CN108619187B - 蛇床子提取物及其制备与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中医药领域，具体涉及蛇床子提取物及其制备与应用。本研究以蛇床子提取物(水提和醇提)为研究对象，结合电生理膜片钳技术，在瞬转了人TRPV1的HEK293细胞上测试它能否活化或抑制TRPV1，以探讨蛇床子发挥药效作用的分子靶点。首次发现：蛇床子的水提物和醇提物都激活TRPV1通道，产生跨膜电流。因此，蛇床子的辛温之性很可能是TRPV1活化的结果，其部分药效可能是通过TRPV1通道发挥，TRPV1是蛇床子产生温肾壮阳，杀虫止痒作用的分子靶点之一。
Description
技术领域
本发明属于中医药领域，具体涉及蛇床子提取物及其制备与应用。
背景技术
蛇床子最早收录于《神农本草经》，具有数千年的医疗实践应用，别名野茴香、野胡荽，为伞形科植物蛇床的干燥成熟果实，有浓郁的芳香气息。
《神农本草经》将蛇床子列为上品，概述其性味功效：“味苦，平。主妇人阴中肿痛，男子阳痿、湿痒，除痹气，利关节，癫痫恶创(疮)。”其后不久的《本草经集注》(草木上品)记载为“味苦、辛、甘，平，无毒。主治妇人阴中肿痛，男子阴痿湿痒，除痹气，利关节，癫痫，恶疮。温中下气，令妇人子脏热，男子阴强。”《金匮要略·妇人杂病脉证并治》：“妇人阴寒，温中坐药，蛇床子散主之。……绵裹内之，自然温。”《备急千金要方·杂治第十七》“治产后阴下脱方：蛇床子一升，布裹炙熨之。亦治产后阴中痛。”又有外治方：“治男女阴中疮湿痒方(黄连、栀子、甘草、黄柏、蛇床子)，……为细末，以粉疮上……深者，用绵裹纳疮中。”现代《中药学》将其应用概括为：“阴部湿痒，湿疹，疥癣；寒湿带下，湿痹腰痛；肾虚阳痿，宫冷不孕”，既可内服，又可外用。现代研究显示蛇床子具有抗菌、止痒、止痛、防治疗骨质疏松、保护心血管、抗血栓、镇静催眠等作用。
从分子方面理解蛇床子的功效有重要意义，但是蛇床子的作用机制尚不知晓。
发明内容
为了克服现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供蛇床子提取物及其制备与应用。
为了实现上述目的以及其他相关目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的第一方面，提供蛇床子提取物用于制备TRPV1激动剂的用途。
一种实施方式中，所述TRPV1激动剂至少具有以下功效之一：
(1)激活TRPV1通道、(2)诱导产生跨膜电流。
一种实施方式中，所述TRPV1激动剂必然包括所述蛇床子提取物，并为蛇床子提取物作为发挥前述功用的有效成分。
所述TRPV1激动剂中，发挥前述功用的有效可仅为蛇床子提取物，亦可包含其他可起到类似功用的分子。
亦即，蛇床子提取物为所述TRPV1激动剂的唯一有效成分或有效成分之一。
一种实施方式中，所述蛇床子提取物，为以蛇床子为原料提取有效成分制得。
本领域技术人鱼可采用各种常规的中药有效成分提起方法来提取其有效成分，如常规的煎煮法、水提法、水提醇沉法、醇提法、醇提水沉法、盐析法等。
其中，水提法为：以水为溶剂提取药材有效成分。
水提醇沉法为：先以水为溶剂提取药材有效成分，再用不同浓度的乙醇沉淀去除提取液中杂质的方法。一般含乙醇量达到50～60％(重量体积比即g/100mL)时，可去除淀粉等杂质，当含醇量达75％以上，除鞣质、水溶性色素等少数无效成分外，其余大部分杂质均可沉淀去除。
醇提水沉法为：先以适宜浓度的乙醇提取药材成分，再用水除去提取液中杂质的方法。
一种实施方式中，提取有效成分后可再经常规的步骤浓缩、纯化或干燥获得蛇床子提取物。
其中浓缩的方法包括但不限于：常压蒸发、减压蒸发、薄膜蒸发、多效蒸发，纯化的方法包括但不限于：盐析纯化、大孔树脂吸附纯化、乙醇沉淀纯化、离子交换树脂纯化、絮凝沉淀纯化、膜分离纯化、聚酰胺吸附纯化、硅胶吸附层析纯化等，干燥的方法包括但不限于：烘干法、鼓式干燥法、带式干燥法、吸湿干燥法、沸腾干燥法、喷雾干燥法、减压干燥法、冷冻干燥法、红外线干燥法、微波干燥法等。
