CN108697686B - 组合物及其方法 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素‑2‑o‑鼠李糖苷、文赛宁‑1和纤维，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起的组合物，以及制备所述组合物的方法。本公开还涉及使用所述组合物应对各种病症，例如但不限于缺氧、肺动脉高压、肺纤维化和鼻窦炎的方法。

Description

组合物及其方法
技术领域
本公开广泛涉及植物化学、生物技术和生物化学领域。具体而言，本公开涉及一种包含胡卢巴皂甙(Trigofoenoside)、牡荆素(Vitexin)、异牡荆素(Iso-Vitexin)、牡荆素-2-o-鼠李糖苷(Vitexin-2-o-rhamnoside)、文赛宁-1(Vicenin-1)和纤维，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起的组合物；以及制备所述组合物的方法。本公开还涉及使用所述组合物应对各种病症，如缺氧、肺动脉高压、肺纤维化和鼻窦炎的方法。
背景技术
传统上将富含植物化学成分的胡卢巴(Fenugreek，Trigonella foenum-graecum)用作食物、饲料和药用植物。胡卢巴在阿育吠陀和中国医学中有着历史悠久的医疗用途，并且被用于多种适应症，包括引产、助消化，以及作为改善新陈代谢和健康的一般补品。
胡卢巴含有丰富的化学成分。胡卢巴种子含有约45-60％的碳水化合物类，主要是胶质纤维(半乳甘露聚糖(galactomannan))；蛋白质类，其赖氨酸和色氨酸的含量高；非挥发性油类，如脂质；吡啶型生物碱类，主要是胡卢巴碱(trigonelline)、胆碱、龙胆碱(gentianine)和番木瓜碱(carpaine)；类黄酮类，如芹菜素(apigenin)、木犀草素(luteolin)、荭草素(orientin)、槲皮素(quercetin)、牡荆素和异牡荆素；游离氨基酸类，如4-羟基异亮氨酸、精氨酸、组氨酸和赖氨酸；钙和铁；皂苷类，如水解时产生甾体皂苷元的糖苷(如薯蓣皂苷元(diosgenin)、雅姆皂苷元(yamogenin)、剑麻皂苷元(tigogenin)、新替告皂苷元(neotigogenin))；胆固醇和谷甾醇；维生素A、B1、C和烟酸；挥发油类，如正烷烃和倍半萜烯；以及糖类，如棉子糖、水苏糖、蔗糖、果糖、甘露糖、毛蕊花糖和木糖。所述种子还含有皂苷胡卢巴素B(saponin fenugrin B)和香豆素化合物。所述种子还涉及约8％非挥发性恶臭油。在胡卢巴的种子中还鉴定出几种C-糖苷黄酮。这些包括牡荆素、牡荆素糖苷，以及荭草素(异荭草素)的阿拉伯糖苷(arabinoside)、次要甾体皂苷元(胡卢巴肽酯(fenugreekine)、异菝葜皂苷元(smilagenin)、菝葜皂苷元(sarsasapogenin)、丝兰皂苷元(yuccagenin))，以及高达50％的胶质纤维。
这些不同的化学成分显示出不同的治疗效果。被称为胡卢巴肽酯的组分(一种甾体皂苷元肽酯)具有降血糖性质并显示出改善的胰腺功能。其有助于延缓胃排空，减缓碳水化合物的吸收，以及抑制人体内的葡萄糖转运。胡卢巴碱被建议在未患糖尿病的健康患者中发挥降糖作用。甾体皂苷类(steroidal saponins)(薯蓣皂苷元、雅姆皂苷元、剑麻皂苷元和新替告皂苷元)被认为抑制了胆固醇的吸收和合成，从而抑制其在动脉硬化中的潜在作用。它还局部地用于治疗炎症，并促进动物的产后泌乳。目前，薯蓣皂苷元(一种甾体皂苷元)用于避孕药的制造。植物酚类物质具有潜在的健康益处，主要是由于其抗氧化性质，如活性氧(reactive oxygen species，ROS)的清除和抑制、亲电体的清除以及金属螯合。它们还被报道显示出药理学性质，如抗肿瘤、抗病毒、抗微生物、抗炎、降血压和抗氧化活性。
因此，研究了胡卢巴的不同化学组分和治疗活性。据报道，胡卢巴在欧洲各地，如奥地利、法国、德国、希腊、葡萄牙、俄罗斯、西班牙、瑞士、土耳其和联合王国(UK)；北非，如埃及、埃塞俄比亚、肯尼亚、摩洛哥、苏丹、坦桑尼亚和突尼斯；西亚和南亚，如中国、印度、伊朗、以色列、日本、黎巴嫩和巴基斯坦；南北美洲以及澳洲都是栽培作物。
植物生长和分布受到环境因子的限制。影响植物生长和植物化学分布的环境因素为光照、温度、水分(湿度)和营养。这些环境条件在全球不同的地理位置有所不同。它们在活性成分的质量和数量方面对植物生长、化学分布以及对遗传多样性都显示出显著的影响。
然而，由于发展中国家人口不断增长的需求，故需要鉴定和分离生物资源(如胡卢巴)中可用的特定组分，以用于多种用途。
氧气对生命至关重要。碳水化合物和脂肪酸是在动物细胞中产生ATP的最重要的燃料。动物细胞的呼吸依赖于氧气。来自燃料源的化学键的电子与氧和氢离子结合形成水和二氧化碳。细胞将此反应偶联至ATP的产生。以ATP形式的高能磷酸酯对于细胞内的许多合成和降解过程是必需的。这些包括膜运输、蛋白质合成、脂肪生成以及磷脂周转所必需的脱酰化-再酰化反应。由于血液和空气中低水平的氧气含量，身体机能受到影响。最终，这种减少的空气和血液流动影响了通过肺部的氧气输送。肺部氧气水平受损导致了动脉和静脉的高压，导致组织结疤以及动脉和静脉的血压异常。
随着ATP长时间或增涨的消耗，发生蛋白质合成器官的结构上的破坏，导致核糖体从粗面内质网脱离并使多核糖体解离成单核糖体，结果蛋白质合成减少。最终，存在对线粒体和溶酶体的膜的不可逆的损伤，并且细胞发生坏死。
缺氧是一种病理状态，其中身体或身体某个区域缺乏足够的氧气供应。当氧气水平长时间低时，肺动脉收缩并且其壁变厚。这种收缩和增厚增加了肺动脉的压力。损害或减少肺组织的量的肺部疾病(例如，肺气肿)也会减少肺部血管的数量。血管数量减少增加剩余血管中的压力，导致肺动脉高压。
肺动脉高压(PAH)是一种罕见的肺部疾病，其中肺动脉中的血压升高远高于正常水平，并且可能会危及生命。其特征在于远端肺动脉循环的血管重塑。在PAH中观察到的重塑包括肺血管内皮细胞的凋亡和增殖、细胞外基质蛋白的沉积、以及血管周围炎症。
肺静脉压增高通常是由影响心脏左侧并提高左心室压力的疾病引起的，其最终导致肺静脉压升高。肺静脉压力升高可引起肺泡-毛细血管壁的急性损伤以及随后的水肿。持续的高压可能会最终导致肺泡-毛细血管膜壁的不可逆的增厚，降低了肺扩散能力。在大多数患者中，肺动脉高压最终导致右心室肥大继而扩张，以及右心室衰竭。用力时右心室衰竭限制了心脏输出量。
肺纤维化(PF)是指肺中结疤。肺纤维化与肺血管重塑有关，促进了肺动脉高压的发展。其描述了一类肺部疾病，其中由组织结疤引起的气囊壁(称为肺泡)的增厚使得氧气难以进入血液。低氧水平(以及僵硬的疤痕组织本身)可导致呼吸短促，特别是在步行和锻炼时。肺纤维化可以由可识别的肺部刺激所引起，但在许多情况下，原因不明。
气道黏液分泌过多通过黏膜纤毛清除削减和细菌重复感染而导致呼吸衰竭。形成气道中黏蛋白家族的黏液基质的主要组分是MUC5AC和MUC5B。黏液的主要成分是大量的高度糖基化的蛋白质(黏蛋白)，其提供了具有其特征粘度、粘附性和弹性的气道分泌物。
活化的嗜中性粒细胞释放的活性氧(ROS)通过人肺黏液表皮样细胞系中表皮生长因子受体的反式激活而导致黏蛋白Muc5ac的合成。此外，嗜中性粒细胞弹性蛋白酶通过氧化剂依赖机制来诱导培养的人支气管上皮细胞中Muc5ac的过表达。在鼻窦炎中，由Muc5ac基因形成的黏蛋白阻塞上呼吸道，其中颧骨和额头会受到黏液分泌的影响。
在急性鼻窦炎中，感染迅速发展(几天内)并持续较短的时间。许多急性鼻窦炎的病例持续一周左右，但持续2至3周的并不罕见(即，比大多数感冒时间长)。有时其持续更长。据说鼻窦炎如果持续4至30天则是急性的，而如果其持续4至12周则是亚急性的。然而，在慢性鼻窦炎中，鼻窦炎会变得持久并持续超过12周。
目前疗法
PAH的目前疗法包括以下药剂：1)抑制PDE5，2)拮抗内皮素，或者3)用外源性的前列环素(prostacyclins)来补充前列腺素路径。这些治疗改善了PAH患者的寿命和日常生活活动的表现，但无法停止会不可避免地改变肺血管构造并导致肺移植的持续的细胞增殖过程。
