CN108641975A - 一种养殖水体净水剂及其制备方法 - Google Patents

一种养殖水体净水剂及其制备方法 Download PDF

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    • C02F2103/20—Nature of the water, waste water, sewage or sludge to be treated from animal husbandry

Abstract

本发明公开了一种养殖水体净水剂及其制备方法；所述净水剂由巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌组成，菌数数量比为1.8‑2.2∶1.8‑2.2∶0.8‑1∶1.8‑2.2∶0.8‑1，总菌数达到100亿/g。本发明有针对性地对菌种进行筛选，采用巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌配合制成，它们复配在一起发挥微生物的协同作用和增效功能，对水体中的有机物、氨氮、亚硝酸盐等污染物降解、转化，达到净化水质修复水体的目的。本发明的净水剂在无任何毒副作用，成本低廉的同时，还能将复杂的有机物转化为供浮游生物生长繁殖所需的简单无机物，维持水产养殖环境的生态平衡。

Description

一种养殖水体净水剂及其制备方法
技术领域
本发明属于水处理技术领域，尤其是涉及一种养殖水体净水剂及其制备方法
背景技术
水产养殖水体污染是指由于养殖对象自身的分泌物和排泄物、饵料过剩、药物残留、人类的活动(生产、生活)等因素造成水体破坏，水质因子平衡失调的现象。近年来，我国水产养殖业发展迅速，养殖规模不断扩大。但是目前我国的水产养殖多数采用的是高密度集约化的养殖模式，苗种放养过量，大量施肥投饵，使残留饵料、水生生物排泄物及尸体、养殖水体底部沉积物、各种有机无机肥料等富营养因子共处一个水体，进而发生非正常变化，产生有害物质如氨氮、亚硝酸盐、硫化氢等，引起水产养殖动物发病甚至死亡。
目前应用于水产养殖水质处理的有物理、化学、生物等修复方法。物理和化学措施包括施用改良水质的物质、换水、使用增氧设备等，其目的是为有益生物种类和生态学的旺盛及良性运转创造最佳条件。适当使用理化技术是必要的，但是常伴有一定的副作用或大幅度增加养殖成本。因此，开发一些效果良好又能避免物理化学方法弊端的替代品尤为重要。
微生物修复是一种利用微生物对环境污染物吸收、代谢降解的技术。微生物制剂具有无抗药性、无残留、无不良反应、无污染等特点，开发适宜的水产微生物制剂用于水产动物养殖环境的改善和持续发展，应用前景十分广阔。但是目前的微生物制剂还存在一些缺陷：用量大，效果不稳定，菌种来源不明确(如市售)，使用条件受限，不能满足所有养殖水体。
中国专利号ZL201510436128.7，名称“一种应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂及其应用”公开了使用由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、侧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌组成的混合菌种用于处理观赏鱼养殖水体。但上述组合在处理观赏鱼养殖水体的净水效果还未达到最佳，且该组合物菌种成分复杂，尤其凝结粉芽孢杆菌较难获得，增加了应用成本。
发明内容
本发明要解决的第一个技术问题是提供一种养殖水体生物净水剂。该净水剂能将水体中的有机物、氨氮、亚硝酸盐等污染物降解、转化，最终达到水质净化的目的，且具有无毒、安全、高效、无二次污染等特点，尤其针对水产养殖水体处理方面有很好的效果。
本发明要解决的第二个技术问题是提供一种上述养殖水体生物净水剂的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：
一种养殖水体净水剂，由巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌组成，菌数数量比为1.8-2.2∶1.8-2.2∶0.8-1∶1.8-2.2∶0.8-1，总菌数达到100亿/g。
作为技术方案的进一步改进，所述巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌的菌数数量比为2∶2∶1∶2∶1。
作为技术方案的进一步改进，所述净水剂在养殖水体中的添加量为3-8ppm。
作为技术方案的进一步改进，所述净水剂用于降解养殖水体中的氨氮、亚硝酸盐、COD。
为解决上述第二个技术问题，本发明上述一种养殖水体净水剂的制备方法，包括如下步骤：
S1、筛选自集约化养殖后期池塘水体，采集水样1.0g，放入装有9mL无菌水并放有玻璃珠的50mL三角瓶中，置摇床上振荡20min使微生物细胞分散，静置30s即成10-1稀释液；
