CN108619187B - 蛇床子提取物及其制备与应用 - Google Patents
蛇床子提取物及其制备与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108619187B CN108619187B CN201810632937.9A CN201810632937A CN108619187B CN 108619187 B CN108619187 B CN 108619187B CN 201810632937 A CN201810632937 A CN 201810632937A CN 108619187 B CN108619187 B CN 108619187B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- cnidium fruit
- trpv1
- fructus cnidii
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 76
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 241000212948 Cnidium Species 0.000 claims abstract description 82
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims abstract description 69
- 102000003566 TRPV1 Human genes 0.000 claims abstract description 34
- 101150016206 Trpv1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 34
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 claims abstract description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 19
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 claims description 11
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 10
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 9
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 7
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 90
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 20
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 abstract description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 7
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 abstract description 5
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 abstract description 4
- 230000001139 anti-pruritic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 abstract description 4
- 238000010792 warming Methods 0.000 abstract description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 101000633069 Homo sapiens Transient receptor potential cation channel subfamily V member 1 Proteins 0.000 abstract description 2
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 abstract description 2
- 102000045756 human TRPV1 Human genes 0.000 abstract description 2
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 abstract description 2
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 description 17
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 14
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 12
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 12
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 11
- YKPUWZUDDOIDPM-SOFGYWHQSA-N capsaicin Chemical compound COC1=CC(CNC(=O)CCCC\C=C\C(C)C)=CC=C1O YKPUWZUDDOIDPM-SOFGYWHQSA-N 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 9
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 6
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 6
- 235000019615 sensations Nutrition 0.000 description 6
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 6
- 229960002504 capsaicin Drugs 0.000 description 5
