CN108680633A - 一种用于羟自由基检测的N-CNF/AuNPs基电化学生物传感方法 - Google Patents
一种用于羟自由基检测的N-CNF/AuNPs基电化学生物传感方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于环境监测技术领域,涉及一种用于羟自由基检测的N‑CNF/AuNPs基电化学生物传感方法。N‑CNF以ZIF‑8作为牺牲模板、通过外层包裹介孔SiO2形成壳核结构的保护煅烧法制备;AuNPs通过电沉积方法修饰到N‑CNF/GCE表面,作为ssDNA的固定平台;基于N‑CNF/AuNPs复合材料构建的电化学生物传感体系在·OH存在的情况下,其对ssDNA造成氧化损伤,致使ssDNA链断裂;最终通过电化学探针RuHex与ssDNA磷酸骨架的静电结合作用,实现对·OH的传感检测。本发明的方法实现对·OH的线性检测范围为50μM~500μM,检测限可达到25μM,具有较高的灵敏度。
Description
技术领域
本发明属于环境工程中的环境监测技术领域,涉及到一种用于羟自由基检测的N-CNF/AuNPs基电化学生物传感方法。
背景技术
羟自由基·OH作为活性氧中化学性质最活泼、对生物体毒性最强、危害也最大的一种自由基,可以通过夺取氢原子、羟基化反应和电子转移等方式,与几乎所有的细胞成分(如核酸、蛋白质、糖等)发生反应。研究表明,由·OH引起的DNA的氧化损伤是生物变异和组织癌变的主要原因之一。自1934年Haber和Weiss从Fenton体系中发现了·OH以来,其在天然水体、大气、生物系统中的存在均已得到证实,可以说·OH在环境中是无处不在的。当生物体内的·OH由于某些外源性因素无法被及时清除而在体内积聚时,会打破机体内正常的动态平衡,引发对DNA的氧化损伤,造成生物变异和组织癌变,进而诱发一系列的病理性疾病,最终导致癌变或形成肿瘤。因此,寻找一种方便、快捷、可实现对·OH灵敏检测的方法是十分必要的,并且具有积极的环境意义。
传统的检测方法有高效液相色谱分析法、电子自旋共振技术、荧光分光光度法、分光光度法等。虽然上述方法可实现对·OH的定量检测,但仍面临着仪器价格昂贵、运行成本高、检测过程繁琐、灵敏度低、精确度较差等问题。此外,部分方法对捕捉剂或发光物质的需要也在一定程度上限制了其实用性。因此,电化学传感法作为一种新兴的检测方法,以其成本低、易于操作、响应迅速、易微型化且灵敏度高等优势逐渐进入人们的视野。
近年来,在电化学传感的基础上引入对目标物特异性更强的生物传感元已逐渐成为传感检测领域新的研究方向,进一步拓宽了电化学传感法的应用范围。由于·OH对DNA的损伤作用,可以导致DNA链的断裂,这一特异性的反应已被用于构建DNA基电化学生物传感器从而实现对·OH的灵敏、特异检测。然而,这些方法都是以造价昂贵且易损耗的金电极作为DNA的固定平台,在实际应用中难以推广普及。如果能通过对常规电极表面进行修饰的方式固定DNA,同时选取具有良好导电性的材料来提升该方法的检测灵敏度,那么将为构建新型电化学生物传感器引入一个新的切入点。
发明内容
本发明的目的通过将氮掺杂多孔碳纳米材料N-CNF与金纳米颗粒AuNPs复合构建电化学生物传感体系实现对水体中羟自由基的检测。本发明通过利用N-CNF作为电极材料起到提升导电性的作用,通过进一步电沉积AuNPs起到固定ssDNA的作用,最终基于N-CNF/AuNPs复合材料构建的电化学生物传感体系可实现对水体中羟自由基的灵敏、快速、特异性检测。
本发明的技术方案是:
本发明提供了一种用于羟自由基检测的N-CNF/AuNPs基电化学生物传感方法,包括如下步骤:
(1)以ZIF-8作为牺牲模板,通过外层包裹介孔SiO2(mSiO2)形成壳核结构,目的是防止颗粒碳化过程中发生融合与聚合,碳化过程在真空炉中进行,煅烧温度为900-1200℃,煅烧时间为4-6h,成功碳化后为去除外层包裹的mSiO2壳,用质量分数为10%的HF溶液酸洗得到最终产物N-CNF。
(2)将步骤(1)得到的N-CNF分散在体积比为1:2:17的Nafion、异丙醇和水的混合溶液中,得到浓度为2-4mg/mL的均匀悬浮液;取悬浮液滴涂于玻碳电极GCE表面,滴涂量为0.28μg/cm2,并于室温放置直至形成一层均匀的薄膜,滴涂有N-CNF的玻碳电极称为N-CNF/GCE。
