量(芽胞)达2.0×10¹¹cfu/g，保质期长，对小麦全蚀病、小麦根腐病和小麦纹枯病均有显著防治效果，大田试验对小麦全蚀病的防治效果达68％以上，对小麦根腐病的防治效果达72％以上，对小麦纹枯病的防治效果达70％以上。

生物保藏说明

生物材料：Z-5，分类命名：枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)，已于2014年3月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏编号为CGMCC No.8925。

附图说明

图1为芽胞杆菌菌株Z-5对小麦全蚀病菌的拮抗作用图；

图2为芽胞杆菌菌株Z-5对小麦纹枯病菌的拮抗作用图；

图3为芽胞杆菌菌株Z-5对小麦根腐病菌的拮抗作用图；

图4为枯草芽胞杆菌菌株Z-5的菌落形态图；

图5为枯草芽胞杆菌菌株Z-5的菌体形态图；

图6为枯草芽胞杆菌菌株Z-5的芽胞形态图；

图7为基于16S rDNA序列的拮抗菌Z-5菌株及相关菌株的系统发育树。

具体实施方式

实施例

一株对小麦全蚀病、小麦根腐病和小麦纹枯病等小麦根部主要真菌病害有显著防治效果的枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)菌株Z-5，其菌种保藏号CGMCC No.8925，分离自小麦根系。

具体获得方法如下：

1、小麦根系芽胞杆菌的分离

从小麦大田采集小麦幼苗，回收根部，自来水冲洗干净，用滤纸将水分吸干，依次用5％H₂O₂表面消毒3min，75％酒精处理30s～1min，无菌水冲洗3次，然后在无菌研钵中碾碎，放入灭菌的装有玻璃珠和50mL蒸馏水的三角瓶中，摇床震荡1h，80℃水浴加热15min，进行系列梯度稀释，取合适稀释度的样品100μL涂布在NA平板上，37℃培养过夜，挑取不同菌落形态的单菌落接种到NA斜面，37℃培养过夜，置于4℃冰箱保存备用。

2、拮抗小麦根部真菌病原菌的芽胞杆菌的筛选

拮抗小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminis var.tritici)、小麦根腐病菌禾旋孢腔菌(Cochliobolus sativus)和小麦纹枯病菌禾谷丝核菌(Rhizotoniacerealis)的芽胞杆菌的筛选采用对峙培养法进行。

拮抗小麦全蚀病菌的芽胞杆菌的筛选：将保存的病原菌接种到PDA平板，25℃培养箱培养5d，挑取活化的病原菌直径7mm的菌片接种到新鲜的PDA平板中央，在距离菌片3cm处以点接种的方式接种分离的芽胞杆菌菌株，每个平板接种4株，25℃培养箱倒置培养5d，观察抑菌带生成情况。

拮抗小麦根腐病菌和小麦纹枯病菌的芽胞杆菌的筛选：将保存的病原菌接种到新鲜的PDA斜面，25℃培养箱培养7d，将5mL无菌水加入病原菌斜面，用灭菌竹签轻刮病原菌，使孢子悬浮。用无菌水调整悬浮液中孢子数量使其浓度为1×10⁶/mL，孢子数量通过血球计数板进行计数。将10mL病原菌孢子悬浮液和100mL PDA培养基混合后倒平板即为病原菌平板。凝固后，用灭菌竹签挑取分离的芽胞杆菌通过十字划线的方式接种到病原菌平板上，25℃培养箱倒置培养5d，观察抑菌带生成情况。

结果表明，从小麦根部分离芽胞杆菌137株，其中对小麦全蚀病菌

Gaeumannomyces graminis var.tritici有显著拮抗的芽胞杆菌69株，为分离菌株的50.36％，对根腐病菌禾旋孢腔菌(Cochliobolus sativus)有显著拮抗的53株，占分离菌株的38.69％，对纹枯病菌禾谷丝核菌(Rhizotonia cerealis)有显著拮抗的58株，占分离菌株的42.34％，对3种病原真菌均具有显著拮抗的34株，占分离菌株的24.82％。

