CN108727508A - 一种提取木耳多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物提取技术领域，尤其是一种提取木耳多糖的方法，通过采用冷冻干燥、超微粉碎、酶解破壁、制备预提取液、微波提取、浓缩干燥，破坏木耳细胞及其细胞壁间的结构，同时粉碎木耳的组织结构，增大酶解接触面，经玫瑰细胞液与木耳冻干粉微波提取，玫瑰细胞液中的β‑苯乙醇及其挥发性物质，迅速将木耳中的多糖活性物质脱离出，减少使用的液料比，增加提取木耳多糖的效率。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其是一种提取木耳多糖的方法。
背景技术
木耳，属担子菌纲，木耳目，木耳科。色泽黑褐，口感柔软，味道爽滑吗，营养丰富，可熟食亦可凉拌，不仅是烹饪美味佳肴的食材，同时还具有养血驻颜、令人肌肤红润、预防缺铁性贫血等药用功效。其中，木耳多糖是木耳中主要的生物活性成分，其具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、降胆固醇、调节血糖等功能。
目前，木耳多糖的提取技术，大多数为酶解法、超神波辅助提取、微波辅助提取、超微粉碎等方法，也有采用多种方法进行组合的提取方法。这些方法所采用的提取液，大多是水、稀溶液或者是一定浓度的乙醇溶液。如CN200910216887.7公开的一种富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法，选取黑木耳，切片、粉碎，经强电场萃取，用超速离心机分离提取液，除去蛋白及脂类物质，再用真空刮板式薄膜浓缩，用真空冻干机进行冻干，即得黑木耳多糖冻干粉末。但此种方法提取过程复杂，提取时间长，料液比中的提取液用量多。
发明内容
为了解决上述现有技术的问题，本发明提供了一种提取木耳多糖的方法。
具体是通过以下技术方案得以实现：
一种提取木耳多糖的方法，包括以下步骤：冷冻干燥、超微粉碎、酶解破壁、制备预提取液、微波提取、浓缩干燥，其具体步骤为：
冷冻干燥：将300～400份木耳，在-60℃～-50℃条件下，冷冻干燥24h，得干燥木耳；
超微粉碎：将干燥木耳放入气流式超微粉碎机中，采用8～10kg/m2工作压力，在10～30Hz条件下进行超微粉碎处理，得到木耳超微粉；
酶解破壁：将木耳超微粉、无菌水、细胞壁酶以50：15：1的质量比混合，在35～40℃的条件下以10～20r/min的速率搅拌8～10h，然后在-60℃～-50℃的条件下，冷冻干燥24h，得到木耳冻干粉；其中，细胞壁酶，包含果胶酶、半纤维素酶、纤维素酶，质量比依次为2：2：3。
制备预提取液：将1500～2000份玫瑰花瓣，放置在烘干箱中，在0.5～1KPa、45～55℃的条件下，进行烘干处理5～7h，气体经冷凝后即为玫瑰细胞液；
微波提取：将玫瑰细胞液与木耳冻干粉以质量比为4.5～5.5：1进行混合，在50～60℃、600～800W功率下，微波提取3～5min，在离心机中以20～30r/min速率离心2min，得到木耳提取液；
浓缩干燥：将木耳提取液在真空度0.2～0.3bar、温度40～50℃下，浓缩10～20min，加入木耳提取液浓缩后3～5倍体积的无水乙醇，搅拌2～4h，在-60℃～-50℃的条件下，冷冻干燥48h，得到木耳多糖。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明采用冷冻干燥技术，将木耳细胞及细胞间的水分尽可能的脱出，破坏细胞及细胞间的结构，保留木耳中活性多糖成分；经过超微粉碎，将木耳的结构粉碎化，增大后续酶解及木耳细胞内外的物质交换的接触面；使用多种配比的酶，对木耳的细胞结构进行酶解，分解细胞壁，打开多糖进出细胞的通道；以玫瑰细胞液作为木耳多糖的提取溶剂，其细胞液中含有一定量的β-苯乙醇及其它挥发性物质，可以在微波提取过程中，将木耳多糖中细胞及细胞间迅速剥离出来，进而达到快速提取的效果，所用的料液比比例也较小，增加提取木耳多糖的效率，减少了后续浓缩的时间；浓缩干燥过程中采用无水乙醇进行冷冻干燥，避免木耳多糖物质失去活性。
具体实施方式
下面结合具体的实施例以及实验例来对本发明创造的技术方案做出进一步的解释和说明，以便于本领域技术人员对本发明创造的充分理解，但该解释和说明，并不是对本发明创造技术方案的进一步的限定，其在该发明创造的基础上，做出的简单数值的替换和常规调整的该改进的技术方案，均属于本发明创造的保护范围。
实施例1
一种提取木耳多糖的方法，其具体步骤为：
冷冻干燥：将300份木耳，在-60℃℃条件下，冷冻干燥24h，得干燥木耳；
超微粉碎：将干燥木耳放入气流式超微粉碎机中，采用8kg/m2工作压力，在10条件下进行超微粉碎处理，得到木耳超微粉；
酶解破壁：将木耳超微粉、无菌水、细胞壁酶以50：15：1的质量比混合，在35℃的条件下以10r/min的速率搅拌8h，然后在-60℃的条件下，冷冻干燥24h，得到木耳冻干粉；其中，细胞壁酶，包含果胶酶、半纤维素酶、纤维素酶，质量比依次为2：2：3。
制备预提取液：将1500份玫瑰花瓣，放置在烘干箱中，在0.5KPa、45℃的条件下，进行烘干处理5h，气体经冷凝后即为玫瑰细胞液；
