CN109762753A

CN109762753A - 一株特殊生境链霉菌菌株及其应用

Info

Publication number: CN109762753A
Application number: CN201811293167.6A
Authority: CN
Inventors: 石妞妞; 杜宜新; 阮宏椿; 陈福如; 杨秀娟; 甘林; 代玉立
Original assignee: Institute of Plant Protection of FAAS
Current assignee: Institute of Plant Protection of FAAS
Priority date: 2018-11-01
Filing date: 2018-11-01
Publication date: 2019-05-17
Anticipated expiration: 2038-11-01
Also published as: CN109762753B

Abstract

本发明涉及一株特殊生境链霉菌菌株及其应用，链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8‑5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14966，保藏日期：2017年11月28日。链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8‑5对芦笋茎枯病菌、稻瘟病菌、蘑菇褐腐病菌、大豆炭疽病菌等多种植物病原菌具有拮抗作用，其发酵液对芦笋茎枯病、稻瘟病、稻曲病、大豆炭疽病、蘑菇褐腐病的防治效果好，与杀菌剂混合后显著提高杀菌剂的防治效果。

Description

一株特殊生境链霉菌菌株及其应用

技术领域

本发明涉及农业作物病害防治技术领域，特别是一株特殊生境链霉菌菌株及其应用。

背景技术

放线菌是一类具有重要经济价值和生物学意义的原核生物。放线菌是最早应用到生产中的生防微生物，其产生的抗生素在农作物病虫害生物防治方面具有重要的意义。

现已发现的2万多种微生物来源的活性物质中，约45％是由放线菌产生，而其中75％是由链霉菌属(Streptomyces)产生，经探索研究目前已筛选出多种最具有生防价值的链霉菌，其天然产物如井冈霉素、农抗120、多抗霉素等9种成分在我国获得了正式登记，宁南霉素等获得了临时登记，这些农用抗生素的使用已经取得巨大的社会效益、经济效益和生态效益。由链霉菌产生的活性物质进行病害的防治强调生态系统的良性循环和环境保护，符合人们对绿色食品的需求，而且为我国农业生产持久稳定发展提供了保障。

发明内容

本发明的目的在于提供一株特殊生境链霉菌菌株，其对多种作物病原菌具有良好的拮抗作用，其发酵液在防治作物病害方面具有广阔的应用前景。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

所述链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14966，保藏日期：2017年11月28日。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5的16s rRNA序列如SEQ ID NO:1所示。16srRNA序列在GeneBank中进行比对，发现其16s rRNA测序结果与链霉菌属16s rRNA序列同源性最大达到99％。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5从红豆杉根际周围土壤分离筛选获得。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5在高氏一号培养基中气生菌丝灰色，基内菌丝乳白色，孢子丝直、柔曲、钩状、松敞螺旋形，孢子椭圆形、柱形，无可溶性色素产生。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5生理生化特征为：胨化、凝固牛奶；不能水解明胶；可水解淀粉；还原硝酸盐；能利用葡糖糖、乳糖、甘露糖、麦芽糖、鼠李糖等，不能利用山梨糖、山梨醇、蔗糖、核糖、肌醇等；能利用L-丙氨酸、L-苏氨酸、L-脯氨酸，不能利用L-赖氨酸。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5在防治芦笋茎枯病、水稻稻瘟病、水稻稻曲病、大豆炭疽病、蘑菇褐腐病中的应用。

制备链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液的方法，链霉菌(Streptomycessp.)菌株8-5以2-5％的接种量接种于ISP2液体培养基，发酵温度为25-28℃，转速180-200rpm，发酵培养时间5-7d，过滤得发酵液。