肺疾病康复——肺疾病康复是一种用于患有慢性肺病(包括PF和缺氧)的患者的结构性锻炼方案，目标是恢复患者的功能能力而不会出现极度的呼吸困难。通常，肺疾病康复会包括调理；运动训练和呼吸练习；焦虑、压力和情绪管理；营养咨询；教育；以及其它组成部分。
肺移植——在美国肺纤维化现在是肺移植的首要指标；在2013年，PF几乎占所有完成的肺移植的一半。移植能够改善没有其它重大健康问题的患者的寿命和生活质量。
N-乙酰半胱氨酸(NAC)：NAC是一种天然存在的抗氧化剂。在过去，人们认为NAC可以帮助保护肺部免受某些形式的PF中发生的“氧化损伤”。在2014年，一项临床试验发现NAC对特发性肺纤维化(IPF)没有实质性的有益影响。
尼达尼布(Nintedanib)
Figure BDA0001636157330000041
尼达尼布是一种在美国被批准用于治疗IPF的抗纤维化药物。在临床试验中，尼达尼布已被证明减缓了轻度至中度IPF的肺功能的下降。其每日口服两次。
这些治疗改善了PF患者的寿命和日常生活活动的表现，但无法停止影响了气囊和气道的肺组织的结疤，导致ILD或PF以及肺移植。
存在针对鼻窦炎的非处方药，如用于缓解疼痛和发烧的扑热息痛和布洛芬；用于缓解鼻塞的解充血药(decongestant)和盐水鼻腔喷雾剂或滴剂。这些药物提供了瞬时的缓解，但不能阻止上呼吸道黏液的形成。有必要开发一种能够通过停止导致鼻窦炎的黏液形成和鼻塞来阻止疾病进展的药物。
现有技术：
CN 103304605 A公开了一种凭借高速逆流色谱(HSCCC)分离技术由胡卢巴制备黄酮苷和二苯乙烯苷型化合物的方法，从而有效缩短了分离时间，并且克服了传统制备方法的操作复杂、样品解吸损失、低收率等的缺点。根据所述方法，技术简单，重现性高，分离效率高；并且获得的单体含量高于96.0％。该文献围绕获得糖苷和葡萄糖苷的有效过程为中心。
WO 2009121155 A2在一种药物的制备中公开了式(I)的苯并吡喃酮化合物，所述药物用于治疗与单胺氧化酶有关的疾病、功能障碍和紊乱，如抑郁症和与抑郁症有关的疾病、恐惧症、注意力缺陷、药物滥用、行为失调、帕金森病、阿尔茨海默病和偏头痛。在更特别的实施方式中，所述疾病包括对采用其它抗抑郁药的常规治疗无反应的严重抑郁或抑郁症状。
CN 103923074 A公开了一种从胡卢巴中提取牡荆素和胡卢巴碱的方法。所述方法包括从一定量的胡卢巴种子和胡卢巴叶中获得含牡荆素和胡卢巴碱的水提取物的多个步骤，其产率为20％-35％。该过程导致了提高的牡荆素和胡卢巴碱的提取率，并且还改善了牡荆素和胡卢巴碱的提取纯度。因此，该文献主要着眼于通过专利过程获得胡卢巴碱和牡荆素的更纯的形式。
CN 102920727 A提供了一种制备富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物的方法，并且涉及山楂叶的草药提取领域。根据所述方法，牡荆素鼠李糖苷构成所述提取物的30％至55％，而牡荆素葡糖苷构成所述提取物的10％至35％。该文献着眼于获得两种高纯度的成分。
Lamia Yacoubi等人(2011年09月)研究了胡卢巴(Trigonella foenum-graecumLinnaeus)及其酚类(phenolylic)提取物用于抑制博来霉素(bleomycin)诱导的大鼠肺纤维化。随着纤维化的增加，未发现相关性，表明炎症在肺纤维化中不太可能起直接作用。数据表明，在第一方面，胡卢巴的多酚具有强效的抗氧化活性，因此对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型具有强效的抗炎活性，并且在第二方面，他们证实了除了炎症之外，其它因素可能介入了肺纤维化的发病机制。
Madhesh Murugesan等人(2011年09月)表示，给药胡卢巴会更加有效地降低心肌损伤的程度，并在异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌梗塞期间显著地抵消氧化应激。
然而，单独或组合的现有技术都没有教导用于治疗以下病症的用途的组合物：其中氧气水平下降至低于正常，并由此引发肺中氧的削减而导致的疾病，如缺氧、肺动脉高压、肺纤维化和鼻窦炎。有必要开发一种安全且有效的方案，其不仅可以停止疾病的发展，并且还可以提供使器官在移植阶段免于受到损害的保护。
因此，本公开克服了现有技术中观察到的各种缺点，并提供了用于实现含有来自例如但不限于胡卢巴的来源中的特定活性组分，并且除去了诸如氨基酸类、生物碱类、皂苷类等所有其它活性成分的组合物的方法。本公开的组合物在应对诸如但不限于缺氧、肺动脉高压、肺纤维化和鼻窦炎的病症上是有效的。
发明内容
因此，本公开涉及一种包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起的组合物；一种用于获得包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起的组合物的方法，所述方法包括以下行为：(a)用第一溶剂提取所述组合物的片状源材料以获得第一提取物，(b)用第二溶剂处理所述第一提取物以获得第二提取物，(c)用第三溶剂再提取所述第二提取物以获得澄清提取物，(d)浓缩所述澄清提取物以获得固体物质，(e)将所述固体物质溶于水性溶剂中以获得澄清溶液，(f)再生和用溶剂洗涤吸附剂以获得再生和洗涤过的吸附剂，(g)使所述澄清溶液通过所述再生和洗涤过的吸附剂，用溶剂再洗涤该吸附剂并用醇溶剂洗脱以获得洗脱液，以及(h)浓缩所述洗脱液并任选地添加药学上可接受的赋形剂以获得所述组合物；以及一种应对选自包括缺氧、肺动脉高压、肺纤维化和鼻窦炎，或它们的任意组合的群组中的疾病的方法，所述方法包括以下行为：将包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起的组合物给药至有此需要的受治者。
附图说明
为了使本公开可以容易理解并付诸实践，现在将参考参照附图所阐明的示例性的实施方式。所述附图与下面的详细描述共同并入说明书并形成说明书的一部分，用于进一步说明实施方式并解释各个原理和优点，根据本公开，其中：
图1a和1b为描绘根据一个实施方式，当前组合物中胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1的存在的HPLC图谱。
图2a描绘了标准胡卢巴皂甙的HPLC图谱；图2b描绘了标准文赛宁-1的HPLC图谱；图2c描绘了标准牡荆素-2-o-鼠李糖苷的HPLC图谱；图2d描绘了标准牡荆素的HPLC图谱；以及图2e描绘了标准异牡荆素的HPLC图谱。
图3为描绘根据一个实施方式，当前组合物对MCT诱导的外周血氧含量(脉搏Ox)的变化的影响的条形图。
图4为描绘根据一个实施方式，当前组合物对MCT诱导的呼吸频率(f)的变化的影响的条形图。
图5为描绘根据一个实施方式，当前组合物对MCT诱导的增强的呼吸间歇(enhanced pause，Penh)的变化的影响的条形图。
图6a为根描绘根据一个实施方式，当前组合物对MCT诱导的右心室dP/dt最小的变化的影响的条形图；以及图6b为描绘当前组合物对MCT诱导的右心室dP/dt最大的变化的影响的条形图。
图7a为描绘根据一个实施方式，当前组合物对MCT诱导的收缩指数的变化的影响的条形图，以及图7b为描绘当前组合物对MCT诱导的τ的变化的影响的条形图。
图8为描绘根据一个实施方式，当前组合物对博来霉素诱导的吸气时间(Ti)的变化的影响的图表。
图9为描绘根据一个实施方式，当前组合物对博来霉素诱导的呼气时间(Te)的变化的影响的图表。
图10为描绘根据一个实施方式，当前组合物对博来霉素诱导的增强的呼吸间歇(Penh)的变化的影响的图表。
图11为描绘根据一个实施方式，当前组合物对博来霉素诱导的外周血氧含量(脉搏Ox)的变化的影响的条形图。
图12为描绘根据一个实施方式，当前组合物对博来霉素诱导的肺中Muc5ac m-RNA表达的变化的影响的条形图。
图13为描绘根据一个实施方式，当前组合物对博来霉素诱导的肺中NF-kB m-RNA表达的变化的影响的条形图。
