CN108699018A - 双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂的分析和分辨方法 - Google Patents

双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂的分析和分辨方法 Download PDF

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Abstract

一种用于分析双脱水半乳糖醇制剂的改进的分析方法，提供用于测定双脱水半乳糖醇的纯度并检测双脱水半乳糖醇制剂中的杂质以及鉴别任何此类杂质的方法。所述方法采用高效液相色谱HPLC，尤其采用具有ELSD检测的逆相酰胺色谱柱的HPLC；所述HPLC可以接着串联质谱。所述方法可另外包括进行双脱水半乳糖醇制剂中存在的至少一种特定物质峰的制备型HPLC采集的步骤。

Description

双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂的分析和分辨 方法
相关申请的交叉引用
本申请案主张于2015年11月25日由Q.Xu提交的题为“双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂的分析和分辨方法(Methods for Analysis and Resolution ofPreparations of Dianhydrogalactitol and Derivatives or Analogs Thereof)”的第62/260,019号美国临时专利的权益，其内容通过全文引用并入本文中。
技术领域
本发明涉及改进的双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂的分析方法，尤其涉及高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)。
背景技术
双脱水半乳糖醇(1,2:5,6双脱水半乳糖醇或DAG)是多种己糖醇或己糖醇衍生物中的一个，具有显著药理学活性，包含化学治疗活性。特定来说，已提议双脱水半乳糖醇用于化学疗法，如在授予纳尔逊(Nielsen)等人的第7,157,079号美国专利中，所述专利通过引用并入本文中。
双脱水半乳糖醇具有抗多种肿瘤的活性。然而，双脱水半乳糖醇要想成功地作为治疗剂使用，它必须要有极高的纯度且要除去杂质。杂质的存在会引起不合期望的副作用。多年前出现一个实例，当一批氨基酸色氨酸，蛋白质的正常组分，中存在杂质时，导致嗜酸粒细胞性肌痛综合症显著爆发，引起大量永久性残疾病例和至少37例死亡。如果治疗剂，如双脱水半乳糖醇，要用于具有受损免疫系统或肝或肾功能障碍的患者或用于老年患者时，这一点尤其重要。此类患者由于其对污染物的敏感，可能经历不合期望的副作用的发生率更高。
在双脱水半乳糖醇制剂中发现的一种杂质是半乳糖醇。双脱水半乳糖醇制剂中还存在其它杂质，视其制备方法而定。
因此，需要改进的检测双脱水半乳糖醇制剂中的杂质和降解产物的分析方法，以提供当双脱水半乳糖醇出于治疗性目的给药时不大可能引起副作用的更高纯度的制剂。
发明内容
本文中描述一种改进的测定双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的纯度且检测符合此等需要的双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂中的杂质和降解产物的分析方法。特定来说，分析方法适用于测定双脱水半乳糖醇的纯度且检测双脱水半乳糖醇制剂中的杂质和降解产物。
一般而言，此分析方法利用高效液相色谱法(HPLC)，尤其具有蒸发光散射检测(evaporative light scattering detection，ELSD)的HPLC。
特定来说，根据本发明的分析方法能够检测双脱水半乳糖醇制剂中的杂质半乳糖醇和二溴半乳糖醇。
本发明的一个方面是用于分析双脱水半乳糖醇制剂中存在的杂质的存在和量的分析方法，包括以下步骤：
(1)通过将双脱水半乳糖醇制剂进行高效液相色谱来分析所述制剂，使用采用呈亲水性相互作用模式的酰胺化学物质和乙烯桥连混合(ethylene bridged hybrid，BEH)技术的逆相酰胺色谱柱，以第一流动相是100％乙腈且第二流动相是100％水的流动相梯度洗脱，以将双脱水半乳糖醇与半乳糖醇和制剂的其它污染物分离；以及
(2)测定通过高效液相色谱分辨的代表除双脱水半乳糖醇本身以外的化合物的一或多个峰的相对浓度。
通常，所述方法检测并定量以下各项中的至少一个：(1)半乳糖醇；(2)二溴半乳糖醇；(3)除半乳糖醇以外的杂质；以及(4)双脱水半乳糖醇的降解产物。
通常，流速为约0.72毫升/分钟到约0.88毫升/分钟。优选地，流速为约0.80毫升/分钟。
通常，洗脱流程为(1)0.00分钟，90％的100％乙腈；10％的100％水；(2)3.00分钟，90％的100％乙腈；10％的100％水；(3)20.00分钟，75％的100％乙腈，25％的100％水；(4)25.00分钟，50％的100％乙腈，50％的100％水；(5)30.00分钟，50％的100％乙腈，50％的100％水；(6)30.10分钟，90％的100％乙腈，10％的100％水；以及(7)40.00分钟，90％的100％乙腈，10％的100％水。
通常，注射体积为约15μL到约35μL。优选地，注射体积为约25μL。
通常，柱温为约28℃到约32℃。优选地，柱温为约30℃。
通常，运行时间为约40分钟。
在一个替代方案中，注射器温度为约5℃。在另一个替代方案中，注射器温度为约20℃到约22℃。
所述方法可包含用100％乙腈清洗进样针。