ISP2液体培养基，其组分为：Yeast extract 4g，Malt extract 10g，Glucose 4g，水1000mL，pH 7.4～7.6。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液在防治芦笋茎枯病、水稻稻瘟病、水稻稻曲病、大豆炭疽病、蘑菇褐腐病中的应用。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液防治芦笋茎枯病和大豆炭疽病，分别于芦笋茎枯病发病初期、大豆炭疽病发病初期，用链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液(每亩用量45升)，喷雾防治芦笋茎枯病和大豆炭疽病。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液防治稻瘟病，在水稻破口期用链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液(每亩用量45升)，喷雾防治稻瘟病。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液防治稻曲病，在水稻抽穗前10天用链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液(每亩用量45升)，喷雾防治稻曲病。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液防治双孢蘑菇褐腐病，在双孢蘑菇覆盖土之前，用链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液拌覆盖土，防治双孢蘑菇褐腐病(每平方米用量1.5L)。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液在制备防治芦笋茎枯病、水稻稻瘟病、水稻稻曲病、大豆炭疽病、蘑菇褐腐病药物中的应用。

将链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液稀释10倍后与杀菌剂混合后形成用于防治芦笋茎枯病、水稻稻瘟病、水稻稻曲病、大豆炭疽病、蘑菇褐腐病的药物。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液稀释10倍后用作10％苯醚甲环唑可分散粒剂的溶剂，将10％苯醚甲环唑可分散粒剂1500倍稀释。每亩混合杀菌剂的用量为45升，分别于芦笋茎枯病发病初期、大豆炭疽病发病初期，喷雾防治芦笋茎枯病和大豆炭疽病。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液稀释10倍后用作430克/升戊唑醇悬浮剂的溶剂。每亩430克/升戊唑醇悬浮剂用量为15毫升，10倍稀释后的发酵液用量为45升，在水稻抽穗前10天喷雾防治稻曲病。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液稀释10倍后用作75％三环唑可湿性粉剂的溶剂。每亩75％三环唑可湿性粉剂用量为26.7克，10倍稀释后的发酵液用量为45升，在水稻破口期喷雾防治稻瘟病。

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液稀释10倍后用作50％咪鲜胺锰盐可湿性粉剂的溶剂。将50％咪鲜胺锰盐可湿性粉剂和稀释10倍后的链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液混合形成的药剂拌双孢蘑菇覆盖土，每平方米覆盖土中50％咪鲜胺锰盐可湿性粉剂用量1.0克，稀释10倍后的链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液用量1.5L，每平方米菇床覆盖用土约25kg，防治双孢蘑菇褐腐病。

较之现有技术而言，本发明的优点在于：链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5对芦笋茎枯病菌、稻瘟病菌、蘑菇褐腐病菌、大豆炭疽病菌等多种植物病原菌具有拮抗作用，其发酵液对芦笋茎枯病、稻瘟病、稻曲病、大豆炭疽病、蘑菇褐腐病的防治效果好，与杀菌剂混合后显著提高杀菌剂的防治效果。

此外链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5是从土壤中获得的，与土壤环境和谐相容，具有良好的应用前景。

附图说明

图1为链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5在高氏一号培养基上的培养特征。

图2为构建链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5的16S rRNA系统发育树。

图3为链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5与芦笋茎枯病菌、水稻稻瘟病菌、大豆炭疽病菌、蘑菇褐腐病菌的对峙培养，注：A芦笋茎枯病菌，B稻瘟病菌，C大豆炭疽病菌，D蘑菇褐腐病菌，CK对照组。

图4为链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5的发酵液在离体条件下对芦笋茎枯病菌、水稻稻瘟病菌、水稻稻曲病菌、大豆炭疽病菌和蘑菇褐腐病菌的抑制效果，注：A芦笋茎枯病菌，B稻瘟病菌，C，稻曲病菌，D大豆炭疽病菌，E蘑菇褐腐病菌，CK对照组。

具体实施方式

下面结合说明书附图和实施例对本发明内容进行详细说明：

实施例一：链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5的分离与鉴定

1.土壤样品的采集

从江西井冈山采集红豆杉根际周围土样3份，去除表面的土壤，采集5-20cm深处的土样，标记后带回实验室自然风干。

2.放线菌的分离

采用平板稀释法进行分离。将风干土样用研钵磨碎，称取样品1g悬浮于9mL无菌水中，于40℃、180rpm震荡30min后静置5min，依次稀释10倍，分别配制成10^-2、10^-3、10^-4的悬浮液，分别吸取不同浓度的悬浮液各0.1mL加入到改良的HVA培养基(加入终浓度为100-200ppm的重铬酸钾)平板上，均匀涂布后倒置于28℃培养观察，5-7天后挑取不同的单菌落划线纯化，纯化后的放线菌菌株采用甘油法保藏于-80℃冰箱。