S2、用1mL无菌吸管吸取10-1稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吸吹3次，混合菌液，即成10-2稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8一系列的稀释菌液；
S3、从10-6、10-7、10-8稀释菌液中各取1mL于平板中，倒入熔化并冷却至45-50℃的培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀；冷却后倒置，于28-30℃培养24-48小时后观察；从固体平板上分离出来的菌株若不是单个菌繁殖而成，则进一步进行分离纯化；在平板上选择生长较好的有代表性的菌落接种斜面，同时做涂片检查，若发现不纯，挑取菌落进一步分离，直至获得纯培养体；
S4、根据细菌的形态特征和生理生化特征对分离的优势菌进行鉴定；从细菌的菌落形态和生理生化实验确定了优势菌种为巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌，将此5种菌均进行单菌株发酵，然后巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌按比例混合，菌数数量比1.8-2.2∶1.8-2.2∶0.8-1∶1.8-2.2∶0.8-1，总菌数达到100亿/g。
作为技术方案的进一步改进，步骤S4中，所述巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌的菌数数量比为2∶2∶1∶2∶1。
如无特殊说明，本发明中的各原料均可通过市售购买获得，本发明中所用的设备可采用所属领域中的常规设备或参照所属领域的现有技术进行。
与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：
针对养殖水体中特有的残留饵料、水生生物排泄物及尸体、底部沉积物、各种富营养因子共处一个水体进而发生非正常变化，产生有害物质如氨氮、亚硝酸盐、硫化氢等，引起水产养殖动物发病甚至死亡的问题，本发明有针对性地对菌种进行筛选，采用巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌配合制成，它们复配在一起发挥微生物的协同作用和增效功能，对水体中的有机物、氨氮、亚硝酸盐等污染物降解、转化，达到净化水质修复水体的目的。
本发明的净水剂在无任何毒副作用，成本低廉的同时，还能将复杂的有机物转化为供浮游生物生长繁殖所需的简单无机物，维持水产养殖环境的生态平衡。
本发明的复合微生物净水剂经过多个菌种间种类和比例的复配，其处理效果稳定，并且无使用条件的限制、菌种易获得、能够满足所有养殖水体净水的需求。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。
本发明一种养殖水体净水剂，由巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌组成，菌数数量比为1.8-2.2∶1.8-2.2∶0.8-1∶1.8-2.2∶0.8-1，总菌数达到100亿/g。
硝化细菌是一种好氧性的化能自养细菌，是指利用氨或亚硝酸盐作为主要生存能源，以及利用二氧化碳作为主要碳源的一类细菌，包括亚硝化细菌和硝化细菌。亚硝化细菌将水体中的氨氮转化为亚硝酸盐，硝化细菌将亚硝酸盐氧化为对水生动物无害的硝酸盐。硝化细菌是一种用于控制养殖水体氨浓度的处理剂，使用相当方便，能发挥立竿见影的效果。所述维氏硝化杆菌为硝化细菌中的一种，可以通过购买获得，也可通过从池塘底泥样品中筛选获得。
乳酸菌是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的通称。这类细菌在自然界分布极为广泛，具有丰富的物种多样性。乳酸菌可以促进养殖水体饵料生物大量繁殖、生长，并且可分解残饵、粪便及水中有机质，改良水体环境，抑制水体中有害菌的繁殖生长，调节菌藻平衡。所述嗜酸乳酸杆菌为乳酸菌中的一种，可以通过购买获得，也可通过从池塘底泥样品中筛选获得。
反硝化细菌是指一类将硝态氮还原为气态氮的细菌。在水产养殖中反硝化细菌能还原水体中的亚硝酸盐，使之生成无害的氮气，解除亚硝酸盐的危害；消耗氮素营养，抑制藻类过度繁殖，净化水体；抑制致病菌；改良底质。传统观点认为反硝化作用的一个重要条件是厌氧环境，在O2和NO3 -同时存在时，反硝化菌首先利用O2作为最终电子受体，只有溶解氧浓度接近零时才开始发挥反硝化作用。但从20世纪50年代以来好氧反硝化现象不断地被报道。近年来，还发现存在自养型反硝化菌，能利用一些无机物在氧化过程中释放出来的能量将硝酸盐还原，发挥反硝化作用。所述脱氮硫杆菌为反硝化细菌中的一种，可以通过购买获得，也可通过从池塘底泥样品中筛选获得。