- 235000017663 capsaicin Nutrition 0.000 description 5
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 239000003163 gonadal steroid hormone Substances 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N benzo-alpha-pyrone Natural products C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 3
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 3
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 3
- 241000208173 Apiaceae Species 0.000 description 2
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 2
- 101000764872 Homo sapiens Transient receptor potential cation channel subfamily A member 1 Proteins 0.000 description 2
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 2
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 2
- 208000008930 Low Back Pain Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- HPUXDMUGCAWDFW-UHFFFAOYSA-N Osthole Natural products COc1ccc2CCC(=O)Oc2c1C=CC(=O)C HPUXDMUGCAWDFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100026186 Transient receptor potential cation channel subfamily A member 1 Human genes 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 2
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 2
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 2
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 2
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 201000001881 impotence Diseases 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 2
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 2
- MBRLOUHOWLUMFF-UHFFFAOYSA-N osthole Chemical compound C1=CC(=O)OC2=C(CC=C(C)C)C(OC)=CC=C21 MBRLOUHOWLUMFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 230000021595 spermatogenesis Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010063409 Acarodermatitis Diseases 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 206010049589 Afterbirth pain Diseases 0.000 description 1
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 description 1
- 206010006784 Burning sensation Diseases 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 1
- 108010062745 Chloride Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000011045 Chloride Channels Human genes 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000000094 Chronic Pain Diseases 0.000 description 1
- 244000247747 Coptis groenlandica Species 0.000 description 1
- 235000002991 Coptis groenlandica Nutrition 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 244000111489 Gardenia augusta Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 244000303040 Glycyrrhiza glabra Species 0.000 description 1
- 235000006200 Glycyrrhiza glabra Nutrition 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000035154 Hyperesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010021118 Hypotonia Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010050031 Muscle strain Diseases 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 208000000114 Pain Threshold Diseases 0.000 description 1