3.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5的鉴定

(1)形态特征观察

链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5在多数培养基上生长良好。在桑塔氏培养基上产生栗棕色可溶性色素，在其它培养基上没有产生色素(表1)。光学显微镜下链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5孢子丝直、柔曲、钩状、松敞螺旋形，孢子椭圆形、柱形。

表1链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5的培养特征

注:+++表示生长很好，++表示生长良好，+表示可以生长

(2)生理生化特征

参照《链霉菌鉴定手册》中所述的方法测定链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5的明胶液化、牛奶的凝固与胨化、淀粉水解、硝酸盐还原及碳、氮源的利用等特性，结果见表2。

表2菌株8-5的生理生化特征

(3)16s rRNA序列分析

细菌基因组提取试剂盒提取链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5基因组DNA后，采用通用引物

F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’

R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’，进行16s rRNA的PCR扩增。

回收PCR扩增产物，经连接、转化、鉴定后，阳性克隆送去生物生工工程(上海)有限公司测序，序列全长为1356bp。将所得序列提交到GenBank数据库进行BLAST比对分析，并用MEGA软件构建系统发育树(图2)。

经序列比对和系统发育树可知链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5与Streptomyces ziwulingensis亲缘关系最近。

实施例二：链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5对病原菌的拮抗测定

采用平板对峙培养法，将链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5对芦笋茎枯病菌、水稻稻瘟病菌、大豆炭疽病菌、蘑菇褐腐病菌进行拮抗测定。首先在PDA培养基靠边缘两侧划线接种菌株8-5，3天后在平板中央接入直径5mm供试病原菌菌饼，28℃下培养6天测量菌株8-5对供试病原菌的抑菌带宽度，以不接拮抗菌的供试病原菌为对照，结果表明菌株8-5对芦笋茎枯病菌、水稻稻瘟病菌、大豆炭疽病菌、蘑菇褐腐病菌均具有非常好的拮抗作用(图3)。

实施例三：链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5的无菌发酵滤液对病原菌的抑制作用

将高氏一号培养基活化的菌株8-5的孢子接入ISP2液体培养基中，其组分为：Yeast extract 4g，Malt extract 10g，Glucose 4g，水1000mL，pH 7.4～7.6，250mL三角瓶装入培养基80mL，接种量为2-5％，转速180-200rpm，25-28℃下震荡培养5-7天，用22μm的微孔滤膜过滤除菌得无菌发酵滤液，备用。

取菌株8-5的无菌发酵滤液1mL加入到9mLPDA培养基中，混合后倒入培养皿中，将直径5mm供试病原菌菌饼接入PDA培养基平板中央，置于28℃下培养6天后测量菌落直径。以不加发酵滤液的平板为对照，计算10％无菌发酵滤液对病原菌菌丝生长的抑制率，结果表明菌株8-5的无菌发酵滤液对芦笋茎枯病菌、水稻稻瘟病菌、水稻稻曲病菌、大豆炭疽病菌、蘑菇褐腐病菌均具有较好的抑制效果(图4)。

实施例四：链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液在防治芦笋茎枯病中的应用

试验地点选择在福建省莆田市涵江区庄边镇吉云村，芦笋品种为格兰德。试验设置4个处理，分别为：A.10％苯醚甲环唑WG1500倍液、B.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液、C.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制的10％苯醚甲环唑WG1500倍液、D.清水对照。每处理4次重复，共计16个小区，随机区组排列，每小区20m²，按每亩用药量45升喷雾。于芦笋留母茎后开始喷雾防治茎枯病，间隔7天喷雾施药一次，共施药3次，于末次药后14天病情稳定时，调查发病情况。

