CN108693360B - 氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种氧化锆(ZrO2)微珠稀有血型检测试剂卡的制备方法，所述检测试剂卡包括装有含IgM性质的单克隆抗K抗体的氧化锆微珠的微柱管；装有含lgM性质的单克隆抗k抗体的氧化锆微珠的微柱管；装有含IgM性质的单克隆抗S抗体的氧化锆微珠的微柱管；装有含IgM性质的单克隆抗s抗体的氧化锆微珠的微柱管；装有含IgM性质的单克隆抗M抗体的氧化锆微珠的微柱管；装有含IgM性质的单克隆抗N抗体的氧化锆微珠的微柱管；有含IgM性质的单克隆抗Jka抗体的氧化锆微珠的微柱管；装有含IgM性质的单克隆抗Jkb抗体的氧化锆微珠微柱管。本发明方法制备的氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡灵敏度高、特异性好且质量稳定。

Description

氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡及其制备方法
技术领域
本发明涉及医学检测领域，具体的，本发明涉及一种氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡及其制备方法。
背景技术
1946年，在直接抗球人蛋白试验(DAT)的第一次应用报道中，Coombs等人描述了一种具有新的特异性的抗体，这种抗体原先叫抗-K或KEL1，与抗体产生者的丈夫和两个孩子的红细胞起反应，并和7％的随机血样起反应。三年以后，Levine等人描述了抗-Cellano，与抗K相对应，由于k已经被应用表示K的等位基因，符号k就表示这个基因的产物。K和k是共显性等位基因的产物，这已由许多家系研究所证实。
1947年，Walsh和Montgomery发现抗-S同种抗体，它能检测到一种和MN相关的抗原。Sanger等对190份英国人血样进行检测，发现86％的S+标本是M+，只有63％S-标本是M+，两者存在显著差异。M、N、S之间的关系很明显不是等位基因的关系，但可能是紧密连锁的基因座。
MNS是第二个被发现的血型系统，其复杂性仅次于Rh系统。MN的抗原决定簇位于糖蛋白(sialoglycoprotein，SGP)。M和N的区别在于GPA在细胞膜外端部分的氨基酸组成不同：M在1号位为丝氨酸，5号位为谷氨酸。碳水化合物在MN抗原的表达中也起了重要作用，尤其是唾液酸。
Jka和Jkb是Kidd系统的一对等位基因，在所有人群中显现出多态型。Jka/Jkb的多态性与Asp280Asn置换密切相关。Kidd系统的抗体一般很难被检测，由于它们经常造成迟发性溶血性输血反应，所以具有潜在危险性。
用于稀有血型分型的试剂目前国内尚未实现标准化，很多医疗机构尚不进行稀有血型分型检查。
在国外，已经有用于稀有血型的检测试剂卡，其多采用葡聚糖凝胶。但是葡聚糖凝胶会受温度、盐浓度、渗透压、pH的变化而致颗粒的孔径会改变，床外的空间也会改变，导致离心层析结果受影响。由于是一种凝胶状的颗粒，物理强度较差，随着保存期的延长，会导致变形，非特异吸附高，会影响试验结果。另外，价格也比较昂贵。
因此，本领域需要开发成本低、且稳定性好的氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡及其制备方法。
发明内容
本发明的目的在于克服上述不足，提供一种灵敏度高、特异性好且质量稳定、成本低的氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡。
本发明第一方面，提供一种氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡，所述检测试剂卡包括：
装有含IgM性质的单克隆抗K抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含lgM性质的单克隆抗k抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗S抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗s抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗M抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗N抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗Jka抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗Jkb抗体的氧化锆微珠微柱管。
上述氧化锆微珠颗粒直径为63-125微米。
上述抗M抗体效价≥16；抗N抗体效价≥16；其余抗体效价≥8。
上述氧化锆微珠与抗体的体积比为2:1。
上述微柱管开口处设铝箔封片。
上述试剂卡上贴有标签纸。
第二方面，本发明提供上述氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡的制备方法，所述方法包括步骤：
(a)筛选出颗粒直径为63-125微米的氧化锆微珠，用微珠悬浮介洗涤3-5次，除去微珠破损碎片以及聚集的微珠颗粒，收集得到颗粒大小均匀的、且完整呈球形的微珠；
(b)将步骤(a)制备的微珠与各抗体分别按照体积比2：1的比例混合，配制成含各抗体的微珠；
(c)按照每管22-28微升的量，将步骤(b)配制的微珠混合物分别分装到检测卡的微柱管中。
上述方法还包括以下步骤：
(d)用铝箔纸通过压膜方式将微柱管上口密封。