- 208000000450 Pelvic Pain Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 description 1
- 241000972673 Phellodendron amurense Species 0.000 description 1
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 description 1
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 description 1
- 244000203593 Piper nigrum Species 0.000 description 1
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 241000447727 Scabies Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 238000010161 Student-Newman-Keuls test Methods 0.000 description 1
- 102000003610 TRPM8 Human genes 0.000 description 1
- 102000003563 TRPV Human genes 0.000 description 1
- 108060008564 TRPV Proteins 0.000 description 1
- 101150111302 Trpm8 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010046814 Uterine prolapse Diseases 0.000 description 1
- 206010046940 Vaginal prolapse Diseases 0.000 description 1
- 208000003728 Vulvodynia Diseases 0.000 description 1
- 206010069055 Vulvovaginal pain Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 206010053552 allodynia Diseases 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003556 anti-epileptic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000648 anti-parkinson Effects 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 239000000939 antiparkinson agent Substances 0.000 description 1
- 239000003908 antipruritic agent Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229960002713 calcium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004633 cognitive health Effects 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- -1 coumarin compound Chemical class 0.000 description 1
- 201000003146 cystitis Diseases 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000002036 drum drying Methods 0.000 description 1
- 230000000773 effect on pain Effects 0.000 description 1
- 230000007831 electrophysiology Effects 0.000 description 1
- 238000002001 electrophysiology Methods 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 208000028329 epileptic seizure Diseases 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 208000017561 flaccidity Diseases 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000004295 hippocampal neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000147 hypnotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000007603 infrared drying Methods 0.000 description 1
- 230000030214 innervation Effects 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000013016 learning Effects 0.000 description 1
- 235000011477 liquorice Nutrition 0.000 description 1
- 229940050906 magnesium chloride hexahydrate Drugs 0.000 description 1
- DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L magnesium dichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[Cl-].[Cl-] DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000001595 mastoid Anatomy 0.000 description 1
