CN108652990A - 一种用于义齿清洁剂的抗菌微囊的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于义齿清洁剂的抗菌微囊及其制备方法，本发明利用新鲜的鱼鳞，通过预处理、酶解、提取等工艺，得到了天然生物抗菌肽，提取工艺简单，效率高，原料来源广泛，成本较低，接着利用硅胶来处理抗菌肽溶液，不仅可以最大程度的吸附抗菌肽溶液，提高胶囊的包容率，增强抗菌效果，同时为抗菌钛提供载体，促进抗菌肽后续应用在义齿清洁剂中时，在基体中的分散性和相容性，更高效的发挥抗菌特性；最后利用海藻酸钠和氯化钙溶液的反应，形成包覆膜，包覆在硅胶粒子表面，延长了抗菌期效，为其应用在义齿清洁领域提供了可靠的保障。
Description
技术领域
本发明属于口腔医用生物材料技术领域，具体涉及一种用于义齿清洁剂的抗菌微囊的制备方法。
背景技术
抗菌肽指生物体受到 病原微生物侵害或外界刺激时分泌出的一种防御性的肽类物质，1980年Boman等从天蚕蛹中诱导分离出cecropin，成为第一个真正意义的抗菌肽，并发现对大肠杆菌有很强的抑 制作用，同年，首个鱼源抗菌肽被提取出来，其抑菌性直到1996年才被发现，目 前己经有超过2700多种不同来源的抗菌肽被发现。天然抗菌肽主要是从动植物体内提取，具有来源广、抗菌范围广、安全无毒、环保等良好的优点，随着人们环保意识和生产技术 的提高，天然抗菌肽越来越引起重视，其应用领域也有待扩展和挖掘。
发明内容
针对上述问题，本发明旨在提供一种用于义齿清洁剂的抗菌微囊，及其制备方法。
本发明通过以下技术方案实现：
一种用于义齿清洁剂的抗菌微囊，由以下原料制成：
抗菌肽溶液10-20，硅胶20-30，硅烷偶联剂KH-550 2-3，正丙胺1-2，海藻酸钠溶液30-50，氯化钙溶液30-50。
进一步的，所述抗菌肽溶液的制备方法为：将新鲜的鱼鳞用蒸馏水冲洗3-5次后，加入体积为10-50倍的丙酮，加热至30-35℃，超声20-30min，除去表面油污和杂蛋白，然后取出更换丙酮，重复上述操作2-3次后，取出鱼鳞，30-40℃鼓风干燥箱中烘干，然后加入到5-10倍体积的水中，加热至35-38℃，用30-50%的乙酸溶液调pH 值至1.8-2.4，加入酸性蛋白酶酶解5-6h，2000-3000rpm转速下离心 25-30min，取上清液，升温至98-100℃灭酶5-10min，得抗菌肽溶液，放置于-10~-5℃环境中保存备用。
进一步的，其制备方法包括以下步骤：
（1）将硅胶分散在体积10-50倍的乙醇中，超声处理10-20min，然后加入硅烷偶联剂KH-550和正丙胺，升温至50-60℃继续超声20-30min后，过滤，蒸馏水冲洗2-3次后，烘干备用；
（2）将抗菌肽溶液20-30℃下超声5-10min后，加入步骤（1）所得硅胶， 升温至35-40℃下超声5-10min后，转入密闭容器中，抽真空至0.08-0.09MPa，浸泡5-10h后，蒸发除去水分，得到负载抗菌肽的硅胶粒子；
（3）将步骤（2）所得物分散到海藻酸钠溶液中，25-30℃超声处理5-10min后，用玻璃注射器注入氯化钙溶液，转入水浴装置中，300-500rpm转速下反应3-4h，然后静置5-10h，过滤，蒸馏水洗涤2-3次后，放入冷冻干燥机中-20~-10℃下干燥5-10h即可。
进一步的，步骤（2）中所述硅胶的目粒度为300-400mu。
进一步的，步骤（3）所述海藻酸钠溶液浓度为20-30%，所述氯化钙溶液浓度为40-50%。
本发明的有益效果：本发明利用新鲜的鱼鳞，通过预处理、酶解、提取等工艺，得到了天然生物抗菌肽，提取工艺简单，效率高，原料来源广泛，成本较低，接着利用硅胶来处理抗菌肽溶液，不仅可以最大程度的吸附抗菌肽溶液，提高胶囊的包容率，增强抗菌效果，同时为抗菌钛提供载体，促进抗菌肽后续应用在义齿清洁剂中时，在基体中的分散性和相容性，更高效的发挥抗菌特性；最后利用海藻酸钠和氯化钙溶液的反应，形成包覆膜，包覆在硅胶粒子表面，延长了抗菌期效，为其应用在义齿清洁领域提供了可靠的保障。
具体实施方式
下面用具体实施例说明本发明，但并不是对本发明的限制。
实施例1
一种用于义齿清洁剂的抗菌微囊，由以下原料制成：
抗菌肽溶液10，硅胶20，硅烷偶联剂KH-5502，正丙胺1，海藻酸钠溶液30，氯化钙溶液30。
进一步的，所述抗菌肽溶液的制备方法为：将新鲜的鱼鳞用蒸馏水冲洗3次后，加入体积为10倍的丙酮，加热至30℃，超声20min，除去表面油污和杂蛋白，然后取出更换丙酮，重复上述操作2次后，取出鱼鳞，30℃鼓风干燥箱中烘干，然后加入到5倍体积的水中，加热至35℃，用30%的乙酸溶液调pH 值至1.8，加入酸性蛋白酶酶解5h，2000rpm转速下离心25min，取上清液，升温至98℃灭酶5min，得抗菌肽溶液，放置于-10℃环境中保存备用。
进一步的，其制备方法包括以下步骤：
（1）将硅胶分散在体积10倍的乙醇中，超声处理10min，然后加入硅烷偶联剂KH-550和正丙胺，升温至50℃继续超声20min后，过滤，蒸馏水冲洗2-3次后，烘干备用；
（2）将抗菌肽溶液20℃下超声5min后，加入步骤（1）所得硅胶， 升温至35℃下超声5min后，转入密闭容器中，抽真空至0.08MPa，浸泡5h后，蒸发除去水分，得到负载抗菌肽的硅胶粒子；
（3）将步骤（2）所得物分散到海藻酸钠溶液中，25℃超声处理5min后，用玻璃注射器注入氯化钙溶液，转入水浴装置中，300pm转速下反应3h，然后静置5h，过滤，蒸馏水洗涤2次后，放入冷冻干燥机中-20℃下干燥5h即可。
进一步的，步骤（2）中所述硅胶的目粒度为300mu。
进一步的，步骤（3）所述海藻酸钠溶液浓度为20%，所述氯化钙溶液浓度为40%。
实施例2
一种用于义齿清洁剂的抗菌微囊，由以下原料制成：
抗菌肽溶液15，硅胶25，硅烷偶联剂KH-550 2，正丙胺2，海藻酸钠溶液40，氯化钙溶液40。
进一步的，所述抗菌肽溶液的制备方法为：将新鲜的鱼鳞用蒸馏水冲洗4次后，加入体积为30倍的丙酮，加热至32℃，超声25min，除去表面油污和杂蛋白，然后取出更换丙酮，重复上述操作2次后，取出鱼鳞，35℃鼓风干燥箱中烘干，然后加入到7倍体积的水中，加热至37℃，用40%的乙酸溶液调pH 值至2.0，加入酸性蛋白酶酶解5h，2500rpm转速下离心27min，取上清液，升温至99℃灭酶7min，得抗菌肽溶液，放置于-8℃环境中保存备用。
进一步的，其制备方法包括以下步骤：
（1）将硅胶分散在体积40倍的乙醇中，超声处理15min，然后加入硅烷偶联剂KH-550和正丙胺，升温至55℃继续超声25min后，过滤，蒸馏水冲洗2次后，烘干备用；
（2）将抗菌肽溶液25℃下超声7min后，加入步骤（1）所得硅胶， 升温至37℃下超声7min后，转入密闭容器中，抽真空至0.085MPa，浸泡8h后，蒸发除去水分，得到负载抗菌肽的硅胶粒子；
（3）将步骤（2）所得物分散到海藻酸钠溶液中，28℃超声处理8min后，用玻璃注射器注入氯化钙溶液，转入水浴装置中，400rpm转速下反应4h，然后静置6h，过滤，蒸馏水洗涤3次后，放入冷冻干燥机中-15℃下干燥7h即可。
进一步的，步骤（2）中所述硅胶的目粒度为300mu。
进一步的，步骤（3）所述海藻酸钠溶液浓度为25%，所述氯化钙溶液浓度为45%。
实施例3
一种用于义齿清洁剂的抗菌微囊，由以下原料制成：
抗菌肽溶液20，硅胶30，硅烷偶联剂KH-550 3，正丙胺2，海藻酸钠溶液50，氯化钙溶液50。
进一步的，所述抗菌肽溶液的制备方法为：将新鲜的鱼鳞用蒸馏水冲洗5次后，加入体积为50倍的丙酮，加热至35℃，超声30min，除去表面油污和杂蛋白，然后取出更换丙酮，重复上述操作3次后，取出鱼鳞，40℃鼓风干燥箱中烘干，然后加入到10倍体积的水中，加热至38℃，用50%的乙酸溶液调pH 值至2.4，加入酸性蛋白酶酶解6h，3000rpm转速下离心30min，取上清液，升温至100℃灭酶10min，得抗菌肽溶液，放置于-10℃环境中保存备用。
进一步的，其制备方法包括以下步骤：
（1）将硅胶分散在体积50倍的乙醇中，超声处理20min，然后加入硅烷偶联剂KH-550和正丙胺，升温至60℃继续超声30min后，过滤，蒸馏水冲洗3次后，烘干备用；
（2）将抗菌肽溶液30℃下超声10min后，加入步骤（1）所得硅胶， 升温至40℃下超声10min后，转入密闭容器中，抽真空至0.09MPa，浸泡10h后，蒸发除去水分，得到负载抗菌肽的硅胶粒子；
（3）将步骤（2）所得物分散到海藻酸钠溶液中，30℃超声处理10min后，用玻璃注射器注入氯化钙溶液，转入水浴装置中，500rpm转速下反应4h，然后静置10h，过滤，蒸馏水洗涤3次后，放入冷冻干燥机中-20℃下干燥10h即可。
进一步的，步骤（2）中所述硅胶的目粒度为400mu。
进一步的，步骤（3）所述海藻酸钠溶液浓度为30%，所述氯化钙溶液浓度为50%。
对比实施例1
本对比实施例相比于实施例1，省略了抗菌肽的提取和加入操作步骤，除此之外的方法步骤均相同。
对比实施例2
本对比实施例相比于实施例1，省略了硅胶的处理和加入操作步骤，除此之外的方法步骤均相同。
由于变形链球菌是口腔天然菌群中占比例最大的链球菌，为牙斑的主要成分之一，所以本实验选用变形链球菌为实验对象，将上述各实施例和对比实施例条件下制得的样品，称取1g粉体浸入浓度为106cfu/mL，体积为5mL的变形链球菌菌液中振荡培养1h，然后经过样品洗脱，活菌计数后计算抗菌率，并且每隔一个小时进行活菌记数，计算抗菌期效，结果如表1所示：
表1
由表1可知，本发明制备的抗菌微囊具有良好的抗菌效果，并且抗菌期效较长。
Claims (5)
1.一种用于义齿清洁剂的抗菌微囊，其特征在于，由以下原料制成：
抗菌肽溶液10-20，硅胶20-30，硅烷偶联剂KH-550 2-3，正丙胺1-2，海藻酸钠溶液30-50，氯化钙溶液30-50。
2. 根据权利要求1所述的一种用于义齿清洁剂的抗菌微囊，其特征在于，所述抗菌肽溶液的制备方法为：将新鲜的鱼鳞用蒸馏水冲洗3-5次后，加入体积为10-50倍的丙酮，加热至30-35℃，超声20-30min，除去表面油污和杂蛋白，然后取出更换丙酮，重复上述操作2-3次后，取出鱼鳞，30-40℃鼓风干燥箱中烘干，然后加入到5-10倍体积的水中，加热至35-38℃，用30-50%的乙酸溶液调pH 值至1.8-2.4，加入酸性蛋白酶酶解5-6h，2000-3000rpm转速下离心 25-30min，取上清液，升温至98-100℃灭酶5-10min，得抗菌肽溶液，放置于-10~-5℃环境中保存备用。
3.根据权利要求1所述的一种用于义齿清洁剂的抗菌微囊，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：
（1）将硅胶分散在体积10-50倍的乙醇中，超声处理10-20min，然后加入硅烷偶联剂KH-550和正丙胺，升温至50-60℃继续超声20-30min后，过滤，蒸馏水冲洗2-3次后，烘干备用；
（2）将抗菌肽溶液20-30℃下超声5-10min后，加入步骤（1）所得硅胶， 升温至35-40℃下超声5-10min后，转入密闭容器中，抽真空至0.08-0.09MPa，浸泡5-10h后，蒸发除去水分，得到负载抗菌肽的硅胶粒子；
（3）将步骤（2）所得物分散到海藻酸钠溶液中，25-30℃超声处理5-10min后，用玻璃注射器注入氯化钙溶液，转入水浴装置中，300-500rpm转速下反应3-4h，然后静置5-10h，过滤，蒸馏水洗涤2-3次后，放入冷冻干燥机中-20~-10℃下干燥5-10h即可。
4.根据权利要求3所述的一种用于义齿清洁剂的抗菌微囊的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述硅胶的目粒度为300-400mu。
5.根据权利要求3所述的一种用于义齿清洁剂的抗菌微囊的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述海藻酸钠溶液浓度为20-30%，所述氯化钙溶液浓度为40-50%。
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