参见图1、图2和图3，图1为芽胞杆菌菌株Z-5对小麦全蚀病菌的拮抗作用图；图2为芽胞杆菌菌株Z-5对小麦纹枯病菌的拮抗作用图；图3为芽胞杆菌菌株Z-5对小麦根腐病菌的拮抗作用图。由图1、图2和图3可知，本发明提供的芽胞杆菌菌株对小麦全蚀病菌、小麦根腐病菌和小麦纹枯病菌有抑制效果。

3、产生物膜拮抗芽胞杆菌的筛选

将过夜活化的对3种病原真菌均具有显著拮抗作用的34株芽胞杆菌菌株接种于新鲜NB液体培养基中，37℃摇床震荡培养过夜。离心收集菌体，用无菌水洗涤并重悬于等体积的Msgg培养基中。生物膜定性试验采用48孔细胞培养板，每个培养孔中加入2mL Msgg培养基，然后分别接入菌悬液10μL，各设置3个重复，于37℃静置培养，观察拮抗菌形成生物膜情况。结果表明，对3种病原真菌均具有显著拮抗的34株芽胞杆菌中，在Msgg培养基中能够形成生物膜的菌株有16株。

4、小麦根系分泌物诱导拮抗芽胞杆菌代谢产生拮抗物质的检测

小麦种子(石4185)用5％H₂O₂表面消毒3min，75％酒精表面消毒30s-1min，在超净工作台中用无菌水冲洗3次，将种子摆放到培养皿内无菌双蒸水浸湿的滤纸上，30℃过夜催芽。随后将发芽的种子移栽到盛有无菌蛭石的周转箱中，置于28℃温室中生长，光周期为16h光照/8h黑暗交替，定期浇灌1/2浓度的Hoagland营养液。幼苗生长至5-6片真叶后用去离子水洗净根上的残留培养液，将幼苗放入盛有50mL去离子水的三角瓶中，使根系完全浸没，收集幼苗根系分泌物。将三角瓶放入光照培养箱中28℃培养，日光照16h，然后取出植株苗。将收集液超滤除去根系碎片，冷冻干燥后溶于超纯水。

将浓缩的根系分泌物加入NB培养基中，使其终浓度等于根系分泌物提取的初始浓度，按照10％接种量接种活化的拮抗菌培养液到含有根系分泌物的NB培养基中，37℃摇床震荡培养48h，筛选对3种病原菌具有高拮抗活性的菌株，进行盆栽试验。结果表明，在根系分泌物的诱导下，对3种病原真菌均具有显著拮抗的芽胞杆菌有5株，分别为Z-2、Z-5、Z-14、Z-19和Z-23。

5、温室条件下防治小麦根部真菌病害拮抗芽胞杆菌的筛选

小麦种子(石4185)用5％H₂O₂表面消毒3min，75％酒精表面消毒30s-1min，在超净工作台中用无菌水冲洗3次，晾干备用。从河北农业大学标本园中选取5～20cm深度的土壤，去除杂草及碎石，装入直径12cm、高10cm的塑料花盆中，将土壤压实压平，土壤高度为7cm，用灭菌竹签选取直径0.7cm的小麦全蚀病、根腐病和纹枯病病原菌菌片，菌面向上，均匀放置在土层表面，每个花盆里放10个菌片。将表面消毒的小麦种子放在病原菌片上面，盖一层土壤，在花盆中浇灌拮抗菌悬液10mL，菌悬液活菌含量为1×10⁹cfu/mL，然后再在上面盖一层土壤。以没有接种拮抗菌，只接种病原菌的处理为病原菌对照组，以既不接种病原菌也不接种拮抗菌悬液的处理为清水对照组。每处理10盆，室温培养并保持土壤湿润。种植4周后，进行拮抗细菌防治效果调查。植株生长状况检测按株进行，取样量为20株，然后计算平均值。小麦全蚀病按照小麦根部被病菌侵染面积占总根面积的百分率作为严重程度指标，染病等级分为5级：0级＝0％，1级＝1～10％，2级＝11～30％，3级＝31～60％，4级＝61～100％。小麦根腐病严重度分级标准：0级：不发病；1级：小麦植株茎基部外部叶鞘变黑褐色，且病斑长度小于叶鞘的1/2；2级：小麦植株茎基部外部叶鞘变黑褐色，且病斑长度大于叶鞘的1/2；3级：小麦植株茎基部内部叶鞘变黑褐色，且病斑长度小于叶鞘的1/2；4级：小麦植株茎基部内部叶鞘变黑褐色，且病斑长度大于叶鞘的1/2；5级：根部腐烂，植株死亡。小麦纹枯病发病分级标准：0级：全株无病；1级：外叶鞘1/2以下变褐；2级：外叶鞘1/2以上变褐；3级：茎基部产生明显眼状病斑。病情指数＝[∑(各级病株数×代表数值)/调查总株数×发病最重级的代表数值]×100。防治效果＝[(对照组病情指数－处理组病情指数)/对照组病情指数]×100。

