CN108693346B - 外源凝集素a1血型检测试剂卡及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种氧化锆(ZrO2)微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡及其制备方法,所述试剂卡具有8个氧化锆微珠微柱管,所述微柱管均为含有抗A1外源凝集素的氧化锆微珠微柱管。本发明方法制备的氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡灵敏度高,特异性好且质量稳定。
Description
技术领域
本发明涉及医学检测领域,更具体的,本发明涉及一种氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡及其制备方法。
背景技术
邓格恩及L.希尔斯费尔德于1911年发现A血型的亚型。他们看到不同A型人的红细胞与抗A血清发生凝集反应的强度不一,在反应弱的A型人血清中还有一种抗体能与反应强的A型红细胞发生凝集反应。据此认为在A型中存在亚型;即A1及A2亚型。A1型红细胞与抗A血清反应强,而A2型红细胞与抗A血清反应弱。
A型有两种主要的亚血型,成为A1和A2(构成全部A型血液的99.99%)。在直接凝集反应中,两种红细胞与抗A试剂均发生强的凝集反应。A1和A2间的血清区别,依赖与抗A1试剂作试验获得的结果为基础。这种抗A1试剂可由B型人的血清或由双花扁豆种子(Dolichosbiflous seeds)提出的稀释植物血凝素(lectin)制成。在标准试验情况下,抗A1试剂凝集A1红细胞,但不凝集A2红细胞。大约80%A型或AB型红细胞为抗A1所凝集称为A1或A1B,其余20%红细胞为抗A2凝集,但不为抗A1凝集,故称为A2或A2B型。
(1)若A1基因与A2基因共同遗传时,个体的表现为A1,A2基因被存在的A1基因锁隐蔽。当A2基因与B或O基因共同配对时,则个体的表型将为A2B或A2型。
1990年Lapierre等人发明了观察红细胞凝集的凝胶技术(gel technique),该技术很快商品化并迅速推广应用到临床输血,并产生了“凝胶试验”(gel test)的专用名词。
在国内外,还没有单位研究和生产将凝集素用于A1血型定型的试剂卡,因此,本领域需要开发A1血型检测试剂卡。
发明内容
本发明的目的在国内外首次提出应用氧化锆微珠作为介质(见图1),用于氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡,提供一种灵敏度高、特异性好、质量稳定的氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡及其制备方法。
本发明的第一方面,提供一种氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡,所述检测试剂卡包括:
微柱管,管内装有含有抗A1外源凝集素的氧化锆微珠。
上述微柱管为4-12管。
上述微柱管为8管。
上述氧化锆微珠颗粒直径为63-125微米。
上述外源凝集素效价≥16。
上述氧化锆微珠与外源凝集素的体积比为2:1。
上述微柱管开口处设铝箔封片。
本发明第二发明,提供上述氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡的制备方法,所述方法包括步骤:
(a)筛选出颗粒直径为63-125微米的氧化锆微珠,用微珠悬浮介质洗涤3-5次,除去微珠破损碎片以及聚集的微珠颗粒,收集得到颗粒大小均匀的、且完整呈球形的微珠;
(b)将步骤(a)制备的微珠与抗A1外源凝集素分别按照体积比2:1的比例混合,配制成含有抗A1外源凝集素的微珠;
(c)按照每管22-28微升的量,将步骤(b)配制的微珠分别分装到检测卡的微柱管中。
上述方法还包括以下步骤:
(d)用铝箔纸通过压膜方式将微柱管上口密封。
上述微珠悬浮介质的组份为:
pH值为6.6-6.8。
本发明所述微珠悬浮介质中“水”为蒸馏水、纯化水或去离子水,优选蒸馏水。
本发明的有益效果是:
本发明的第一个方面,提出了一种标准化的氧化锆微珠悬浮介质体系,用于氧化锆微珠的洗涤和悬浮,并可以长时间维持抗体以及氧化锆微珠的稳定.其特点在于:
1、设计了具有很强缓冲能力的缓冲体系,采用磷酸钾盐、钠盐以及氨基酸组成的缓冲体系,使体系的pH值维持在6.6-6.8与输血领域通常采用的单一的枸橼酸缓冲体系相比,具有缓冲能力更强的特点,有利于保持整个体系处于要求的缓冲范围,同时保证了整个氧化锆微珠悬浮介质的离子强度。
2、具有更加有效的低盐浓度体系,从其组成可以看出,本发明的氧化锆微珠悬浮介质采用氨基酸和氯化钠作为添加剂,辅助以微量的磷酸盐来维持低离子强度环境,保持氧化锆微珠颗粒呈圆球颗粒,并维持氧化锆微珠颗粒的直径大小在所要求的范围内(63-125微米)。