芽孢杆菌为革兰氏染色阳性，是普遍存在的一类好氧性细菌，在生长后期能形成芽孢(内生孢子)的杆菌。芽孢杆菌能够清除长时间残留于养殖水域底部废物，尤其是老池底部积累的大量残余饵料、排泄废物、动植物残体以及有害气体(氨氮、硫化氢等)，使之先分解为小分子(多肽、高级脂肪酸等)，后分解为更小分子有机物(氨基酸、低级脂肪酸、单糖、环烃等)，最终分解为二氧化碳、硝酸盐、硫酸盐等，有效降低了水中的COD、BOD，使水体中的氨氮、亚硝酸盐、硫化物浓度降低，从而有效地改善水质。同时还能为以单细胞藻类为主的浮游植物提供营养物质，促进繁殖。这些浮游植物的光合作用，又为池内水产动物的呼吸、有机物的分解提供氧气，从而形成一个良性生态循环。由于芽孢杆菌大量繁殖，在池内形成优势种群，可抑制病原微生物的繁殖，减少疾病发生。所述巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌选自芽孢杆菌，可以通过购买获得，也可通过从池塘底泥样品中筛选获得。
申请人经长期试验研究发现，将单一菌种、或者单一类别的不同菌种组合，针对养殖水体的净水处理，往往不能达到理想的要求。而将上述五种四类别的菌种混合在一起，经复配，通过菌种种间相互促进，共同生长，完成对污染物的全面分解，从而达到在有机污染处理过程中的相互协同的作用，能够充分发挥每类微生物的单菌种作用和复合后的协同作用和增效功能，对水体中的有机物、氨氮、亚硝酸盐等污染物降解、转化，达到净化水质修复水体的目的。另外，该5种微生物均为池塘水样中的优势微生物，在池塘水体中能够快速繁殖，并起到复合协同净水作用。
在本发明某些实施例中，所述巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌的菌数数量比为2∶2∶1∶2∶1。
在本发明某些实施例中，所述净水剂在养殖水体中的添加量为3-8ppm。
上述净水剂尤其适用于降解养殖水体中的氨氮、亚硝酸盐、COD。
申请人在实践中发现，按照特定比例使用本发明的巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌的菌种组合进行复配，如为2∶2∶1∶2∶1，比单独使用某一种、单独使用某一类、或者单独使用某几种的组合效果要好，尤其好于现有技术中常用到的由单一类别的芽孢杆菌组成的微生物组合物。
发明上述一种养殖水体净水剂的制备方法，包括如下步骤：
S1、筛选自集约化养殖后期池塘水体，采集水样1.0g，放入装有9mL无菌水并放有玻璃珠的50mL三角瓶中，置摇床上振荡20min使微生物细胞分散，静置30s即成10-1稀释液；
S2、用1mL无菌吸管吸取10-1稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吸吹3次，混合菌液，即成10-2稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8一系列的稀释菌液；
S3、从10-6、10-7、10-8稀释菌液中各取1mL于平板中，倒入熔化并冷却至45-50℃的培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀；冷却后倒置，于28-30℃培养24-48小时后观察；从固体平板上分离出来的菌株若不是单个菌繁殖而成，则进一步进行分离纯化；在平板上选择生长较好的有代表性的菌落接种斜面，同时做涂片检查，若发现不纯，挑取菌落进一步分离，直至获得纯培养体；
S4、根据细菌的形态特征和生理生化特征对分离的优势菌进行鉴定；从细菌的菌落形态和生理生化实验确定了优势菌种为巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌，将此5种菌均进行单菌株发酵，然后巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌按比例混合，菌数数量比1.8-2.2∶1.8-2.2∶0.8-1∶1.8-2.2∶0.8-1，总菌数达到100亿/g。
在本发明某些实施例中，步骤S4中，所述巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌的菌数数量比为2∶2∶1∶2∶1。
实施例1
一种养殖水体净水剂，包括如下菌数数量配比的组分：巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌，菌数数量比为2∶2∶1∶2∶1，添加量为5ppm。
上述养殖水体净水剂的制备方法如下：
S1、筛选自集约化养殖后期池塘水体，采集水样1.0g，放入装有9mL无菌水并放有玻璃珠的50mL三角瓶中，置摇床上振荡20min使微生物细胞分散，静置30s即成10-1稀释液；
S2、用1mL无菌吸管吸取10-1稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吸吹3次，混合菌液，即成10-2稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8一系列的稀释菌液；