- 230000003446 memory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001473 noxious effect Effects 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000008533 pain sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000037040 pain threshold Effects 0.000 description 1
- 238000007427 paired t-test Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 230000004983 pleiotropic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 201000007094 prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002633 protecting effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009323 psychological health Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 208000005687 scabies Diseases 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000000932 sedative agent Substances 0.000 description 1
- 230000001624 sedative effect Effects 0.000 description 1
- 230000004799 sedative–hypnotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008491 skin homeostasis Effects 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 1
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 1
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 230000001720 vestibular Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 210000003905 vulva Anatomy 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
- A61K36/234—Cnidium (snowparsley)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/04—Antipruritics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Botany (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
本发明属于中医药领域，具体涉及蛇床子提取物及其制备与应用。本研究以蛇床子提取物(水提和醇提)为研究对象，结合电生理膜片钳技术，在瞬转了人TRPV1的HEK293细胞上测试它能否活化或抑制TRPV1，以探讨蛇床子发挥药效作用的分子靶点。首次发现：蛇床子的水提物和醇提物都激活TRPV1通道，产生跨膜电流。因此，蛇床子的辛温之性很可能是TRPV1活化的结果，其部分药效可能是通过TRPV1通道发挥，TRPV1是蛇床子产生温肾壮阳，杀虫止痒作用的分子靶点之一。
Description
技术领域
本发明属于中医药领域，具体涉及蛇床子提取物及其制备与应用。
背景技术
蛇床子最早收录于《神农本草经》，具有数千年的医疗实践应用，别名野茴香、野胡荽，为伞形科植物蛇床的干燥成熟果实，有浓郁的芳香气息。
《神农本草经》将蛇床子列为上品，概述其性味功效：“味苦，平。主妇人阴中肿痛，男子阳痿、湿痒，除痹气，利关节，癫痫恶创(疮)。”其后不久的《本草经集注》(草木上品)记载为“味苦、辛、甘，平，无毒。主治妇人阴中肿痛，男子阴痿湿痒，除痹气，利关节，癫痫，恶疮。温中下气，令妇人子脏热，男子阴强。”《金匮要略·妇人杂病脉证并治》：“妇人阴寒，温中坐药，蛇床子散主之。……绵裹内之，自然温。”《备急千金要方·杂治第十七》“治产后阴下脱方：蛇床子一升，布裹炙熨之。亦治产后阴中痛。”又有外治方：“治男女阴中疮湿痒方(黄连、栀子、甘草、黄柏、蛇床子)，……为细末，以粉疮上……深者，用绵裹纳疮中。”现代《中药学》将其应用概括为：“阴部湿痒，湿疹，疥癣；寒湿带下，湿痹腰痛；肾虚阳痿，宫冷不孕”，既可内服，又可外用。现代研究显示蛇床子具有抗菌、止痒、止痛、防治疗骨质疏松、保护心血管、抗血栓、镇静催眠等作用。
从分子方面理解蛇床子的功效有重要意义，但是蛇床子的作用机制尚不知晓。
发明内容
为了克服现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供蛇床子提取物及其制备与应用。
为了实现上述目的以及其他相关目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的第一方面，提供蛇床子提取物用于制备TRPV1激动剂的用途。
一种实施方式中，所述TRPV1激动剂至少具有以下功效之一：
(1)激活TRPV1通道、(2)诱导产生跨膜电流。
一种实施方式中，所述TRPV1激动剂必然包括所述蛇床子提取物，并为蛇床子提取物作为发挥前述功用的有效成分。
所述TRPV1激动剂中，发挥前述功用的有效可仅为蛇床子提取物，亦可包含其他可起到类似功用的分子。
亦即，蛇床子提取物为所述TRPV1激动剂的唯一有效成分或有效成分之一。
一种实施方式中，所述蛇床子提取物，为以蛇床子为原料提取有效成分制得。
本领域技术人鱼可采用各种常规的中药有效成分提起方法来提取其有效成分，如常规的煎煮法、水提法、水提醇沉法、醇提法、醇提水沉法、盐析法等。
其中，水提法为：以水为溶剂提取药材有效成分。
水提醇沉法为：先以水为溶剂提取药材有效成分，再用不同浓度的乙醇沉淀去除提取液中杂质的方法。一般含乙醇量达到50～60％(重量体积比即g/100mL)时，可去除淀粉等杂质，当含醇量达75％以上，除鞣质、水溶性色素等少数无效成分外，其余大部分杂质均可沉淀去除。