3、本发明具有独特的润滑体系,采用一定浓度的牛血清白蛋白,使得红细胞通过氧化锆微珠间隙时获得合适的润滑能力,使无凝集的红细胞具有完全通过氧化锆微珠颗粒间隙的能力,而凝集的红细胞则不能通过。
4、本发明具有优越的防腐体系,选择苯甲酸钠作为防腐剂,采用聚乙烯吡咯烷酮协同作用,因而其在穿透细胞膜的能力不同,并且其抑菌的作用位点就不同,所以针对不同种类微生物的抑制能力就不同,具有更好的防腐能力,有效防止细菌的繁衍,获得较长时间的保存期,同时不仅避免使用叠氮钠化学防腐剂对氧化锆微珠悬浮介质体系的离子强度提升,从而对氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡的灵敏度和特异性产生的不良影响,也避免使用抗生素类在保存过程中所代谢产生的中间体对氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡的特异性产生不良影响。
本发明的另一方面,为了保证本发明氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡的质量,在制备过程中还需要对氧化锆微珠进行筛选,即,首先要选择适当的氧化锆微珠,一般应该满足的条件是:选择颗粒直径为63-125微米的氧化锆微珠。对筛选获得的氧化锆微珠原料需要进行洗涤、悬浮,目的是让氧化锆微珠颗粒洗涤去除破损的氧化锆微珠颗粒、聚集的氧化锆微珠颗粒、内径在63-125微米以外的超大或超小氧化锆微珠颗粒以及氧化锆微珠以外的其它杂质成分。洗涤完成后用氧化锆微珠悬浮介质来悬浮氧化锆微珠。
本发明的再一方面,为了保证本发明氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡的质量,在制备过程中还需要对与氧化锆微珠混合的外源凝集素原料进行筛选。
综上所述,本发明的氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡之所以可以具有优良的特异性、灵敏度以及长达1年的保存期,是在于整个体系各种成分的协同作用。含有4-12个抗A1外源凝集素的氧化锆微珠微柱管排列于一张卡上可以保证仅使用一张氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡就能完成最多12个样本的A1血型检测。缓冲体系可以维持分型卡反应体系需要的pH。低盐浓度体系可以保证氧化锆微珠颗粒直径在所需要的范围内。润滑体系可以保证氧化锆微珠颗粒之间适当的润滑能力。苯甲酸钠防腐剂可以防止氧化锆微珠或抗体因为细菌繁殖而失效。标准化的氧化锆微珠可以保证氧化锆微珠颗粒之间的合适的间隙。标准化的外源凝集素可以保障抗原的有效检出。
用此氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡进行A1血型定型,产生的阳性反应均不低于1+。一般在18-25℃条件下保存有效期不低于12个月。
总之,本发明的实施提供了标准化的氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡产品,各采供血机构可以得到标准一致的氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡,为准确进行A1血型定型、保证安全输血创造条件。
附图说明
图1为氧化锆微珠显微镜图;
图2为本发明氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡的结构示意图。
1-8.氧化锆微珠微柱管;9.检测试剂卡;11.氧化锆微珠;12.抗A1外源凝集素;13.微柱管;14.空白卡片。
具体实施方式
以下通过具体实施例详细说明本发明的实施和所具有的有益效果,旨在帮助阅读者更好的理解本发明的精神和实质,并不能对本发明的实施范围构成任何限定。本发明试剂和仪器均为市售的。
实施例1氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡的制备
步骤一、氧化锆微珠悬浮介质的配制
所述微珠悬浮介质的组份为:
以上试剂用蒸馏水溶解,调pH值为6.6-6.8。
步骤二、氧化锆微珠的制备
选用氧化锆微珠,颗粒直径为63-125微米。用氧化锆微珠悬浮介质洗涤3-5次,除去氧化锆微珠破损碎片以及聚集的氧化锆微珠颗粒,收集得到颗粒大小均匀的、且完整呈球形的适用的氧化锆微珠。
步骤三、外源凝集素的选择
选择抗A1外源凝集素,效价≥16。
步骤四、氧化锆微珠的配制
将步骤二制备的氧化锆微珠与步骤三选择的外源凝集素按照体积比2:1的比例混合,配制成含有抗A1外源凝集素的氧化锆微珠。
步骤五、分装