对标记的母茎进行调查，每个处理小区5点取样，共调查约120株，调查母茎的病级数。

病情分级标准如下：

0级：无病斑；

1级：芦笋主茎病斑绕茎长度占主茎周长25％以下，或侧枝发病率25％以下；

2级：芦笋主茎病斑绕茎长度占主茎周长25％-50％，或侧枝发病率25％-50％；

3级：芦笋主茎病斑绕茎长度占主茎周长50％-75％，或侧枝发病率50％-75％；

4级：芦笋主茎病斑绕茎长度占主茎周长75％以上，或侧枝发病率75％以上；

根据调查总母茎数、发病茎数和病级数；计算病情指数；处理区和对照区病情指数比较计算防效。

病情指数＝∑(各级病茎数×相对病级数值)÷(调查总茎数×9)×100

防治效果(％)＝[(CK病情指数—处理病情指数)÷CK病情指数]×100

表3链霉菌(Streptomyces sp.)8-5发酵液防治芦笋茎枯病田间药效试验结果

实验结果表明(表3)，A.10％苯醚甲环唑WG1500倍液、B.链霉菌(Streptomycessp.)菌株8-5发酵液、C.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制的10％苯醚甲环唑WG1500倍液对芦笋茎枯病的防治效果分别为：76.57％、74.26％和86.15％，均对芦笋安全，未见药害。链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液对芦笋茎枯病的防治效果在5％显著水平上及1％极显著水平上与10％苯醚甲环唑WG1500倍液防效差异均不显著，而菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制的10％苯醚甲环唑WG1500倍液对芦笋茎枯病的防效达86.15％，在5％显著水平上及1％极显著水平上与10％苯醚甲环唑WG1500倍液、链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液防效差异均达显著水平。由此可见，链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液对芦笋茎枯病的防治效果与10％苯醚甲环唑WG1500倍液防效相当，具备良好的应用前景。

实施例五：链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液在防治水稻稻瘟病中的应用

试验地点选择在福建省建阳市麻沙镇石宇村，水稻品种为甬优9号。试验设置4个处理，分别为：A.75％三环唑WP 26.7克/亩、B.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液、C.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制的75％三环唑WP溶液(26.7克/亩)、D.清水对照。每处理4次重复，共计16个小区，随机区组排列，每小区30m²，按每亩用药量45升喷雾。于水稻破口期开始喷雾防治稻瘟病，间隔7天喷雾施药一次，共施药2次，于水稻腊熟期，调查发病情况。

采用平行跳跃取样法，每个小区调查20丛，调查记载各小区调查总穗数，发病穗数和病级。

分级标准如下：

0级：无病；

1级：每穗损失5％以下(个别枝梗发病)；

3级：每穗损失6％-20％(1/3左右枝梗发病)；

5级：每穗损失21％-50％(穗颈或主轴发病，谷粒半瘪)；

7级：每穗损失51％-70％(穗颈发病，大部瘪谷)；

9级：每穗损失71％-100％(穗颈发病，造成白穗)。

病情指数＝∑(各级病穗数×相对病级数值)÷(调查总穗数×9)×100

表4链霉菌(Streptomyces sp.)8-5发酵液防治稻瘟病田间药效试验结果

实验结果表明(表4)，A.75％三环唑WP 26.7克/亩、B.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液、C.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制的75％三环唑WP溶液(26.7克/亩)对稻瘟病的防治效果分别为：80.84％、76.61％和87.89％，均对水稻安全，未见药害。链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液对稻瘟病的防治效果在5％显著水平上及1％极显著水平上与75％三环唑WP溶液(26.7克/亩)防效差异均不显著。菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制的75％三环唑WP溶液(26.7克/亩)对稻瘟病的防效达87.89％，在5％显著水平上与75％三环唑WP26.7克/亩、链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液防效差异均达显著水平；在1％极显著水平上与75％三环唑WP26.7克/亩防效差异不显著，与链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液防效差异达显著水平。由此可见，链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液对稻瘟病的防治效果与75％三环唑WP 26.7克/亩防效相当，稀释10倍后用作配制75％三环唑WP(26.7克/亩)的溶剂时能显著提高对稻瘟病的防治效果，具备良好的应用前景。