微波提取：将玫瑰细胞液与木耳冻干粉以质量比为4.5：1进行混合，在50℃、600W功率下，微波提取3min，在离心机中以20r/min速率离心2min，得到木耳提取液；
浓缩干燥：将木耳提取液在真空度0.2bar、温度40℃下，浓缩10min，加入木耳提取液浓缩后3倍体积的无水乙醇，搅拌2h，在-60℃的条件下，冷冻干燥48h，得到木耳多糖。
实施例2
一种提取木耳多糖的方法，其具体步骤为：
冷冻干燥：将350份木耳，在-55℃条件下，冷冻干燥24h，得干燥木耳；
超微粉碎：将干燥木耳放入气流式超微粉碎机中，采用9kg/m2工作压力，在20Hz条件下进行超微粉碎处理，得到木耳超微粉；
酶解破壁：将木耳超微粉、无菌水、细胞壁酶以50：15：1的质量比混合，在37℃的条件下以15r/min的速率搅拌9h，然后在-55℃的条件下，冷冻干燥24h，得到木耳冻干粉；其中，细胞壁酶，包含果胶酶、半纤维素酶、纤维素酶，质量比依次为2：2：3。
制备预提取液：将1750份玫瑰花瓣，放置在烘干箱中，在0.75KPa、50℃的条件下，进行烘干处理6h，气体经冷凝后即为玫瑰细胞液；
微波提取：将玫瑰细胞液与木耳冻干粉以质量比为5：1进行混合，在55℃、700W功率下，微波提取4min，在离心机中以25r/min速率离心2min，得到木耳提取液；
浓缩干燥：将木耳提取液在真空度0.25bar、温度45℃下，浓缩20min，加入木耳提取液浓缩后4倍体积的无水乙醇，搅拌3h，在-55℃的条件下，冷冻干燥48h，得到木耳多糖。
实施例3
一种提取木耳多糖的方法，其具体步骤为：
冷冻干燥：将400份木耳，在-50℃条件下，冷冻干燥24h，得干燥木耳；
超微粉碎：将干燥木耳放入气流式超微粉碎机中，采用10kg/m2工作压力，在30Hz条件下进行超微粉碎处理，得到木耳超微粉；
酶解破壁：将木耳超微粉、无菌水、细胞壁酶以50：15：1的质量比混合，在40℃的条件下以20r/min的速率搅拌10h，然后在-50℃的条件下，冷冻干燥24h，得到木耳冻干粉；其中，细胞壁酶，包含果胶酶、半纤维素酶、纤维素酶，质量比依次为2：2：3。
制备预提取液：将2000份玫瑰花瓣，放置在烘干箱中，在1KPa、55℃的条件下，进行烘干处理7h，气体经冷凝后即为玫瑰细胞液；
微波提取：将玫瑰细胞液与木耳冻干粉以质量比为5.5：1进行混合，在60℃、800W功率下，微波提取5min，在离心机中以30r/min速率离心2min，得到木耳提取液；
浓缩干燥：将木耳提取液在真空度0.3bar、温度50℃下，浓缩30min，加入木耳提取液浓缩后5倍体积的无水乙醇，搅拌4h，在-50℃的条件下，冷冻干燥48h，得到木耳多糖。
试验例
将实施例1-3的方法与CN200910216887.7公开的方法将试验组分别分为第1-3组与第4组，按照上述各组的方法提取木耳多糖，以木耳质量10g的相同原料质量条件下，测定各组的木耳多糖得率。实验结果见表1
表1
从上表看出，第1-3组采用的方法，其木耳多糖得率略低于第4组，但木耳多糖得率的差异程度不大；相对于第4组，第1-3组的提取方法具有提取时间短、料液比用量少的特点。
Claims (8)
1.一种提取木耳多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：冷冻干燥、超微粉碎、酶解破壁、制备预提取液、微波提取、浓缩干燥；其中，预提取液为玫瑰细胞液。
2.如权利要求1所述的提取木耳多糖的方法，其特征在于，所述的冷冻干燥，将300～400份木耳，在-60℃～-50℃条件下，冷冻干燥24h，得干燥木耳。
3.如权利要求1所述的提取木耳多糖的方法，其特征在于，所述的超微粉碎，将干燥木耳放入气流式超微粉碎机中，采用8～10kg/m2工作压力，在10～30Hz条件下进行超微粉碎处理，得到木耳超微粉。
4.如权利要求1所述的提取木耳多糖的方法，其特征在于，所述的酶解破壁，是将木耳超微粉、无菌水、细胞壁酶以50：15：1的质量比混合，在35～40℃的条件下以10～20r/min的速率搅拌8～10h，然后在-60℃～-50℃的条件下，冷冻干燥24h，得到木耳冻干粉。
5.如权利要求4所述的提取木耳多糖的方法，其特征在于，所述的细胞壁酶，包含果胶酶、半纤维素酶、纤维素酶，质量比依次为2：2：3。
6.如权利要求1所述的提取木耳多糖的方法，其特征在于，所述的制备预提取液，将1500～2000份玫瑰花瓣，放置在烘干箱中，在0.5～1KPa、45～55℃的条件下，进行烘干处理5～7h，气体经冷凝后即为玫瑰细胞液。
7.如权利要求1所述的提取木耳多糖的方法，其特征在于，所述的微波提取，是将玫瑰细胞液与木耳冻干粉以质量比为4.5～5.5：1进行混合，在50～60℃、600～800W功率下，微波提取3～5min，在离心机中以20～30r/min速率离心2min，得到木耳提取液。
8.如权利要求1所述的提取木耳多糖的方法，其特征在于，所述的浓缩干燥，将木耳提取液在真空度0.2～0.3bar、温度40～50℃下，浓缩10～20min，加入木耳提取液浓缩后3～5倍体积的无水乙醇，搅拌2～4h，在-60℃～-50℃的条件下，冷冻干燥48h，得到木耳多糖。
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