(3)将步骤(2)得到的N-CNF/GCE浸入摩尔比为1:100~200的HAuCl4与H2SO4混合液中,通过循环伏安法在-1V~1V范围内扫描30-60s,此时在电极表面发生Au的还原反应,AuNPs由电沉积方法修饰到N-CNF/GCE电极表面,修饰后的电极称为AuNPs/N-CNF/GCE。
(4)配置浓度为1-2μM的经巯基-SH修饰的ssDNA缓冲溶液,取上述溶液滴涂到由步骤(3)得到的AuNPs/N-CNF/GCE表面培养16-20h,滴涂量为0.14nmol/cm2,ssDNA通过Au-S键自组装到电极表面,形成ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE。其中,ssDNA缓冲溶液的成分为:10mMTris-HCl缓冲溶液,含10mM TCEP,100mM NaCl,1-2μM ssDNA,pH 7.4。
(5)将步骤(4)得到的ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE浸入1-5mM MCH缓冲溶液中培养1-2h,用于去除电极表面非特异性吸附的ssDNA并占据多余的活性位点,得到MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE。其中,MCH缓冲溶液的成分为:10mM Tris-HCl缓冲溶液,含1-5mM MCH,pH7.4。
(6)将步骤(5)得到的MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE浸入摩尔比为1:6的FeSO4·7H2O与H2O2的Fenton试剂缓冲溶液中,充分反应1-3h,反应过程中·OH不断攻击ssDNA,致使ssDNA链断裂完全,得到消化后的MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE。其中,Fenton试剂缓冲溶液的成分为:0.1M柠檬酸与0.2M磷酸氢二钠的混合液,pH 3.4。
(7)将步骤(6)得到的消化后的MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE置于50μM的RuHex缓冲溶液中培养5-15min,带正电的RuHex与带负电的ssDNA磷酸骨架静电结合,RuHex作为电化学探针以实现对电极表面ssDNA残余量的检测,而·OH的浓度与ssDNA残余量成反比,进而实现对·OH的定量检测,测试方法为方波伏安法,测试参数为:电势范围-0.6V~0V,电势增量4mV,振幅25mV,频率25Hz。其中,RuHex缓冲溶液的成分为:10mM Tris-HCl缓冲溶液,含50μM RuHex,pH 7.4。
所述的ssDNA为5’端修饰巯基-SH的单链脱氧核糖核苷酸。
本发明具有如下效果:
(1)灵敏度高,检测限可达到25μM(S/N=3);
(2)选择性高,噪声值低;
(3)成本低,有效替代了造价昂贵且易损耗的金电极。
附图说明
图1为N-CNF材料合成过程中不同阶段产物的透射电镜图,其中,A和B分别为500nm和20nm条件下的ZIF-8电镜图、C为50nm条件下的ZIF-8@SiO2电镜图、D为20nm条件下的N-CNF@SiO2电镜图、E和F分别为100nm和20nm条件下的N-CNF电镜图;
图2(A)为MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE电极修饰过程中的循环伏安曲线图,其中,a为GCE、b为N-CNF/GCE、c为AuNPs/N-CNF/GCE、d为ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE、e为MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE;
图2(B)为MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE电极修饰过程中的交流阻抗图,其中,a为GCE、b为N-CNF/GCE、c为AuNPs/N-CNF/GCE、d为ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE、e为MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE;