具体实施方式
本公开涉及一种包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起的组合物。
本公开还涉及一种用于获得包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起的组合物的方法，所述方法包括以下行为：
a)用第一溶剂提取所述组合物的片状源材料以获得第一提取物；
b)用第二溶剂处理所述第一提取物以获得第二提取物；
c)用第三溶剂再提取所述第二提取物以获得澄清提取物；
d)浓缩所述澄清提取物以获得固体物质；
e)将所述固体物质溶于水性溶剂中以获得澄清溶液；
f)再生和用溶剂洗涤吸附剂以获得再生和洗涤过的吸附剂；
g)使所述澄清溶液通过所述再生和洗涤过的吸附剂，用溶剂再洗涤该吸附剂并用醇溶剂洗脱以获得洗脱液；以及
h)浓缩所述洗脱液并任选地添加药学上可接受的赋形剂以获得所述组合物。
在本公开的一个实施方式中，所述源材料来自植物来源，优选胡卢巴(Trigonellafoenum graecum)。
在本公开的另一个实施方式中，所述用第一溶剂提取是在约25℃至约30℃，优选约25℃至约27℃的温度范围，约3.8小时至约4.2小时，优选约4小时的时间段下进行的；以及所述第一溶剂为选自包括正己烷、正戊烷和正庚烷的群组的脂肪族化合物，优选正己烷。
在本公开的再一个实施方式中，所述用第二溶剂处理是在约26℃至约30℃，优选约27℃至约29℃的温度下范围进行的；以及所述第二溶剂为乙酸乙酯。
在本公开的再一个实施方式中，所述用第三溶剂提取是在约22℃至约27℃，优选约22℃至约25℃的温度范围，约7小时至约9小时的时间段范围，优选约8小时下以逆流方式进行的；以及所述第三溶剂为正丁醇。
在本公开的再一个实施方式中，所述浓缩通过真空浓缩进行。
在本公开的再一个实施方式中，所述水性溶剂为去离子水。
在本公开的又一个实施方式中，所述吸附剂为树脂床，优选Amberlite XAD-16；其中，用于洗涤所述吸附剂的溶剂选自包括异丙醇、乙醇和去离子水，或它们的任意组合的群组；其中，用于再洗涤所述吸附剂的溶剂选自包括氯化钠盐水和水，或它们的组合的群组；以及其中，所述醇溶剂选自包括乙醇和异丙醇的群组，优选异丙醇。
本公开还涉及一种应对选自包括缺氧、肺动脉高压、肺纤维化和鼻窦炎，或它们的任意组合的群组中的疾病的方法，所述方法包括以下行为：将包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起的组合物给药至有此需要的受治者。
在本公开的一个实施方式中，所述胡卢巴皂甙、所述牡荆素、所述异牡荆素、所述牡荆素-2-o-鼠李糖苷和所述文赛宁-1共同具有约8％w/w至约31％w/w的浓度范围；所述纤维以约69％w/w至约92％w/w的浓度范围存在。
在本公开的另一个实施方式中，所述胡卢巴皂甙以约0.1％w/w至约8％w/w的浓度范围存在；所述牡荆素以约0.5％w/w至约5％w/w的浓度范围存在；所述异牡荆素以约0.5％w/w至约7％w/w的浓度范围存在；所述牡荆素-2-o-鼠李糖苷以约0.5％w/w至约7％w/w的浓度范围存在；所述文赛宁-1以约0.5％w/w至约4％w/w的浓度范围存在；以及所述纤维以约69％w/w至约92％w/w的浓度范围存在。
在本公开的再一个实施方式中，所述药学上可接受的赋形剂选自包括树胶、成粒剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、甜味剂、添加剂、溶剂、助流剂、防粘剂、抗静电剂、抗氧化剂、表面活性剂、增粘剂、植物纤维素材料、着色剂、调味剂、包衣剂、增塑剂、防腐剂、悬浮剂、乳化剂和滚圆剂或它们的任意组合的群组。
在本公开的再一个实施方式中，所述组合物被配制为选自包括固体口服制剂、液体口服制剂、吸入制剂、鼻用制剂、肠胃外制剂、植物性(phytoceutical)原料、保健品和食品或者它们的任意组合的剂型的群组。
在本公开的再一个实施方式中，所述固体口服制剂选自包括片剂、胶囊、圆形锭剂、菱形锭剂、可分散粉剂、可分散颗粒或它们的任意组合的群组；所述液体口服制剂选自包括水性或油性悬浮液、乳剂、滴剂、硬或软凝胶胶囊中的乳剂、糖浆剂、酏剂或它们的任意组合的群组；所述肠胃外制剂选自包括静脉内注射、肌内注射、肌内贮库、皮下注射、经皮注射或它们的任意组合的群组；所述吸入制剂选自包括吸入剂、干粉吸入剂、雾化剂它们的任意组合的群组；以及所述鼻用制剂选自包括滴鼻剂、鼻用喷雾剂或它们的任意组合的群组。
在本公开的再一个实施方式中，所述组合物以约1mg/kg所述受治者体重至约100mg/kg所述受治者体重的范围，优选约1mg/kg所述受治者体重至约40mg/kg所述受治者体重的范围的剂量给药。
在本公开的再一个实施方式中，所述组合物以约1μg/kg所述受治者体重至约100μg/kg所述受治者体重的范围，优选约1μg/kg所述受治者体重至约25μg/kg所述受治者体重的范围的剂量作为雾化剂或吸入剂给药。
在本公开的又一个实施方式中，所述受治者为哺乳动物，包括人类。
本公开涉及一种包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起的组合物，其在整个本说明书中也称之为“当前组合物”。
在本公开的一个实施方式中，胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1共同构成所述组合物的约8％w/w至约31％w/w，同时所述纤维构成所述组合物的约69％w/w至约92％w/w。
在本公开的另一个实施方式中，所述组合物包含约0.1％w/w至约8％w/w的胡卢巴皂甙、约0.5％w/w至约5％w/w的牡荆素、约0.5％w/w至约7％w/w的异牡荆素、约0.5％w/w至约7％w/w的牡荆素-2-o-鼠李糖苷、约0.5％w/w至约4％w/w的文赛宁-1和约69％w/w至约92％w/w的纤维。
在本公开的另一个实施方式中，所述药学上可接受的赋形剂以约10％w/w至约70％w/w的浓度范围存在。
在本公开的另一个实施方式中，所述药学上可接受的赋形剂选自包括树胶、成粒剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、甜味剂、添加剂、溶剂、助流剂、防粘剂、抗静电剂、抗氧化剂、表面活性剂、增粘剂、植物纤维素材料、着色剂、调味剂、包衣剂、增塑剂、防腐剂、悬浮剂、乳化剂和滚圆剂或者它们的任意组合的群组。
在本公开的一个实施方式中，所述组合物得自生物源材料。在一个示例性的实施方式中，所述组合物得自植物来源，优选得自胡卢巴(Trigonella foenum-graecum)。
在本公开的一个非限制性实施方式中，所述组合物为植物提取物的形式，包括但不限于基于胡卢巴的提取物。
本公开提供了一种用于获得包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维的组合物/提取物的简单、成本合算且高效的方法。
在一个非限制性实施方式中，所述组合物/提取物得自胡卢巴(Trigonellafoenum-graecum)，并且制备所述组合物/提取物的方法主要包括以下行为：在削片机上将胡卢巴的种子切片以暴露内核，制成平均2mm的尺寸的薄片，使片状种子接受一系列提取步骤，接着是选自包括浓缩提取物、稀释、吸附、层析、洗脱和浓缩或它们的任意组合的群组的行为。
在本公开的一个实施方式中，在切片后，采用作为脂肪族化合物的第一溶剂提取胡卢巴种子。在一个示例性的实施方式中，所述溶剂为选自包括正己烷、正戊烷、正庚烷的群组的正烷烃，优选正己烷。该步骤是在约25℃至约30℃，优选约25℃至约27℃的室温，约3.8小时至约4.2小时，优选约4小时的时间段下进行的，并且能够除去脂质和油。
