CN108703072B - 一种直立白薇快速育苗方法 - Google Patents

一种直立白薇快速育苗方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108703072B
CN108703072B CN201810527533.3A CN201810527533A CN108703072B CN 108703072 B CN108703072 B CN 108703072B CN 201810527533 A CN201810527533 A CN 201810527533A CN 108703072 B CN108703072 B CN 108703072B
Authority
CN
China
Prior art keywords
seedlings
cynanchum atratum
seeds
erect
culture
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201810527533.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108703072A (zh
Inventor
董玉梅
田富诚
许俊强
张国平
吴兴恩
张应华
毕保良
邹俊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yunnan Agricultural University
Original Assignee
Yunnan Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yunnan Agricultural University filed Critical Yunnan Agricultural University
Priority to CN201810527533.3A priority Critical patent/CN108703072B/zh
Publication of CN108703072A publication Critical patent/CN108703072A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108703072B publication Critical patent/CN108703072B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01C—PLANTING; SOWING; FERTILISING
    • A01C1/00—Apparatus, or methods of use thereof, for testing or treating seed, roots, or the like, prior to sowing or planting
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明提供了一种直立白薇快速育苗方法，包括以下步骤：(1)消毒前处理；(2)不定芽增殖；(3)不定芽生根培养；(4)炼苗；(5)移栽；本发明提供的快速育苗方法利用少量的种子萌发无菌实生苗后，通过植物组织培养技术为直立白薇的人工栽培快繁出整齐一致的大量种苗，本发明提供的育苗方法操作简单，适宜推广。

