CN217359918U - 一种采用微板法液相爆珠技术进行血型检测的装置 - Google Patents
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Abstract
本实用新型涉及一种采用微板法液相爆珠技术进行血型检测的装置,包括检测板、设置在检测板上的半球型反应槽、放置在半球型反应槽内的试剂爆珠以及覆盖在半球型反应槽上的贴膜,贴膜将试剂爆珠密封在半球型反应槽内;本实用新型的每组6个带有试剂爆珠的半球形反应槽可用作一次检测,抗‑A、抗‑B、抗‑D作为正定型试剂,标记的A型红细胞膜抗原、标记的B型红细胞膜抗原、标记的O型红细胞膜抗原作为反定型试剂,使用时隔着贴膜将各个槽内的试剂爆珠压破,撕下热合的贴膜,分别在相应的各孔内滴加被检者红细胞和血浆,混匀,观察凝集结果,即可实现对血型的检测。
Description
技术领域
本实用新型涉及一种采用微板法液相爆珠技术进行血型检测的装置。
背景技术
血型鉴定是采供血工作中最重要的基础环节,现有的常规方法大多不适合紧急状态下应急血液保障的血型鉴定。
目前临床常用的血型鉴定方法有凝集法和微柱凝胶卡式法,前者存在手工法劳动强度大、结果判断受主观影响较大、试剂需低温保存等问题,而后者鉴定时间较长,需要相应的仪器和试剂,且价格较高,两者均不适合突发事件情况下使用。可在野战条件下使用的血型卡应具备体积小、重量轻、操作简单、结果可靠、可肉眼判断结果、无需电源和其他实验室设备以及适合多种气候条件下使用等特点。
在目前临床常规血型检测中,反定型所使用的试剂红细胞大多由各实验室自行配制,无统一标准,制备的方法也有所不同,并且红细胞保存液的成分及理化性质均有差异,导致反定型红细胞试剂的质量不稳定。此外,红细胞的体外保存期短,通常为1~3个月,而且红细胞需要低温保存,高温环境下容易造成细胞溶血、污染而导致血型误定,给后续急救输血带来了很大的弊端,限制了其在实际临床中的应用,特别是在野外、自然灾害等突发事件情况下的血液保障能力的建立。
实用新型内容
本实用新型所要解决的技术问题是提供一种采用微板法液相爆珠技术进行血型检测的装置,具有操作简单快捷、无需借助仪器、携带方便、性能稳定和容易保存的特点。
本实用新型所采用的技术方案是:
一种采用微板法液相爆珠技术进行血型检测的装置,其包括检测板、设置在检测板上的半球形反应槽、设置在半球形反应槽内的试剂爆珠以及覆盖在半球形反应槽上将其封盖住的贴膜。
所述试剂爆珠包括正定型:抗-A试剂爆珠、抗-B试剂爆珠、抗-D试剂爆珠,反定型:标记的A型红细胞膜抗原爆珠、标记的B型红细胞膜抗原爆珠以及标记的O型红细胞膜抗原爆珠,六个半球形反应槽为一组,每组内的每个半球形反应槽各放置一种类型的爆珠。
进一步的,所述贴膜通过热合覆盖在检测板上,并且将整个检测板覆盖。
进一步的,还包括框架以及设置在框架内呈十字形的交叉网格,所述检测板包括若干个通过连接板连接的检测体,半球形反应槽设置在检测体的顶面上。
进一步的,在检测板的两端分别设有搭接板,所述检测板的长度与框架内部尺寸相对应,两侧的搭接板搭接在框架上。
进一步的,所述交叉网格位于框架内部的下侧位置,框架内部的上侧位置为中空,检测体对应设置在网格内。
进一步的,所述连接板位于相邻两个检测体之间且位置靠上。
本实用新型的积极效果为:
本实用新型的每组6个带有试剂爆珠的半球形反应槽可用作一次血型检测,抗-A、抗-B、抗-D作为正定型,标记的A膜抗原、标记的B膜抗原、标记的O膜抗原作为反定型,使用时隔着贴膜将各个槽内的试剂爆珠压破,撕下热合的贴膜,分别在各孔内滴加被检者红细胞(正定型) 和血浆(反定型),混匀,观察凝集结果,即可实现对血型的检测。本实用新型操作简单快捷,克服了固相试剂反应慢的缺点,无需借助仪器,实验不需要动力及设备保障,非专业人员就可实施,2min之内即可判读结果。同时,便于携带,无污染,操作现场能够保持清洁。