在根据本发明的方法中，通常借助蒸发光散射(ELSD)检测。通常，蒸发光散射检测包括挥发性溶剂的柱后添加，以增进所存在的任何流动相的水性级分的蒸发。挥发性溶剂可选自由以下组成的群组：甲醇、乙醇、异丙醇以及乙腈。在一个优选替代方案中，ELSD检测条件为：温度为约36℃到约44℃，气体压力为约2.0巴(bar)到约3.0巴，且增益为7。在一个更优选的替代方案中，ELSD检测条件为：温度为约38℃到约42℃，气体压力为约2.25巴到约2.75巴，且增益为7。在一个进一步更优选的替代方案中，ELSD条件为：温度为约40℃，气体压力为约2.5巴，且增益为7。蒸发光散射检测可以与电喷雾LC/MS兼容。当蒸发光散射检测与电喷雾LC/MS兼容时，可将电喷雾串联质谱仪在线安装并连接于具有ELSD的HPLC系统。当在线安装并连接电喷雾串联质谱仪时，能够采集到提供可能存在于双脱水半乳糖醇制剂中的杂质和降解产物中的每一个的化学信息的串联质谱数据。与HPLC串联的质谱能够针对观测到的杂质和降解产物中的每一个提供分子离子信息和具有与分子离子信息一致的分子量的可能化学结构。在此替代方案中，至少一种杂质或降解产物通过以下来鉴别：通过柱色谱分离，接着进行至少一个纯化程序，得到固体未知样品。固体未知样品可通过选自由以下组成的群组的至少一种标准分析程序来鉴别表征：核磁共振(nuclear magneticresonance，NMR)、质谱(mass spectroscopy，MS)、傅里叶变换红外光谱法(Fouriertransform infrared spectroscopy，FT-IR)、元素分析、通过HPLC测定纯度以及通过卡尔费舍尔(Karl Fischer)滴定方法测定含水量。
在如上所述方法中，方法可另外包括进行双脱水半乳糖醇制剂中存在的至少一种特定物质峰的制备型HPLC采集的步骤。双脱水半乳糖醇制剂中存在的至少一种特定物质峰可以是杂质。或者，双脱水半乳糖醇制剂中存在的至少一种特定物质峰可以是降解产物。
附图说明
参考以下描述、所附权利要求书和附图将能更好地理解本发明的这些和其它特性、方面以及优点，在附图中：
图1是展示空白组、新鲜片剂样品、标准溶液、以及模拟样品溶液的重叠色谱图的图(DAG是双脱水半乳糖醇且DBD是二溴半乳糖醇)。
图2是展示用来测定半乳糖醇的检测限(LOD)的0.004mg/mL半乳糖醇溶液(标称浓度的0.05％)的色谱分析结果的图。
图3是展示用来测定半乳糖醇的定量限(LOQ)的0.008mg/mL半乳糖醇溶液(标称浓度的0.1％)的色谱分析结果的图。
图4是展示使用半乳糖醇的线性测试的结果的图。
图5是展示样品溶液中的杂质的图。
具体实施方式
本发明涉及用于测定双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的纯度以及测定双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂中存在的杂质的存在和浓度的改进的分析方法。本文中描述一种改进的测定双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的纯度且检测符合此等需要的双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂中的杂质和降解产物的分析方法。特定来说，分析方法适用于测定双脱水半乳糖醇的纯度且检测双脱水半乳糖醇制剂中的杂质和降解产物。
双脱水半乳糖醇的结构如下显示为式(I)：
双脱水半乳糖醇制剂中存在的一个显著杂质是半乳糖醇。半乳糖醇的结构如下显示在式(II)中。
双脱水半乳糖醇制剂中可能存在的另一杂质是二溴半乳糖醇。二溴半乳糖醇的结构如下显示在式(III)中。
双脱水半乳糖醇制剂中可能还存在其它杂质。此类杂质的确切身份视双脱水半乳糖醇的合成和纯化的途径而定。此类杂质也可代表双脱水半乳糖醇的降解产物。
分析双脱水半乳糖醇制剂的改进的方法是基于具有蒸发光散射检测(ELSD)的HPLC(高效液相色谱)。在一个替代方案中，为检测和鉴别此类双脱水半乳糖醇制剂中存在的所有显著组分，将HPLC与质谱(MS)组合。
HPLC的理论和实践描述在L.R.辛德尔(L.R.Snyder)等人，“现代液相色谱简介(Introduction to Modern Liquid Chromatography)”(第3版，约翰·威利父子公司(JohnWiley&Sons)，纽约(New York)，2009)中。MS的理论和实践描述在E.霍夫曼(E.deHoffmann)和V.司徒班(V.Stroobant)，“质谱：原理和应用(Mass Spectroscopy:Principles and Applications)”(第3版，约翰·威利父子公司，纽约，2007)中。
在一个优选替代方案中，采用逆相酰胺色谱柱进行HPLC。尤其优选酰胺色谱柱是采用呈亲水性相互作用模式的酰胺化学物质的4.6mm×250mm色谱柱；色谱柱利用乙烯桥连混合(BEH)技术。色谱柱的粒子为球形且粒度为3.5μm。粒子具有混合基质且孔隙尺寸为尤其优选的逆相酰胺色谱柱是沃特世(Waters)XBridge BEH酰胺色谱柱第186004870号(马萨诸塞州米尔福德的沃特世(Waters，Milford MA))。其它逆相酰胺色谱柱为所属领域中已知的。
对于流动相，优选替代方案是使用100％乙腈作为流动相A且100％水作为流动相B。优选流速为约0.72毫升/分钟到约0.88毫升/分钟；尤其优选流速为约0.80毫升/分钟。
优选洗脱流程如下：(1)0.00分钟，90％的100％乙腈；10％的100％水；(2)3.00分钟，90％的100％乙腈；10％的100％水；(3)20.00分钟，75％的100％乙腈，25％的100％水；(4)25.00分钟，50％的100％乙腈，50％的100％水；(5)30.00分钟，50％的100％乙腈，50％的100％水；(6)30.10分钟，90％的100％乙腈，10％的100％水；以及(7)40.00分钟，90％的100％乙腈，10％的100％水。
注射体积可为约15μL到约35μL。优选注射体积为25μL。