Description

一种直立白薇快速育苗方法
技术领域
本发明涉及快速育苗技术领域，具体涉及一种直立白薇快速育苗方法。
背景技术
直立白薇(Cynanchum atratum Bunge)为双子叶、多年生草本萝藦科(Asclepiadaceae)鹅绒藤属(Cynanchum Bunge)植物，多生于山地灌木丛中，在我国各地广有分布，尤其是在东北三省，云南，贵州等地。直立白薇株高40-60厘米，全株具有白色乳汁。根茎短，簇生多数细长的条状根，根长达20厘米以上，直径2-3毫米，淡黄褐色，质坚脆，具香气，味苦。民间通常于早春或晚秋两季采挖生长2-3年植株，其干燥根及根茎是我国传统中药，始载于《神农本草经》，被列为中品，具有清热凉血、利尿通淋、解毒疗疮的功效，临床上常用于温邪伤营发热、阴虚发热、骨蒸劳热、产后血虚发热、热淋、血淋、痈疽肿毒等症。现代药理研究表明，直立白薇的粗提物具有抗炎、退热、抗肿瘤、平喘等生理活性。
目前，我国白薇资源遭到了严重破坏，有些地区甚至面临枯竭。直立白薇的花期通常为6-7月或7-8月，此时期最容易被识花采集，加之与药农的相对休闲期重叠，因此也成了野生直立自薇的大量采集期，使得种子无法落地。连年的无序采挖是导致白薇资源桔竭的主要原因之一。而白薇作为中药资源需要可持续利用，因此直立白薇的人工驯化栽培迫在眉睫。本项目组前期驯化栽培可知，直立白薇种子种皮较厚，种子露白后萌发时子叶很难从坚硬的种皮中完全伸展出来而影响了成苗率。本研究拟对直立白薇进行快繁研究，以期利用少量的种子萌发无菌实生苗后，通过植物组织培养技术为直立白薇的人工栽培快繁出整齐一致的大量种苗。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种直立白薇快速育苗方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)消毒前处理：将直立白薇种子放入45℃温水中水浴3h，然后于超净台上依次用75％酒精浸泡30s和0.1％升汞浸泡12min，接着用无菌水清洗3-5遍，接最后种于1/2MS培养基上，在无光照条件下萌发；
(2)不定芽增殖：将步骤(1)制备的无菌实生苗茎切割成数段，保证每个茎段带有叶片，并将茎段接种在增殖培养基上；
(3)不定芽生根培养：将步骤(2)中增殖苗移植到1/3MS无激素培养基中，培养芽根；
(4)炼苗：揭开培养瓶的封口膜并向培养瓶中注入0.9-1.1cm高的自来水，然后将培养瓶放置在准备室中5-7天；
(5)移栽：
(5a)将步骤(4)中于准备室中放置5-7天后的直立白薇苗根部培养基洗净；
(5b)将花卉基质和红土按照质量比为2:1混合均匀后，放入带接水盘和透明塑料罩的空育苗盘；
(5c)将根部清洗干净的直立白薇苗移栽到育苗盘内，浇透水，然后在接水盘内放入1.8-2.2cm厚的水，并罩上透明罩子，一周后揭开罩子，放在准备室的阴凉透风处3-5天，即可放在阳台上接受自然光照了；
(5d)移栽一个月后，将组培苗移栽到10cm的小花钵即可。
优选地，上述步骤(2)中培养基组成为MS+0.5mg/L KT+0.2mg/LNAA+1.5mg/LIBA。
优选地，上述步骤(4)中准备室为开放式自然环境。
优选地，上述步骤(5c)中移栽10-30天时，保证每天给直立白薇苗1次水。
优选地，上述步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)中的培养基均放置于无菌室中。
优选地，上述步骤(4)中培养瓶瓶盖打开。
本发明的有益效果为：
将直立白薇种子放入45℃温水中水浴3h，然后于超净台上依次用75％酒精浸泡30s、0.1％升汞浸泡12min，最后用无菌水清洗3-5遍。接种于1/2MS培养基上，在无光照条件下萌发；与不用温水处理的相比，可提前萌发十天，且出苗整齐；采用质量分数为75％的酒精和质量分数为0.1％的升汞进行灭菌，种子污染率可控制在6％，且种子不会受到升汞伤害；升汞质量分数高于0.1％，种子污染率进一步降低，但是种子死亡率提高，因此，75％酒精处理30S，0.1％升汞处理12分钟，再用无菌水清洗3-5遍，效果最好；采用组成为在MS+0.5mg/LKT+0.2mg/LNAA+1.5mg/LIBA培养基的培养芽基增殖倍数最高，愈伤组织率为零。总而言之，本发明提供的培育方法能够利用少量的种子萌发无菌实生苗后，通过植物组织培养技术为直立白薇的人工栽培快繁出整齐一致的大量种苗。
附图说明
图1为采用温水处理后的直立白薇种子萌发成苗情况，其中A为萌发，B为成苗；
图2为无菌生苗切割情况，其中A为切割前，B为切割后；
图3为切割茎段接种于增殖培养基上情况，其中，A为接种初期，B为接种15天-20天后；
图4为不定芽生根情况，其中A为直接不生根，B为生根植株较少，且粗短，带有愈伤组织，C为生根植株较少，且粗短，带有愈伤组织，D为根形态正常且没有愈伤组织。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
(1)消毒前处理：将直立白薇种子放入45℃温水中水浴3h，然后于超净台上依次用酒精浸泡和升汞浸泡消毒，接着用无菌水清洗3-5遍，接最后种于1/2MS培养基上，在无光照条件下萌发；
消毒液质量分数以及各自浸泡时间：
①75％酒精+1.5％NaClO；30s+15min②75％酒精+1.5％NaClO；30s+18min③75％酒精+1.5％NaClO；30s+20min④75％酒精+0.1％HgCl2，30s+5min⑤75％酒精+0.1％HgCl2；30s+8min⑥75％酒精+0.1％HgCl2；30s+12min。
(2)不定芽增殖：将步骤(1)制备的无菌实生苗茎切割成数段，保证每个茎段带有叶片，并将茎段接种在培养基上；
激素组成：
①2.0mg/LNAA+2.0mg/LIBA+mg/LKT；
②2.0mg/LNAA+1.0mg/LIBA+0.5mg/LKT；
③2.0mg/LNAA+0.1mg/LIBA+2.0mg/LKT；
④0.2mg/LNAA+1.5mg/LIBA+0.5mg/LKT；
⑤0.2mg/LNAA+1.5mg/LIBA+1.0mg/LKT；
⑥0.2mg/LNAA+1.5mg/LIBA+2.0mg/LKT；
(3)不定芽生根培养：将步骤(2)中增殖苗移植到1/3MS无激素培养基中，培养芽根；
①MS+NAA0.1mg/L；
②MS+NAA0.5mg/L；
③MS+NAA0.8mg/L；
④MS+NAA 1.0mg/L；
⑤MS；
⑥1/2MS。
(4)炼苗：向培养瓶中注入0.9-1.1cm高的自来水，然后将培养瓶放置在准备室中5-7天；
(5)移栽：
(5a)将步骤(4)中于准备室中放置5-7天后的直立白薇苗根部洗净；
(5b)将花卉基质和红土按照质量比为2:1混合均匀后，放入带接水盘和透明塑料罩的空育苗盘；
(5c)将根部清洗干净的直立白薇苗移栽到育苗盘内，浇透水，然后在接水盘内放入1.8-2.2cm厚的水，并罩上透明罩子，一周后揭开罩子，放在准备室的阴凉透风处3-5天，即可放在阳台上接受自然光照了；
(5d)移栽一个月后，将组培苗移栽到10cm的小花钵即可。
表1不同灭菌方式对直立白薇种子灭菌的影响
Figure BDA0001676347660000061
设计6组实验探究直立白薇种子灭菌效果最佳的霉菌试剂和灭菌时间，实验条件和结果如表1所示。6组实验中，种子污染率最低为6％，对应霉菌试剂为75％酒精+0.1％HgCl2，灭菌时间为30s+12min，所以直立白薇种子灭菌最优条件为依次用质量分数为75％的酒精浸泡30s，再用质量分数为0.1％的HgCl2浸泡12min。
表2不同激素浓度诱导直立白薇增殖效果
Figure BDA0001676347660000071
将萌发获得的无菌实生苗利用不同激素组合及切取不同部位来进行增殖培养，结果见表2。由表2可知，带芽茎段快繁设计的6组培养基，其中芽增殖比最高对应的培养基为实验序号④，所以MS+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L+IBA1.5mg/L培养基最适宜直立白薇增殖培养。
表3不同激素浓度诱导直立白薇生根的效果比较
Figure BDA0001676347660000081
当预期的组培苗数增殖足够时，需进行生根培养，实验中设计7个配方的生根培养基如表3所示，其中实验序号为1-4生出粗而短的根，根上带有少量愈伤，实验序号5和6生出的根虽然没有愈伤，但是根系细且长，只有实验序号7中生出的根长段粗细在正常范围内，而且没有愈伤，所以挑出最适宜生根的是1/3MS无激素培养基。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (4)