上述洗涤氧化锆微珠的微珠悬浮介质，pH值为6.6-6.8；
所述微珠悬浮介质的组份为：
Figure BDA0001417309670000031
本发明的有益效果是：
本发明的第一个方面，提出了一种标准化的氧化锆微珠悬浮介质体系，用于氧化锆微珠的洗涤和悬浮，并可以长时间维持抗体以及氧化锆微珠的稳定，其特点在于：
1、设计了具有很强缓冲能力的缓冲体系，采用磷酸钾盐、钠盐以及氨基酸组成的缓冲体系，使体系的pH值维持在6.6-6.8。与输血领域通常采用的单一的枸橼酸缓冲体系相比，具有缓冲能力更强的特点，有利于保持整个体系处于要求的缓冲范围，同时保证了整个氧化锆微珠悬浮介质的离子强度；
2、具有更加有效的低盐浓度体系，从其组成可以看出，本发明的氧化锆微珠悬浮介质采用氨基酸和氯化钠作为添加剂，辅助以微量的磷酸盐来雏持低离子强度环境，保持氧化锆微珠颗粒呈圆球颗粒并维持氧化锆微珠颗粒的直径直径在所要求的范围内(63-125微米)；
3、本发明具有独特的润滑体系，采用一定浓度的牛血清白蛋白，使得红细胞通过氧化锆微珠间隙时获得合适的润滑能力，使无凝集的红细胞具有完全通过氧化锆微珠颗粒间隙的能力，而凝集的红细胞则不能通过；
4、本发明具有优越的防腐体系，选择苯甲酸酯类作为防腐剂，采用聚乙烯吡咯烷酮协同作用，因而其在穿透细胞膜的能力不同，并且其抑菌的作用位点也就不同，所以各种单酯针对不同种类微生物的抑制能力就不同。几种酯的复合，具有更好的防腐能力，有效防止细菌的繁衍，获得较长时间的保存期，同时不仅避免使用叠氮钠化学防腐剂对氧化锆微珠悬浮介质体系的离子强度提升从而对氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡的灵敏度和特异性产生的不良影响，也避免使用抗生素类在保存过程中所代谢产生的中间体对氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡的特异性产生的不良影响。
另一方面，为了保证本发明氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡的质量，在制备过程中还需要对氧化锆微珠进行筛选，即，首先要选择适当的氧化锆微珠，一般应该满足的条件是：选择颗粒直径为63-125微米，对筛选获得的氧化锆微珠原料需要进行洗涤、悬浮，目的是让氧化锆微珠颗粒洗涤去除破损的氧化锆微珠颗粒、聚集的氧化锆微珠颗粒、内径在63-125微米以外的超大或超小氧化锆微珠颗粒以及氧化锆微珠以外的其它杂质成分。洗涤完成后用氧化锆微珠悬浮介质来悬浮氧化锆微珠。
再一方面，为了保证本发明氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡的质量，在制备过程中还对与氧化锆微珠混合的抗体原料进行筛选。
综上所述，本发明的氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡之所以可以具有优良的特异性、灵敏度以及长达1年的保存期，是在于整个体系各种成分的协同作用。含有8种稀有血型分型抗体的氧化锆微珠微柱管排列于一张卡上可以保证仅使用一张氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡就能完成8个稀有血型抗原的检查。缓冲体系可以维持检测试剂卡反应体系需要的pH。低盐浓度体系可以保证氧化锆微珠颗粒直径在所需要的范围内。润滑体系可以保证氧化锆微珠颗粒之间适当的润滑能力。苯甲酸钠防腐剂可以防止氧化锆微珠或抗体因为细菌繁殖而失效。标准化的氧化锆微珠可以保证氧化锆微珠颗粒之间的合适的间隙。标准化的抗体可以保障抗原的有效检出。
用此氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡检测稀有血型，产生的阳性反应均不低于1+。一般在18-25℃条件下保存有效期不低于12个月。
总之，本发明的实施提供了标准化的氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡产品，各医院和采供血机构可以直接从生产供应商处得到标准一致的氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡，为准确鉴定稀有血型分型、保证安全输血、尽早诊断和治疗新生儿溶血病创造了条件。
附图说明
图1为氧化锆微珠显微镜图；
图2为本发明氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡的结构示意图。
1-8.氧化锆微珠微柱管；9.检测试剂卡；11.氧化锆微珠；12.IgM性质的单克隆抗体；13.微柱管；14.空白卡片。
(四)具体实施方式
以下通过具体实施例详细说明本发明的实施和所具有的有益效果，旨在帮助阅读者更好的理解本发明的精神和实质，并不能对奉发明的实施范围构成任何限定。本发明试剂均为市售的。
实施例1：
步骤一、氧化锆微珠悬浮介质的配制
所述氧化锆微珠悬浮介质配方如下：
Figure BDA0001417309670000051
以上试剂用蒸馏水溶解，调pH值为6.6-6.8；
步骤二、氧化锆微珠的制备
选用氧化锆微珠，颗粒直径为63-125微米。用步骤一配制的氧化锆微珠悬浮介质，再用该氧化锆微珠悬浮介质洗涤3-5次，除去氧化锆微珠破损碎片以及聚集的氧化锆微珠颗粒，收集得到颗粒大小均匀的、且完整呈球形的适用的氧化锆微珠。
步骤三、抗体的选择
选择IgM性质的单克隆抗K抗体，效价≥8；
选择IgM性质的单克隆抗k抗体，效价≥8；
选择IgM性质的单克隆抗S抗体，效价≥8；
选择IgM性质的单克隆抗s抗体，效价≥8；
选择IgM性质的单克隆抗M抗体，效价≥16；