柱温可为约28℃到约32℃。优选柱温为约30℃。
优选运行时间为约40分钟。注射器温度可为约5℃或约室温(约20℃到约22℃)。分析方法可包含用100％乙腈清洗进样针。
通常，在根据本发明的HPLC分析方法中，借助于蒸发光散射(ELSD)检测。蒸发光散射检测器(ELSD)雾化色谱柱洗脱液，对所得微粒组分照射光，并检测所得散射光。理论上，ELSD能够检测任何非挥发性组分。非显色化合物的蒸发光散射检测是基于HPLC洗脱剂的雾化和流动相溶剂的蒸发以产生用于光散射检测的雾化溶质粒子。用以产生雾化分析物溶质粒子的这一雾化和溶剂蒸发过程与电喷雾LC/MS程序相当。通常，ELSD检测与电喷雾LC/MS兼容。
与电喷雾LC/MS应用兼容的具有ELSD检测的HPLC方法的实施方案通常涉及柱后添加挥发性溶剂以增进所存在的任何流动相的水性级分的蒸发。挥发性溶剂通常选自由以下组成的群组：甲醇、乙醇、异丙醇以及乙腈。
通常，ELSD检测条件为：温度为约36℃到约44℃，气体压力为约2.0巴到约3.0巴，且增益为7。优选地，ELSD条件为：温度为约38℃到约42℃，气体压力为约2.25巴到约2.75巴，且增益为7。更优选地，ELSD条件为：温度为约40℃，气体压力为约2.5巴，且增益为7。
通常，蒸发光散射检测与电喷雾LC/MS兼容。因此，在根据本发明的方法中，可在线安装并连接电喷雾串联质谱仪于具有ELSD的HPLC系统。能够采集针对双脱水半乳糖醇制剂中可能存在的每一种杂质提供分子信息的质谱数据和提供化学结构信息的串联质谱数据。与HPLC串联的质谱将针对观测到的杂质和降解产物中的每一个提供分子离子信息和具有与分子离子信息一致的分子量的可能化学结构。
在另一个替代方案中，可进行特定DAG相关物质峰，包含DAG制剂中存在的杂质，的制备型HPLC采集。
因此，一种用于分析双脱水半乳糖醇制剂中存在的杂质的存在和量的分析方法包括以下步骤：
(1)通过将双脱水半乳糖醇制剂进行高效液相色谱来分析所述制剂，使用采用呈亲水性相互作用模式的酰胺化学物质和乙烯桥连混合(BEH)技术的逆相酰胺色谱柱，以第一流动相是100％乙腈且第二流动相是100％水的流动相梯度洗脱，以将双脱水半乳糖醇与半乳糖醇和制剂的其它污染物分离；以及
(2)测定通过高效液相色谱分辨的代表除双脱水半乳糖醇本身以外的化合物的一或多个峰的相对浓度。
除双脱水半乳糖醇本身以外的化合物可能为以下各项中的至少一个：(1)半乳糖醇；(2)二溴半乳糖醇；(3)除半乳糖醇以外的杂质；以及(4)双脱水半乳糖醇的降解产物。
逆相色谱分析和ELSD检测的合适条件如上所述。
在一个替代方案中，根据本发明的方法另外包括通过电喷雾串联质谱分析从高效液相色谱洗脱的一或多个峰的步骤。在另一个替代方案中，根据本发明的方法另外包括至少一种特定双脱水半乳糖醇相关物质峰的制备型HPLC采集步骤。
如果存在杂质或降解产物(除半乳糖醇以外)，那么未知杂质或降解产物能够通过以下来鉴别：通过柱色谱分离，接着进行至少一个纯化程序，得到固体未知样品，所述固体未知样品随后可通过选自由以下组成的群组的至少一种标准分析程序来鉴别表征：核磁共振(NMR)、质谱(MS)、傅里叶变换红外光谱法(FT-IR)、元素分析、通过HPLC测定纯度以及通过卡尔费舍尔滴定方法测定含水量。这些方法是所属领域中所熟知的。
在如上所述方法中，方法可另外包括进行双脱水半乳糖醇制剂中存在的至少一种特定物质峰的制备型HPLC采集的步骤。双脱水半乳糖醇制剂中存在的至少一种特定物质峰可以是杂质。或者，双脱水半乳糖醇制剂中存在的至少一种特定物质峰可以是降解产物。
通过以下实例说明本发明。此实例仅出于说明性目的且不意图限制本发明。
实例
采用乙腈和水梯度的双脱水半乳糖醇制剂的逆相HPLC分析
总体而言，这一测试程序是用于通过具有ELSD检测的高效液相色谱(HPLC)(HPLC-ELSD)来测定双脱水半乳糖醇(DAG)药物和药品的制剂中的一或多种相关物质。使用具有100％乙腈(ACN)作为流动相A和100％水作为流动相B的逆相色谱柱(沃特世酰胺，3.5μm，4.6×250mm)。流速为0.8mg/mL。以约5.20分钟的保留时间检测DAG的峰。以目标浓度8mg/mL制备DAG样品。
试剂和参考标准品
试剂和参考标准品包含：(1)HPLC级纯水(H2O)或等效物；(2)HPLC级乙腈(ACN)或等效物；以及(3)半乳糖醇参考标准品。
仪器和装置
仪器和装置包含：(1)配备有ELSD检测器的岛津(Shimadzu)LC20A HPLC系统或等效物；(2)沃特世酰胺逆相HPLC色谱柱，3.5μm，4.6×250mm，PN：186004870)；(3)纯水生成器；以及(4)分析天平。
溶液制备
体积可视测试需要按比例上调或下调。具有乙腈/水(85:15，v/v)的稀释剂可通过彻底混合850mL ACN和150mL水制备。流动相是100％ACN(流动相A)和100％水(流动相B)。制备0.016mg/mL(0.2％)、0.08mg/mL(1％)以及0.4mg/mL(5％)的半乳糖醇线性标准溶液。给出的重量和体积是常规定量分析的建议量。可以使用替代量，只要最终浓度保持相同。将玻璃器皿用纯水和ACN预冲洗五次以使潜在污染物降到最少。
可以制备其它浓度。例如，对于3％(0.24mg/mL)的半乳糖醇浓度标准，准确称重约24mg半乳糖醇参考标准品置于100mL容量瓶中，添加15mL纯水并音波处理到溶解，用乙腈稀释到体积并充分混合。将其贴标签为L-3％-#1(STD#1)和L-3％-#2(STD#2)。在使用前，容量瓶应通过用纯水和ACN冲洗来彻底清洁。
可制备一个0.08mg/mL(1％)的复本。例如，准确称重约20mg半乳糖醇参考标准品置于250mL容量瓶中，添加37.5mL纯水并音波处理到溶解，用ACN稀释到体积并充分混合。将其贴标签为L-1％。
可制备一个0.016mg/mL(0.2％)的复本。这个可以如表1中所示制备。
表1
含量 实例稀释程序 标签AS 目标浓度(mg/mL)