图3为本发明所述的一种用于羟自由基检测的N-CNF/AuNPs基电化学生物传感方法的检测过程示意图;
图4(A)为本发明的方法获得的羟自由基的方波伏安曲线图;
图4(B)为本发明的方法获得的羟自由基的峰电流差值与羟自由基浓度线性关系图。
具体实施方式
以下结合附图和技术方案,进一步说明本发明的具体实施方式。
本发明涉及一种用于羟自由基检测的N-CNF/AuNPs基电化学生物传感方法。本方法通过合成N-CNF并将其作为电极材料,有效提升了玻碳电极的导电性;AuNPs对电极的进一步修饰,起到了固定ssDNA的作用;基于N-CNF/AuNPs复合材料构建的电化学生物传感体系,在·OH存在的情况下,其对ssDNA造成氧化损伤,致使ssDNA链断裂;最终通过电化学探针RuHex与ssDNA磷酸骨架的静电结合作用,实现对·OH的传感检测。
下面对本发明技术方案进行详细说明,但是本发明的保护范围不局限于所述实施例。
实施例1:一种用于羟自由基检测的N-CNF/AuNPs基电化学生物传感方法。
(1)分别将0.9625g六水合硝酸锌和1.107g 2-甲基咪唑分散于50mL和40mL的无水甲醇中,待完全溶解后混合搅拌2h,得到白色乳胶状悬浊液于8000rpm离心10min,去除上清液同时用无水甲醇清洗3次,收集到的固体产物在120℃条件下真空干燥8h,最终获得前驱体ZIF-8;其形貌结构如图1A、图1B所示,呈现均匀的十二面体结构,且边缘清晰,粒径大约为60nm左右。随后,将0.2g ZIF-8粉末分散到80mL水中,依次加入2mL的CTAB水溶液(25mg/mL)和3.2mL的NaOH水溶液(6mg/mL),充分混合后注入含0.4mL TEOS和2mL无水甲醇的混合液,持续搅拌0.5h,获得的白色悬浊液于8000rpm离心10min,去除上清液同时用无水乙醇清洗3次,收集到的固体产物在120℃条件下真空干燥8h,得到呈壳核结构的纳米颗粒ZIF-8@mSiO2;如图1C所示,mSiO2外壳厚度大约为6nm左右。将上述产物置于真空炉中并接通氩气缓慢升温至1000℃,持续热解5h,待冷却至室温后即可获得N-CNF@mSiO2;其形貌结构如图1D所示,可见高温热解后的N-CNF@mSiO2形态较ZIF-8@mSiO2无明显改变,说明包裹的mSiO2外壳在煅烧过程中对ZIF-8的骨架结构起到了良好的保护作用。为去除包裹在N-CNF外的mSiO2壳,将N-CNF@mSiO2粉末分散到HF溶液(10wt.%)中充分搅拌3小时,得到的黑色悬浊液于8000rpm离心10min,随后分别用无水乙醇和去离子水清洗3次,收集到的固体产物在200℃条件下真空干燥10h,得到最终产物N-CNF;如图1E、图1F所示,经过酸洗去除mSiO2外壳后的N-CNF再次呈现原ZIF-8的十二面体骨架结构,且分层孔隙结构明显,得到的N-CNF纳米颗粒直径约为60nm左右,与原ZIF-8前驱体直径几乎一致,表明高温碳化过程仅改变了纳米颗粒的内部结构。
(2)将GCE电极依次在粒径为1μm、0.3μm和50nm的α-氧化铝抛光粉悬浮液中打磨2分钟,随后分别置于无水乙醇和高纯水中超声5分钟,去除吸附在电极表面的氧化铝粉末和有机物,用高纯水冲洗净电极后通N2吹干;将合成的N-CNF超声分散在Nafion:异丙醇:水=1:2:17的水溶液中得到均匀的悬浮液(2mg/mL),取10μL滴涂在GCE电极表面并置于室温下干燥直至在其表面形成一层均匀的薄膜,此时电极被标记为N-CNF/GCE。
(3)将N-CNF/GCE浸没于5mM HAuCl4溶液(含0.5M H2SO4)中通过循环伏安法电沉积AuNPs,电势范围为-1V~1V,扫描速率为50mM/s,扫描圈数为2圈,用高纯水冲洗电极后通N2吹干,修饰后的电极被标记为AuNPs/N-CNF/GCE。
(4)取10μL 1μM的经巯基(-SH)修饰的ssDNA溶液(10mM Tris-HCl缓冲液,含10mMTCEP,100mM NaCl,pH 7.4)滴涂在AuNPs/N-CNF/GCE电极表面培养16h,随后用10mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)冲洗电极并通N2吹干,此时ssDNA已通过Au-S键自组装到电极表面,该电极被标记为ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE。其中,ssDNA序列为:5’-SH-GTG CAG AGA TCC GTCCCT CTG CAC-3’。