根据蛇床子的有效成分的特性，可采用不同的提取工艺。
一种实施方式中，所述蛇床子提取物为蛇床子水提物或蛇床子醇提物。
所述蛇床子水提物，是以蛇床子为原料，以水为溶剂提取有效成分制得。
所述蛇床子醇提物，是以蛇床子为原料，以乙醇为溶剂提取有效成分制得。
一种实施方式中，所述蛇床子水提物的制备方法，包括如下步骤：称量蛇床子，倒入水浸泡，加热至沸腾后倒出药汁，剩余的药渣加水第二次煎煮，合并两次药汁。
一种实施方式中，蛇床子与水的质量体积比例范围为50g：400～500ml。
例如，一种实施方式中，蛇床子与水的质量体积比例范围为50g：400。
一种实施方式中，称量蛇床子，倒入水浸泡30～40min。
例如，一种实施方式中，称量蛇床子，倒入水浸泡30min。
一种实施方式中，加热至沸腾30～40min。
例如，一种实施方式中，加热至沸腾30min。
一种实施方式中，剩余的药渣加水250～400ml第二次煎煮。
例如，一种实施方式中，剩余的药渣加水250第二次煎煮。
一种实施方式中，合并后的药汁，过滤，加热浓缩，离心，取上液，即得蛇床子水提物。
一种实施方式中，所述蛇床子水提物的浓度为0.9～1.1g生药/ml。
例如，一种实施方式中，所述蛇床子水提物的浓度为1.0g生药/ml。
一种实施方式中，所述蛇床子醇提物的制备方法包括如下步骤：
称量蛇床子，加入乙醇浸泡，回流提取，收集提滤液，过滤，剩余的药渣再倒入乙醇继续回流提取，收集并合并提滤液，回收乙醇，所得的提取物用水调整浓度，获得蛇床子醇提物。
一种实施方式中，蛇床子粉碎后，加入乙醇浸泡。
一种实施方式中，所述乙醇为70～80％乙醇。
优选地，所述乙醇为75％乙醇(重量体积比即g/100mL)。
一种实施方式中，蛇床子与乙醇的质量体积比例范围为80g：640～800ml。
例如，一种实施方式中，蛇床子与乙醇的质量体积比例范围为80g：640ml。
一种实施方式中，加入乙醇浸泡30～40min。
例如，一种实施方式中，加入乙醇浸泡30min。
一种实施方式中，称量蛇床子，加入乙醇浸泡，回流提取1.8～2.2h。
例如，一种实施方式中，称量蛇床子，加入乙醇浸泡，回流提取2h。
一种实施方式中，剩余的药渣再倒入400～640ml乙醇继续回流提取。
例如，一种实施方式中，剩余的药渣再倒入400ml乙醇继续回流提取。
一种实施方式中，剩余的药渣再倒入乙醇继续回流提取0.8～1.2h。
例如，一种实施方式中，剩余的药渣再倒入乙醇继续回流提取1.0h。
一种实施方式中，所得的提取物用水调整浓度至0.9～1.1g(生药)/ml。
例如，一种实施方式中，所得的提取物用水调整浓度至1.0g(生药)/ml。
本发明的第二方面，提供前述蛇床子提取物用于制备TRPV1活化剂的用途。
一种实施方式中，所述TRPV1活化剂必然包括所述蛇床子提取物，并为蛇床子提取物作为发挥功用的有效成分。
所述TRPV1活化剂中，发挥功用的有效可仅为蛇床子提取物，亦可包含其他可起到类似功用的分子。
亦即，蛇床子提取物为所述TRPV1活化剂的唯一有效成分或有效成分之一。
本发明的第三方面，提供前述蛇床子提取物用于制备TRPV1通道激活剂的用途。
一种实施方式中，所述TRPV1通道激活剂必然包括所述蛇床子提取物，并为蛇床子提取物作为发挥功用的有效成分。
所述TRPV1通道激活剂中，发挥功用的有效可仅为蛇床子提取物，亦可包含其他可起到类似功用的分子。
亦即，蛇床子提取物为所述TRPV1通道激活剂的唯一有效成分或有效成分之一。
本发明的第四方面，提供前述蛇床子提取物用于制备跨膜电流诱导剂的用途。
一种实施方式中，所述跨膜电流诱导剂必然包括所述蛇床子提取物，并为蛇床子提取物作为发挥功用的有效成分。