0.2％ 2mL L-1％→10mL L-0.2％ 0.016
标准溶液能够在2到8℃下储存至多48小时且能够在实验室环境条件下储存至多52小时。可使用标准溶液如下文进一步描述地产生标准曲线。
一个复本中的半乳糖醇灵敏度溶液(0.008mg/mL(0.1％))可如下表2中所示地制备。
表2
含量 实例稀释程序 标签AS 目标浓度(mg/mL)
0.1％ 1mL L-5％-#1→50mL SS 0.008
双脱水半乳糖醇(DAG)标准溶液(8mg/mL)(仅用于鉴别目的)可如下制备：在一个复本中，准确称重约80mg DAG工作标准品置于干净10mL容量瓶中。将DAG工作标准品溶解在约5mL稀释剂中，用稀释剂稀释到体积，并混合。溶液可浸水并冷冻储存用于将来使用，直到相关峰在色谱图中不再能检测得到。
如下制备测试样品溶液(标称8mg/mL)。针对DAG药物或API的样品制备可为如下。一式两份准确称重约80mg的DAG API样品置于干净10mL容量瓶。将DAG API样品溶解在约5mL稀释剂中，用稀释剂稀释到体积，并混合。DAG药品(冻干粉末，40毫克/瓶)的样品制备可如下：清洁并移去小瓶的封盖。用5.0mL稀释剂复原冻干小瓶以得到8mg/mL溶液。一式两份制备样品(使用2瓶)。样品溶液能够在2到8℃下储存至多48小时且在实验室环境条件下52小时。
色谱条件
色谱条件显示于表3中。
表3
在样品分析之前在初始方法条件下调节并平衡HPLC色谱柱。
注射顺序
在确保满足以下所述的系统适用性要求之后，可以进行样品分析。注射顺序显示于表4中。
表4
顺序通过注射STD#1(L-3％#1)一次接着不超过6次的样品溶液注射并且在顺序的结尾再次注射STD#1(L-3％#1)包围。
系统适用性
对于空白组，确保系统清洁且稳定且在空白组色谱图中在半乳糖醇的保留时间处观测不到干扰峰。若存在任何干扰，干扰应不超过灵敏度溶液中的半乳糖醇峰。
对于灵敏度溶液，在灵敏度溶液中的半乳糖醇峰的信噪比(S/N)应不低于10。
对于相关性(r)，L-0.2％、L-1％以及L-3％#1(第一次注射)的对数校准曲线的相关性应不低于0.980。
对于标准溶液，STD#1(L-3％#1)的前五次初始注射的半乳糖醇的Lg(峰面积)的相对标准偏差(relative standard deviation，RSD)应≤5％。在STD#1(L-3％#1)的第一次注射中半乳糖醇峰的拖尾因子应≤2.0。STD#2(L-3％#2)的回收率应在95％到105％内。标准溶液#2的回收率根据等式(1)计算：
其中：CSTD#1是标准溶液#1(STD#1)中的半乳糖醇参考标准品的浓度(mg/mL)；CSTD#2是标准溶液#2(STD#2)的半乳糖醇参考标准品的浓度(mg/mL)；ASTD#1是标准溶液#1(STD#1)的五次初始注射中的半乳糖醇的平均峰面积；且ASTD#2是标准溶液#2(STD#2)的五次初始注射中的半乳糖醇的平均峰面积。
对于标准溶液包围，STD#1(L-3％#1)的包围注射的Lg(峰面积)与前五次注射的平均Lg(峰面积)之间的比率应在95％到105％内。
对于检测限(LOD)，信噪比(S/N)应不低于3。双脱水半乳糖醇制剂中的预期杂质中的一种，半乳糖醇的检测限(LOD)的测定显示于图2中。图2是展示用来测定半乳糖醇的检测限(LOD)的0.004mg/mL半乳糖醇溶液(标称浓度的0.05％)的色谱分析结果的图。
对于定量限(LOQ)，信噪比(S/N)应不低于10。半乳糖醇的定量限(LOQ)的测定显示于图3中。图3是展示用来测定半乳糖醇的定量限(LOQ)的0.008mg/mL半乳糖醇溶液(标称浓度的0.1％)的色谱分析结果的图。
每一含量的平均回收率(n＝3)应在约80％到约120％内。
对于重复性，0.1％到0.4％含量，应记录RSD％。对于0.5％以及以上，RSD％应≤20％。合并的RSD％应≤20％。
对于结果相对于ELSD气体压力的变化，对于≤1.0％的杂质，绝对差应不超过0.2％。对于>1.0％的杂质，相对差应控制在±20％内。应观测不到≥0.1％的新杂质。
就溶液稳定性而言，老化溶液的回收率应在初始分析的85％到115％内。对于≤1.0％的杂质，绝对差应不超过0.2％。对于>1.0％的杂质，老化溶液的结果应在最初的80％到120％内。应观测不到≥1.0％的新杂质。
鉴别
对于安慰剂，对应于DAG标准色谱图中的DAG峰，检测不到大于灵敏度溶液(SS)中的半乳糖醇峰的色谱峰。对于DAG活性物质，样品和DAG标准品中的DAG的保留时间基本上相同(在±5％内)。
计算
单独相关物质，使用线性工作标准品的半乳糖醇的计算曲线如下进行(等式(2)：
其中：ASTD表示线性标准溶液的半乳糖醇的面积(对于L-3％，可使用STD#1的第一次注射)；VSTD是线性标准溶液的稀释体积(mL)；WSTD是线性标准溶液的半乳糖醇重量(mg)；P是半乳糖醇的纯度(或含量)；b是确立的校准曲线的Y-截距；且k是确立的校准曲线的斜率。单独相关物质的百分比通过等式(3)计算
其中：ASPL是单独相关物质的面积；VSPL是样品溶液的稀释体积；b是确立的校准曲线的Y-截距；k是确立的校准曲线的斜率；LC是每瓶中的DAG的标示量(如在标签上说明的标称量)(药品的LC＝40mg)；且WSPL是DAG药物重量(mg)。使用半乳糖醇的线性测试的结果显示于图4中；此等结果来自下表18。
对于总相关物质，总相关物质的计算应对所有不低于0.1％的单独相关物质求和。空隙和空白组峰不应添加到总相关物质。
报告
对于报告单独相关物质，对于所有不低于0.1％的杂质，引用其相对保留时间(relative retention time，RRT)或名称来报告所有不低于0.1％的杂质，且保留两个小数位。如果两个测试结果不低于规格限度(0.1％)，那么应报告平均结果作为最终结果。但如果一个测试结果小于0.1％，那么应报告最大结果作为最终结果。对于总相关物质(总杂质)，对所有不低于0.1％的单独杂质求和。总相关物质报告到两个小数位。
参考