选择IgM性质的单克隆抗N抗体，效价≥8；
选择IgM性质的单克隆抗Jka抗体，效价≥8；
选择IgM性质的单克隆抗Jkb抗体，效价≥8。
步骤四、氧化锆微珠的配制
将步骤二制备的氧化锆微珠与步骤三选择的各抗体按照体积比2：1的比例混合，分别配制成含有IgM性质的单克隆抗K抗体的氧化锆微珠、含有IgM性质的单克隆抗k抗体的氧化锆微珠、含有lgM性质的单克隆抗S抗体的氧化锆微珠、含有IgM性质的单克隆抗s抗体的氧化锆微珠、含有IgM性质的单克隆抗M抗体的氧化锆微珠、含有IgM性质的单克隆抗N抗体的氧化锆微珠、含有IgM性质的单克隆抗Jka抗体的氧化锆微珠和合有IgM性质的单克隆抗Jkb抗体的氧化锆微珠。
步骤五、分装
按照每管22-28微升的量，将步骤四悬浮的各氧化锆微珠加入到一块空白卡片的八个微柱管中，形成具有8个氧化锆微珠微柱管的氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡。为了便于识别标记，在试剂卡下方贴有标签纸。
步骤六、半成品测定
要求含有抗体的氧化锆微珠微柱管中，具有与抗体相应抗原的红细胞产生≥1+的阳性反应。而与不含有抗体对应抗原的红细胞产生阴性反应，即红细胞可以全部通过氧化锆微珠到达微管底部，沉积在微管底部。
步骤七、封口
用铝箔纸通过压膜方式将微柱管上门密封。贴标签标记后于18-25℃保存。
步骤八、保存试验
上述氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡保存了1年以上，在此保存期间，该稀有血型检测试剂卡具有以下检测结果：
(1)外观
氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡中的氧化锆微珠均应呈均匀白色，微珠层上端有1～2毫米清澈透明的无色透明液体，氧化锆微珠颗粒之间不应有气泡和异物。
(2)灵敏度
含有抗体的微柱氧化锆微珠微柱管中，具有与抗体相应抗原的红细胞产生≥1+的阳性反应。
(3)特异性
含有抗体的微柱氧化锆微珠微柱管中，具有与抗体相应抗原的红细胞产生阳性反应。与不含有抗体对应抗原的红细胞产生阴性反应，即红细胞可以全部通过氧化锆微珠到达微管底部，沉积在微管底部。
通常葡聚糖凝胶价格是氧化锆的30余倍。另外，氧化锆是白色无臭无味晶体，不溶于水、盐酸和稀硫酸。化学性质不活泼，且高熔点、高电阻率、高析射率和低热膨胀系数的性质，是重要的耐高温材料，陶瓷绝缘材料。
氧化锆微珠的特点是化学物理稳定性高，非特异性吸附低，细菌等微生物不会生长，填料反压特低。
以上为对本发明实施例的描述，通过对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其他实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例。

Claims (7)

1.一种氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡，其特征在于，所述检测试剂卡包括：
装有含IgM性质的单克隆抗K抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含lgM性质的单克隆抗k抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗S抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗s抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗M抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗N抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗Jka抗体的氧化锆微珠的微柱管；
装有含IgM性质的单克隆抗Jkb抗体的氧化锆微珠微柱管；
所述氧化锆微珠颗粒直径为63-125微米；所述氧化锆微珠通过微珠悬浮介质进行悬浮，所述的微珠悬浮介质组份为：
Figure FDA0002836956730000011
。
2.如权利要求1所述氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡，其特征在于，所述抗M抗体效价≥16；抗N抗体效价≥16；其余抗体效价≥8。
3.如权利要求1-2任一权利要求所述稀有血型检测试剂卡，其特征在于，所述氧化锆微珠与抗体的体积比为2:1。
4.如权利要求3所述稀有血型检测试剂卡，其特征在于，所述微柱管开口处设铝箔封片。
5.权利要求4所述稀有血型检测试剂卡，其特征在于，所述试剂卡上贴有标签纸。
6.如权利要求3所述氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
(a)筛选出颗粒直径为63-125微米的氧化锆微珠，用微珠悬浮介洗涤3-5次，除去微珠破损碎片以及聚集的微珠颗粒，收集得到颗粒大小均匀的、且完整呈球形的微珠；
(b)将步骤(a)制备的微珠与各抗体分别按照体积比2：1的比例混合，配制成含各抗体的微珠；
(c)按照每管22-28微升的量，将步骤(b)配制的微珠混合物分别分装到检测卡的微柱管中。
7.如权利要求6所述氧化锆微珠稀有血型检测试剂卡的制备方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：
(d)用铝箔纸通过压膜方式将微柱管上口密封。
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