CN108690103A - 一种以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法 - Google Patents

一种以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法，属天然产物分离领域。本发明方法的工艺过程如下：首先取炒莱菔子药材，粉碎，过筛，加水煎煮提取，提取液浓缩后通过阴离子交换树脂，以NaCl溶液洗脱，洗脱液经减压浓缩除去大部分盐，浓缩液再加水经过去盐后，减压浓缩，冷冻干燥得到萝卜苷提取物，该萝卜苷提取物的纯度大于80％。采用本方法生产萝卜苷，工艺简单，所得产品含量高，易于工业化生产，可广泛用于莱菔子药材的进一步开发利用。

Description

一种以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法
技术领域
本发明属于天然活性物质分离纯化技术领域，具体涉及一种以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法。
背景技术
莱菔子为十字花科植物萝卜(Raphanus Sativus L.)的干燥成熟种子，味辛、甘，性平，归肺脾胃经。有消食除胀，降气化痰之功效，可用于治疗饮食停滞，脘腹胀痛，大便秘结，积滞泻痢，痰壅喘咳。有生、炒两种药用规格，临床上多以炒莱菔子入药。现代药理研究表明，莱菔子具有抗病原微生物、解毒、降压、抗癌、祛痰镇咳、抗肾上腺素等的作用。硫苷类成分是莱菔子中最主要的特征性成分。其中，萝卜苷是最主要的硫苷类化合物，其含量可高达3～8％。萝卜苷具有抗癌、促进胃肠蠕动、抗氧化和抑菌活性。萝卜苷(glucoraphenin)，化学名：4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫苷，分子式：
C12H20NO10S3，其化学结构式如下所示：
研究表明萝卜苷是莱菔子炮制是否得当的专属性质控指标。现有从莱菔子中提取萝卜苷的方法公开较少，如专利申请号(201410049676.X)“一种从莱菔子中提取总硫苷部位的方法”，该专利公开的方法是将莱菔子炒制，脱脂后经水提，醇沉，柱分离后得总硫苷提取部位，制备出的总硫苷部位含量不低于53％，萝卜苷的含量不低于30％。该专利获得的萝卜苷含量不高。目前对萝卜苷的纯化工艺报道较少，因此制备纯度较高的萝卜苷对莱菔子药材的进一步开发利用具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的不足，创新性的提供一种以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法，其工艺简单易操作，提取物收率高、有效成分含量高，适合工业化生产。
本发明技术解决方案如下：
一种以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法，其特征在于包含以下操作步骤：
(1)取炒莱菔子药材，粉碎，过筛，加水煎煮提取；
(2)合并上述提取液，浓缩后通过阴离子交换树脂，以NaCl溶液洗脱，收集洗脱液；
(3)将上述洗脱液经浓缩和除盐后，冷冻干燥得到萝卜苷提取物，HPLC法测定萝卜苷含量≥80％。
优选的，所述步骤(2)中，所述的阴离子交换树脂为D301氯型阴离子交换树脂。
优选的，所述除盐为透析法脱盐、超滤法脱盐、纳滤脱盐、分子筛层析法脱盐或有机溶剂法脱盐。
优选的，所述步骤(1)中，取炒莱菔子药材，粉碎，过20目筛，加水煎煮提取2-3次，每次加水量为药量的8-12倍，每次提取10-30min，合并提取液。更优选的，所述步骤(1)中，取炒莱菔子药材，粉碎，过20目筛，加水煎煮提取3次，每次加水量为药量的10倍，每次提取15min，合并提取液。