参考标准品显示于表5中。
表5
结果
符合所有系统适用性标准。在稀释剂色谱图中，在DAG峰、DBD以及半乳糖醇的保留时间处未观测到明显干扰峰。样品与标准溶液中的DAG峰的保留时间的差值在0％到3％范围内。在一式三份的复本中，就检测限而言的信噪比(S/N)为6、6以及3。在一式三份的复本中，就定量限而言的信噪比(S/N)为22、20以及16。相关系数(r)为0.9985，且斜率为1.7212且y-截距为7.7258。对于0.5％、1.0％以及3.0％含量的平均回收率显示于下表6中。对于两个重复运行，RSD％显示于以下表7(运行1)和表8(运行2)中。对于P-0.5％(以0.5％含量或更高存在的污染物)，半乳糖醇显示于下表9中；在表9中半乳糖醇显示为以0.59％含量存在。0.5％含量的中等精确度(在一组定义条件下的精确度的测量：相同测量程序、相同测量系统、相同地点以及历经一段延长的时间对同一或相似目标的重复测量)的合并的RSD％显示于下表10中。对于2.6巴和2.4巴的ELSD气体压力的绝对差显示于下表11中。未观测到>1.0％的杂质，且未观测到≥0.1％的新杂质。对于39℃和41℃的ELSD温度的结果显示于下表12中。未观测到>1.0％的杂质，且未观测到≥0.1％的新杂质。
溶液稳定性
测定溶液稳定性的实验方法如下：对于标准溶液，在一个复本中使用1％线性标准溶液)以1.0％DAG标称浓度制备半乳糖醇标准溶液且将溶液分别置于实验室环境条件和冷藏条件(2到8℃)下。将溶液以不同时间间隔，如2小时、4小时、8小时、24小时以及48小时再分析。对于小于24小时的时间点，相对于新鲜标准品评估溶液稳定性。评估老化溶液的回收率。对于样品溶液，在一个复本中制备指定DAG标称浓度的样品溶液且置于环境温度下的实验室条件下或冷藏条件下(2到8℃)。将溶液以不同时间间隔，如2小时、4小时、8小时、24小时以及48小时再分析。对于小于24小时的时间点，相对于新鲜标准品评估溶液稳定性。
关于在2到8℃下和在实验室环境条件下老化的变化的结果显示于下表13中。对于杂质，关于在实验室环境条件下老化，结果显示于下表14中。未观测到≥0.1％的新杂质。对于杂质，关于在2到8℃下老化，结果显示于下表15中。未观测到≥0.1％的新杂质。
表6
含量 平均回收率(％) RSD％(n＝3)
0.5％ 120 2.1
1.0％ 116 0.9
3.0％ 95 0.1
表7
运行1：
峰名称 平均含量(％) RSD(n＝6)
RRT 0.48 0.18 2.9
RRT 0.51 0.34 1.1
RRT 0.56 0.28 1.0
RRT 0.71 1.06 0.7
半乳糖醇 0.15 2.9
RRT 1.02 0.08 5.2
RRT 1.07 0.08 4.0
表8
运行2：
峰名称 平均含量(％) RSD(n＝6)
RRT 0.48 0.23 1.5
RRT 0.56 0.35 1.8
RRT 0.71 0.67 0.8
半乳糖醇 0.20 1.8
RRT 1.07 0.21 3.8
RRT 1.19 0.15 2.8
RRT 1.27 0.12 10.1
表9
P-0.5％
峰名称 平均含量(％) RSD(n＝6)
半乳糖醇 0.59 0.9
表10
含量 RSD％(n＝12)
0.5％ 2.1
表11
2.6巴：
峰名称 绝对差(％)
RRT 0.48 0.001
RRT 0.51 0.01
RRT 0.56 0.01
RRT 0.71 0.02
半乳糖醇 0.004
2.4巴：
峰名称 绝对差(％)
RRT 0.48 0.01
RRT 0.51 0.01
RRT 0.56 0.01
RRT 0.71 0.02
半乳糖醇 0.001
表12
39℃：
峰名称 绝对差(％)
RRT 0.48 0.01
RRT 0.51 0.01
RRT 0.56 0.003
RRT 0.71 0.04
半乳糖醇 0.02
RRT 1.02 0.01
RRT 1.07 0.01
41℃：
峰名称 绝对差(％)
RRT 0.48 0.001
RRT 0.51 0.0001
RRT 0.56 0.01
RRT 0.71 0.01
半乳糖醇 0.002
RRT 1.02 0.001
RRT 1.07 0.01
表13
表14
实验室环境条件
表15
2到8℃
系统适用性方面的其它细节显示于下表16和17中，显示符合回收率一致性的标准。
表16
表17
图1是展示空白组、新鲜片剂样品、标准溶液、以及模拟样品溶液的重叠色谱图的图(DAG是双脱水半乳糖醇且DBD是二溴半乳糖醇)。在图1中，在DAG峰、DBD以及半乳糖醇的保留时间处未观测到明显干扰峰，因此清楚地确立了此等物质的分辨。样品和标准溶液中的DAG峰的保留时间在±5％内。
图5是展示样品溶液中的杂质的图。除半乳糖醇以外的杂质包含相对保留时间在(relative retention time，RRT)0.48、0.51、0.56、0.71、1.02、1.07、1.19、1.23、以及1.27处的杂质。
下表18显示半乳糖醇的线性结果。
表18
下表19显示半乳糖醇的准确性结果。
表19
下表20显示运行1的精确度(重复性)结果。
表20
下表21显示运行2的精确度(重复性)结果。
表21
下表22显示P-0.5％下的精确度(重复性)结果。
表22
下表23显示半乳糖醇的精确度结果(中等精确度)。
表23
下表24显示变化ELSD温度的研究的结果。
表24
下表25显示变化ELSD气体压力的研究的结果。
表25
下表26显示在2到8℃下运行1的标准溶液稳定性的结果。
表26
时间点 浓度(mg/mL) 分析(％) 回收率(对比于初始，％)
0小时 0.0895 109.233 N/A
2小时 0.0894 109.076 100
4小时 0.0895 109.164 100
8小时 0.0888 108.302 99
25小时 0.0894 109.056 100
48小时 0.0893 108.947 100