(5)为进一步去除电极表面非特异性吸附的ssDNA并占据多余的活性位点,将上述电极沉浸于10mM Tris–HCl缓冲溶液(含1mM MCH,pH 7.4)中培养1h,随后用高纯水冲洗并通N2吹干,得到MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE。
与此同时,分别采用循环伏安法和交流阻抗法对上述步骤(2)到步骤(5)之间的电极修饰过程进行表征,结果如图2A和图2B所示。在循环伏安谱图中氧化还原峰之间的电势差和峰电流的大小揭示了电极表面的电子传递情况,由图2A可见,N-CNF/GCE电极的氧化还原峰电流强于GCE电极,印证了N-CNF良好的导电性;而电沉积AuNPs后,峰电流进一步增强;当ssDNA通过自组装固定到AuNPs/N-CNF/GCE电极表面时,带负电的ssDNA磷酸骨架与溶液中的[Fe(CN)6]3-/4-产生静电排斥作用,致使氧化还原峰电流减弱;随后MCH对电极表面位点的封阻进一步抑制了电子的传递过程。在交流阻抗谱图中高频区的半圆代表了电子传递限制过程,半圆直径越大意味着电极/溶液界面处电子传递阻力(Rct)越大,由图2B可见,随着N-CNF和AuNPs相继修饰到电极表面,电子传递阻力逐渐减小,说明电极/溶液界面处电子传递速率加快,当ssDNA与MCH依次固定到AuNPs/N-CNF/GCE电极表面之后,半圆直径逐渐增大,说明电极表面电子传递阻力增大,电子传递速率减慢,该现象与循环伏安法所得结果一致。以上结果证实了电化学传感体系的成功构建。
(6)为实现对·OH的电化学检测,待测物·OH由Fenton试剂获得,其中FeSO4·7H2O与H2O2的摩尔比例为1:6,配置于含0.1M柠檬酸与0.2M磷酸氢二钠的缓冲溶液(pH 3.4)中,该体系所产生·OH的浓度与Fe2+的浓度相同。将MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE电极浸入上述溶液中,充分反应2h,此过程中·OH不断攻击ssDNA,致使ssDNA链断裂完全,随后用超纯水冲洗电极,去除已脱离电极表面的ssDNA片段。
(7)将上述电极置于10mM Tris-HCl缓冲溶液(含50μM RuHex,pH 7.4)中10min,带正电的RuHex与带负电的ssDNA磷酸骨架静电结合,RuHex作为电化学探针以实现对电极表面ssDNA残余量的检测,而·OH的浓度与ssDNA残余量成反比,进而实现对·OH的定量检测,检测过程示意图如图3所示。检测方法为方波伏安法(SWV),检测过程在CHI660D电化学工作站上进行,反应前后的MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE电极作为工作电极,铂丝电极作为对电极,饱和甘汞电极作为参比电极,检测溶液为10mM Tris-HCl缓冲溶液(含50μM RuHex,pH7.4),检测参数如下:电势范围为-0.6V~0V,电势增量为4mV,振幅为25mV,频率为25Hz。检测结果如图4A所示,当·OH浓度在50μM~500μM范围内增加时,峰电流值逐渐减小。产生该现象的原因可以解释为:随着·OH浓度的增加,其对ssDNA结构的破坏更加充分,因而更多断裂的ssDNA片段离开电极表面;RuHex作为电化学指示剂,可以与带负价的ssDNA磷酸骨架静电结合,当电极表面残留的ssDNA片段因被·OH攻击而减少时,通过静电结合作用吸附到ssDNA上的RuHex相应减少,因此检测到的RuHex峰电流逐渐减弱。图4B进一步揭示了RuHex峰电流变化与·OH浓度之间的关系,可见该方法可实现在50μM~500μM范围内对·OH的灵敏检测,由三倍信噪比(S/N=3)计算得出该方法的检出限为25μM,并且在上述线性范围内峰电流变化值与·OH浓度满足如下拟合方程:
ΔI=9.86665lg(CFe2+)-16.24404
相关系数为0.9941。
实施例2:一种用于羟自由基检测的N-CNF/AuNPs基电化学生物传感方法。