附图说明
图1为本实用新型整体示意图;
图2为本实用新型半球形反应槽示意图;
图3为本实用新型框架结构示意图;
图4为本实用新型框架俯视示意图;
图5为本实用新型检测板示意图;
图6为本实用新型检测原理图;
图7为本实用新型检测结果图。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明为实现预定发明目的所采取的技术手段及功效,以下结合附图及较佳实施例,对依据本发明的具体实施方式、结构、特征及其功效,详细说明如后。
实施例1
如附图1、2所示,本实施例提供了一种采用微板法液相爆珠技术进行血型检测的装置,包括检测板1、设置在检测板1上的半球型反应槽2、放置在半球型反应槽2内的试剂爆珠4以及覆盖在半球型反应槽2上的贴膜3,贴膜3将试剂爆珠4密封在半球型反应槽2内。
试剂爆珠4有六种,分别是抗-A试剂爆珠、抗-B试剂爆珠、抗-D试剂爆珠、标记的A膜抗原爆珠、标记的B膜抗原爆珠以及标记的O膜抗原爆珠。
每六个半球型反应槽2为一组,组内每个半球型反应槽2内各放置一种类型的爆珠,抗-A、抗-B、抗-D作为正定型,标记的A膜抗原、标记的B膜抗原、标记的O膜抗原作为反定型使用,操作时先将各孔内爆珠压破,热合撕下贴膜,分别在各孔内滴加被检者红细胞(正定型)和血浆(反定型),混匀,观察凝集结果。
红细胞膜抗原制备:
用抗-A、抗-B血清筛选出A型、B型和O型健康献血者的红细胞各 3份,各取2ml,分别混匀备用。将全血离心后弃上清和白细胞层,用PBS 缓冲液洗涤3次,剩余的红细胞用裂解剂处理10min后7000r/min离心 5min弃上清。加入纯水至原体积,混匀,7000r/min离心5min弃上清,重复用纯水洗涤直到上清无色透明。弃上清,收集A型、B型、O型红细胞膜抗原,于2~8℃储存备用。
胶体金标记红细胞膜抗原制备:
将红细胞膜抗原与胶体金按一定比例混合,在磁力搅拌器上搅拌10 min,混匀后3500r/min离心3min弃上清,最后用ABO血型反定型复溶液(含蛋白稳定组分)复溶,复溶后的试剂即为ABO反定型免疫胶体金试剂,储存于2~8℃。
试剂爆珠的制备:
采用爆珠技术,各取50uL正定型单抗试剂(抗-A、抗-B、抗-D)和 50uLA、B、O血型反定型试剂(胶体金标记的红细胞膜A、B、H抗原) 分别包裹在微球中,制成爆珠。本实用新型的爆珠原理类似于香烟中所使用的爆珠,是一种可以挤破的珠子,挤破时,爆珠里面的液体流出来。
在本实施例中,检测板1为一个整体,在一个检测板1上开设若干个半球形反应槽2,贴膜3通过热合覆盖在检测板1上,并且将整个检测板 1覆盖。
实施例2
如附图3-5所示,本实施例提供另外一种形式结构,在本实施例中,包括框架5以及设置在框架5内的交叉网格6。本实施例中,检测板1包括若各干通过连接板8依次连接的圆底形的检测体7,半球形反应槽2开设在检测体7的顶面上,检测体7为一排,可对应放置在交叉网格6的网格内,贴膜单独覆盖在每个半球形反应槽2上。
优选的,连接板8连接在检测体7的侧面上半部分,对应的,交叉网格6位于框架5内部的下侧位置,框架5内部的上侧位置为中空。
检测板7的整体长度与框架5的内部尺寸相对应,在检测板1的两端分别设有搭接板9,两侧的搭接板9搭接在框架5上,可起到便于拿取检测板的作用。