下表27显示在2到8℃下运行2的标准溶液稳定性的结果。
表27
下表28显示在实验室环境条件下运行1的标准溶液稳定性的结果。
表28
时间点 浓度(mg/mL) 分析(％) 回收率(对比于初始，％)
0小时 0.0898 109.944 N/A
2小时 0.0897 109.778 100
4小时 0.0891 109.059 99
8小时 0.0887 108.590 99
25小时 0.0903 110.553 101
48小时 0.0891 108.986 99
下表29显示在实验室环境条件下运行2的标准溶液稳定性的结果。
表29
针对分析方法确立如下验收标准。
系统适用性/色谱参数的验收标准
此等验收标准是针对特异性、检测限(LOD)、定量限(LOQ)以及稳固性的参数。对于空白组(稀释剂)，需要系统清洁且稳定且在空白组色谱图中在半乳糖醇的保留时间处观测不到干扰峰。若存在任何干扰，干扰应不超过灵敏度溶液中的半乳糖醇峰。对于灵敏度溶液，在灵敏度溶液中的半乳糖醇峰的信噪比(S/N)应不低于10。对于相关性(r)，L-0.2％、L-1％以及L-5％#1(第一次注射)的对数校准曲线的相关性应不低于0.980。对于标准溶液，STD#1(L-5％#1)的前五次初始注射的半乳糖醇的Lg(峰面积)的相对标准偏差(RSD)应≤5％。在STD#1(L-5％#1)的第一次注射中半乳糖醇峰的拖尾因子应≤2.0。STD#2(L-5％#2)的回收率应在95％到105％内。对于标准溶液包围，STD#1(L-5％#1)的包围注射的Lg(峰面积)与前五次注射的平均Lg(峰面积)之间的比率应在95％到105％内。
此等验收标准是针对线性、范围、精确度(重复性且中等)、准确性以及溶液稳定性的参数。对于空白组(稀释剂)，需要系统清洁且稳定且在空白组色谱图中在半乳糖醇的保留时间处观测不到干扰峰。若存在任何干扰，干扰应不超过灵敏度溶液中的半乳糖醇峰。对于灵敏度溶液，在灵敏度溶液中的半乳糖醇峰的信噪比(S/N)应不低于10。对于相关性(r)，L-0.2％、L-1％以及L-3％#1(第一次注射)的对数校准曲线的相关性应不低于0.980。对于标准溶液，STD#1(L-3％#1)的前五次初始注射的半乳糖醇的Lg(峰面积)的RSD应≤5％。在STD#1(L-3％#1)的第一次注射中半乳糖醇峰的拖尾因子应≤2.0。STD#2(L-3％#2)的回收率应在95％到105％内。对于标准溶液包围，STD#1(L-5％#1)的包围注射的Lg(峰面积)与前五次注射的平均Lg(峰面积)之间的比率应在95％到105％内。
对于特异性，在稀释剂色谱图中应观测不到在DAG峰、DBD以及半乳糖醇的保留时间处的明显干扰峰。若存在任何干扰峰，对DAG的干扰应不超过灵敏度溶液中的半乳糖醇峰。样品和标准溶液中的DAG峰的保留时间基本上相同(在±5％内)。
对于检测限(LOD)，信噪比(S/N)应不低于3。
对于定量限(LOQ)，信噪比(S/N)应不低于10。
对于线性和范围，相关系数(r)应不低于0.980。
对于准确性，每一含量的平均回收率(n＝3)应在80％到120％内。
对于精确度和重复性，在0.5％含量和更高下，相对标准偏差应≤20％。
对于中等精确度，合并的RSD％应≤20％。
对于稳固性，对于≤1.0％的杂质的绝对差应不超过0.2％。对于>1.0％的杂质，相对差应控制在±20％内。应观测不到新杂质。此等稳固性标准适用于ELSD气体压力和ELSD温度的变化。
对于溶液稳定性，老化溶液的回收率应在初始分析的85％到115％内。对于样品，对于≤1.0％的杂质，绝对差应不超过0.2％。对于>1.0％的杂质，老化溶液的结果应在初始结果的80％到120％内。应观测不到≥0.1％的新杂质。
在实验室环境条件下，对于至多52小时的时间间隔，符合所有验收标准。在冷藏条件下(2到8℃)，对于至多48小时的时间间隔，符合所有验收标准。
结论
在这个实例中所描述的分析系统和方法符合针对灵敏度、精确度、稳固性、稳定性以及信噪比，包含在检测限处的信噪比，的所有标准。因此，这一分析系统和方法适用于双脱水半乳糖醇和在双脱水半乳糖醇制剂中发现的杂质，包含半乳糖醇、二溴半乳糖醇以及其它杂质的分析。
根据本发明的方法具有分析双脱水半乳糖醇制剂以及测定和定量双脱水半乳糖醇制剂中的杂质的工业实用性。
关于数值范围，除非上下文另外明确指示，否则本发明涵盖范围的上限与下限之间的到下限单位的至少十分之一的每个中间值。而且，除非被特定地排除在所陈述的范围之外，否则本发明涵盖任何其它所陈述中间值和范围，包含范围的上限和下限中的任一个或两个。
除非另外定义，否则本文中所使用的所有技术和科学术语的含义是本发明所属领域的一般技术人员通常所理解的含义。所属领域的普通技术人员还将理解，也可以使用与本文中所描述的方法和物质相似或相等的任何方法和物质来实践或测试本发明。
提供本文中论述的公开案和专利仅用于在本申请的提交日期之前对其进行公开。不应将本文中的任何内容理解为承认本发明无权凭借先前发明而先于所述公开案。另外，所提供的公开日期可能不同于可能需要独立确认的实际公开日期。
所引用的所有公开案均通过全文引用并入在本文中，包含所有发表的专利、专利申请以及文献参考以及已并入在那些发表的文献中的那些公开案。然而，在这个意义上，通过引用并入本文中的任何公开案是指发表的信息，申请人不承认在本申请的申请日期之后的任何此类发表的信息为现有技术。