(1)分别将1.925g六水合硝酸锌和2.214g 2-甲基咪唑分散于90mL和80mL的无水甲醇中,待完全溶解后混合搅拌2h,得到白色乳胶状悬浊液于8000rpm离心10min,去除上清液同时用无水甲醇清洗3次,收集到的固体产物在120℃条件下真空干燥8h,最终获得前驱体ZIF-8。随后,将0.4g ZIF-8粉末分散到160mL水中,依次加入4mL的CTAB水溶液(25mg/mL)和6.4mL的NaOH水溶液(6mg/mL),充分混合后注入含0.8mL TEOS和4mL无水甲醇的混合液,持续搅拌0.5h,获得的白色悬浊液于8000rpm离心10min,去除上清液同时用无水乙醇清洗3次,收集到的固体产物在120℃条件下真空干燥8h,得到呈壳核结构的纳米颗粒ZIF-8@mSiO2。将上述产物置于真空炉中并接通氩气缓慢升温至900℃,持续热解5h,待冷却至室温后即可获得N-CNF@mSiO2。为去除包裹在N-CNF外的mSiO2壳,将N-CNF@mSiO2粉末分散到HF溶液(10wt.%)中充分搅拌3小时,得到的黑色悬浊液于10000rpm离心12min,随后分别用无水乙醇和去离子水清洗3次,收集到的固体产物在200℃条件下真空干燥12h,得到最终产物N-CNF。
(2)将GCE电极依次在粒径为1μm、0.3μm和50nm的α-氧化铝抛光粉悬浮液中打磨2分钟,随后分别置于无水乙醇和高纯水中超声5分钟,去除吸附在电极表面的氧化铝粉末和有机物,用高纯水冲洗净电极后通N2吹干;将合成的N-CNF超声分散在Nafion:异丙醇:水=1:2:17的水溶液中得到均匀的悬浮液(4mg/mL),取5μL滴涂在GCE电极表面并置于室温下干燥直至在其表面形成一层均匀的薄膜,此时电极被标记为N-CNF/GCE。
(3)将N-CNF/GCE浸没于5mM HAuCl4溶液(含1M H2SO4)中通过循环伏安法电沉积AuNPs,电势范围为-1V~1V,扫描速率为50mM/s,扫描圈数为3圈,用高纯水冲洗电极后通N2吹干,修饰后的电极被标记为AuNPs/N-CNF/GCE。
(4)取5μL 2μM的经巯基(-SH)修饰的ssDNA溶液(10mM Tris-HCl缓冲液,含10mMTCEP,100mM NaCl,pH 7.4)滴涂在AuNPs/N-CNF/GCE电极表面培养20h,随后用10mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)冲洗电极并通N2吹干,此时ssDNA已通过Au-S键自组装到电极表面,该电极被标记为ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE。其中,ssDNA序列为:5’-SH-GTG CAG AGATCCGTCCCT CTG CAC-3’。
(5)为进一步去除电极表面非特异性吸附的ssDNA并占据多余的活性位点,将上述电极沉浸于10mM Tris–HCl缓冲溶液(含2mM MCH,pH 7.4)中培养2h,随后用高纯水冲洗并通N2吹干,得到MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE。
(6)为实现对·OH的电化学检测,待测物·OH由Fenton试剂获得,其中FeSO4·7H2O与H2O2的摩尔比例为1:6,配置于含0.1M柠檬酸与0.2M磷酸氢二钠的缓冲溶液(pH 3.4)中,该体系所产生·OH的浓度与Fe2+的浓度相同。将MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE电极浸入上述溶液中,充分反应3h,此过程中·OH不断攻击ssDNA,致使ssDNA链断裂完全,随后用超纯水冲洗电极,去除已脱离电极表面的ssDNA片段。
(7)将上述电极置于10mM Tris-HCl缓冲溶液(含50μM RuHex,pH 7.4)中15min,带正电的RuHex与带负电的ssDNA磷酸骨架静电结合,RuHex作为电化学探针以实现对电极表面ssDNA残余量的检测,而·OH的浓度与ssDNA残余量成反比,进而实现对·OH的定量检测,检测过程示意图如图3所示。检测方法为方波伏安法(SWV),检测过程在CHI660D电化学工作站上进行,反应前后的MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE电极作为工作电极,铂丝电极作为对电极,饱和甘汞电极作为参比电极,检测溶液为10mM Tris-HCl缓冲溶液(含50μM RuHex,pH7.4),检测参数如下:电势范围为-0.6V~0V,电势增量为4mV,振幅为25mV,频率为25Hz。