本实用新型具有如下特点:①试剂保存方便,传统的试剂需要2~8℃保存,本实用新型中将单克隆抗血清及胶体金技术标记的ABO血型反定型红细胞膜抗原试剂分别包裹在爆珠中,实现血型鉴定试剂的常温、长期保存;②便于携带,无污染,操作现场能够保持清洁;③操作简单快捷,克服了固相试剂反应慢的缺点,无需借助仪器,实验不需要动力及设备保障,非专业人员就可实施,2min之内即可判读结果;④稳定性好,贴膜封装后可长期保存,效期长;⑤载体上易于粘贴条形码或ID号,可以避免出错;⑥检测结果易于保存,可反复判读。
血型鉴定的反应原理:ABO血型系统主要是根据人类红细胞表面所含凝集原(即血型抗原,有A、B、H三种)的不同而命名的,Rh血型系统是根据红细胞表面是否含有D抗原而确定为Rh阳性和阴性。ABO血型鉴定,即指ABH血型抗原的检测。红细胞含A抗原的叫A型,含B抗原的叫B型,含A和B抗原的叫AB型;不含A、B抗原,而含H抗原的称O型。A型人血清中只含抗B抗体;B型血清中只含抗A抗体; AB型血清中抗A和抗B抗体都没有;而O型血清中抗A和抗B抗体都有;Rh阳性即表示红细胞表面含有D抗原,阴性即表示红细胞表面不含有D抗原。采用标准的抗A、抗B及抗D血清以鉴定被检者红细胞上的抗原(正定型);同时用标准的A型、B型及O型红细胞鉴定被检者血清中的抗体(反定型)。只有被检者红细胞上的抗原鉴别和血清中的抗体鉴别所得出的结果完全符合时才能确定其血型类别。
本实用新型鉴定血型的反应原理如图6所示。
目前临床上做血型鉴定包括ABO血型和Rh血型鉴定,其中ABO血型鉴定需要同时做正反定型,正定型是指采用单克隆抗A试剂,单克隆抗B试剂,单克隆抗D试剂分别于被检者的红细胞进行反应,反定型是指采用被检者的血清与标准是A型、B型、O型红细胞进行反应,出现凝集反应则判定为阳性,不凝集则判定为阴性。
如果出现弱凝集或正反定型不相符合的情况,需要采用其他辅助试验技术解决。
经临床样本测试,本实用新型技术效果良好。
1血型鉴定方法
取被检血液样本,离心分离血浆和红细胞,做好标记,轻轻捏破凹槽内爆珠,试剂留在孔内,每份样本需要6孔,其中正定型3孔分别加入被检红细胞各1滴(50μl),反定型3孔分别加入血浆各4滴(200μl),轻轻混匀,2分钟内观察凝集情况,以孔中出现肉眼可见的凝集颗粒为阳性反应,无凝集颗粒出现为阴性反应,见图7。凝集反应结果以强凝集(4+)~无凝集(-)、溶血或混合凝集视野(mf)表示,血型鉴定的结果判定标准见表1。
表1血型鉴定结果判定
2血型鉴定试剂爆珠的评估
2.1试剂爆珠的可操作性包括爆珠壁材的密封性、耐腐蚀性、膜均匀性以及是否易于捏破等情况进行测试,评价试剂爆珠的可操作性和野外环境下的实用性。
2.2特异性和亲和力测定采用改良微板法爆珠技术,以ABO标准试剂红细胞和免疫胶体金试剂作为血型抗原,检测经倍比稀释的抗-A、抗-B、抗 -D标准血清和经倍比稀释的已知献血者的血浆,比较其凝集强度,记录阳性反应出现的时间并判断血型。记录肉眼可见凝集出现的时间、反应10min时的凝集情况并判断血型。
2.3稳定性试验将新制备的血型鉴定爆珠放试剂置于37℃温箱内保存1周(相当于在2~8℃保存1年),每天抽取一部分进行特异性和亲和力测定,评价试剂的稳定性。
2.4灵敏度测定以标准试剂红细胞和免疫胶体金试剂作为血型抗原,分别检测经倍比稀释的抗-A、抗-B、抗-D标准血清,对2种试剂的凝集强度进行比较,评价爆珠试剂的灵敏度。
2.5准确率评价随机收集285份临床常规标本,采用临床常规试管法与改良微板法进行血型平行对比鉴定试验,比较二者结果的一致性,计算爆珠技术检测血型的准确率。
3结果
3.1改良微板法检测的性能评价爆珠壁材为热可塑性聚氨酯材料,经过加热塑封后密封性良好,外膜均匀,易于捏破且无试剂外溅的情况,在10%的醋酸溶液中无腐蚀、变形和漏液情况,操作方便,简单实用。
3.2爆珠试剂的特异性和亲和力爆珠试剂在37℃放置1周后的各项性能指标与新鲜制备的试剂结果一致,符合血型鉴定试剂的质量标准要求,可以常规应用,见表2.