在用所述第一溶剂提取之后，将获得的提取物用第二溶剂，优选乙酸乙酯处理。该步骤是在约26℃至约30℃，优选约27℃至约29℃的温度范围下进行的，并且能够除去生物碱和其它有色杂质。随后是在约22℃至约27℃，优选约22℃至约25℃的温度范围，约7小时至约9小时的时间段范围，优选约8小时下以逆流方式用第三溶剂，优选正丁醇的再提取。然后将获得的提取物真空浓缩并溶于去离子水中，以及使由此获得的澄清溶液通过再生并用选自包括异丙醇、乙醇和去离子水，或它们的任意组合的群组的溶剂洗涤的吸附剂树脂。采用色谱法，优选薄层色谱法来监测柱/树脂的出口。一旦全部的澄清溶液通过了吸附剂树脂，则树脂/柱采用选自包括氯化钠盐水和水，或它们的组合的群组的溶剂来洗涤，并且采用选自包括乙醇和异丙醇的群组，优选异丙醇的溶剂来洗脱。然后将洗脱液收集并浓缩以获得本公开的组合物。可任选地将赋形剂添加到最终组合物中。
在本公开的另一个非限制性实施方式中，获得所述组合物的方法包括将胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起依次添加和组合，以获得当前组合物。
在一个示例性的实施方式中，加入胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1，以使得它们共同构成所述组合物的约8％w/w至约31％w/w，以及加入纤维以使其构成所述组合物的约69％w/w至约92％w/w。
在另一个示例性的实施方式中，所述方法包括将约0.1％w/w至约8％w/w的胡卢巴皂甙、约0.5％w/w至约5％w/w的牡荆素、约0.5％w/w至约7％w/w的异牡荆素、约0.5％w/w至约7％w/w的牡荆素-2-o-鼠李糖苷、约0.5％w/w至约4％w/w的文赛宁-1和约69％w/w至约92％w/w的纤维组合，以获得所述组合物。
在本公开的可选实施方式中，所述组合物可以通过化学合成而获得。
在一个示例性的实施方式中，本公开的组合物用于应对疾病状况，如缺氧、肺动脉高压、肺纤维化和鼻窦炎，或它们的任意组合。
本公开进一步提供了一种通过将当前组合物给药至有此需要的受治者来应对选自包括缺氧、肺动脉高压、肺纤维化和鼻窦炎，或它们的任意组合的群组的疾病状况的方法。
在本公开的一个实施方式中，术语“应对(managing)”或“应对(management)”包括疾病状况或病症或不良影响或副作用的预防、治疗和治愈。所述术语还包括最佳状态的维持以及预防疾病状况或病症或不良影响或副作用的进一步发展。
在本公开的另一个实施方式中，所述受治者为哺乳动物，包括人类。
在本公开的再一个实施方式中，所述组合物被配制为选自包括固体口服制剂、液体口服制剂、吸入制剂、鼻用制剂、肠胃外制剂、植物性原料、保健品和食品或它们的任意组合的剂型的群组。所述固体口服制剂选自包括片剂、胶囊、圆形锭剂、菱形锭剂、可分散粉剂、可分散颗粒或它们的任意组合的群组；所述液体口服制剂选自包括水性或油性悬浮液、乳剂、滴剂、硬或软凝胶胶囊中的乳剂、糖浆剂、酏剂或它们的任意组合的群组；所述肠胃外制剂选自包括静脉内注射、肌内注射、肌内贮库、皮下注射、经皮注射或它们的任意组合的群组；所述吸入制剂选自包括吸入剂、干粉吸入剂、雾化剂它们的任意组合的群组；以及所述鼻用制剂选自包括滴鼻剂、鼻用喷雾剂或它们的任意组合的群组。
在本公开的一个非限制性实施方式中，所述组合物的给药是经口服进行的。
在本公开的又一个实施方式中，当前组合物被配制为合适的剂量制剂以获得治疗效果。在本公开的一个实施方式中，用于受治者的当前组合物的剂量根据USFDA行业准则来计算。
在一个示例性的实施方式中，所述组合物以约1mg/kg受治者体重至约100mg/kg受治者体重的范围，优选受治者体重的约1mg/kg受治者体重至约40mg/kg受治者体重的范围的剂量给药。
在另一个示例性的实施方式中，所述组合物以约1μg/kg受治者体重至约100μg/kg受治者体重的范围，优选受治者体重的约1μg/kg受治者体重至约25μg/kg受治者体重的范围的剂量作为雾化剂或吸入剂给药。
本公开在以下实施例的帮助下被进一步阐述。然而，这些实施例不应当被解读为限制本公开的范围。
实施例
实施例1(a)：由胡卢巴制备当前组合物
将500g的胡卢巴种子切片至约2mm的厚度，然后用约3000ml的正己烷在室温下提取约4小时以除去脂质和油。提取物用约2000ml的乙酸乙酯处理以除去生物碱和其它有色杂质。将这些提取过的胡卢巴切片用约2000ml的正丁醇以逆流方式再提取约8小时。将该澄清的正丁醇提取物浓缩以得到重约6.5g的固体物质，然后将其溶于250ml的去离子水中以得到澄清溶液。然后使该溶液通过含有约25ml的Amberlite xad-16树脂(再生并用异丙醇然后是去离子水洗涤)的吸附剂树脂床。采用薄层色谱在以下系统中监测柱子出口的化合物的消失——氯仿(约8ml):甲醇(约2ml):约1滴水。一旦全量通过，将柱子用0.9％氯化钠盐水洗涤然后是约250ml的水洗涤。用约250ml的异丙醇洗脱所述柱子，然后收集并浓缩洗脱液，以得到约1.4g的自由流动的淡棕色粉末，其为包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维的当前组合物。
此外，为了验证所述粉末包含以上所述的组分，使用HPLC和重量分析法分析所述粉末。
HPLC方法
样品名称：RD#FE 691
样品瓶：1:A,1
注射#：1
注射体积：20.00μl
运行时间：10:00分钟
进行HPLC时，获得了五个峰。当前组合物的HPLC图谱显示于图1a中。通过与标准物质的HPLC图谱比较(图2a至2e)，发现峰对应于活性组分胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷和文赛宁-1。
利用HPLC分析的五种组分的浓度采用标准程序由HPLC图谱来计算，并提供于以下表1中：
样品序号 组分 浓度(％)
1 胡卢巴皂甙, 4.075
2 牡荆素 3.415
3 异牡荆素 2.800
4 牡荆素-2-o-鼠李糖苷 3.369
5 文赛宁-1 1.554
表1：当前组合物中组分的浓度
重量分析
方案
向约1g的获得的粉末中，加入约40ml的异丙醇(IPA)，并在室温下搅拌约30分钟。将溶液过滤，之后，获得了澄清的IPA提取物，将其在水浴上蒸发至残渣，冷却至室温。向上述残渣中加入约100ml的丙酮并在室温下搅拌约30分钟。将该溶液通过沃特曼(Whatman)滤纸(预先称重)过滤。沉淀物在约100℃下干燥约2小时，然后再次称重沉淀物和滤纸。
计算确定纤维的浓度：
沉淀物的重量＝包含沉淀物的滤纸的重量-滤纸的重量
可溶性纤维的浓度＝[(样品的初始重量-沉淀物的重量)/样品的初始重量]×100
基于此，确定获得的可溶性纤维的浓度为约77％。
实施例1(b)：由胡卢巴制备当前组合物的方法
将500g的胡卢巴种子切片至约2mm的厚度，然后用约3000ml的正庚烷在室温下提取约3.8小时以除去脂质和油。提取物用约2000ml的乙酸乙酯处理以除去生物碱和其它有色杂质。将这些提取过的胡卢巴切片用约2000ml的正丁醇以逆流方式再提取约8小时。将该澄清的正丁醇提取物浓缩以得到重约6.5g的固体物质，然后将其溶于250ml的去离子水中以得到澄清溶液。然后使该溶液通过含有约25ml的Amberlite xad-16树脂(再生并用乙醇然后是去离子水洗涤)的吸附剂树脂床。采用薄层色谱在以下系统中监测柱子出口的化合物的消失——氯仿(约8ml):甲醇(约2ml):约1滴水。一旦全量通过，将柱子用0.9％氯化钠盐水洗涤然后是约250ml的水洗涤。用约250ml的异丙醇洗脱所述柱子，然后收集并浓缩洗脱液，以得到约1.2g的自由流动的淡棕色粉末，其为包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维的当前组合物。
HPLC方法
样品名称：IND 830植物批次
样品瓶：1:A,7
注射#：1
注射体积：20.00μl
运行时间：10:00分钟
进行HPLC时，获得了五个峰。当前组合物的HPLC图谱显示于图1b中。通过与标准物质的HPLC图谱比较(图2a至2e)，发现峰对应于活性组分胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷和文赛宁-1。
利用HPLC分析的五种组分的浓度采用标准程序由HPLC图谱来计算，并提供于以下表2中：