优选的，所述步骤(2)中，将提取液减压浓缩至质量浓度为0.1～0.2g·mL-1，通过D301氯型阴离子交换树脂，上样量为7BV，上样液吸附流速为1～3BV·h-1，水洗脱用量3BV，以浓度为5％～10％NaCl溶液3～5BV洗脱，洗脱流速为1～2BV·h-1；将收集的洗脱液减压浓缩，过滤，除去大部分盐，浓缩液减压浓缩。更优选的，所述步骤(2)中，将提取液减压浓缩至质量浓度为0.1g·mL-1，通过D301氯型阴离子交换树脂，上样量为7BV，上样液吸附流速为2BV·h-1，水洗脱用量3BV，以5％NaCl溶液5BV洗脱，洗脱流速为2BV·h-1。
优选的，所述步骤(3)中，将上述洗脱液经减压浓缩，过滤；将浓缩液加水后采用纳滤进一步除盐，减压浓缩，冷冻干燥，得到萝卜苷提取物，HPLC法测定萝卜苷含量≥80％。更优选的，所述步骤(3)中，纳滤采用截留分子量在100-1000Dal的纳滤膜，优选采用截留分子量在100-500Dal的纳滤膜，更优选采用截留分子量在200-300Dal的纳滤膜。
优选的，所述步骤(3)中，将收集的洗脱液减压浓缩，过滤，除去大部分盐，浓缩液真空干燥，得干燥品将上述干燥品装入滤纸筒中，置于索氏提取器中，用无水乙醇提取4-8h，然后将提取液中的乙醇回收，真空干燥得到萝卜苷提取物，经HLPC法测定萝卜苷提取物中萝卜苷纯度达到80％以上。
相对于现有技术，本发明的有益效果是：
1)由于萝卜苷为小分子强极性阴离子化合物，具有可离子化的基团，在水中的溶解性较好，采用普通的大孔树脂其吸附效率较低。本发明创新性的利用阴离子交换树脂可明显提高其在树脂上的吸附率，提高纯化选择性，取得了意想不到的技术效果。离子树脂在天然药物化学领域有着重要应用，离子树脂大致可分为凝胶型和大孔型，其中凝胶型适用于无机离子的吸附，大孔型则适用于有机大分子的吸附。经大量的反复试验表明，D301氯型阴离子交换树脂对炒莱菔子中萝卜苷吸附和洗脱效果较好，效率较高，重复性较好，纯度较纯化前有较大的提高。其再生简单，成本较低，适宜于工业化生产。洗脱液中含有大量的氯化钠，影响样品纯度，故需要进行除盐操作，用纳滤方法简单，除盐效率高。
2)本发明的浓缩提纯工艺上主要采用截留分子量在100-1000Dal的纳滤膜。纳滤膜对二价离子，功能性糖类，小分子色素，多肽，头孢菌素等物质的截留性高于98％，可脱除产品的盐分，减少产品灰分，提高产品纯度，相对于溶剂脱盐，不仅产品品质更好，且收率还能有所提高。本方法生产萝卜苷，工艺简单，所得产品含量高，易于工业化生产，可广泛用于莱菔子药材的进一步开发利用。
附图说明
图1为本发明试验例中2.2.5专属性试验中萝卜苷的HPLC色谱图；图中，A为对照品溶液；B为供试品溶液；1为萝卜苷峰。
图2为本发明试验例2.5.5项中D301氯型阴离子交换树脂对炒莱菔子中硫苷类成分的泄漏曲线。
图3为本发明实施例1中萝卜苷提取物的HPLC色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
试验例：阴离子交换树脂纯化炒莱菔子中萝卜苷的工艺研究
1材料
1.1仪器
Agilent 1260液相色谱仪(美国安捷伦公司)，配有真空脱气机，二极管阵列检测器；CP225D十万分之一电子天平(sartorius公司，德国)；DZHW型调温电热套(北京市永光明医疗仪器厂)；SHZ-82水浴恒温振荡器(金坛市医疗仪器厂)。
1.2试药
萝卜苷对照品(批号：0453522-24，Cayman Chemical Company)；D201，D301，D315型阴离子交换树脂(沧州宝恩吸附材料有限公司)；乙腈为色谱纯(山东禹王实业有限公司)；水为超纯水；其他试剂为分析纯。炒莱菔子购于山东百味堂中药饮片有限公司。
2方法与结果
2.1上样液的制备
取炒莱菔子药材，粉碎，过20目筛，加水煎煮提取3次，每次加水量为药量的10倍，每次提取15min，合并提取液，浓缩，加水定容至质量浓度为0.1g·mL-1，备用。
2.2萝卜苷的含量测定
2.2.1色谱条件
Inertsil ODS-3色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液(体积比为5:95)；检测波长：225nm；；流速为1.0mL·min-1；柱温30℃。
2.2.2对照品溶液的制备