表2爆珠试剂的特异性和亲和力
注:NF表示无反应
3.3爆珠试剂的灵敏度方面爆珠试剂与临床常规应用的血型鉴定试剂进行灵敏度比较,二者正定型均为单抗试剂,分别与倍比稀释的标准红细胞反应,反定型爆珠试剂为免疫胶体金标记的红细胞膜抗原,常规检测应用的是标准红细胞悬液,分别与倍比稀释的抗-A、抗-B试剂血清反应,结果显示两种试剂的检测灵敏度方面无差异,凝集结果见表3。
表3爆珠试剂与临床常规应用的试剂检测灵敏度比较
注:*爆珠试剂与常规单抗试剂的凝集反应结果一致
3.4爆珠试剂的检测准确率方面以经典试管法鉴定结果为参照,采用两种试剂对285例临床标本同时进行血型正反定型鉴定,爆珠试剂检测结果有2例出现正反定型不符的情况,经过与试管法和微柱凝胶卡式法进一步检测分析,其中1例应为A2B型,血清中产生了不规则的抗-A1抗体;另一例为O型,反定型出现了血清中抗-B抗体减弱的现象。而试管法同样表现出了异常结果,因此,在爆珠试剂准确性方面与临床全血标本试管法的鉴定结果符合率基本为100%。
总结:对微板法爆珠试剂进行了各项性能指标的检测。结果显示,本产品的特异性、亲和力、灵敏度和稳定性高,实验操作简单,判读结果客观可靠,能长期保存,达到常规血型反定型试剂的质量要求。但本试剂仍有待改进之处,一是当样本中的抗体极弱时存在漏检的可能(任何技术方法都存在局限性),如果出现弱凝集或正反定型不相符合的情况,需要采用其他辅助试验技术解决。本实施例中有2例未能判断出准确结果就是这个原因,因此需要筛选抗原性强的红细胞膜以提高试剂的抗原性;二是尚需研究常温保存ABO血型反定型免疫胶体金试剂的方法。
以上实施例仅用以说明本实用新型的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本实用新型进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本实用新型实施例技术方案的精神和范围。
Claims (6)
1.一种采用微板法液相爆珠技术进行血型检测的装置,其特征在于其包括检测板(1)、设置在检测板(1)上的半球形反应槽(2)、设置在半球形反应槽(2)内的试剂爆珠(4)以及覆盖在半球形反应槽(2)上将其封盖住的贴膜(3);
所述试剂爆珠(4)包括标记为血型正定型的抗-A试剂爆珠、抗-B试剂爆珠、抗-D试剂爆珠、标记为反定型的A型红细胞膜抗原爆珠、B型红细胞膜抗原爆珠以及标记的O型红细胞膜抗原爆珠,六个半球形反应槽(2)为一组,包括正定型三孔,反定型三孔,每组内的每个半球形反应槽(2)各放置一种类型的爆珠。
2.根据权利要求1所述的一种采用微板法液相爆珠技术进行血型检测的装置,其特征在于所述贴膜(3)通过热合覆盖在检测板(1)上,并且将整个检测板(1)覆盖。
3.根据权利要求1所述的一种采用微板法液相爆珠技术进行血型检测的装置,其特征在于还包括框架(5)以及设置在框架(5)内呈十字形的交叉网格(6),所述检测板(1)包括若干个通过连接板(8)连接的检测体(7),半球形反应槽(2)设置在检测体(7)的顶面上。
4.根据权利要求3所述的一种采用微板法液相爆珠技术进行血型检测的装置,其特征在于在检测板(1)的两端分别设有搭接板(9),所述检测板(1)的长度与框架(5)内部尺寸相对应,两侧的搭接板(9)搭接在框架(5)上。
5.根据权利要求3或4所述的一种采用微板法液相爆珠技术进行血型检测的装置,其特征在于所述交叉网格(6)位于框架(5)内部的下侧位置,框架(5)内部的上侧位置为中空,检测体(7)对应设置在网格内。
6.根据权利要求3所述的一种采用微板法液相爆珠技术进行血型检测的装置,其特征在于所述连接板(8)位于相邻两个检测体(7)之间且位置靠上。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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GR01 | Patent grant | ||
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CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20220902 |