实施例六：链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液在防治水稻稻曲病中的应用

试验地点选择在福建省建阳市麻沙镇石宇村，水稻品种为甬优9号。试验设置4个处理，分别为：A.430克/升戊唑醇悬浮剂15毫升/亩、B.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液、C.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制的430克/升戊唑醇悬浮剂(15毫升/亩)、D.清水对照。每处理4次重复，共计16个小区，随机区组排列，每小区30m²，按每亩用药量45升喷雾。于水稻抽穗前10天开始喷雾防治稻曲病，间隔7天喷雾施药一次，共施药2次，于水稻腊熟期，调查发病情况。

每小区按照对角线五点取样，每点调查相连的10丛水稻，每小区调查50丛，调查总穗数、每穗上稻曲球数量(病粒数)，按照以下病穗分级标准统计：

0级：单穗健康，无稻曲球病粒；

1级：单穗稻曲球病粒数1个；

3级：单穗稻曲球病粒数2个；

5级：单穗稻曲球病粒数3-5个；

7级：单穗稻曲球病粒数6-9个；

9级：单穗稻曲球病粒数10个以上。

表5链霉菌(Streptomyces sp.)8-5发酵液防治稻曲病田间药效试验结果

实验结果表明(表5)，A.430克/升戊唑醇悬浮剂15毫升/亩、B.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液、C.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制的430克/升戊唑醇悬浮剂(15毫升/亩)溶液对稻曲病的防治效果分别为：81.21％、78.42％和86.65％，均对水稻安全，未见药害。链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液对稻曲病的防治效果在5％显著水平上及1％极显著水平上与430克/升戊唑醇悬浮剂15毫升/亩防效差异均不显著。菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制的430克/升戊唑醇悬浮剂(15毫升/亩)溶液对稻曲病的防效达86.65％，在5％显著水平上与430克/升戊唑醇悬浮剂15毫升/亩、链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液防效差异均达显著水平；在1％极显著水平上与430克/升戊唑醇悬浮剂15毫升/亩防效差异不显著，与链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液防效差异达显著水平。由此可见，链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液对稻曲病的防治效果与430克/升戊唑醇悬浮剂15毫升/亩防效相当，稀释10倍后用作配制430克/升戊唑醇悬浮剂(15毫升/亩)的溶剂时能显著提高对稻曲病的防治效果，具备良好的应用前景。

实施例七：链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液在防治大豆炭疽病中的应用

试验地点选择在福建省莆田市涵江区庄边镇吉云村，大豆品种为毛豆75。试验设置4个处理，分别为：A.10％苯醚甲环唑WG 1500倍液、B.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液、C.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制的10％苯醚甲环唑WG 1500倍液、D.清水对照。每处理4次重复，共计16个小区，随机区组排列，每小区20m²，按每亩用药量45升喷雾。于大豆初荚后开始喷雾防治炭疽病，间隔7天喷雾施药一次，共施药3次，于末次药后14天病情稳定时，调查发病情况。