取萝卜苷对照品适量，精密称定，用50％的甲醇配制成质量浓度为0.508mg·mL-1的萝卜苷对照品溶液，备用。
2.2.3供试品溶液的制备
精密量取2.1项下的上样液0.1mL，置于10mL量瓶中，加水定容至刻度作为供试品溶液。
2.2.4线性关系考察
按照2.2.1项下色谱条件，取2.2.2项下对照品溶液1，2，5，10，20，50，80μL分别注入液相色谱仪，测定其峰面积，以峰面积平均值为纵坐标(Y)，对照品质量为横坐标(X)进行回归，得到萝卜苷回归方程为Y＝679.1X+36.36(r＝0.9999)，在0.508μg～40.64μg呈良好的线性关系。
2.2.5专属性试验
精密吸取上述供试品、对照品溶液20μL，按2.2.1项下色谱条件进行萝卜苷HPLC测定，萝卜苷HPLC色谱图见图1。由图可知，萝卜苷色谱峰分离度良好，能够达到基线分离。
2.2.6精密度试验
取萝卜苷对照品溶液，按照2.2.1项下色谱条件重复进样6次，测得峰面积RSD为1.56％，保留时间RSD为0.71％，表明仪器精密度良好。
2.2.7重复性试验
取同一份上样液适量，按2.2.3项下方法平行制备6份供试品溶液，测得萝卜苷峰面积RSD为1.71％，表明该方法重复性良好。
2.2.8加样回收率试验
精密吸取已知含量的6份炒莱菔子供试品溶液，加入适量的萝卜苷对照品溶液，混合均匀，按照2.2.1项下色谱条件，进样测定其峰面积并计算其加样回收率和平均加样回收率。结果见表1。
表1萝卜苷加样回收试验结果(n＝6)
2.3树脂的预处理
树脂以去离子水洗至无色，以5倍量体积5％HCl浸泡2小时，去离子水洗至中性后再用5倍量体积的5％NaOH浸泡2小时。分别用5％NaOH，5％HCl浸泡转变为OH-型和Cl-型阴离子树脂，水洗至中性，备用。
2.4树脂型号的筛选
分别量取处理好的D315、D201、D301三种离子交换树脂氢氧型和氯型各2.5mL，分别置于50mL的具塞锥形瓶中，精密加入0.05g·mL-1炒莱菔子上样液25.00mL，置于恒温水浴振荡器中，静态吸附12h，滤过，按2.2.1项下色谱条件测定滤液中萝卜苷的含量，计算静态吸附率[(静态吸附率＝(上样液中萝卜苷的含量-滤液中萝卜苷的含量)/提取液中萝卜苷的含量×100％]。再向这三种已吸附饱和的树脂中分别加入25.00mL 0.05mol·L-1NaCl溶液，置于恒温水浴振荡器中，静态洗脱12h，滤过，按2.2.1项下色谱条件测定滤液中萝卜苷的含量，计算静态洗脱率(静态洗脱率＝洗脱液中萝卜苷的含量/树脂上吸附的萝卜苷含量)。同法试验氯型离子交换树脂，计算其静态吸附率和洗脱率，结果见表2。
表2不同类型离子交换树脂静态吸附-洗脱结果(n＝3，)
由表2结果可知，D201氢氧型静态吸附率最高，但是其静态洗脱率最低；D201氯型吸附率较高，但是洗脱率较低。而氢氧型和氯型D315静态吸附率较低，而D301氯型和氢氧型的吸附率和洗脱率相当，均较高。氯型D301比氢氧型的吸附率和洗脱率稍好，故选择D301氯型树脂进行纯化工艺优选。
2.5动态洗脱条件考察
2.5.1上样液pH值的选择
量取D301氯型阴离子交换树脂4份，每份45mL，湿法装柱，径高比为1：6，分别加入pH值分别为5.0，6.0(原液)，7.0，9.0，的0.1g·mL-1炒莱菔子样品液450mL，控制流速为2BV·h-1，收集流出液，然后水洗至无色，收集水洗液，按照2.2.1项下色谱条件测定上样液、流出液和水洗液中萝卜苷含量，计算比吸附量(比吸附量＝(上样液中萝卜苷质量-流出液中萝卜苷质量-水洗脱液中萝卜苷质量)/树脂总体积)。结果见表3。
表3不同上样液pH值对萝卜苷比吸附量的影响(n＝3，)
由表3数据可知，上样液的不同pH值对萝卜苷的比吸附量影响无显著性差异，从简化试验操作角度出发，选择上样液不调节其pH值，选择原液上样。
2.5.2上样液质量浓度
量取D301氯型阴离子交换树脂4份，每份45mL，湿法装柱，径高比为1：6，分别加入0.05，0.1，0.15，0.2g·mL-1上样液450mL，控制流速为2BV·h-1，收集流出液，然后水洗至无色，收集水洗液，按照2.2.1项下色谱条件测定上样液、流出液和水洗液中萝卜苷含量，计算其比吸附量。结果见表4。