1.一种直立白薇快速育苗方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）消毒前处理：将直立白薇种子放入45℃温水中水浴3h，然后于超净台上依次用75%酒精浸泡30s和0.1%升汞浸泡12min，接着用无菌水清洗3-5遍，最后接种于1/2MS培养基上，在无光照条件下萌发；
（2）不定芽增殖：将步骤（1）制备的无菌实生苗茎切割成数段，保证每个茎段带有叶片，并将茎段接种在培养基上，培养基组成为MS+0.5mg/L KT+ 0.2 mg/LNAA+ 1.5mg/LIBA；
（3）不定芽生根培养：将步骤（2）中增殖苗移植到1/3MS无激素培养基中，培养芽根；
（4）炼苗：向培养瓶中注入0.9-1.1cm高的自来水，然后将培养瓶放置在准备室中5-7天；
（5）移栽：
将步骤（4）中于准备室中放置5-7天后的直立白薇苗根部洗净；
将花卉基质和红土按照质量比为2:1混合均匀后，放入带接水盘和透明塑料罩的空育苗盘；
将根部清洗干净的直立白薇苗移栽到空育苗盘内，浇透水，然后在接水盘内放入1.8-2.2cm厚的水，并罩上透明罩子，一周后揭开罩子，放在准备室的阴凉透风处3-5天，即可放在阳台上接受自然光照；移栽10-30天时，保证每天给直立白薇苗1-3次水；
移栽一个月后，将组培苗移栽到10cm的小花钵。
2.根据权利要求1所述的直立白薇快速育苗方法，其特征在于，所述步骤（4）中准备室为开放式自然环境。
3.根据权利要求1所述的直立白薇快速育苗方法，其特征在于，所述步骤（1）、步骤（2）和步骤（3）中的培养基均放置于无菌室中。
4.根据权利要求1所述的直立白薇快速育苗方法，其特征在于，所述步骤（4）中培养瓶瓶盖打开。
CN201810527533.3A 2018-05-26 2018-05-26 一种直立白薇快速育苗方法 Expired - Fee Related CN108703072B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810527533.3A CN108703072B (zh) 2018-05-26 2018-05-26 一种直立白薇快速育苗方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810527533.3A CN108703072B (zh) 2018-05-26 2018-05-26 一种直立白薇快速育苗方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108703072A CN108703072A (zh) 2018-10-26
CN108703072B true CN108703072B (zh) 2021-06-01