所述跨膜电流诱导剂中，发挥功用的有效可仅为蛇床子提取物，亦可包含其他可起到类似功用的分子。
亦即，蛇床子提取物为所述跨膜电流诱导剂的唯一有效成分或有效成分之一。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本研究以蛇床子提取物(水提和醇提)为研究对象，结合电生理膜片钳技术，在瞬转了人TRPV1的HEK293细胞上测试它能否活化或抑制TRPV1，以探讨蛇床子发挥药效作用的分子靶点。首次发现：蛇床子的水提物和醇提物都激活TRPV1通道，产生跨膜电流。因此，蛇床子的辛温之性很可能是TRPV1活化的结果，其部分药效可能是通过TRPV1通道发挥，TRPV1是蛇床子产生温肾壮阳，杀虫止痒作用的分子靶点之一。
附图说明
图1A：蛇床子水提物作用于hTRPV1/HEK293效应研究，各组+100mV电压下电流峰值对比统计图(Mean±SEM)。
图1B：蛇床子水提物作用于hTRPV1/HEK293效应研究，+100mV电压下跨膜电流时程图，其中小图为在细胞外液(a)、蛇床子提取物峰值(b)、辣椒素峰值(c)点用电压斜坡(voltage ramp)检测到的I-V关系曲线，**P<0.01，表示组之间的差异显著，n＝6。
图2A：蛇床子醇提物对转染hTRPV1的HEK293细胞全细胞电流影响，各组+100mV电压下电流峰值对比统计图(Mean±SEM)。
图2B：蛇床子醇提物对转染hTRPV1的HEK293细胞全细胞电流影响，+100mV电压下跨膜电流时程图，**P<0.01，表示组之间的差异显著，n＝6。
具体实施方式
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的技术。
实施例1
1材料和方法
1.1药品及试剂
中药蛇床子(购于北京同仁堂东四药店，为伞形科植物蛇床的干燥成熟果实)，TRPV1plasmid(Origene，RC217653)，质粒GFP(北京爱思益普)、DMEM cell culturemedium、Fetal Bovine Serum、penicillin/streptomycin(Gibco)、Lipofectamine2000(invitrogen)、Capsaicin、DMSO、Sodium chloride、Potassium chloride、Cesiumchloride、EGTA、HEPES、Magnesium chloride hexahydrate、D-glucose、Calciumchloride(Sigma)。
1.2仪器
300克密封型摇摆式粉碎XL-06B(广州旭朗)、旋转蒸发器RE-52(上海虹昕)、数显恒温水浴锅HH-6(常州润华)、SHZIII型循环水真空泵(上海亚荣)、EPC-10Quattro膜片钳放大器(Heka)、PatchMaster数据获取软件(Heka)、P-97拉制仪器(Sutter Instruments)、IGOR-Pro分析软件(WaveMetrics Inc)等。
1.3实验步骤
1.3.1蛇床子提取物制备
第Ⅰ组水提物制备：用电子秤量得50g蛇床子，倒入400ml双蒸水浸泡30min，加热至沸腾30min后倒出药汁，剩余的药渣加250ml双蒸水第二次煎煮，合并两次药汁，双层滤纸过滤，99℃恒温水浴锅加热浓缩调浓度为1g/ml，3500r/min离心15min后取上液即得第Ⅰ组蛇床子水提物，4℃冰箱中保存备用。
第Ⅱ组水提物制备：用电子秤量得50g蛇床子，倒入500ml双蒸水浸泡40min，加热至沸腾40min后倒出药汁，剩余的药渣加400ml双蒸水第二次煎煮，合并两次药汁，双层滤纸过滤，99℃恒温水浴锅加热浓缩调浓度为1.1g/ml，3500r/min离心15min后取上液即得第Ⅱ组蛇床子水提物，4℃冰箱中保存备用。