结果参见表1，表1为温室条件下拮抗菌对小麦根部真菌病害的防治效果。

表1 温室条件下拮抗菌对小麦根部真菌病害的防治效果

表中数据为平均数±标准差。同列数据后不同字母表示经LSD法检验在P<0.05水平差异显著。

结果表明，5株拮抗菌对小麦全蚀病的防治效果为23.95％～73.92％，Z-5菌株的防治效果最好；对小麦根腐病的防治效果为42.55％～77.48％，Z-14菌株的防治效果最好，Z-5和Z-14对小麦根腐病的防治效果差异不显著；对小麦纹枯病的防治效果为36.61％～73.08％，Z-5菌株的防治效果最好，Z-5、Z-19和Z-23对小麦纹枯病的防治效果差异不显著(表1)；综上所述，Z-5菌株对3种小麦根部真菌病害防治效果均显著，所以选择Z-5菌株进行后续的种属鉴定、发酵中试和田间防治效果试验。

6、拮抗菌种属鉴定

参考《伯杰氏细菌鉴定手册》的方法进行菌落、菌体形态观察和生理生化指标检测，结果参见图4、图5和图6，图4为枯草芽胞杆菌菌株Z-5的菌落形态图；图5为枯草芽胞杆菌菌株Z-5的菌体形态图；图6为枯草芽胞杆菌菌株Z-5的芽胞形态图，由图4、图5和图6可知，拮抗菌Z-5菌株菌落圆形，边缘整齐，表面不光滑有皱褶，不产生色素；革兰氏阳性，菌体杆状，芽胞呈椭圆形中生；菌株呈氧化酶阳性；可利用葡萄糖、甘露醇、乳糖，不利用葡萄糖产气；V-P反应、明胶液化、酪素水解及淀粉水解反应阳性，脲酶酶反应阴性；可耐受10％NaCl，硝酸盐还原反应阳性。将拮抗细菌Z-5菌株菌体形态、菌落特征及生理生化试验结果与《伯杰氏细菌鉴定手册》进行对照，初步鉴定Z-5菌株为Bacillus spp.。

利用通用引物27f/1495r扩增拮抗菌16S rDNA，PCR产物测序结果在NCBI数据库中用Blast进行分析，与模式菌株进行同源性比较，用MEGA5.0软件构建系统发育树。结果参见图7，图7为基于16S rDNA序列的拮抗菌Z-5菌株及相关菌株的系统发育树。由图7可知，Z-5菌株与Bacillus subtilis NRRLB23049同处于一个分支。根据16S rDNA序列相似性分析，确定Z-5菌株属于枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)。

枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)Z-5菌株对小麦全蚀病、小麦根腐病和小麦纹枯病等小麦根部主要真菌病害有显著防治效果，其菌种保藏号CGMCC No.8925。

7、拮抗菌产芽胞条件优化

为了确定菌株最适碳源、氮源及无机盐，选取8种碳源(葡萄糖、淀粉、玉米粉、甘露醇、乳糖、蔗糖、糊精、麸皮)，8种氮源(花生饼粉、蛋白胨、尿素、(NH₄)₂SO₄、牛肉膏、豆饼粉、大豆蛋白胨、酵母粉)及6种无机盐(ZnSO₄·7H₂O、CaCl₂、FeSO₄·7H₂O、CuSO₄·5H₂O、MnSO₄·H₂O、MgSO₄·7H₂O)，在基础发酵培养基的基础上，分别改变碳源、氮源和无机盐的种类，配制成不同营养成分的培养基。将培养12h的种子液接入其中，接种量为2.0％，250mL的三角瓶装液量为50mL，于37℃、220r/min的摇床中振荡培养48h。以发酵液活菌含量和芽胞产量为指标，检测菌株在不同营养成分的培养基中的发酵情况。