表4不同上样浓度对萝卜苷比吸附量的影响(n＝3，)
*p<0.01与0.05g·mL-1比较
由表4结果可知，浓度为0.1，0.15，0.2g·mL-1的上样液萝卜苷的比吸附量与浓度为0.05g·mL-1上样液萝卜苷比吸附量有显著性差异，而浓度为0.1，0.15，0.2g·mL-1的上样液萝卜苷的比吸附量之间无显著性差异，由直观结果分析选择0.1g·mL-1浓度作为上样浓度。
2.5.3吸附流速
量取D301氯型阴离子交换树脂4份，每份45mL，湿法装柱，径高比约为1：6，分别加入炒莱菔子提取液450mL上柱，流速分别为1、2、3、4BV·h-1，收集流出液，然后水洗至无色，收集水洗液，按照2.2.1项下色谱条件测定上样液、流出液和水洗液中萝卜苷含量，计算比吸附量。结果见表5。
表5不同吸附流速对萝卜苷比吸附量的影响(n＝3，)
#p<0.05与4BV·h-1相比；*p<0.01与4BV·h-1相比
由表5结果可知，流速为2BV·h-1萝卜苷比吸附量最高。
2.5.4树脂径高比
取3支粗细不同的树脂柱，分别量取D301氯型阴离子交换树脂45mL，按径高比1:6、1:8、1:10湿法装柱，上样液质量浓度为0.1g·mL-1，上样量为450mL，吸附流速为2BV·h-1。收集流出液，然后水洗至无色，收集水洗液，按照2.2.1项下色谱条件测定上样液、流出液和水洗液中萝卜苷含量，计算比吸附量，结果见表6。
表6树脂径高比对萝卜苷比吸附量的影响(n＝3，)
表6中结果经SPSS分析，各组间无显著性差异，可见树脂柱的径高比对吸附量的影响较小。综合考率，选择径高比1:8进行上样。
2.5.5上样量
量取D301氯型阴离子交换树脂45mL，湿法装柱，径高比约为1：8，加入0.1g·mL-1上样液，以2BV·h-1的流速通过树脂柱，每45mL流出液收集为1份，以流出液收集份数为横坐标，萝卜苷泄漏率为纵坐标，绘制吸附泄漏曲线，见图2。
由图2可知，在上样过程中，当萝卜苷泄漏率逐渐增加，选定泄露率不超过5％的点的用量为最佳上样量。当上样量为7BV时，萝卜苷的泄漏率为3.77％，上样量为8BV时，其泄漏率为5.91％。为了使成分保留完全，选择7BV为最佳上样量，即1mlD301离子交换树脂的最佳吸附量为0.7g生药。
2.6洗脱条件考察
2.6.1水洗脱用量
量取D301氯型阴离子交换树脂45mL，湿法装柱，径高比为1:8，上样液质量浓度为0.1g·mL-1，上样量315mL，吸附流速为2BV·h-1。3BV去离子水洗除杂后，可使流出液澄清。因此确定样品液吸附后先用3BV水洗后再用洗脱剂洗脱。
2.6.2氯化钠质量浓度的选择
量取4份D301氯型阴离子交换树脂，每份45mL，湿法装柱，径高比为1:8，上样液质量浓度为0.1g·mL-1，吸附流速为2BV·h-1，上样量7BV，3BV水洗后分别用300mL的1％、5％、10％、15％的氯化钠溶液洗脱，洗脱流速为2BV·h-1，按2.2.1项下色谱条件测定萝卜苷含量，计算洗脱率结果见表7。
表7氯化钠质量浓度对萝卜苷洗脱率的影响(n＝3，)
*与1％NaCl比较P<0.01；#与1％NaCl比较P<0.05
由表7结果可知，1％NaCl作为洗脱液时与其他浓度NaCl溶液相比，其洗脱率存在显著性差异，而其他各浓度NaCl作为洗脱液时，萝卜苷的洗脱率无显著性差异，综合考虑，选择5％NaCl作为洗脱溶剂。
2.6.3洗脱流速的选择
量取4份D301氯型阴离子交换树脂,每份45mL，湿法装柱，径高比为1:8，上样液质量浓度为0.1g·mL-1，吸附流速为2BV·h-1，上样量为315mL，水洗后用5％的氯化钠洗脱，洗脱流速分别控制为1、2、3、4BV·h-1，收集洗脱液，按2.2.1项下色谱条件测定萝卜苷的含量，计算其洗脱率，结果见表8。
表8洗脱流速对萝卜苷洗脱率的影响(n＝3，)
由表8结果可知，不同洗脱流速下萝卜苷的洗脱率无显著性差异，从直观分析同时考虑到洗脱时间的因素，选择洗脱流速为2BV·h-1洗脱。