样品序号 组分 浓度(％)
1 胡卢巴皂甙, 3.259
2 牡荆素 1.300
3 异牡荆素 2.094
4 牡荆素-2-o-鼠李糖苷 2.022
5 文赛宁-1 0.679
表2：当前组合物中组分的浓度
重量分析
方案
向约1g的获得的粉末中，加入约40ml的异丙醇(IPA)，并在室温下搅拌约30分钟。将溶液过滤，之后，获得了澄清的IPA提取物，将其在水浴上蒸发至残渣，冷却至室温。向上述残渣中加入约100ml的丙酮并在室温下搅拌约30分钟。将该溶液通过沃特曼滤纸(预先称重)过滤。沉淀物在约100℃下干燥约2小时，然后再次称重沉淀物和滤纸。
计算确定纤维的浓度：
沉淀物的重量＝包含沉淀物的滤纸的重量-滤纸的重量
可溶性纤维的浓度＝[(样品的初始重量-沉淀物的重量)/样品的初始重量]×100
基于此，确定获得的可溶性纤维的浓度为约79％。
实施例2：制备当前组合物的方法
将约0.1％w/w至约8％w/w的胡卢巴皂甙、约0.5％w/w至约5％w/w的牡荆素、约0.5％w/w至约7％w/w的异牡荆素、约0.5％w/w至约7％w/w的牡荆素-2-o-鼠李糖苷和约0.5％w/w至约4％w/w的文赛宁-1依次添加和组合，之后将约69％w/w至约92％w/w的纤维加入到组合物中，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起，以获得当前组合物。
实施例3：当前组合物对缺氧、肺动脉高压、肺纤维化和鼻窦炎的评价
在麻醉状态下通过野百合碱(Monocrotaline，MCT)的皮下给药(60mg/kg)，在重约200至220g的雄性Sprague Dawley系大鼠中诱导了肺动脉高压(PAH)。用媒介物(10mg/kg蒸馏水，口服(p.o.))或当前组合物(10mg/kg，20mg/kg和40mg/kg，口服(p.o.))治疗用野百合碱(MCT)给药的动物28天。在各个不同的日子评价必要的参数。
动物模型：
肺动脉高压(PAH)的特征在于利用内皮增殖、平滑肌增生和肥大、以及外膜基质的扩张来重塑肺动脉。肺动脉压力的增加、右心室肥大和最终的肺心病是组成该疾病的复杂病理生理学的表现。常用于研究与右心室(RV)代偿性肥大和RV衰竭相关的功能、结构和分子变化的模型为用野百合碱(MCT)对大鼠的处理。它是一种源自大托叶猪屎豆(Crotalariaspectabilis)种子的植物毒素，并且在体内由混合功能氧化酶在肝中激活以形成反应性双官能交联化合物MCT吡咯。由于肺代表了肝脏远端的第一个主要血管床，所以MCT对肺血管展现出选择性毒性作用而对全身血管没有任何影响。
实施例3.1：当前组合物对缺氧的评价
将实施例1(a)中获得的当前组合物用于以下实验中。
采用以下参数进行缺氧评价：
a、外周血氧含量
b、肺功能测量
i、呼吸率
ii、增强的呼吸间歇
当前组合物对MCT诱导的大鼠外周血氧含量(脉搏Ox)的变化的影响：
脉搏血氧测定法对于血氧饱和度的无创连续测量特别方便。血氧监测仪显示血液负载氧气的百分比。更具体地，其测量负载的血红蛋白(血液中携带氧气的蛋白质)的百分比。
数据通过单因素方差分析(One-Way ANOVA)，接着是Dunnett后期检验来分析。与正常组相比###P<0.001，以及与MCT对照组相比**P<0.01，***P<0.001。结果显示于以下表3和图3(第28天结果)中。
Figure BDA0001636157330000171
表3：当前组合物对MCT诱导的外周血氧含量(脉搏Ox)的变化的影响
可以观察到，第28天，与正常组相比，MCT对照组中的外周血氧含量显著降低(P<0.001)。与MCT对照大鼠相比，采用当前组合物治疗，特别是以20mg/kg和40mg/kg的浓度治疗，在外周血氧含量上产生了显著提升(P<0.01)，达到正常水平。
当前组合物对MCT诱导的大鼠呼吸频率(f)的变化的影响：
数据通过双因素方差分析(Two-Way ANOVA)，接着是Bonferroni后期检验来分析。在各自天数下，与正常组相比#P<0.05，##P<0.01，以及与MCT对照组相比*P<0.05，结果显示于以下表4和图4中。
Figure BDA0001636157330000181
表4：当前组合物对MCT诱导的大鼠呼吸频率(f)的变化的影响
可以观察到，在第0天，MCT对照组与正常组的呼吸频率不存在显著差异。与正常组相比，皮下MCT给药14天和28天后的MCT对照大鼠中的呼吸频率显著降低(P<0.05和P<0.01)。与MCT对照组相比时，28天的治疗后，当前组合物治疗组(20mg/kg和40mg/kg)中的呼吸频率显著增加(P<0.05)。
当前组合物对MCT诱导的大鼠增强的呼吸间歇(Penh)的变化的影响：
Penh是一种无量纲指标，通常用于评价动物呼吸时进入和离开全身流体积描记器的气流模式的形状的变化。该指数对呼气期间波形下的面积分布的变化敏感，并随着曲线起始附近的归一化面积的增加而以非线性方式增加。
数据通过双因素方差分析，接着是Bonferroni后期检验来分析。在各自天数下，与正常组相比##P<0.01，以及与MCT对照组相比*P<0.05，**P<0.01，结果显示于以下表5和图5中。
Figure BDA0001636157330000191
表5：当前组合物对MCT诱导的大鼠增强的呼吸间歇(Penh)的变化的影响
可以观察到，在第0天，MCT对照组与正常组和当前组合物(10mg/kg、20mg/kg和40mg/kg)治疗组中的增强的呼吸间歇不存在显著差异。与正常组相比，皮下MCT给药28天后的MCT对照大鼠中的增强的呼吸间歇显著增加(P<0.01)。与MCT对照组相比时，28天后，当前组合物(20mg/kg和40mg/kg)治疗组中的增强的呼吸间歇显著且剂量依赖性地降低(P<0.05和P<0.01)。
结论：
由上述结果明确的是，当前组合物有效地使血氧饱和度正常化，结果恢复了血液中携带氧气的血红蛋白的百分比。呼吸速率的正常化表明当前组合物带来了充足的氧气供应。其还在低的氧气水平的情况下使进入和离开全身流的气流模式的形状的变化正常化。因此，所有上述发现证明了当前组合物对于缺氧是安全有效的药物。
实施例3.2：采用血液动力学测量的当前组合物对肺动脉高压的作用
将实施例1(a)中获得的当前组合物用于以下实验中。
血流动力学测量包括许多参数，如dP/dt最大、dP/dt最小、收缩指数和τ。这些参数有助于详细说明气流压力，如收缩压和舒张压随时间的比率。它们还通过用于描述心肌松弛过程的时间常数(τ)而详细说明了压力下降及其分析。
收缩性能通过dP/dt最大的收缩指数来评定，而舒张功能障碍则是由于后负荷增加而引起的。舒张期用等容积松弛(τ)的时间常数和舒张末期压-直径关系(EDPDR)来评价——前者评价主动松弛，而后者为体内心肌僵硬的评价。心肌松弛的动态过程从射血期延续到早期充盈期。
当前组合物对MCT诱导的大鼠右心室dP/dt最大和右心室dP/dt最小的变化的影响：
数据通过单因素方差分析，接着是Dunnett后期检验来分析。在各自天数下，与正常组相比##P<0.01，###P<0.001，以及与MCT对照组相比*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。结果显示于以下表6以及图6a和6b中。
Figure BDA0001636157330000201
表6：当前组合物对MCT诱导的大鼠右心室dP/dt最大和右心室dP/dt最小的变化的影响
可以观察到，28天的MCT皮下给药之后，与正常组相比，MCT对照组在dP/dt最大和dP/dt最小上存在显著增加(P<0.01和P<0.001)。与MCT对照组相比，当前组合物的给药(20mg/kg和40mg/kg)显著且剂量依赖性地降低了(P<0.05和P<0.01)dP/dt最大，而与MCT对照组相比，当前组合物以全部三种剂量的给药显著且剂量依赖性地降低了(分别为P<0.05、P<0.01和P<0.001)dP/dt最小。
当前组合物对MCT诱导的大鼠收缩指数和τ的变化的影响：