每小区按照对角线五点取样，每点调查相连的3株大豆，每小区调查15株大豆的所有豆荚，记录总荚数、发病荚数，按照以下分级标准统计病情指数：

0级：豆荚无病斑；

1级：豆荚上有褐点型小病斑，病斑面积占整个豆荚面积的5％以下；

3级：豆荚上出现典型病斑，病斑面积占整个豆荚面积的6％～10％；

5级：豆荚上出现典型病斑，病斑面积占整个豆荚面积的11％～25％；

7级：豆荚上出现典型病斑，病斑面积占整个豆荚面积的26％～50％；

9级：豆荚上出现典型病斑，病斑面积占整个豆荚面积的50％以上；

病情指数＝∑(各级病荚数×相对病级数值)÷(调查总荚数×9)×100；

防治效果(％)＝[(CK病情指数—处理病情指数)÷CK病情指数]×100；

表6链霉菌(Streptomyces sp.)8-5发酵液防治大豆炭疽病田间药效试验结果

实验结果表明(表6)，A.10％苯醚甲环唑WG1500倍液、B.链霉菌(Streptomycessp.)菌株8-5发酵液、C.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制的10％苯醚甲环唑WG1500倍液对大豆炭疽病的防治效果分别为：79.07％、76.71％和87.77％，均对大豆安全，未见药害。链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液对大豆炭疽病的防治效果在5％显著水平上及1％极显著水平上与10％苯醚甲环唑WG1500倍液防效差异均不显著，而菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制的10％苯醚甲环唑WG1500倍液对大豆炭疽病的防效达87.77％，在5％显著水平上及1％极显著水平上与10％苯醚甲环唑WG1500倍液、链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液防效差异均达显著水平。由此可见，链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液对大豆炭疽病的防治效果与10％苯醚甲环唑WG1500倍液防效相当，10倍稀释后作为溶剂配制的10％苯醚甲环唑WG 1500倍液显著提高对大豆炭疽病的防治效果，具备良好的应用前景。

实施例八：链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液在防治蘑菇褐腐病中的应用

试验地点选择在福建省莆田市荔城区新度镇青坨村，双孢蘑菇品种为AS2796。试验设置4个处理，分别为：A.50％咪鲜胺锰盐WP 1.0克/平方米、B.链霉菌(Streptomycessp.)菌株8-5发酵液、C.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制50％咪鲜胺锰盐WP(1.0克/平方米)、D.清水对照。每处理4次重复，共计16个小区，随机区组排列，每小区12m²。将供试浓度药液定量喷施于待覆土的定量土粒上(每平方米菇床覆盖用土约25kg，喷施药液1.5L)，拌匀，保持土壤含水量约为70％，用塑料膜覆盖闷土24h后进行覆土。于覆土7d后分别进行第二次施药，将相同剂量药液均匀喷施于床面土粒上，以土粒湿润且不流进菌料内为度。从采收第一潮菇起开始调查，共调查3潮菇，采取全小区调查方式，于每次采收时调查记录培养料上病菇菇粒数或菌团数(菇粒或菌团≥1cm)，累计各小区的发病菇粒数，计算防治效果。

防治效果(％)＝[(对照区病菇数—处理区病菇数)/对照区病菇数]×100

表7链霉菌(Streptomyces sp.)8-5发酵液防治双孢蘑菇褐腐病田间药效试验结果

实验结果表明(表7)，A.50％咪鲜胺锰盐WP 1.0克/平方米、B.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液、C.链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制50％咪鲜胺锰盐WP(1.0克/平方米)拌土后对双孢蘑菇褐腐病的防治效果分别为：93.36％、96.31％和100.00％，均对双孢蘑菇安全，双孢蘑菇色泽洁白，朵形圆整，未见药害。链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液对双孢蘑菇褐腐病的防治效果在5％显著水平上与50％咪鲜胺锰盐WP 1.0克/平方米防效差异达显著水平；在1％极显著水平上与50％咪鲜胺锰盐WP 1.0克/平方米防效差异不显著。菌株8-5发酵液10倍稀释后作为溶剂配制的50％咪鲜胺锰盐WP1.0克/平方米溶液对双孢蘑菇褐腐病的防效达100.00％，在5％显著水平上及1％极显著水平上与50％咪鲜胺锰盐WP 1.0克/平方米、链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液防效差异均达显著水平。由此可见，链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液对双孢蘑菇褐腐病的防治效果比50％咪鲜胺锰盐WP1.0克/平方米防效稍差，10倍稀释后作为溶剂配制的50％咪鲜胺锰盐WP 1.0克/平方米溶液对双孢蘑菇褐腐病的防治效果好，可见，链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液具备良好的应用前景。

序列表

<110> 福建省农业科学院植物保护研究所

<120> 一种特殊生境链霉菌菌株及其应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1356

<212> DNA

<213> 链霉菌(Streptomyces sp.)