S3、从10-6、10-7、10-8稀释菌液中各取1mL于平板中，倒入熔化并冷却至45-50℃的培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀；冷却后倒置，于28-30℃培养24-48小时后观察；从固体平板上分离出来的菌株若不是单个菌繁殖而成，则进一步进行分离纯化；在平板上选择生长较好的有代表性的菌落接种斜面，同时做涂片检查，若发现不纯，挑取菌落进一步分离，直至获得纯培养体；
S4、根据细菌的形态特征和生理生化特征对分离的优势菌进行鉴定；从细菌的菌落形态和生理生化实验确定了优势菌种为巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌，将此5种菌均进行单菌株发酵，然后巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌按比例混合，菌数数量比2∶2∶1∶2∶1，总菌数达到100亿/g。
对比例1
一种养殖水体净水剂，包括如下菌数数量配比的组分：巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌，菌数数量比为2∶2∶1∶2，添加量为5ppm。
对比例2
一种养殖水体净水剂，包括如下菌数数量配比的组分：巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、维氏硝化杆菌，菌数数量比为2∶2∶1∶1，添加量为5ppm。
对比例3
一种养殖水体净水剂，包括如下菌数数量配比的组分：巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌，菌数数量比为2∶2∶2∶1，添加量为5ppm。
对比例4
一种养殖水体净水剂，包括如下菌数数量配比的组分：巨大芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌，菌数数量比为2∶1∶2∶1，添加量为5ppm。
对比例5
一种养殖水体净水剂，包括如下菌数数量配比的组分：巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌的菌数数量比为2∶2，添加量为5ppm。
对比例6
一种养殖水体净水剂，包括如下菌数数量配比的组分：巨大芽孢杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌，菌数数量比为2∶2∶1，添加量为5ppm。
对比例7
一种养殖水体净水剂，包括如下菌数数量配比的组分：巨大芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、维氏硝化杆菌，菌数数量比为2∶1∶1，添加量为5ppm。
对比例8
一种养殖水体净水剂，包括如下菌数数量配比的组分：脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌，菌数数量比为1∶2∶1，添加量为5ppm。
对比例9
一种养殖水体净水剂，包括如下菌数数量配比的组分：嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌，菌数数量比为2∶1，添加量为5ppm。
实验报告：
1、对虾养殖池
1)设置三个组：空白组、对照组、本发明组。
空白组不投放任何处理剂；
对照组1投放对比例1，对照组2投放对比例5，对照组3投放对比例6，对照组4投放对比例7；
本发明组投放实施例1。
2)结果：见表1，本发明组的NH3-N、亚硝酸盐、COD明显低于空白组和对照组。
表1各组NH3-N、亚硝酸盐、COD等指标
注：NH3-N测定采用纳氏试剂分光光度法；亚硝酸盐测定采用N-(1-萘基)-乙二胺光度法；COD测定采用COD快速测定仪测定。
2、罗非鱼养殖池
1)设置三个组：空白组、对照组、本发明组。
空白组不投放任何处理剂；
对照组1投放对比例2，对照组2投放对比例5，对照组3投放对比例6，对照组4投放对比例8；
本发明组投放实施例1。
2)结果：见表2，本发明组的NH3-N、亚硝酸盐、COD明显低于空白组和对照组。
表2各组NH3-N、亚硝酸盐、COD等指标
空白组 对照组1 对照组2 对照组3 对照组4 本发明组
NH3-N(mg/L) 1.08 0.69 0.95 0.79 0.82 0.03
亚硝酸盐(mg/L) 2.45 1.26 1.67 1.50 1.56 0.05
COD(mg/L) 90.77 50.42 70.42 62.46 63.67 25.90
注：注：NH3-N测定采用纳氏试剂分光光度法；亚硝酸盐测定采用N-(1-萘基)-乙二胺光度法；COD测定采用COD快速测定仪测定。
3、草鱼养殖池
1)设置三个组：空白组、对照组、本发明组。
空白组不投放任何处理剂；
对照组1投放对比例3，对照组2投放对比例5，对照组3投放对比例7，对照组4投放对比例8；
本发明组投放实施例1。