数据通过单因素方差分析，接着是Dunnett后期检验来分析。在第28天，与正常组相比###P<0.001，以及与MCT对照组相比*P<0.05，***P<0.001。结果显示于以下表6以及图7a和7b中。
Figure BDA0001636157330000202
表7：当前组合物对MCT诱导的大鼠收缩指数和τ的变化的影响
可以观察到，与正常组相比，MCT对照组在收缩指数上存在显著降低(P<0.001)并且在τ上存在显著增加(P<0.001)。与MCT对照组相比，当前组合物的给药(20mg/kg和40mg/kg)显著且剂量依赖性地使收缩指数正常化(P<0.05和P<0.001)，而与MCT对照组相比，第28天，当前组合物(20mg/kg和40mg/kg)的治疗在τ上产生了显著且剂量依赖性的恢复(P<0.05和P<0.001)。
结论：当前组合物有效地使收缩和舒张末期压正常化，并且有助于恢复收缩指数和τ，显示其在肺动脉高压中的极其显著的活性。
实施例3.3：当前组合物在博来霉素诱导的肺纤维化中的评价
将实施例1(b)中获得的当前组合物用于以下实验中。
采用以下参数进行当前组合物在博来霉素诱导的肺纤维化[PF]中的评价：
a、肺功能测量
i、吸气时间
ii、呼气时间
iii、增强的呼吸间歇(Penh)
b、外周血氧含量
方案：
在氯胺酮麻醉下，通过博来霉素(BLM)的气管内给药(6IU/kg)在雄性SpragueDawley系大鼠(180至220gm)中诱导PF。用媒介物(10mg/kg蒸馏水，口服(p.o.))或当前组合物(10mg/kg，20mg/kg和40mg/kg，口服(p.o.))治疗用博来霉素(MCT)给药的动物28天。假手术组包括在氯胺酮麻醉下接受媒介物的气管内施用(10mg/kg蒸馏水，口服)的动物。在各个不同的日子评价必要的参数。发现通过当前组合物(20mg/kg和40mg/kg，口服(p.o.))治疗，肺功能测试和血液学的变化水平得到显著(P<0.01和P<0.001)恢复。
动物模型：
肺纤维化的博来霉素-啮齿动物模型是人肺纤维化的建立和广泛使用的替代模型。博来霉素诱导的肺损伤被广泛接受的机制之一是其产生ROS的能力。已知博来霉素结合至DNA/Fe2+并形成复合物。该DNA/Fe2+/博来霉素复合物经历氧化还原循环并产生ROS，如超氧化物和羟基自由基，结果引发纤维化。
当前组合物对博来霉素诱导的大鼠吸气时间(Ti)的变化的影响：
数据通过双因素方差分析，接着是Bonferroni后期检验来分析。在各自天数下，与正常组相比##P<0.01，###P<0.001，与假手术组相比$$P<0.01，$$$P<0.001，以及与BLM对照组相比*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。结果显示于以下表8和图8中。
Figure BDA0001636157330000221
表8：当前组合物对博来霉素诱导的大鼠吸气时间(Ti)的变化的影响
可以观察到，第0天，与正常和假手术组相比，BLM对照组中的吸气时间不存在显著差异。自第7天起，与正常和假手术组相比，BLM的气管内灌注显著增加了(P<0.001)BLM对照大鼠的吸气时间。第28天，与BLM对照大鼠相比，第28天，采用当前组合物的治疗(10mg/kg、20mg/kg和40mg/kg)显著降低了(P<0.01)吸气时间。
当前组合物对博来霉素诱导的大鼠呼气时间(Te)的变化的影响：
数据通过双因素方差分析，接着是Bonferroni后期检验来分析。在各自天数下，与正常组相比###P<0.001，与假手术组相比$$$P<0.001，以及与BLM对照组相比*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。结果显示于以下表9和图9中。
Figure BDA0001636157330000231
表9：当前组合物对博来霉素诱导的大鼠呼气时间(Te)的变化的影响
可以观察到，第0天，BLM对照组以及正常和假手术组中的呼气时间没有显著差异。然而，与正常和假手术组相比，气管内BLM灌注7天后的BLM对照大鼠中的呼气时间存在显著降低(P<0.001)。与BLM对照大鼠相比，采用当前组合物的第28天的治疗(10、20和40mg/kg)显著增加了(P<0.05，P<0.01和P<0.001)该呼气时间。
当前组合物对博来霉素诱导的大鼠增强的呼吸间歇(Penh)的变化的影响：
数据通过双因素方差分析，接着是Bonferroni后期检验来分析。在各自天数下，与正常组相比###P<0.001，与假手术组相比$$$P<0.001，以及与BLM对照组相比***P<0.001。结果显示于以下表10和图10中。
Figure BDA0001636157330000241
表10：当前组合物对博来霉素诱导的大鼠增强的呼吸间歇(Penh)的变化的影响
可以观察到，第0、7和14天，BLM对照组以及正常和假手术组的增强的呼吸间歇不存在显著差异。与正常和假手术组相比，气管内BLM灌注21天后的BLM对照大鼠中的增强的呼吸间歇显著增加(P<0.001)。与BLM对照组相比时，28天后，当前组合物(10mg/kg、20mg/kg和40mg/kg)中使该增强的呼吸间歇显著正常化(P<0.001)。
当前组合物对博来霉素诱导的大鼠外周血氧含量(脉搏Ox)的变化的影响：
数据通过双因素方差分析，接着是Bonferroni后期检验来分析。在各自天数下，与正常组相比#P<0.05，###P<0.001，与假手术组相比$P<0.05，$$$P<0.001，以及与BLM对照组相比*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。结果列于以下表11和图11中。
Figure BDA0001636157330000242
表11：当前组合物对博来霉素诱导的大鼠外周血氧含量(脉搏Ox)的变化的影响
可以观察到，分别在第14和28天，与正常和假手术组相比，BLM对照组中外周血氧含量显著降低(P<0.05和P<0.001)。与BLM对照大鼠相比，第14天，采用当前组合物的治疗(10mg/kg、20mg/kg和40mg/kg)在外周血氧含量上不会产生任何的显著性增加。然而，第28天，与BLM对照大鼠相比，当前组合物的第28天的给药(10mg/kg、20mg/kg和40mg/kg)在外周血氧含量上显著且剂量依赖性地抑制(P<0.05，P<0.01和P<0.01)并恢复了BLM诱导的降低。
结论：通过当前组合物的如吸气时间、呼气时间以及血氧含量和增强的呼吸间歇的正常化的肺功能测试的恢复证实了其在治疗肺纤维化中的效果。
实施例3.4：当前组合物在博来霉素诱导的鼻窦炎中的评价
将实施例1(b)中获得的当前组合物用于以下实验中。
采用以下参数进行当前组合物在博来霉素诱导的肺纤维化中的评价：
a、肺中基因的RT-PCR分析
i、Muc5ac
ii、NF-kB
当前组合物对博来霉素诱导的大鼠肺中Muc5ac m-RNA表达的变化的影响：
Muc5ac被认为是从表面上皮的杯状细胞中分泌的主要黏蛋白。粘液过量生成代表了呼吸系统疾病中一部分的粘膜纤毛功能障碍，并且在这些疾病中Muc5ac主要由气道上皮细胞来表达。已表明响应博来霉素而产生的氧化应激增加了支气管上皮细胞中的Muc5ac产生(可能涉及表皮生长因子受体的活化的过程)。在这里，在本研究中，博来霉素增加了肺的Muc5ac mRNA并且增加了气道上皮层的黏液形成细胞。发现当前组合物剂量依赖性地减少了博来霉素诱导的肺Muc5ac的形成和上皮黏液形成细胞。
数据通过单因素方差分析，接着是Dunnett后期检验来分析。在第28天，与正常组相比###P<0.001，与假手术组相比$$$P<0.001，以及与BLM对照组相比*P<0.05，***P<0.001。结果显示于以下表12和图12中。
Figure BDA0001636157330000261
表12：当前组合物对博来霉素诱导的大鼠肺中Muc5ac m-RNA表达的变化的影响