在基础发酵培养基基础上，选择合适的碳源、氮源、无机盐，利用Plackett-Burman试验设计方案筛选出对活菌数和芽胞产量影响较大的因素。对Plackett-Burman试验确定的因子，通过爬坡试验确定因子的浓度范围，利用响应面分析法(Response SurfaceMethodology)中的Box-Behnken试验方案进行设计，通过试验数据拟合得到二阶响应面模型，确定最优试验条件，并进行验证。使用统计分析软件Design-Expert v8.0.6.1对Plackett-Burman试验和响应面优化设计结果进行处理分析。

在获得最佳培养基成分及含量后，在优化的培养基基础上，进行培养条件的优化，需要优化的培养条件包括培养温度、摇瓶装液量和摇床转速，检测指标为活菌含量及芽胞生成量。

结果表明，枯草芽胞杆菌Z-5菌株的最佳培养条件为：培养基组成为玉米粉1.17％、酵母粉3.31％、MnSO₄·H₂O 0.072％、NaH₂PO₄·2H₂O 0.2％、Na₂HPO₄·2H₂O 0.4％、起始pH为7.0，接种量为2.0％，摇床转速250r/min，摇瓶装液量50mL/250mL，发酵温度37℃，发酵周期36h。优化后活菌浓度达到1.89×10⁹cfu/mL，芽胞产量达到1.86×10⁹cfu/mL。

8、芽胞杆菌的发酵生产

接种量：摇瓶种子转入种子发酵罐培养的接种量为0.5％～5％；从种子罐接种到发酵罐的接种量为5％～10％。

培养温度：发酵温度控制在32～37℃。2m³罐采用夹层通入冷却水或蒸汽进行控制，20m³发酵罐采用蛇形管通入冷却水或蒸汽进行控制。每2h观察记录一次。

供氧：采用连续向培养基中补充无菌空气与搅拌相结合的方式进行。根据发酵时期的差异，2m³发酵罐通入的无菌空气流量为0.2～0.8VVM，搅拌速率为300r/min。20m³发酵罐通入的无菌空气流量为0.2～0.8VVM，搅拌速率为160r/min。

发酵终点判断：发酵终点判定依据的主要参数为发酵液的活菌含量和芽胞生成量，发酵结束时，芽胞形成率应≥80％；其他可供参考的参数还包括发酵液中氨基氮、还原糖、总糖、发酵液颜色、pH值、形态、气味等变化情况。

9、后处理工艺

采用碟式离心机对发酵液进行连续离心获得发酵浓缩液。离心机转速设定为6900r/min，在保证离心机出口液体澄清的前提下，调节离心机进口发酵液流速，以获得较大的处理量，提高离心效率；离心机对浓缩液的排放方式为间歇排放，通过调节排放口浓缩液间歇时间以便获得适中的排液量和排液浓度。对碟片离心机连续离心后得到的浓缩液进行喷雾干燥，调节进风口的温度及浓缩液进料速率，以保证干燥的效果和效率。定时收集干燥的菌粉，一般每班2～4次。

为了检测Bacillus subtilis Z-5菌株田间防治小麦根部真菌病害的应用效果，在河北众邦生物技术有限公司进行了2m³发酵罐规模中试和20m³发酵罐规模生产制备。2m³发酵罐发酵培养液活菌含量达到1.7×10⁹cfu/mL以上，20m³发酵罐培养液活菌含量达到1.5×10⁹cfu/mL以上；发酵液芽胞生成率均在95％以上。发酵液经连续离心后，浓缩液活菌含量＞2.0×10¹⁰cfu/mL；喷雾干燥处理后的固体菌粉活菌(芽胞)含量＞1.5×10¹¹cfu/g。发酵过程和后处理工艺设计合理，操作规范流畅，各批次菌剂生产过程顺利，菌剂质量优良，达到了预期的中试目的。