<400> 1

ggggttgggc cccggcttcg ggtgttaccg actttcgtga cgtgacgggc ggtgtgtaca 60

aggcccggga acgtattcac cgcagcaatg ctgatctgcg attactagca actccgactt 120

catggggtcg agttgcagac cccaatccga actgagacag gctttttgag attcgctcaa 180

cctcacggta tcgcagctct ttgtacctgc cattgtagca cgtgtgcagc ccaagacata 240

aggggcatga tgacttgacg tcgtccccac cttcctccga gttgaccccg gcagtctcct 300

gtgagtcccc atcaccccga agggcatgct ggcaacacag aacaagggtt gcgctcgttg 360

cgggacttaa cccaacatct cacgacacga gctgacgaca gccatgcacc acctgtacac 420

cgaccacaag gggggcacta tctctaatgc tttccggtgt atgtcaagcc ttggtaaggt 480

tcttcgcgtt gcgtcgaatt aagccacatg ctccgctgct tgtgcgggcc cccgtcaatt 540

cctttgagtt ttagccttgc ggccgtactc cccaggcggg gaacttaatg cgttagctgc 600

ggcaccgacg acgtggaatg tcgccaacac ctagttccca ccgtttacgg cgtggactac 660

cagggtatct aatcctgttc gctccccacg ctttcgctcc tcagcgtcag taatggccca 720

gagatccgcc ttcgccaccg gtgttcctcc tgatatctgc gcatttcacc gctacaccag 780

gaattccgat ctcccctacc acactctagc tagcccgtat cgaatgcaga cccggggtta 840

agccccgggc tttcacaccc gacgtgacaa gccgcctacg agctctttac gcccaataat 900

tccggacaac gcttgcgccc tacgtattac cgcggctgct ggcacgtagt tagccggcgc 960

ttcttctgca ggtaccgtca ctttcgcttc ttccctgctg aaagaggttt acaacccgaa 1020

ggccgtcatc cctcacgcgg cgtcgctgca tcaggctttc gcccattgtg caatattccc 1080

cactgctgcc tcccgtagga gtctgggccg tgtctcagtc ccagtgtggc cggtcgccct 1140

ctcaggccgg ctacccgtcg tcgccttggt gagccactac ctcaccaaca agctgatagg 1200

ccgcgggctc atccttcacc gccggagctt ttaaccccca cagatgcctg caggagtgtt 1260

atccggtatt agaccccgtt tccagggctt gtcccagagt gaagggcaga ttgcccacgt 1320

gttactcacc cgttcgccac taatccccac cgaagt 1356

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 2

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 3

ggttaccttg ttacgactt 19

Claims

1.一株特殊生境链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5，其特征在于：所述链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14966，保藏日期：2017年11月28日。

2.根据权利要求1所述的特殊生境链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5，其特征在于：该菌株的16s rRNA序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求1所述的特殊生境链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5，其特征在于：该菌株从红豆杉根际周围土壤分离筛选获得。

4.根据权利要求1所述的特殊生境链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5，其特征在于：该菌株在高氏一号培养基中气生菌丝灰色，基内菌丝乳白色，孢子丝直、柔曲、钩状、松敞螺旋形，孢子椭圆形、柱形，无可溶性色素产生。

5.如权利要求1所述的特殊生境链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5在防治芦笋茎枯病、水稻稻瘟病、水稻稻曲病、大豆炭疽病、蘑菇褐腐病中的应用。

6.一种链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液的制备方法，其特征在于：链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5以2-5％的接种量接种于ISP2液体培养基，发酵温度为25-28℃，转速180-200rpm，发酵培养时间5-7d，过滤得发酵液。

7.一种如权利要求6制备方法所得的链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液。

8.如权利要求7所述的链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液的应用，其特征在于：链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液在防治芦笋茎枯病、水稻稻瘟病、水稻稻曲病、大豆炭疽病、蘑菇褐腐病中的应用。

9.如权利要求8所述的链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液的应用，其特征在于：链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液在制备防治芦笋茎枯病、水稻稻瘟病、水稻稻曲病、大豆炭疽病、蘑菇褐腐病药物中的应用。

10.如权利要求9所述的链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液的应用，其特征在于：将链霉菌(Streptomyces sp.)菌株8-5发酵液稀释10倍后与杀菌剂混合后形成用于防治芦笋茎枯病、水稻稻瘟病、水稻稻曲病、大豆炭疽病、蘑菇褐腐病的药物。