可以观察到，第28天，与正常和假手术组相比，BLM对照大鼠中的Muc5ac m-RNA表达显著上调(P<0.001)。与MCT对照大鼠相比，采用当前组合物的第28天的治疗(10mg/kg、20mg/kg和40mg/kg)显著且剂量依赖性地下调了(P<0.05，P<0.001和P<0.001)肺中Muc5acm-RNA。
当前组合物对博来霉素诱导的大鼠肺中NF-kB m-RNA表达的变化的影响：
博莱霉素产生的ROS的另一目标是NF-kB的激活，NF-kB为调节许多细胞因子基因的转录因子，包括本研究中检测的那些、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8。TNF-α和IL-1β还可以反过来激活NF-kB。博来霉素激活了肺中NF-κB的活性，表明肺上皮细胞分泌NF-κB p65(Chitra等，2013)。在本研究中，发现当前组合物的治疗通过其抑制氧化剂诱导的NF-κB活化的抗氧化能力发挥其效果，从而在肺纤维化的博来霉素模型中发挥抗纤维化效果。
数据通过单因素方差分析，接着是Dunnett后期检验来分析。在第28天，与正常组相比##P<0.01，###P<0.001，与假手术组相比$$P<0.01，$$$P<0.001，以及与BLM对照组相比*P<0.05，***P<0.001。结果显示于以下表13和图13中。
Figure BDA0001636157330000262
表13：当前组合物对博来霉素诱导的大鼠肺中NF-kB m-RNA表达的变化的影响
可以观察到，第28天，与正常和假手术组相比，BLM对照组的肺NF-kB m-RNA表达存在显著上调(P<0.001和P<0.01)。然而，与MCT对照大鼠相比，采用当前组合物的治疗(10mg/kg、20mg/kg和40mg/kg)显著且下调了(P<0.05，P<0.001和P<0.001)BLM诱导上调的肺NF-kBmRNA表达。
结论：黏液形成基因(Muc5ac，NF-kB)在上呼吸道的气道通路中激活了鼻窦炎。这些基因的剂量依赖性下调表明当前组合物在治疗鼻窦炎中的效果。
因此，本公开的实施例显示了当前组合物在治疗如缺氧、肺动脉高压、肺纤维化和鼻窦炎的疾病状况中的效果。
基于本文中提供的描述，本公开的其它实施例和特征对于本领域普通技术人员是显而易见的。本文中的实施例在说明书中提供了各种特征以及有利的细节。公知/常规方法和技术的描述被省略，以免不必要地掩盖本文中的实施方式。特定实施例的前述描述充分揭示了本文中实施方式的一般性质，通过应用当前的知识，其他人可以在不偏离一般概念的情况下容易地修改和/或改进各种应用，如特定的实施方式，并且因此，这样的改进和修改应当并且旨在被理解为在所公开的实施方式的等同物的含义和范围内。应被理解的是，本文中使用的措辞或术语是为了描述而非限制的目的。因此，尽管根据优选的实施方式描述了本公开中的实施方式，但是本领域技术人员将会认识到，可以在本文中描述的实施方式的精神和范围内包含修改地实施本文中的实施方式。在整个说明书中，各处使用的词语“包括”或如“包括”或“包含”的变化将被理解为暗示包含所陈述的要素、整数或步骤，或者要素、整数或步骤的组合，但是不排除任何其它要素、整数或步骤，或者要素、整数或步骤的组合。关于本文中基本上任何复数和/或单数术语的使用，本领域技术人员可以根据上下文和/或应用适当地将复数转化为单数和/或将单数转化为复数。为了清楚起见，本文中可以明确地阐述各种单数/复数的置换。表述“至少”或“至少一个”的使用表示一种或多种要素或成分或数量的使用，因为该使用可以在本公开的实施方式中以实现一个或多个期望的目标或结果。已经包括在本说明书中的对文献、行为、材料、设备、制品等的任何讨论仅仅是为了提供本公开的背景的目的。其不能因为其在本申请的优先权日之前的任意地方存在而被视为承认任何或所有这些事物构成现有技术基础的一部分，或者成为本公开相关的领域中的公知常识。虽然本文中已经将相当多的重点放在了本公开的特定特征上，但将会被理解的是，在不偏离本公开的原理的情况下在优选实施方式中可以作出各种修改，并且可以作出许多改变。根据本文的公开内容，本公开或优选实施方式的类型中的这些和其它修改对于本领域技术人员而言将是显而易见的，借此将会被清楚地理解的是，前述描述性内容仅被解读为对本公开的说明而不是作为限制。

Claims (20)

1.一种组合物，其包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起，其中，所述胡卢巴皂甙以0.1% w/w至8%w/w的浓度范围存在；所述牡荆素以0.5% w/w至5% w/w的浓度范围存在；所述异牡荆素以0.5% w/w至7% w/w的浓度范围存在；所述牡荆素-2-o-鼠李糖苷以0.5% w/w至7% w/w的浓度范围存在；所述文赛宁-1以0.5% w/w至4% w/w的浓度范围存在；以及所述纤维以69% w/w至92% w/w的浓度范围存在。
2.一种用于获得包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起的组合物的方法，所述方法包括以下行为：
a）在25℃至30℃的温度范围，3.8小时至4.2小时的时间段下，用第一溶剂提取所述组合物的片状源材料以获得第一提取的片状源材料，其中，所述源材料来自胡卢巴，以及其中，所述第一溶剂为选自正己烷、正戊烷和正庚烷的群组的脂肪族化合物；
b）在26℃至30℃的温度范围下用乙酸乙酯处理所述第一提取的片状源材料以获得第二提取的片状源材料；
c）在22℃至27℃的温度范围，7小时至9小时的时间段范围下，用正丁醇再提取所述第二提取的片状源材料以获得澄清提取物；
d）浓缩所述澄清提取物以获得固体物质；
e）将所述固体物质溶于水中以获得澄清溶液；
f）再生和用溶剂洗涤吸附剂以获得再生和洗涤过的吸附剂；
g）使所述澄清溶液通过所述再生和洗涤过的吸附剂，用溶剂再洗涤该吸附剂并用选自乙醇和异丙醇的群组的醇溶剂洗脱以获得洗脱液；以及
h）浓缩所述洗脱液并任选地添加药学上可接受的赋形剂以获得所述组合物。
3.权利要求2所述的方法，其中，所述用第一溶剂提取是在25℃至27℃的温度范围，4小时的时间段下进行的；以及其中，所述第一溶剂为正己烷。
4.权利要求2所述的方法，其中，所述用乙酸乙酯处理是在27℃至29℃的温度范围下进行的。
5.权利要求2所述的方法，其中，所述用正丁醇提取是在22℃至25℃的温度范围，8小时下以逆流方式进行的。
6.权利要求2所述的方法，其中，所述浓缩通过真空浓缩进行。
7.权利要求2所述的方法，其中，所利用的水为去离子水。
8.权利要求2所述的方法，其中，所述吸附剂为树脂床；其中，用于洗涤所述吸附剂的溶剂选自异丙醇、乙醇和去离子水，或它们的任意组合的群组；其中，用于再洗涤所述吸附剂的溶剂选自氯化钠盐水和水，或它们的组合的群组；以及其中，所述醇溶剂为异丙醇。
9.权利要求8所述的方法，其中，所述树脂为Amberlite XAD-16。
10.一种包含胡卢巴皂甙、牡荆素、异牡荆素、牡荆素-2-o-鼠李糖苷、文赛宁-1和纤维，任选地连同药学上可接受的赋形剂一起的组合物在制备应对选自由缺氧、肺动脉高压、肺纤维化和鼻窦炎，或它们的任意组合所组成的群组中的疾病的药物中的用途，所述组合物给药至有此需要的受治者，其中，所述胡卢巴皂甙以0.1% w/w至8% w/w的浓度范围存在；所述牡荆素以0.5% w/w至5% w/w的浓度范围存在；所述异牡荆素以0.5% w/w至7% w/w的浓度范围存在；所述牡荆素-2-o-鼠李糖苷以0.5% w/w至7% w/w的浓度范围存在；所述文赛宁-1以0.5% w/w至4% w/w的浓度范围存在；以及所述纤维以69% w/w至92% w/w的浓度范围存在。
11.权利要求1所述的组合物，权利要求2所述的方法，或权利要求10所述的用途，其中，所述胡卢巴皂甙、所述牡荆素、所述异牡荆素、所述牡荆素-2-o-鼠李糖苷和所述文赛宁-1共以8% w/w至31% w/w的浓度范围存在；并且所述纤维以69% w/w至92% w/w的浓度范围存在。