醇提水沉法为：先以适宜浓度的乙醇提取药材成分，再用水除去提取液中杂质的方法。
一种实施方式中，提取有效成分后可再经常规的步骤浓缩、纯化或干燥获得蛇床子提取物。
其中浓缩的方法包括但不限于：常压蒸发、减压蒸发、薄膜蒸发、多效蒸发，纯化的方法包括但不限于：盐析纯化、大孔树脂吸附纯化、乙醇沉淀纯化、离子交换树脂纯化、絮凝沉淀纯化、膜分离纯化、聚酰胺吸附纯化、硅胶吸附层析纯化等，干燥的方法包括但不限于：烘干法、鼓式干燥法、带式干燥法、吸湿干燥法、沸腾干燥法、喷雾干燥法、减压干燥法、冷冻干燥法、红外线干燥法、微波干燥法等。
根据蛇床子的有效成分的特性，可采用不同的提取工艺。
一种实施方式中，所述蛇床子提取物为蛇床子水提物或蛇床子醇提物。
所述蛇床子水提物，是以蛇床子为原料，以水为溶剂提取有效成分制得。
所述蛇床子醇提物，是以蛇床子为原料，以乙醇为溶剂提取有效成分制得。
一种实施方式中，所述蛇床子水提物的制备方法，包括如下步骤：称量蛇床子，倒入水浸泡，加热至沸腾后倒出药汁，剩余的药渣加水第二次煎煮，合并两次药汁。
一种实施方式中，蛇床子与水的质量体积比例范围为50g：400～500ml。
例如，一种实施方式中，蛇床子与水的质量体积比例范围为50g：400。
一种实施方式中，称量蛇床子，倒入水浸泡30～40min。
例如，一种实施方式中，称量蛇床子，倒入水浸泡30min。
一种实施方式中，加热至沸腾30～40min。
例如，一种实施方式中，加热至沸腾30min。
一种实施方式中，剩余的药渣加水250～400ml第二次煎煮。
例如，一种实施方式中，剩余的药渣加水250第二次煎煮。
一种实施方式中，合并后的药汁，过滤，加热浓缩，离心，取上液，即得蛇床子水提物。
一种实施方式中，所述蛇床子水提物的浓度为0.9～1.1g生药/ml。
例如，一种实施方式中，所述蛇床子水提物的浓度为1.0g生药/ml。
一种实施方式中，所述蛇床子醇提物的制备方法包括如下步骤：
称量蛇床子，加入乙醇浸泡，回流提取，收集提滤液，过滤，剩余的药渣再倒入乙醇继续回流提取，收集并合并提滤液，回收乙醇，所得的提取物用水调整浓度，获得蛇床子醇提物。
一种实施方式中，蛇床子粉碎后，加入乙醇浸泡。
一种实施方式中，所述乙醇为70～80％乙醇。
优选地，所述乙醇为75％乙醇(重量体积比即g/100mL)。
一种实施方式中，蛇床子与乙醇的质量体积比例范围为80g：640～800ml。
例如，一种实施方式中，蛇床子与乙醇的质量体积比例范围为80g：640ml。
一种实施方式中，加入乙醇浸泡30～40min。
例如，一种实施方式中，加入乙醇浸泡30min。
一种实施方式中，称量蛇床子，加入乙醇浸泡，回流提取1.8～2.2h。
例如，一种实施方式中，称量蛇床子，加入乙醇浸泡，回流提取2h。
一种实施方式中，剩余的药渣再倒入400～640ml乙醇继续回流提取。
例如，一种实施方式中，剩余的药渣再倒入400ml乙醇继续回流提取。
一种实施方式中，剩余的药渣再倒入乙醇继续回流提取0.8～1.2h。
例如，一种实施方式中，剩余的药渣再倒入乙醇继续回流提取1.0h。
一种实施方式中，所得的提取物用水调整浓度至0.9～1.1g(生药)/ml。
例如，一种实施方式中，所得的提取物用水调整浓度至1.0g(生药)/ml。
本发明的第二方面，提供前述蛇床子提取物用于制备TRPV1活化剂的用途。
一种实施方式中，所述TRPV1活化剂必然包括所述蛇床子提取物，并为蛇床子提取物作为发挥功用的有效成分。
所述TRPV1活化剂中，发挥功用的有效可仅为蛇床子提取物，亦可包含其他可起到类似功用的分子。
亦即，蛇床子提取物为所述TRPV1活化剂的唯一有效成分或有效成分之一。
本发明的第三方面，提供前述蛇床子提取物用于制备TRPV1通道激活剂的用途。
一种实施方式中，所述TRPV1通道激活剂必然包括所述蛇床子提取物，并为蛇床子提取物作为发挥功用的有效成分。
所述TRPV1通道激活剂中，发挥功用的有效可仅为蛇床子提取物，亦可包含其他可起到类似功用的分子。
亦即，蛇床子提取物为所述TRPV1通道激活剂的唯一有效成分或有效成分之一。
本发明的第四方面，提供前述蛇床子提取物用于制备跨膜电流诱导剂的用途。
一种实施方式中，所述跨膜电流诱导剂必然包括所述蛇床子提取物，并为蛇床子提取物作为发挥功用的有效成分。
所述跨膜电流诱导剂中，发挥功用的有效可仅为蛇床子提取物，亦可包含其他可起到类似功用的分子。
亦即，蛇床子提取物为所述跨膜电流诱导剂的唯一有效成分或有效成分之一。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本研究以蛇床子提取物(水提和醇提)为研究对象，结合电生理膜片钳技术，在瞬转了人TRPV1的HEK293细胞上测试它能否活化或抑制TRPV1，以探讨蛇床子发挥药效作用的分子靶点。首次发现：蛇床子的水提物和醇提物都激活TRPV1通道，产生跨膜电流。因此，蛇床子的辛温之性很可能是TRPV1活化的结果，其部分药效可能是通过TRPV1通道发挥，TRPV1是蛇床子产生温肾壮阳，杀虫止痒作用的分子靶点之一。
附图说明
图1A：蛇床子水提物作用于hTRPV1/HEK293效应研究，各组+100mV电压下电流峰值对比统计图(Mean±SEM)。
图1B：蛇床子水提物作用于hTRPV1/HEK293效应研究，+100mV电压下跨膜电流时程图，其中小图为在细胞外液(a)、蛇床子提取物峰值(b)、辣椒素峰值(c)点用电压斜坡(voltage ramp)检测到的I-V关系曲线，**P<0.01，表示组之间的差异显著，n＝6。
图2A：蛇床子醇提物对转染hTRPV1的HEK293细胞全细胞电流影响，各组+100mV电压下电流峰值对比统计图(Mean±SEM)。
图2B：蛇床子醇提物对转染hTRPV1的HEK293细胞全细胞电流影响，+100mV电压下跨膜电流时程图，**P<0.01，表示组之间的差异显著，n＝6。
具体实施方式
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的技术。
实施例1
1材料和方法
1.1药品及试剂
中药蛇床子(购于北京同仁堂东四药店，为伞形科植物蛇床的干燥成熟果实)，TRPV1plasmid(Origene，RC217653)，质粒GFP(北京爱思益普)、DMEM cell culturemedium、Fetal Bovine Serum、penicillin/streptomycin(Gibco)、Lipofectamine2000(invitrogen)、Capsaicin、DMSO、Sodium chloride、Potassium chloride、Cesiumchloride、EGTA、HEPES、Magnesium chloride hexahydrate、D-glucose、Calciumchloride(Sigma)。
1.2仪器