2.6.4洗脱液用量的选择
量取D301氯型阴离子交换树脂45mL，湿法装柱，径高比为1:8，上样液质量浓度为0.1g·mL-1，吸附流速为2BV·h-1，上样量为315mL，每45mL流出液收集一份，共收集5份，按2.2.1项下方法分别测定萝卜苷的含量，计算其洗脱率。以流出液收集份数为横坐标，以洗脱率为纵坐标，绘制动态洗脱曲线，见图2。结果显示当收集份数为4时，洗脱率基本不再变化，因此选择洗脱液用量为4BV洗脱。
2.7除盐工艺
由于收集到的洗脱液中含有较多的氯化钠，故而需要将其中的盐除去。首先将得到的洗脱液浓缩20倍以除去大部分盐，除盐后浓缩液加10倍量水后通过300Dal的纳滤膜进一步除盐，药液减压浓缩，冷冻干燥。
2.8验证实验
量取D301氯型阴离子交换树脂3份，每份45mL，湿法装柱，使之径高比为1：8，按最佳纯化工艺条件操作，收集洗脱液浓缩，浓缩20倍以除去大部分盐，除盐后浓缩液加10倍量水后通过300Dal的纳滤膜进一步除盐，药液减压浓缩，真空干燥。按2.1项下方法测定其中萝卜苷的含量，计算其纯度为82.6％，HPLC图谱见图3所示。验证结果表明用氯型D301离子树脂纯化炒莱菔子中萝卜苷稳定、可行。
3实验例
3.1实施例一
取炒莱菔子药材，粉碎，过20目筛，加水煎煮提取3次，每次加水量为药量的10倍，每次提取15min，合并提取液，浓缩，加水定容至质量浓度为0.1g·mL-1通过D301氯型阴离子交换树脂，上样量为7BV，上样液吸附流速为2BV·h-1，水洗脱用量3BV，以5％NaCl溶液5BV洗脱，洗脱流速为1BV·h-1。将收集的洗脱液以70℃，压力-0.08～-0.09MPa条件下减压浓缩20倍，过滤，除去大部分盐，浓缩液加入10倍量的水通过300Dal的纳滤膜进一步除盐，除盐后药液以70℃，压力-0.08～-0.09MPa条件下减压浓缩得到稠浸膏，稠浸膏以-50℃冷冻干燥得到萝卜苷提取物，收率为85.7％。经HLPC法测定萝卜苷提取物中萝卜苷纯度达到82.5％。
3.2实施例二
取炒莱菔子药材，粉碎，过20目筛，加水煎煮提取2次，每次加水量为药量的12倍，每次提取30min，合并提取液，浓缩，加水定容至质量浓度为0.2g·mL-1通过D301氯型阴离子交换树脂，上样量为7BV，上样液吸附流速为1BV·h-1，水洗脱用量3BV，以5％NaCl溶液3BV洗脱，洗脱流速为2BV·h-1。将收集的洗脱液以70℃，压力-0.08～-0.09MPa条件下减压浓缩25倍，过滤，除去大部分盐，浓缩液加入15倍量的水通过150Dal的纳滤膜进一步除盐，除盐后药液以60℃，压力-0.08～-0.09MPa条件下减压浓缩得到稠浸膏，稠浸膏以-50℃冷冻干燥得到萝卜苷提取物，收率为86.4％。经HLPC法测定萝卜苷提取物中萝卜苷纯度达到81.6％。
3.3实施例三
取炒莱菔子药材，粉碎，过20目筛，加水煎煮提取3次，每次加水量为药量的8倍，每次提取30min，合并提取液，浓缩，加水定容至质量浓度为0.15g·mL-1通过D301氯型阴离子交换树脂，上样量为7BV，上样液吸附流速为2BV·h-1，水洗脱用量3BV，以5％NaCl溶液3BV洗脱，洗脱流速为1BV·h-1。将收集的洗脱液以70℃，压力-0.08～-0.09MPa条件下减压浓缩25倍，过滤，除去大部分盐，浓缩液加入15倍量的水通过100Dal的纳滤膜进一步除盐，除盐后药液以60℃，压力-0.08～-0.09MPa条件下减压浓缩得到稠浸膏，稠浸膏以-50℃冷冻干燥得到萝卜苷提取物，收率为83.4％。经HLPC法测定萝卜苷提取物中萝卜苷纯度达到81.4％。
3.4实施例四
取炒莱菔子药材，粉碎，过20目筛，加水煎煮提取3次，每次加水量为药量的10倍，每次提取20min，合并提取液，浓缩，加水定容至质量浓度为0.15g·mL-1通过D301氯型阴离子交换树脂，上样量为7BV，上样液吸附流速为2BV·h-1，水洗脱用量3BV，以5％NaCl溶液5BV洗脱，洗脱流速为1.5BV·h-1。将收集的洗脱液减压浓缩，过滤，除去大部分盐，浓缩液以70℃，压力-0.08～-0.09MPa条件下减压浓缩得到稠浸膏，稠浸膏以60℃，压力-0.09MPa真空干燥后得到干浸膏，干浸膏装入滤纸筒中，置于索氏提取器中，用500mL的无水乙醇提取4h，然后将提取液中的乙醇回收，以60℃，压力-0.09MPa真空干燥得到萝卜苷提取物，收率为87.2％。经HLPC法测定萝卜苷提取物中萝卜苷纯度达到80.8％。