第Ⅲ组水提物制备：用电子秤量得50g蛇床子，倒入450ml双蒸水浸泡35min，加热至沸腾35min后倒出药汁，剩余的药渣加325ml双蒸水第二次煎煮，合并两次药汁，双层滤纸过滤，99℃恒温水浴锅加热浓缩调浓度为0.9g/ml，3500r/min离心15min后取上液即得第Ⅲ组蛇床子水提物，4℃冰箱中保存备用。
第Ⅰ组醇提物制备：秤量80g蛇床子，粉碎后加入640ml的75％乙醇浸泡30min，转移入回流提取器中于95℃恒温水浴锅上回流提取2h，收集药液，过滤，剩余的药渣再倒入400ml乙醇继续回流1h，2次所提滤液倾入旋转蒸发器上回收乙醇，所得的提取物(膏状物不含乙醇)用双蒸水调浓度至1g(生药)/ml。
第Ⅱ组醇提物制备：秤量80g蛇床子，粉碎后加入800ml的70％乙醇浸泡40min，转移入回流提取器中于95℃恒温水浴锅上回流提取2.2h，收集药液，过滤，剩余的药渣再倒入640ml乙醇继续回流提取1.2h，2次所提滤液倾入旋转蒸发器上回收乙醇，所得的提取物(膏状物不含乙醇)用双蒸水调浓度至0.9g(生药)/ml。
第Ⅲ组醇提物制备：秤量80g蛇床子，粉碎后加入720ml的80％乙醇浸泡35min，转移入回流提取器中于95℃恒温水浴锅上回流提取1.8h，收集药液，过滤，剩余的药渣再倒入520ml乙醇继续回流提取0.8h，2次所提滤液倾入旋转蒸发器上回收乙醇，所得的提取物(膏状物不含乙醇)用双蒸水调浓度至1.1g(生药)/ml。
以上提取物均分装后保存于-20℃低温冰箱备用。
1.3.2电生理膜片钳实验
1.3.2.1细胞培养和转染
细胞培养用含10％胎牛血清的培养基。转染前24h将HEK293细胞植于直径12mm细胞爬片中并置于细胞培养皿中，于37℃培养箱培养。在转染前换为不含抗生素的培养基，置于培养箱中预热。将转染试剂Lipofectamine2000，质粒与稀释液DMEM在室温下平衡15min至20℃左右，使用无血清的DMEM将转染试剂稀释至终浓度为5μL/100μL(转染试剂/DMEM)，使用无菌管稀释，轻柔混匀。将2μg TRPV1质粒和600ng GFP质粒共同加入100μL转染试剂稀释液中，轻柔混匀后将转染试剂、DNA复合物于15-20℃下静置15min。从培养箱中取出预热的细胞培养皿，将转染试剂、DNA复合物逐滴加入，转染后4h换成完全培养基(无双抗)，孵育细胞24到72h内进行电生理实验。
1.3.2.2全细胞膜片钳实验
实验在室温(20～25℃)下进行，将细胞爬片放置于专门的记录小室中，固定浴液电极。显微镜下选取外形完整，形状规则，边缘整齐，表面光滑无颗粒，横纹清晰，无收缩的长杆状细胞。膜片钳放大器系统通过A/D和D/A数据转换器与计算机进行连接，PatchMaster软件控制相关的刺激信号以及电流、电压信号的采集。玻璃微电极拉制仪拉制玻璃毛胚成尖端直径1-1.5μm的玻璃微电极，灌入电极内液后安装于电极夹持器上与探头和放大器联通。显微镜观察下用三维操纵仪调节电极尖端的位置使其移向细胞表面，轻压细胞微变形，1-mL注射器负压吸引封接细胞，形成高阻封接(Giga seal)至1GΩ以上，完成封接后进行电极电容补偿。观察1-2min，如果不能自行破膜，则用1-mL注射器负压吸引破膜，形成全细胞的记录模式。对全细胞膜电容进行补偿后给予相应的测试程序，进行信号采集。采样频率为10kHz。
细胞维持电压(holding potential,Vhold)设定为-80mV，在Vhold的基础上间隔1s给予细胞一个从-100mV到+100mV连续电压斜坡(voltage ramp)刺激或-80mV电压下连续记录。
1.4统计学方法
GraphPad Prism 6及SPSS 22统计软件进行图像处理和数据分析，数据表示为Mean±SEM，细胞滴加前后产生的电流对比采用配对t检验。多组间两两比较时，行单因素方差分析(one-way ANOVA)后，采用Student Newman Keuls Test检验，n表示重复的细胞个数。
2结果