如在本说明书中和所附权利要求书中所使用，单数形式包含复数形式。除非上下文另外明确规定，否则例如术语“一(a/an)”和“所述(the)”包含复数个参考物。此外，在一系列要素之前的术语“至少”应理解为指所述系列中的每个要素。在此说明性地描述的本发明可以在不存在任何要素、限制的情况下适合地实践，本文中未特定公开。因此，例如，应可扩张地且非限制性地解读术语“包括”、“包含”、“含有”等。此外，本文中所使用的术语和表达用作描述性且非限制性的术语，在此类术语和表达的使用中不意图排除未来显示的和描述的任何等效物或其任何部分，且应认识到，可以在所主张本发明的范围内做各种修改。因此，应理解，虽然已通过优选实施例和任选的特性特定地公开了本发明，但本文中所公开的本发明的修改和变化可由所属领域的技术人员再分选，且认为这类修改和变化处于本文中所公开的本发明的范围内。本发明已在本文中广泛且一般地描述。属于通用公开的范围内的每一个更窄物种和子类分组组成此等发明的一部分。这包含每个发明的通用描述，其限制条件或负面限制从所述属中去除任何主题，无论所删除的材料是否在本文中特定叙述。此外，在本发明的特性或方面以马库西组(Markush group)的方式进行描述的情况下，所属领域的技术人员将认识到本发明也因此以马库西组的任何单独成员或成员子组的形式进行描述。还应理解，以上描述意图为说明性的而非限制性的。对所属领域的技术人员而言，在查阅以上描述之后许多实施例将显而易见。因此本发明的范围不应参考以上描述来确定，而实际上应参考所附权利要求书以及所述权利要求书所授权的等效物的全部范围来确定。所属领域的技术人员顶多使用常规实验即可认识到或能够确定所描述的本发明的特定实施例的许多等效物。意图此类等效物由随附权利要求书涵盖。

Claims (28)

1.一种用于分析双脱水半乳糖醇制剂中存在的杂质的存在和量的分析方法，其包括以下步骤：
(a)通过将双脱水半乳糖醇制剂进行高效液相色谱来分析所述制剂，使用采用呈亲水性相互作用模式的酰胺化学物质和乙烯桥连混合BEH技术的逆相酰胺色谱柱，以第一流动相是100％乙腈且第二流动相是100％水的流动相梯度洗脱，以使双脱水半乳糖醇与半乳糖醇和制剂的其它污染物分离；以及
(b)测定通过高效液相色谱分辨的代表除双脱水半乳糖醇本身以外的化合物的一或多个峰的相对浓度。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法检测并定量以下各项中的至少一个：(1)半乳糖醇；(2)二溴半乳糖醇；(3)除半乳糖醇以外的杂质；以及(4)双脱水半乳糖醇的降解产物。
3.根据权利要求1所述的方法，其中流速为约0.72毫升/分钟到约0.88毫升/分钟。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述流速为约0.80毫升/分钟。
5.根据权利要求1所述的方法，其中洗脱流程为(1)0.00分钟，90％的100％乙腈；10％的100％水；(2)3.00分钟，90％的100％乙腈；10％的100％水；(3)20.00分钟，75％的100％乙腈，25％的100％水；(4)25.00分钟，50％的100％乙腈，50％的100％水；(5)30.00分钟，50％的100％乙腈，50％的100％水；(6)30.10分钟，90％的100％乙腈，10％的100％水；以及(7)40.00分钟，90％的100％乙腈，10％的100％水。
6.根据权利要求1所述的方法，其中注射体积为约15μL到约35μL。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述注射体积为约25μL。
8.根据权利要求1所述的方法，其中柱温为约28℃到约32℃。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述柱温为约30℃。
10.根据权利要求1所述的方法，其中运行时间为约40分钟。
11.根据权利要求1所述的方法，其中注射器温度为约5℃。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述注射器温度为约20℃到约22℃。
13.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包含用100％乙腈清洗进样针。
14.根据权利要求1所述的方法，其中检测借助于蒸发光散射ELSD。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述蒸发光散射检测包括挥发性溶剂的柱后添加，以增进所存在的任何流动相的水性级分的蒸发。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述挥发性溶剂选自由以下组成的群组：甲醇、乙醇、异丙醇以及乙腈。
17.根据权利要求14所述的方法，其中所述ELSD检测条件为：温度为约36℃到约44℃，气体压力为约2.0巴到约3.0巴，且增益为7。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述ELSD条件为：温度为约38℃到约42℃，气体压力为约2.25巴到约2.75巴，且增益为7。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述ELSD条件为：温度为约40℃，气体压力为约2.5巴，且增益为7。
20.根据权利要求14所述的方法，其中所述蒸发光散射检测与电喷雾LC/MS兼容。
21.根据权利要求20所述的方法，其中在线安装并连接电喷雾串联质谱仪于具有ELSD的HPLC系统。
22.根据权利要求21所述的方法，其中采集针对双脱水半乳糖醇制剂中可能存在的杂质和降解产物中的每一个提供化学结构信息的串联质谱数据。
23.根据权利要求22所述的方法，其中与HPLC串联的所述质谱针对观测到的杂质和降解产物中的每一个提供分子离子信息和具有与所述分子离子信息一致的分子量的可能化学结构。
24.根据权利要求22所述的方法，其中至少一种杂质或降解产物通过以下来鉴别：通过柱色谱分离，接着进行至少一个纯化程序，得到固体未知样品。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述固体未知样品是通过以下方式来表征：通过选自由核磁共振NMR、质谱MS、傅里叶变换红外光谱法FT-IR、元素分析组成的群组的至少一种标准分析程序来鉴别，通过HPLC测定纯度，和通过卡尔费舍尔滴定方法测定含水量。