Claims (10)

1.一种以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法，其特征在于，包含以下操作步骤：
(1)取炒莱菔子药材，粉碎，过筛，加水煎煮提取；
(2)合并上述提取液，浓缩后通过阴离子交换树脂，以NaCl溶液洗脱，收集洗脱液；
(3)将上述洗脱液经浓缩和除盐后，冷冻干燥得到萝卜苷提取物，HPLC法测定萝卜苷含量≥80％。
2.根据权利要求1所述的以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述的阴离子交换树脂为D301氯型阴离子交换树脂。
3.根据权利要求1所述的以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述除盐为透析法脱盐、超滤法脱盐、纳滤法脱盐、分子筛层析法脱盐或有机溶剂法脱盐。
4.根据权利要求1所述的以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，取炒莱菔子药材，粉碎，过20目筛，加水煎煮提取2-3次，每次加水量为药量的8-12倍，每次提取10-30min，合并提取液。
5.根据权利要求4所述的以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，取炒莱菔子药材，粉碎，过20目筛，加水煎煮提取3次，每次加水量为药量的10倍，每次提取15min，合并提取液。
6.根据权利要求1所述的以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，将提取液减压浓缩至质量浓度为0.1～0.2g·mL-1，通过D301氯型阴离子交换树脂，上样量为7BV，上样液吸附流速为1～3BV·h-1，水洗脱用量3BV，以浓度为5％～10％NaCl溶液3～5BV洗脱，洗脱流速为1～2BV·h-1；将收集的洗脱液减压浓缩，过滤，除去大部分盐。
7.根据权利要求6所述的以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，将提取液减压浓缩至质量浓度为0.1g·mL-1，通过D301氯型阴离子交换树脂，上样量为7BV，上样液吸附流速为2BV·h-1，水洗脱用量3BV，以5％NaCl溶液5BV洗脱，洗脱流速为2BV·h-1。
8.根据权利要求3所述的以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，将上述洗脱液经减压浓缩，除去大部分盐；将浓缩液加水通过纳滤进一步除盐，减压浓缩，冷冻干燥，得到萝卜苷提取物，HPLC法测定萝卜苷含量≥80％。
9.根据权利要求8所述的以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，纳滤采用截留分子量在100-1000Dal的纳滤膜，优选采用截留分子量在100-500Dal的纳滤膜，更优选采用截留分子量在200-300Dal的纳滤膜。
10.根据权利要求3所述的以莱菔子为原料制备高纯度萝卜苷提取物的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，将收集的洗脱液减压浓缩，过滤，除去大部分盐，浓缩液真空干燥，得干燥品将上述干燥品装入滤纸筒中，置于索氏提取器中，用无水乙醇提取4-8h，然后将提取液中的乙醇回收，真空干燥得到萝卜苷提取物，经HLPC法测定萝卜苷提取物中萝卜苷纯度达到80％以上。
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