2.1蛇床子水提物作用于hTRPV1/HEK293效应研究
第Ⅰ组蛇床子水提物稀释成5mg(生药)/ml，测试其对表达hTRPV1/HEK293细胞跨膜电流的作用，实验过程中先滴入细胞外液作为阴性对照，观察电流的基线水平，然后滴加测试样品，电流到达峰值并开始下降后用细胞外液洗脱(washout)，最后施加阳性药30μM辣椒素检验所记录细胞是否成功转染。结果显示：与正常细胞外液(Pre)对比，第Ⅰ组蛇床子水提物使hTRPV1/HEK293细胞诱导产生明显的跨膜电流(图1A和图1B)，蛇床子水提物滴加入空转的HEK293细胞中不产生跨膜电流(数据不显示)。
同样地，第Ⅱ组蛇床子水提物稀释成5mg(生药)/ml，测试其对表达hTRPV1/HEK293细胞跨膜电流的作用，实验过程中先滴入细胞外液作为阴性对照，观察电流的基线水平，然后滴加测试样品，电流到达峰值并开始下降后用细胞外液洗脱(washout)，最后施加阳性药30μM辣椒素检验所记录细胞是否成功转染。结果显示：与正常细胞外液(Pre)对比，第Ⅰ组蛇床子水提物使hTRPV1/HEK293细胞诱导产生明显的跨膜电流，蛇床子水提物滴加入空转的HEK293细胞中不产生跨膜电流。
同样地，第Ⅲ组蛇床子水提物稀释成5mg(生药)/ml，测试其对表达hTRPV1/HEK293细胞跨膜电流的作用，实验过程中先滴入细胞外液作为阴性对照，观察电流的基线水平，然后滴加测试样品，电流到达峰值并开始下降后用细胞外液洗脱(washout)，最后施加阳性药30μM辣椒素检验所记录细胞是否成功转染。结果显示：与正常细胞外液(Pre)对比，第Ⅰ组蛇床子水提物使hTRPV1/HEK293细胞诱导产生明显的跨膜电流，蛇床子水提物滴加入空转的HEK293细胞中不产生跨膜电流。
2.2蛇床子乙醇提取物量效研究
将第Ⅰ组蛇床子醇提物予细胞外液稀释成3mg/ml和10mg/ml，测试这两个浓度的蛇床子醇提物对表达hTRPV1的HEK293细胞跨膜电流的影响。结果显示：与正常细胞外液(Pre)对比，蛇床子醇提物3mg/ml、10mg/ml这两个浓度均可以使细胞产生跨膜电流(P＜0.01)，且3mg/ml、10mg/ml这两个浓度产生的跨膜电流无显著差异(图2)。
同样地，将第Ⅱ组蛇床子醇提物予细胞外液稀释成3mg/ml和10mg/ml，测试这两个浓度的蛇床子醇提物对表达hTRPV1的HEK293细胞跨膜电流的影响。结果显示：与正常细胞外液(Pre)对比，蛇床子醇提物3mg/ml、10mg/ml这两个浓度均可以使细胞产生跨膜电流(P＜0.01)，且3mg/ml、10mg/ml这两个浓度产生的跨膜电流无显著差异。
同样地，将第Ⅲ组蛇床子醇提物予细胞外液稀释成3mg/ml和10mg/ml，测试这两个浓度的蛇床子醇提物对表达hTRPV1的HEK293细胞跨膜电流的影响。结果显示：与正常细胞外液(Pre)对比，蛇床子醇提物3mg/ml、10mg/ml这两个浓度均可以使细胞产生跨膜电流(P＜0.01)，且3mg/ml、10mg/ml这两个浓度产生的跨膜电流无显著差异。
2.3结论
蛇床子的水提物和醇提物都激活TRPV1通道，产生跨膜电流。蛇床子的辛温之性很可能是TRPV1活化的结果。而TRPV1与瘙痒与疼痛的关系可以帮助我们很好地理解蛇床子的相关功效。
3讨论
从分子方面理解蛇床子的功效有重要意义，近来随着热敏通道的发现以及部分结构和作用的揭示，使得对蛇床子的部分功效和主治可以得到进一步的理解。热敏通道是感受寒热的一类生命攸关的蛋白质，在机械和热传导、皮肤稳态、味觉、肾、内分泌、呼吸道、免疫、心血管、中枢神经系统、生育和衰老方面都发挥作用。它们大量分布在外周感觉神经上，以感知内外环境的温度、化学、机械等伤害性刺激，与寒热、疼痛和瘙痒等感觉有重要关联。热敏通道(TRPV1、TRPA1和TRPM8等)是自然界许多芳香物质的分子靶点，它与温热感有关，也与瘙痒和疼痛密切相关。
3.1蛇床子的化学成分