Claims (2)
1.一种用于羟自由基检测的N-CNF/AuNPs基电化学生物传感方法,其特征在于,步骤如下:
(1)以ZIF-8作为牺牲模板,通过外层包裹介孔SiO2形成壳核结构,将该材料置于真空炉中煅烧,煅烧温度为900-1200℃,煅烧时间为4-6h,随后用质量分数为10%的HF溶液酸洗得到最终产物N-CNF;
(2)将步骤(1)得到的N-CNF分散在体积比为1:2:17的Nafion、异丙醇和水的混合溶液中,得到浓度为2-4mg/mL的均匀悬浮液;取悬浮液滴涂于玻碳电极GCE表面,滴涂量为0.28μg/cm2,并于室温放置直至形成一层均匀的薄膜,即得到N-CNF/GCE;
(3)将步骤(2)得到的N-CNF/GCE浸入摩尔比为1:100~200的HAuCl4与H2SO4混合液中,通过循环伏安法在-1V~1V范围内扫描30-60s,得到AuNPs/N-CNF/GCE;
(4)配置浓度为1-2μM的经巯基-SH修饰的ssDNA缓冲溶液,取上述溶液滴涂到由步骤(3)得到的AuNPs/N-CNF/GCE表面培养16-20h,滴涂量为0.14nmol/cm2,得到ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE;其中,ssDNA缓冲溶液的成分为:10mM Tris-HCl缓冲溶液,含10mM TCEP,100mMNaCl,1-2μM ssDNA,pH 7.4;
(5)将步骤(4)得到的ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE浸入1-5mM MCH缓冲溶液中培养1-2h,得到MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE;其中,MCH缓冲溶液的成分为:10mM Tris-HCl缓冲溶液,含1-5mM MCH,pH 7.4;
(6)将步骤(5)得到的MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE浸入摩尔比为1:6的FeSO4·7H2O与H2O2的Fenton试剂缓冲溶液中,充分反应1-3h,得到消化后的MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE;其中,Fenton试剂缓冲溶液的成分为:0.1M柠檬酸与0.2M磷酸氢二钠的混合液,pH 3.4;
(7)将步骤(6)得到的消化后的MCH/ssDNA/AuNPs/N-CNF/GCE置于50μM的RuHex缓冲溶液中培养5-15min,利用方波伏安法进行测试并分析结果;测试参数为:电势范围-0.6V~0V,电势增量4mV,振幅25mV,频率25Hz;其中,RuHex缓冲溶液的成分为:10mM Tris-HCl缓冲溶液,含50μM RuHex,pH 7.4。
2.根据权利要求1所述的N-CNF/AuNPs基电化学生物传感方法,其特征在于,ssDNA为5’端修饰巯基-SH的单链脱氧核糖核苷酸。
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Cited By (4)
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---|---|---|---|---|
CN110161094A (zh) * | 2019-07-04 | 2019-08-23 | 江苏省农业科学院 | 基于电化学传感器快速检测自由基的方法 |
CN110196270A (zh) * | 2019-06-20 | 2019-09-03 | 海南师范大学 | 一种基于生物质炭-纳米金的电化学生物传感器的构建方法与分析应用 |
CN110779970A (zh) * | 2019-09-18 | 2020-02-11 | 南京农业大学 | 一种鸡传染性支气管炎病毒h120株的电化学检测方法 |
CN111272851A (zh) * | 2020-02-25 | 2020-06-12 | 华东师范大学 | 一种检测·oh的玻璃纳米孔传感器及其制备和应用 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007333714A (ja) * | 2006-06-15 | 2007-12-27 | Advanced Technology:Kk | 超微量ヒスタミン計測用電気化学バイオセンサ |