按照每管22-28微升的量加入到空白卡片中,将步骤四配制的氧化锆微珠加入到一块空白卡片的八个微柱管中,形成具有8个氧化锆微珠微柱管的氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡。
步骤六、半成品测定
要求含有外源凝集素的氧化锆微珠微柱管中,具有与外源凝集素相应抗原的红细胞产生≥1+的阳性反应,即红细胞集中在氧化锆微珠上层表面。而与不含有外源凝集素对应抗原的红细胞产生阴性反应,即红细胞可以全部通过氧化锆微珠到达微管底部,沉积在微管底部。
步骤七、封口
用铝箔纸通过压膜方式将微柱管上口密封。贴标签标记后于18-25℃保存。
实施例2氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡的保存试验
上述氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡保存了1年以上,在此保存期间,该氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡具有以下检测结果:
(1)外观
氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡中的含有抗A1外源凝集素的氧化锆微珠呈均匀白色,氧化锆微珠上端有2~3毫米清澈透明的液体,氧化锆微珠颗粒之间不应有气泡和异物。
(2)灵敏度
含有外源凝集素的氧化锆微珠微柱管中,具有与外源凝集素相应抗原的红细胞产生≥1+的阳性反应,即红细胞集中在氧化锆微珠上层表面。
(3)特异性
含有外源凝集素的氧化锆微珠微柱管中,具有与外源凝集素相应抗原的红细胞产生阳性反应,即红细胞集中在氧化锆微珠上层表面。与不含有外源凝集素对应抗原的红细胞产生阴性反应,即红细胞可以全部通过氧化锆微珠到达微管底部,沉积在微管底部。
通常葡聚糖凝胶价格是氧化锆的30余倍。另外,氧化锆是白色无臭无味晶体,不溶于水、盐酸和稀硫酸。化学性质不活泼,且高熔点、高电阻率、高析射率和低热膨胀系数的性质,是重要的耐高温材料,陶瓷绝缘材料。
氧化锆微珠的特点是化学物理稳定性高,非特异性吸附低,细菌等微生物不会生长,填料反压特低。
以上为对本发明实施例的描述,通过对所公开的实施例的上述说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其他实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例。
Claims (11)
2.如权利要求1所述外源凝集素A1血型检测试剂卡,其特征在于,所述微柱管为4-12管。
3.如权利要求1所述外源凝集素A1血型检测试剂卡,其特征在于,所述微柱管为8管。
4.如权利要求1-3任一权利要求所述外源凝集素A1血型检测试剂卡,其特征在于,所述外源凝集素效价≥16。
5.如权利要求1-3任一权利要求所述外源凝集素A1血型检测试剂卡,其特征在于,所述氧化锆微珠与外源凝集素的体积比为2:1。
6.如权利要求4所述外源凝集素A1血型检测试剂卡,其特征在于,所述氧化锆微珠与外源凝集素的体积比为2:1。
7.如权利要求5所述外源凝集素A1血型检测试剂卡,其特征在于,所述微柱管开口处设铝箔封片。
8.如权利要求6所述外源凝集素A1血型检测试剂卡,其特征在于,所述微柱管开口处设铝箔封片。
9.如权利要求5所述外源凝集素A1血型检测试剂卡的制备方法,其特征在于,所述方法包括步骤:
(a)筛选出颗粒直径为63-125微米的氧化锆微珠,用微珠悬浮介质洗涤3-5次,除去微珠破损碎片以及聚集的微珠颗粒,收集得到颗粒大小均匀的、且完整呈球形的微珠;
(b)将步骤(a)制备的微珠与抗A1外源凝集素分别按照体积比2:1的比例混合,配制成含有抗A1外源凝集素的微珠;
(c)按照每管22-28微升的量,将步骤(b)配制的微珠分别分装到检测卡的微柱管中。
10.如权利要求6所述外源凝集素A1血型检测试剂卡的制备方法,其特征在于,所述方法包括步骤:
(a)筛选出颗粒直径为63-125微米的氧化锆微珠,用微珠悬浮介质洗涤3-5次,除去微珠破损碎片以及聚集的微珠颗粒,收集得到颗粒大小均匀的、且完整呈球形的微珠;
(b)将步骤(a)制备的微珠与抗A1外源凝集素分别按照体积比2:1的比例混合,配制成含有抗A1外源凝集素的微珠;
(c)按照每管22-28微升的量,将步骤(b)配制的微珠分别分装到检测卡的微柱管中。
11.如权利要求9或10所述氧化锆微珠外源凝集素A1血型检测试剂卡的制备方法,其特征在于,所述方法还包括以下步骤:
(d)用铝箔纸通过压膜方式将微柱管上口密封。
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CN108693346A (zh) | 2018-10-23 |
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