蛇床子的化学成分主要有香豆素类和挥发油类以及其他微量元素，且具有生物活性的香豆素类化合物的含量最高。
3.2蛇床子的温热感与止痛作用
外周神经调节阴道的平滑肌张力，血流量和疼痛敏感性。而子宫表达TRPV1、TRPA1的神经随着性激素水平的生理波动，如怀孕、分娩、性周期和青春期时产生巨大改变，局部性激素也参与其间。这些部位的疼痛与局部神经重塑有关，外阴痛的特征是在外阴前庭区域有痛苦的烧灼感，异常性疼痛和痛觉过敏，局部上皮内和乳突的神经支配，其间的TRPV1表达大量增加。
蛇床子对外阴和盆腔的疼痛均有良好效果，蛇床子的全身或局部运用可产生温热感，这应该是蛇床子外用“绵裹内之，自然温”的分子基础，如同辣椒或大蒜。阴道内使用的蛇床子除了产生温热感，对宫寒发挥治疗作用，还会通过神经的交叉脱敏对多种因素如膀胱炎、前列腺炎、结肠炎或腰肌劳损等引起的盆腔疼痛发挥的止痛作用。动物行为学实验也证明蛇床子素能够显著减少醋酸致痛小鼠的扭体次数和升高热致痛小鼠的痛阈，对物理和化学引起的疼痛和炎症均有明显的对抗作用。
3.3蛇床子的止痒作用
瘙痒和疼痛是密切相关但是截然不同的感觉，它们的源头均在感觉神经的皮肤末梢，它们共享大部分重叠的介质和受体，瘙痒反应的神经元对疼痛刺激也很敏感，瘙痒的复杂机制并不清楚。疼痛刺激可引起一些慢性病(例如特应性皮炎)的瘙痒，一些治疗慢性疼痛的药物对慢性瘙痒也有效。
3.4蛇床子的其他作用
古人用蛇床子治疗癫痫。长期以来，认为海马神经元中的钙离子累积是癫痫的主要发病因素。依古籍记载，蛇床子可能会作用于大脑，这需要证实其有效成分可以穿过血脑屏障。蛇床子素通过血脑屏障的证据是确定的。蛇床子的抗癫痫作用，作用靶点可能不是唯一的，蛇床子所含总香豆素可以作用于GABAA受体，该受体在癫痫发作有重要意义。蛇床子抗癫痫的同一信号通路中的作用可能是多靶点的。
蛇床子对神经系统的影响还包括改善学习记忆作用、抗帕金森作用、镇静催眠等。对于蛇床子的研究显示其有性激素样作用。性激素在不同的感觉细胞中发挥多效性作用，促进神经系统的再生，具有重要的功能。性激素的减少与认知和心理健康受损以及神经病变性疾病的风险增加有关，恢复神经－内分泌轴的关键在于老化过程中可通过神经保护和神经再生。
精子生成依赖睾丸的酸性微环境，Sertoli细胞为调控和维持精子发生提供了一个受控的微环境，其中酸性环境对男性生育力至关重要。它是由酸敏氯离子通道(ASCC)调节的。精子运动到受精地点是一个复杂过程，这与精子有趋热性有关，即精子具有温度导向的运动，这样才能与卵子结合而授孕。这些研究对蛇床子在阴道的使用，产生温热感，治疗宫寒不孕有重要意义。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。
Claims (2)
1.一种蛇床子提取物用于制备TRPV1激动剂的用途，其特征在于，所述蛇床子提取物为蛇床子水提物，其用于激活hTRPV1/HEK293细胞中的TRPV1通道，使hTRPV1/HEK293细胞产生跨膜电流；
采用全细胞膜片钳实验对所述TRPV1通道激活后所产生的跨膜电流进行验证；
所述蛇床子水提物的制备方法，包括如下步骤:
称量50g蛇床子，蛇床子与水的质量体积比例范围为50g:400～500ml；
倒入双蒸水浸泡30～40min；
加热至沸腾30～40min后倒出药汁；
剩余的药渣加双蒸水250～400ml第二次煎煮，合并两次药汁；
合并后的药汁，双层滤纸过滤，99℃恒温水浴锅加热浓缩调浓度为0.9～1.1g/ml，3500r/min离心15min后取上液，即得蛇床子水提物。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述蛇床子提取物为所述TRPV1激动剂的唯一有效成分或有效成分之一。
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