2)结果：见表3，本发明组的NH3-N、亚硝酸盐、COD明显低于空白组和对照组。
表3各组NH3-N、亚硝酸盐、COD等指标
空白组 对照组1 对照组2 对照组3 对照组4 本发明组
NH3-N(mg/L) 0.95 0.58 0.81 0.65 0.71 0.04
亚硝酸盐(mg/L) 2.88 1.49 1.96 1.68 1.73 0.03
COD(mg/L) 72.45 45.51 61.47 52.44 55.03 19.50
注：注：NH3-N测定采用纳氏试剂分光光度法；亚硝酸盐测定采用N-(1-萘基)-乙二胺光度法；COD测定采用COD快速测定仪测定。
4、鲤鱼养殖池
1)设置三个组：空白组、对照组、本发明组。
空白组不投放任何处理剂；
对照组1投放对比例4，对照组2投放对比例5，对照组3投放对比例7，对照组4投放对比例9；
本发明组投放实施例1。
2)结果：见表4，本发明组的NH3-N、亚硝酸盐、COD明显低于空白组和对照组。
表4各组NH3-N、亚硝酸盐、COD等指标
空白组 对照组1 对照组2 对照组3 对照组4 本发明组
NH3-N(mg/L) 0.94 0.56 0.78 0.62 0.70 0.04
亚硝酸盐(mg/L) 2.35 0.93 2.16 1.57 1.87 0.04
COD(mg/L) 70.69 42.92 59.83 50.21 55.09 20.31
注：NH3-N测定采用纳氏试剂分光光度法；亚硝酸盐测定采用N-(1-萘基)-乙二胺光度法；COD测定采用COD快速测定仪测定。
综上所述：按照特定比例使用本发明的巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌的菌种组合进行复配，比单独使用某一种、单独使用某一类、或者单独使用某几种的组合效果要好，尤其好于现有技术中常用到的由单一类别的芽孢杆菌组成的微生物组合物。
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (6)

1.一种养殖水体净水剂，其特征在于：由巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌组成，菌数数量比为1.8-2.2∶1.8-2.2∶0.8-1∶1.8-2.2∶0.8-1，总菌数达到100亿/g。
2.根据权利要求1所述的养殖水体净水剂，其特征在于：所述巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌的菌数数量比为2∶2∶1∶2∶1。
3.根据权利要求1所述的养殖水体净水剂，其特征在于：所述净水剂在养殖水体中的添加量为3-8ppm。
4.根据权利要求1所述的养殖水体净水剂，其特征在于：所述净水剂用于降解养殖水体中的氨氮、亚硝酸盐、COD。
5.如权利要求1-4任一所述的养殖水体净水剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
S1、筛选自集约化养殖后期池塘水体，采集水样1.0g，放入装有9mL无菌水并放有玻璃珠的50mL三角瓶中，置摇床上振荡20min使微生物细胞分散，静置30s即成10-1稀释液；
S2、用1mL无菌吸管吸取10-1稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吸吹3次，混合菌液，即成10-2稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8一系列的稀释菌液；
S3、从10-6、10-7、10-8稀释菌液中各取1mL于平板中，倒入熔化并冷却至45-50℃的培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀；冷却后倒置，于28-30℃培养24-48小时后观察；从固体平板上分离出来的菌株若不是单个菌繁殖而成，则进一步进行分离纯化；在平板上选择生长较好的有代表性的菌落接种斜面，同时做涂片检查，若发现不纯，挑取菌落进一步分离，直至获得纯培养体；
S4、根据细菌的形态特征和生理生化特征对分离的优势菌进行鉴定；从细菌的菌落形态和生理生化实验确定了优势菌种为巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌，将此5种菌均进行单菌株发酵，然后巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌按比例混合，菌数数量比1.8-2.2∶1.8-2.2∶0.8-1∶1.8-2.2∶0.8-1，总菌数达到100亿/g。
6.根据权利要求5所述的养殖水体净水剂的制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、脱氮硫杆菌、嗜酸乳酸杆菌、维氏硝化杆菌的菌数数量比为2∶2∶1∶2∶1。
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