CN105742651A (zh) * | 2016-02-23 | 2016-07-06 | 青岛大学 | 一种基于葡糖淀粉酶与纳米金共修饰的碳纳米材料杂化阳极的淀粉生物燃料电池 |
CN106093159A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-11-09 | 大连理工大学 | 一种基于多肽‑金纳米粒子检测金属离子的生物传感器的制备方法 |
US20160341722A1 (en) * | 2015-05-19 | 2016-11-24 | Universiti Brunei Darussalam | Electrochemical immunosensor and method of use for analyte detection |
KR101713480B1 (ko) * | 2016-04-14 | 2017-03-08 | 인천대학교 산학협력단 | 환원된 산화그래핀과 싸이클로덱스트린 나노컴포짓을 활용한 전기화학 센서 |
CN107607597A (zh) * | 2017-09-12 | 2018-01-19 | 桂林电子科技大学 | 一种柿单宁‑石墨烯‑Pt复合材料修饰丝网印刷电极检测过氧化氢的方法 |
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Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007333714A (ja) * | 2006-06-15 | 2007-12-27 | Advanced Technology:Kk | 超微量ヒスタミン計測用電気化学バイオセンサ |
US20160341722A1 (en) * | 2015-05-19 | 2016-11-24 | Universiti Brunei Darussalam | Electrochemical immunosensor and method of use for analyte detection |
CN105742651A (zh) * | 2016-02-23 | 2016-07-06 | 青岛大学 | 一种基于葡糖淀粉酶与纳米金共修饰的碳纳米材料杂化阳极的淀粉生物燃料电池 |
KR101713480B1 (ko) * | 2016-04-14 | 2017-03-08 | 인천대학교 산학협력단 | 환원된 산화그래핀과 싸이클로덱스트린 나노컴포짓을 활용한 전기화학 센서 |
CN106093159A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-11-09 | 大连理工大学 | 一种基于多肽‑金纳米粒子检测金属离子的生物传感器的制备方法 |
CN107607597A (zh) * | 2017-09-12 | 2018-01-19 | 桂林电子科技大学 | 一种柿单宁‑石墨烯‑Pt复合材料修饰丝网印刷电极检测过氧化氢的方法 |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110196270A (zh) * | 2019-06-20 | 2019-09-03 | 海南师范大学 | 一种基于生物质炭-纳米金的电化学生物传感器的构建方法与分析应用 |
CN110161094A (zh) * | 2019-07-04 | 2019-08-23 | 江苏省农业科学院 | 基于电化学传感器快速检测自由基的方法 |
CN110161094B (zh) * | 2019-07-04 | 2021-09-28 | 江苏省农业科学院 | 基于电化学传感器快速检测自由基的方法 |
CN110779970A (zh) * | 2019-09-18 | 2020-02-11 | 南京农业大学 | 一种鸡传染性支气管炎病毒h120株的电化学检测方法 |
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