Family

ID=63870789

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810527533.3A Expired - Fee Related CN108703072B (zh) 2018-05-26 2018-05-26 一种直立白薇快速育苗方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108703072B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104798686A (zh) * 2015-05-02 2015-07-29 冯文杰 一种白首乌组培快繁方法
CN105104189A (zh) * 2015-08-03 2015-12-02 安庆市枞阳县阳和苗圃 一种地稍瓜的快速繁殖方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104798686A (zh) * 2015-05-02 2015-07-29 冯文杰 一种白首乌组培快繁方法
CN105104189A (zh) * 2015-08-03 2015-12-02 安庆市枞阳县阳和苗圃 一种地稍瓜的快速繁殖方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108703072A (zh) 2018-10-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100998311B (zh) 山慈姑独蒜兰人工繁殖方法
CN103461120B (zh) 一种空气凤梨组织培养基及组培快繁空气凤梨的方法
CN107047320B (zh) 一种大花胡麻草组织培养方法
CN102246694B (zh) 一种白背三七的组织培养方法
CN109258460A (zh) 微茎尖培养结合热处理获得增城蜜菊脱毒苗的培育方法
CN113519394B (zh) 一种红果参多倍体诱导及多倍体植株的高效人工育苗方法
CN103704130A (zh) 一种春兰与大花蕙兰杂交种育苗的方法
CN105638458A (zh) 一种川贝母的组织培养方法
CN108739370B (zh) 一种利用成熟莲胚进行快繁的方法
CN106376328A (zh) 野生白芨种子快速繁殖方法
CN103404438B (zh) 一种鸡爪槭种子组织培养方法
US20220007606A1 (en) Method for disinfecting explants of kadsura coccinea stems with buds and method for directly inducing rapid proliferation of sterile buds by using explants of kadsura coccinea stems with buds
CN112273232A (zh) 温郁金脱毒苗培养方法
CN106172016A (zh) 一种五加皮组培快繁方法
CN105918121A (zh) 一种利用走马胎叶片快速繁殖种苗的方法
CN105165630A (zh) 金线莲组培苗的培育方法
CN114946657A (zh) 一种五指毛桃组织培养方法
CN110583488A (zh) 石蒜属新品种‘桃红’组培快繁技术体系的建立方法
CN102144569B (zh) 一种白背三七的快繁方法
CN101743908A (zh) 红花银桦组培快繁及栽培方法
CN109329060B (zh) 以换锦花石蒜鳞茎盘为外植体进行组培快繁的方法
CN104067943B (zh) 蝴蝶兰无菌根扩繁的方法
CN108703072B (zh) 一种直立白薇快速育苗方法
CN105230488B (zh) 一种兔耳兰叶片组织培养快速繁殖方法
CN112385547A (zh) 一种通过愈伤途径建立长筒石蒜再生体系的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20210601

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee