CN108645948A - 一种苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法，色谱条件：JADE‑PAK ODS‑AQ色谱柱；流动相：以乙腈和冰醋酸的混合液，检测波长：275‑285nm；柱温：25‑35℃；流速：0.8‑1.2mL·min‑1；进样量：5μL；儿茶素对照品溶液的制备：精密称取儿茶素对照品，加入甲醇配成0.10～0.14mg·mL‑1的儿茶素对照品溶液；供试品溶液的制备；HPLC法测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即可。本发明以儿茶素为测定指标，采用高效液相色谱法，建立苦皮藤药材的含量测定方法，为苦皮藤药材的质量标准研究提供实验依据；所述测定方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，为苦皮藤药材质量控制和评价提供依据。

Description

一种苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法
技术领域
本发明涉及一种苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法，属于药品技术的领域。
背景技术
苦皮藤Celastrus angulatus Maxim.为卫矛科(Celastraceae)南蛇藤属(Celastrus)多年生藤状灌木，也叫吊干麻(贵阳)、老虎麻(德江)，该植物系《贵州省中药、民族药质量标准》(2003年版)收载苦皮藤品种的法定来源。在《贵州省中药、民族药质量标准》(2003年版)中仅有几个简单的检查项目。文献报道，从苦皮藤根皮分离并鉴定得到黄烷醇类化合物黄烷-3-醇儿茶素，从苦皮藤中分离得到儿茶素，并发现儿茶素存在两个异构体。
目前未见关于苦皮藤药材中儿茶素含量测定方法的研究报道。限制了对苦皮藤药材的进一步开发利用。另外，没有对其药效成分进行定量检测，难以控制药材及其成方制剂的质量，无法保证临床用药的安全性和有效性。
发明内容
本发明目的在于，提供一种苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法。本发明以儿茶素为测定指标，采用高效液相色谱法，建立苦皮藤药材的含量测定方法，为苦皮藤药材的质量标准研究提供实验依据；所述测定方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，为苦皮藤药材质量控制和评价提供依据。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案实现：一种苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法，所述儿茶素的含量测定方法为：
色谱条件：JADE-PAK ODS-AQ色谱柱，5mm，250×4.6mm；流动相：以乙腈和冰醋酸的混合液为流动相，检测波长：275-285nm；柱温：25-35℃；流速：0.8-1.2mL·min-1；进样量：5μL；
儿茶素对照品溶液的制备：精密称取儿茶素对照品，加入甲醇配成0.10～0.14mg·mL-1的儿茶素对照品溶液；
供试品溶液的制备：精密称取苦皮藤药材粉末，按1g苦皮藤粉末加入15-25ml的比例加入甲醇溶液，称定重量，在25-35℃下超声25-35min，放冷，称定重量，再加入甲醇补足重量，摇匀，用干燥滤器滤过，取续滤液，得供试品溶液；
HPLC法测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即可。
前述的苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法中，所述的以乙腈和冰醋酸的混合液为流动相；以体积比为乙腈溶液∶冰醋酸溶液＝8∶92的乙腈和冰醋酸的混合液为流动相。
前述的苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法中，所述的乙腈溶液为色谱纯乙腈溶液。
前述的苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法中，所述的冰醋酸是浓度为0.5％的冰醋酸水溶液。
前述的苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法中，所述的儿茶素对照品溶液的制备是：精密称取儿茶素对照品，加入浓度为50％的甲醇配成0.12mg·mL-1的儿茶素对照品溶液。
前述的苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法中，所述的供试品溶液的制备是；精密称取苦皮藤药材粉末，按1g苦皮藤粉末加入20ml的比例加入50％甲醇溶液，称定重量，在30℃下超声30min，放冷，称定重量，再加入50％甲醇补足重量，摇匀，用干燥滤器滤过，取续滤液，得供试品溶液。
发明人进行了大量的实验，以下是部分实验研究
实验例.含量测定方法考察
一、色谱条件研究
色谱条件：JADE-PAK ODS-AQ色谱柱，5mm 250×4.6mm；流动相：以乙腈和冰醋酸的混合液为流动相，检测波长：275-285nm；柱温：25-35℃；流速：0.8-1.2mL·min-1；进样量：5μL。
儿茶素对照品溶液的制备：精密称取儿茶素对照品，加入甲醇配成0.10～0.14mg·mL-1的儿茶素对照品溶液。
供试品溶液的制备：精密称取苦皮藤药材粉末，按1g苦皮藤粉末加入15-25ml的比例加入甲醇溶液，称定重量，在25-35℃下超声25-35min，放冷，称定重量，再加入甲醇补足重量，摇匀，用干燥滤器滤过，取续滤液，得供试品溶液。
按本发明检测条件，取儿茶素对照品溶液、供试品溶液分别注入色谱仪中，实验结果显示，供试品溶液中的主要成分出峰的保留时间和儿茶素对照品溶液出峰的保留时间是一致的，分别吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各5μl。
在上述色谱条件下，供试品中儿茶素与对照品色谱峰保留时间一致，供试品溶液色谱中被测化合物峰纯度在99％以上，说明所确定的色谱条件能对供试品中上述化合物有较好的分离，分离度大于1.5且达到基线分离，所建立方法具有良好的专属性。如图1、图2和图3所示。
二、线性范围的考察
精密称取儿茶素对照品适量，加50％甲醇制成浓度为0.12mg/ml的对照品溶液，精密吸取上述溶液1μl、3μl、5μl、7μl、9μl、11μl、13μl，按拟定的色谱条件注入高效液相色谱仪。以峰面积对进样量进行线性回归，得各被测成分的回归方程、相关系数及线性范围，得回归方程y＝369.51x-1.7732(r>0.9999)(见图5a、5b、5c、5d、5e、5f、5g)。结果表明：儿茶素质量浓度在0.12μg～1.56μg范围内与峰面积呈现良好的线性关系。结果如表1所示，线性关系见图4。
表1儿茶素线性关系线性范围考察(n＝7)
三、精密度实验
精密吸取取儿茶素对照品溶液(0.12mg/mL)，按拟定的色谱条件，连续进样6次，每次5μl，测定儿茶素成分峰面积(见附图6a、6b、6c、6d、6e、6f)，结果6次峰面积RSD为0.37％，符合质量标准技术要求(RSD在3％以内)，精密度良好。结果如表2所示。
表2儿茶素精密度考察(n＝6)
四、稳定性实验
按拟定的方法制备供试品溶液1份，以拟定的色谱条件，按0h，3h，6h，12h，18h，24h分别进样5μl，测定儿茶素成分峰面积(见附图7a、7b、7c、7d、7e、7f)。峰面积平均值为233.75，RSD％＝0.52％，结果见表3所示，表明供试品溶液24h内稳定。
表3儿茶素稳定性考察(n＝6)
五、重复性实验
取同一批号的待测药材，按照拟定的测试溶液方法制备供试品溶液6份，按拟定的色谱条件，每次5μl，分别测定儿茶素成分峰面积(见附图8a、8b、8c、8d、8e、8f)，计算测得儿茶素的含量平均值为2.4150mg/g，RSD％＝1.91％，结果如表4所示，表明供试品重复性好。
表4儿茶素重复性考察(n＝6)
六、加样回收率实验
取已知含量的苦皮藤样品6份，每份0.75g，精密称定，精密加入1.448mg/ml儿茶素对照品溶液1ml，按拟定的方法对样品进行处理。按拟定的色谱条件，分别测定儿茶素成分峰面积(见附图9a、9b、9c、9d、9e和9f)，按2015年版《中国药典》四部附录9101计算出回收率。结果如表5所示，该样品的平均回收率为99.08％，RSD％＝1.12％，表明该方法加样回收率结果良好，符合定量分析的要求。
表5儿茶素重复性考察(n＝6)
七、样品的测定
分别精密称取对照品与10个批次的苦皮藤根样品，配置成溶液后按含量测定的方法测定样品儿茶素含量。试验结果如表6所示。色谱图见附图10a、10b、10c、10d、10e、10f、10g、10h、10i、10j。
表6苦皮藤样品测定(n＝10)
由此可知，本发明测定方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠。
与现有技术相比，本发明以儿茶素为测定指标，采用高效液相色谱法，建立苦皮藤药材的含量测定方法，为苦皮藤药材的质量标准研究提供实验依据；所述测定方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，为苦皮藤药材质量控制和评价提供依据。
附图说明
图1为儿茶素对照品色谱图；
图2为本发明供试品溶液的色谱图；
图3为本发明空白对照色谱图；
图4为儿茶素标准曲线图；
图5a、5b、5c、5d、5e、5f和5g为线性考察色谱图；
图6a、6b、6c、6d、6e和6f为精密度考察色谱图；
图7a、7b、7c、7d、7e和7f为稳定性考察色谱图；
图8a、8b、8c、8d、8e和8f为重复性考察色谱图；
图9a、9b、9c、9d、9e和9f为加样回收试验色谱图；
图10a、10b、10c、10d、10e、10f、10g、10h、10i和10j为样品测试色谱图。
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
具体实施方式
实施例1：
一种苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法：
色谱条件：JADE-PAK ODS-AQ色谱柱(5mm，250×4.6mm)，流动相：以体积比为乙腈溶液∶冰醋酸溶液＝8∶92的乙腈和冰醋酸的混合液为流动相，检测波长：280nm；柱温：30℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：5μL；所述的乙腈溶液为色谱纯乙腈溶液；所述的冰醋酸是浓度为0.5％的冰醋酸水溶液；
儿茶素对照品溶液的制备：精密称取儿茶素对照品，加入甲醇配成0.12mg·mL-1的儿茶素对照品溶液；
供试品溶液的制备：精密称取苦皮藤药材粉末，按1g苦皮藤粉末加入20ml的比例加入甲醇溶液，称定重量，在30℃下超声30min，放冷，称定重量，再加入甲醇补足重量，摇匀，用干燥滤器滤过，取续滤液，得供试品溶液；
HPLC法测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即可。
实施例2.
一种苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法：
色谱条件：JADE-PAK ODS-AQ色谱柱(5mm，250×4.6mm)，流动相：以体积比为乙腈溶液∶冰醋酸溶液＝8∶92的乙腈和冰醋酸的混合液为流动相，检测波长：285nm；柱温：35℃；流速：1.2mL·min-1；进样量：5μL；所述的乙腈溶液为色谱纯乙腈溶液；所述的冰醋酸是浓度为0.5％的冰醋酸水溶液；
儿茶素对照品溶液的制备：精密称取儿茶素对照品，加入甲醇配成0.14mg·mL-1的儿茶素对照品溶液；
供试品溶液的制备：精密称取苦皮藤药材粉末，按1g苦皮藤粉末加入25ml的比例加入甲醇溶液，称定重量，在35℃下超声35min，放冷，称定重量，再加入甲醇补足重量，摇匀，用干燥滤器滤过，取续滤液，得供试品溶液；
HPLC法测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即可。
实施例3.
一种苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法：
色谱条件：JADE-PAK ODS-AQ色谱柱(5mm 250×4.6mm)；流动相：以体积比为乙腈溶液∶冰醋酸溶液＝8∶92的乙腈和冰醋酸的混合液为流动相，检测波长：275nm；柱温：25℃；流速：0.8mL·min-1；进样量：5μL；所述的乙腈溶液为色谱纯乙腈溶液；所述的冰醋酸是浓度为0.5％的冰醋酸水溶液；
儿茶素对照品溶液的制备：精密称取儿茶素对照品，加入甲醇配成0.10mg·mL-1的儿茶素对照品溶液；
供试品溶液的制备：精密称取苦皮藤药材粉末，按1g苦皮藤粉末加入15ml的比例加入甲醇溶液，称定重量，在25℃下超声25min，放冷，称定重量，再加入甲醇补足重量，摇匀，用干燥滤器滤过，取续滤液，得供试品溶液；
HPLC法测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即可。

Claims (6)

1.一种苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法，其特征在于：所述儿茶素的含量测定方法为：
色谱条件：JADE-PAK ODS-AQ色谱柱，5mm，250×4.6mm；流动相：以乙腈和冰醋酸的混合液为流动相，检测波长：275-285nm；柱温：25-35℃；流速：0.8-1.2mL·min-1；进样量：5μL；
儿茶素对照品溶液的制备：精密称取儿茶素对照品，加入甲醇配成0.10～0.14mg·mL-1的儿茶素对照品溶液；
供试品溶液的制备：精密称取苦皮藤药材粉末，按1g苦皮藤粉末加入15-25ml的比例加入甲醇溶液，称定重量，在25-35℃下超声25-35min，放冷，称定重量，再加入甲醇补足重量，摇匀，用干燥滤器滤过，取续滤液，得供试品溶液；
HPLC法测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即可。
2.如权利要求1所述的苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法，其特征在于：所述的以乙腈和冰醋酸的混合液为流动相；以体积比为乙腈溶液∶冰醋酸溶液＝8∶92的乙腈和冰醋酸的混合液为流动相。
3.如权利要求2所述的苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法，其特征在于：所述的乙腈溶液为色谱纯乙腈溶液。
4.如权利要求2所述的苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法，其特征在于：所述的冰醋酸是浓度为0.5％的冰醋酸水溶液。
5.如权利要求1所述的苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法，其特征在于：所述的儿茶素对照品溶液的制备是：精密称取儿茶素对照品，加入浓度为50％的甲醇配成0.12mg·mL-1的儿茶素对照品溶液。
6.如权利要求1所述的苦皮藤药材中儿茶素的含量测定方法，其特征在于：所述的供试品溶液的制备是；精密称取苦皮藤药材粉末，按1g苦皮藤粉末加入20ml的比例加入50％甲醇溶液，称定重量，在30℃下超声30min，放冷，称定重量，再加入50％甲醇补足重量，摇匀，用干燥滤器滤过，取续滤液，得供试品溶液。
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