26.根据权利要求1所述的分析方法，另外包括进行双脱水半乳糖醇制剂中存在的至少一种特定物质峰的制备型HPLC采集的步骤。
27.根据权利要求26所述的分析方法，其中所述双脱水半乳糖醇制剂中存在的所述至少一种特定物质峰是杂质。
28.根据权利要求26所述的分析方法，其中所述双脱水半乳糖醇制剂中存在的所述至少一种特定物质峰是降解产物。
CN201680076100.XA 2015-11-25 2016-11-22 双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂的分析和分辨方法 Active CN108699018B (zh)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111239311A (zh) * 2018-11-28 2020-06-05 中国科学院大连化学物理研究所 一种婴幼儿排泄物中酸性糖及酸性糖衍生物的分析方法

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108037220A (zh) * 2018-01-26 2018-05-15 上海上药第生化药业有限公司 一种核苷及碱基类物质的分离方法及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102230923A (zh) * 2011-04-01 2011-11-02 红塔烟草(集团)有限责任公司 烟草及烟草制品中水溶性糖的测定方法
US20140017798A1 (en) * 2012-02-27 2014-01-16 Del Mar Pharmaceuticals Analytical methods for analyzing and determining impurities in dianhydrogalactitol

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030060434A1 (en) 1997-02-18 2003-03-27 Loretta Nielsen Combined tumor suppressor gene therapy and chemotherapy in the treatment of neoplasms
US6929907B2 (en) 1999-12-31 2005-08-16 North Carolina State University Methods and compositions for determining the purity of chemically synthesized nucleic acids
CA2649338C (en) 2006-06-06 2011-07-12 F.Hoffman-La Roche Ag Improved measurement of vitamin d
US8563758B2 (en) 2010-08-18 2013-10-22 Del Mar Pharmaceuticals Method of synthesis of substituted hexitols such as dianhydrogalactitol
US9029164B2 (en) * 2012-02-27 2015-05-12 Del Mar Pharmaceuticals Analytical methods for analyzing and determining impurities in dianhydrogalactitol
US9679757B2 (en) 2013-04-12 2017-06-13 Waters Technologies Corporation Liquid chromatography systems and methods
TWI502523B (zh) 2013-09-11 2015-10-01 Nat Univ Tsing Hua 半導體產品多目標產能規劃系統及其方法
JP2016538574A (ja) 2013-11-18 2016-12-08 デル マー ファーマシューティカルズ ジアンヒドロガラクチトール中の不純物のｈｐｌｃ分析

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102230923A (zh) * 2011-04-01 2011-11-02 红塔烟草(集团)有限责任公司 烟草及烟草制品中水溶性糖的测定方法
US20140017798A1 (en) * 2012-02-27 2014-01-16 Del Mar Pharmaceuticals Analytical methods for analyzing and determining impurities in dianhydrogalactitol
US20150027206A1 (en) * 2012-02-27 2015-01-29 Del Mar Pharmaceuticals Analytical methods for analyzing and determining impurities in dianhydrogalactitol

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
EUAN ROSS: "Waters Amide Column Technology For Food Analysis", 《无》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111239311A (zh) * 2018-11-28 2020-06-05 中国科学院大连化学物理研究所 一种婴幼儿排泄物中酸性糖及酸性糖衍生物的分析方法

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