10、拮抗菌防治效果田间试验

利用生产的芽胞杆菌固体制剂进行了广泛的菌剂防治小麦根部真菌病害效果试验及调查，初步掌握了菌剂的施用效果。为了获得更为精细准确的试验数据，在进行大规模应用示范的基础上，选择上一年发病严重且均匀的地块，地块面积约666.7m²，分为3小块，每小块约222.2m²，分别设为对照组，药剂组和菌剂组。药剂组采用15％三唑酮可湿性粉剂。按照使用说明选取3g/kg种子计量添加药剂，将种子和药剂加入结实的塑料袋中，把口绑紧，上下颠倒多次直到药剂和小麦种子混匀。菌剂组采用制备的芽胞含量为1.5×10¹¹cfu/g的固体菌剂拌种，接种量为10g/kg种子。采用机械播种，管理方式同一般大田。

在小麦拔节期采取5点取样法，每点连续选取100株，共选取500株。取样时，用铁锨将整株挖出，将土壤轻轻抖掉，去掉根系被切断的植株，用清水将根部清洗干净后，调查发病情况，计算病情指数和防治效果。病情指数和防治效果的调查采用5的方法进行，结果参见表2，表2为Z-5菌剂在小麦拔节期对根部真菌病害的防治效果。

表2 Z-5菌剂在小麦拔节期对根部真菌病害的防治效果

表中数据为平均数±标准差。同列数据后不同字母表示经LSD法检验在P<0.05水平差异显著。

在小麦乳熟期，采取5点取样法进行取样，每点取连续3行，每行取0.4m，调查发病率和病情指数，计算防病效果。病情指数和防治效果的调查采用5的方法进行。产量调查统计株高、平均穗粒数(每个随机取样点30株，每组取样150株)，种子晾干后称千粒重，并单打单收测定每平方米的产量，结果参见表3，表3为Z-5菌剂在小麦乳熟期对根部真菌病害的防治效果。

表3 Z-5菌剂在小麦乳熟期对根部真菌病害的防治效果

表中数据为平均数±标准差。同列数据后不同字母表示经LSD法检验在P<0.05水平差异显著。

对Z-5菌剂防治小麦根部真菌病害效果进行调查，小麦播种后7d开始出苗，10d后基本上全部出苗。对试验小区麦田的出苗情况调查结果发现，菌剂组和药剂组出苗情况较好，叶色浓绿，麦苗粗壮健壮。发病对照地块小麦出苗较为稀疏矮小，叶尖发黄。小麦过冬返青后，菌剂组和药剂组小麦植株长势较好，叶色绿，对照组小麦植株稀疏，长势较弱，叶尖泛黄。在拔节期对小麦植株的生长情况进行调查发现，菌剂组麦苗长势较好，植株健壮、稠密，叶片浓绿、肥厚，株高较对照组明显增高。生防菌处理的小麦全蚀病病情指数明显降低，为6.03，较对照组的18.96显著下降，防治效果达68.20％，好于药剂组的55.85％；生防菌处理组小麦纹枯病病情指数为5.69，未处理发病地块病情指数为20.13，防治效果为71.73％，优于药剂组的61.25％；生防菌处理小麦根腐病病情指数为6.98，未处理发病地块病情指数为25.06，生防菌防治效果为72.15％，优于药剂组的58.90％(表2)。在小麦乳熟期对全蚀病防治效果调查显示，和对照组相比，菌剂组株高和产量增加显著，小麦产量由657.53g/m²增加到790.46g/m²，效果显著；小麦根腐病防治效果调查显示，菌剂处理组株高和产量增加显著，产量由发病地块对照组的653.61g/m²增加到菌剂处理组的791.30g/m²，效果显著；小麦纹枯病防治效果调查显示，菌剂处理组株高和产量增加显著，产量由发病地块对照组的679.78g/m²增加到菌剂处理组的779.93g/m²，效果显著(表3)。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种枯草芽胞杆菌，其保藏编号为CGMCC No.8925。

2.一种枯草芽胞杆菌制剂，其特征在于，由权利要求1所述的枯草芽胞杆菌经发酵、离心、喷雾干燥获得。

3.根据权利要求1所述的枯草芽胞杆菌制剂，其特征在于，其活菌含量＞1.5×10¹¹cfu/g。

4.权利要求1所述枯草芽胞杆菌或权利要求2～3任意一项所述的枯草芽胞杆菌制剂在防治小麦根部真菌病害中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述小麦根部真菌病害为小麦全蚀病、小麦根腐病或/和小麦纹枯病。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述小麦根部真菌病害为小麦全蚀病、小麦根腐病和小麦纹枯病。