12.权利要求2所述的方法，其中，所述胡卢巴皂甙以0.1% w/w至8% w/w的浓度范围存在；所述牡荆素以0.5% w/w至5% w/w的浓度范围存在；所述异牡荆素以0.5% w/w至7% w/w的浓度范围存在；所述牡荆素-2-o-鼠李糖苷以0.5% w/w至7% w/w的浓度范围存在；所述文赛宁-1以0.5% w/w至4% w/w的浓度范围存在；以及所述纤维以69% w/w至92% w/w的浓度范围存在。
13.权利要求1所述的组合物，权利要求2所述的方法，或权利要求10所述的用途，其中，所述药学上可接受的赋形剂选自树胶、成粒剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、甜味剂、溶剂、助流剂、防粘剂、抗静电剂、抗氧化剂、表面活性剂、增粘剂、植物纤维素材料、着色剂、调味剂、包衣剂、增塑剂、防腐剂、悬浮剂、乳化剂和滚圆剂或者它们的任意组合的群组。
14.权利要求10所述的用途，其中，所述组合物被配制为选自固体口服制剂、液体口服制剂、吸入制剂和鼻用制剂或者它们的任意组合的群组的剂型。
15.权利要求10所述的用途，其中，所述组合物被配制为肠胃外制剂的剂型。
16.权利要求14或15所述的用途，其中，所述固体口服制剂选自片剂、胶囊、圆形锭剂、菱形锭剂、可分散粉剂、可分散颗粒或它们的任意组合的群组；所述液体口服制剂选自水性或油性悬浮液、乳剂、滴剂、糖浆剂、酏剂或它们的任意组合的群组；所述肠胃外制剂选自静脉内注射、肌内注射、皮下注射的群组或它们的任意组合；所述吸入制剂选自吸入剂、雾化剂或它们的任意组合的群组；以及所述鼻用制剂选自滴鼻剂、鼻用喷雾剂或它们的任意组合的群组。
17.权利要求10所述的用途，其中，所述组合物以1 mg/kg所述受治者体重至100 mg/kg所述受治者体重的范围的剂量给药。
18.权利要求10所述的用途，其中，所述组合物以1 μg/kg所述受治者体重至100 μg/kg所述受治者体重的范围的剂量作为雾化剂或吸入剂给药。
19.权利要求10所述的用途，其中，所述受治者为哺乳动物。
20.权利要求10所述的用途，其中，所述受治者为人类。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018142284A1 (en) * 2017-02-02 2018-08-09 Instituto De Investigaciones Cientificas Y Servicios De Alta Tecnologia (Indicasat Aip) Flavonoid compositions and related methods
US11786571B2 (en) * 2019-02-09 2023-10-17 Biogen Extracts Private Ltd. Organoleptic dietary product from fenugreek seed, and method for production thereof
CN115192597A (zh) * 2022-08-08 2022-10-18 青海大学 用于防治肺动脉高压的药物组合物、其制备方法及应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1440778A (zh) * 2003-04-09 2003-09-10 江西汇仁药业有限公司 一种补肾中药
CN1611487A (zh) * 2003-10-27 2005-05-04 成都华高天然产物有限责任公司 一种从葫芦巴中提取4－羟基异亮氨酸制品的新方法
WO2008107909A1 (en) * 2007-03-05 2008-09-12 Indus Biotech Private Limited Pharmaceutical compositions comprising trigonelline and 4-hydroxyisoleucine and a process thereof
CN102015746A (zh) * 2008-05-08 2011-04-13 梧桐生物技术私人有限公司 包含半乳甘露聚糖的组合物及其制备方法
CN103517709A (zh) * 2011-05-02 2014-01-15 梧桐生物技术私人有限公司 治疗自身免疫失调的组合物及其方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050233014A1 (en) 2004-03-02 2005-10-20 Lee Steve S Methods for affecting homeostasis and metabolism in a mammalian body
US7645466B2 (en) 2004-03-02 2010-01-12 Tsi Group Limited Methods for deriving, isolating, and/or extracting amino acid compositions from Fenugreek seed
BRPI0801239A2 (pt) 2008-04-01 2009-11-17 Ache Lab Farmaceuticos Sa uso de um ou mais benzopiranonas, composição farmacêutica e método de prevenção ou tratamento de doenças, disfunções e distúrbios associados a monoamino oxidase
CN102920727B (zh) 2012-11-09 2014-10-22 苏州衷中医药科技有限公司 制备富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷提取物的方法
CN103304605B (zh) 2013-04-27 2015-04-08 中国科学院西北高原生物研究所 从胡芦巴中分离制备黄酮苷和二苯乙烯苷类化合物的方法
CN103923074B (zh) 2014-04-18 2016-06-15 成都合盛生物技术有限公司 一种从葫芦巴中提取牡荆素、葫芦巴碱的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1440778A (zh) * 2003-04-09 2003-09-10 江西汇仁药业有限公司 一种补肾中药
CN1611487A (zh) * 2003-10-27 2005-05-04 成都华高天然产物有限责任公司 一种从葫芦巴中提取4－羟基异亮氨酸制品的新方法
WO2008107909A1 (en) * 2007-03-05 2008-09-12 Indus Biotech Private Limited Pharmaceutical compositions comprising trigonelline and 4-hydroxyisoleucine and a process thereof
CN102015746A (zh) * 2008-05-08 2011-04-13 梧桐生物技术私人有限公司 包含半乳甘露聚糖的组合物及其制备方法
CN103517709A (zh) * 2011-05-02 2014-01-15 梧桐生物技术私人有限公司 治疗自身免疫失调的组合物及其方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Effect of glycosides based standardized fenugreek seed extract in bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats: Decisive role of Bax, Nrf2, NF-κB, Muc5ac, TNF-α and IL-1β;Amit D. Kandhare等;《Chemico-Biological Interactions》;20150617;第237卷;151-165 *

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