300克密封型摇摆式粉碎XL-06B(广州旭朗)、旋转蒸发器RE-52(上海虹昕)、数显恒温水浴锅HH-6(常州润华)、SHZIII型循环水真空泵(上海亚荣)、EPC-10Quattro膜片钳放大器(Heka)、PatchMaster数据获取软件(Heka)、P-97拉制仪器(Sutter Instruments)、IGOR-Pro分析软件(WaveMetrics Inc)等。
1.3实验步骤
1.3.1蛇床子提取物制备
第Ⅰ组水提物制备：用电子秤量得50g蛇床子，倒入400ml双蒸水浸泡30min，加热至沸腾30min后倒出药汁，剩余的药渣加250ml双蒸水第二次煎煮，合并两次药汁，双层滤纸过滤，99℃恒温水浴锅加热浓缩调浓度为1g/ml，3500r/min离心15min后取上液即得第Ⅰ组蛇床子水提物，4℃冰箱中保存备用。
第Ⅱ组水提物制备：用电子秤量得50g蛇床子，倒入500ml双蒸水浸泡40min，加热至沸腾40min后倒出药汁，剩余的药渣加400ml双蒸水第二次煎煮，合并两次药汁，双层滤纸过滤，99℃恒温水浴锅加热浓缩调浓度为1.1g/ml，3500r/min离心15min后取上液即得第Ⅱ组蛇床子水提物，4℃冰箱中保存备用。
第Ⅲ组水提物制备：用电子秤量得50g蛇床子，倒入450ml双蒸水浸泡35min，加热至沸腾35min后倒出药汁，剩余的药渣加325ml双蒸水第二次煎煮，合并两次药汁，双层滤纸过滤，99℃恒温水浴锅加热浓缩调浓度为0.9g/ml，3500r/min离心15min后取上液即得第Ⅲ组蛇床子水提物，4℃冰箱中保存备用。
第Ⅰ组醇提物制备：秤量80g蛇床子，粉碎后加入640ml的75％乙醇浸泡30min，转移入回流提取器中于95℃恒温水浴锅上回流提取2h，收集药液，过滤，剩余的药渣再倒入400ml乙醇继续回流1h，2次所提滤液倾入旋转蒸发器上回收乙醇，所得的提取物(膏状物不含乙醇)用双蒸水调浓度至1g(生药)/ml。
第Ⅱ组醇提物制备：秤量80g蛇床子，粉碎后加入800ml的70％乙醇浸泡40min，转移入回流提取器中于95℃恒温水浴锅上回流提取2.2h，收集药液，过滤，剩余的药渣再倒入640ml乙醇继续回流提取1.2h，2次所提滤液倾入旋转蒸发器上回收乙醇，所得的提取物(膏状物不含乙醇)用双蒸水调浓度至0.9g(生药)/ml。
第Ⅲ组醇提物制备：秤量80g蛇床子，粉碎后加入720ml的80％乙醇浸泡35min，转移入回流提取器中于95℃恒温水浴锅上回流提取1.8h，收集药液，过滤，剩余的药渣再倒入520ml乙醇继续回流提取0.8h，2次所提滤液倾入旋转蒸发器上回收乙醇，所得的提取物(膏状物不含乙醇)用双蒸水调浓度至1.1g(生药)/ml。
以上提取物均分装后保存于-20℃低温冰箱备用。
1.3.2电生理膜片钳实验
1.3.2.1细胞培养和转染
细胞培养用含10％胎牛血清的培养基。转染前24h将HEK293细胞植于直径12mm细胞爬片中并置于细胞培养皿中，于37℃培养箱培养。在转染前换为不含抗生素的培养基，置于培养箱中预热。将转染试剂Lipofectamine2000，质粒与稀释液DMEM在室温下平衡15min至20℃左右，使用无血清的DMEM将转染试剂稀释至终浓度为5μL/100μL(转染试剂/DMEM)，使用无菌管稀释，轻柔混匀。将2μg TRPV1质粒和600ng GFP质粒共同加入100μL转染试剂稀释液中，轻柔混匀后将转染试剂、DNA复合物于15-20℃下静置15min。从培养箱中取出预热的细胞培养皿，将转染试剂、DNA复合物逐滴加入，转染后4h换成完全培养基(无双抗)，孵育细胞24到72h内进行电生理实验。
1.3.2.2全细胞膜片钳实验
实验在室温(20～25℃)下进行，将细胞爬片放置于专门的记录小室中，固定浴液电极。显微镜下选取外形完整，形状规则，边缘整齐，表面光滑无颗粒，横纹清晰，无收缩的长杆状细胞。膜片钳放大器系统通过A/D和D/A数据转换器与计算机进行连接，PatchMaster软件控制相关的刺激信号以及电流、电压信号的采集。玻璃微电极拉制仪拉制玻璃毛胚成尖端直径1-1.5μm的玻璃微电极，灌入电极内液后安装于电极夹持器上与探头和放大器联通。显微镜观察下用三维操纵仪调节电极尖端的位置使其移向细胞表面，轻压细胞微变形，1-mL注射器负压吸引封接细胞，形成高阻封接(Giga seal)至1GΩ以上，完成封接后进行电极电容补偿。观察1-2min，如果不能自行破膜，则用1-mL注射器负压吸引破膜，形成全细胞的记录模式。对全细胞膜电容进行补偿后给予相应的测试程序，进行信号采集。采样频率为10kHz。
细胞维持电压(holding potential,Vhold)设定为-80mV，在Vhold的基础上间隔1s给予细胞一个从-100mV到+100mV连续电压斜坡(voltage ramp)刺激或-80mV电压下连续记录。
1.4统计学方法
GraphPad Prism 6及SPSS 22统计软件进行图像处理和数据分析，数据表示为Mean±SEM，细胞滴加前后产生的电流对比采用配对t检验。多组间两两比较时，行单因素方差分析(one-way ANOVA)后，采用Student Newman Keuls Test检验，n表示重复的细胞个数。
2结果
2.1蛇床子水提物作用于hTRPV1/HEK293效应研究
第Ⅰ组蛇床子水提物稀释成5mg(生药)/ml，测试其对表达hTRPV1/HEK293细胞跨膜电流的作用，实验过程中先滴入细胞外液作为阴性对照，观察电流的基线水平，然后滴加测试样品，电流到达峰值并开始下降后用细胞外液洗脱(washout)，最后施加阳性药30μM辣椒素检验所记录细胞是否成功转染。结果显示：与正常细胞外液(Pre)对比，第Ⅰ组蛇床子水提物使hTRPV1/HEK293细胞诱导产生明显的跨膜电流(图1A和图1B)，蛇床子水提物滴加入空转的HEK293细胞中不产生跨膜电流(数据不显示)。
同样地，第Ⅱ组蛇床子水提物稀释成5mg(生药)/ml，测试其对表达hTRPV1/HEK293细胞跨膜电流的作用，实验过程中先滴入细胞外液作为阴性对照，观察电流的基线水平，然后滴加测试样品，电流到达峰值并开始下降后用细胞外液洗脱(washout)，最后施加阳性药30μM辣椒素检验所记录细胞是否成功转染。结果显示：与正常细胞外液(Pre)对比，第Ⅰ组蛇床子水提物使hTRPV1/HEK293细胞诱导产生明显的跨膜电流，蛇床子水提物滴加入空转的HEK293细胞中不产生跨膜电流。
同样地，第Ⅲ组蛇床子水提物稀释成5mg(生药)/ml，测试其对表达hTRPV1/HEK293细胞跨膜电流的作用，实验过程中先滴入细胞外液作为阴性对照，观察电流的基线水平，然后滴加测试样品，电流到达峰值并开始下降后用细胞外液洗脱(washout)，最后施加阳性药30μM辣椒素检验所记录细胞是否成功转染。结果显示：与正常细胞外液(Pre)对比，第Ⅰ组蛇床子水提物使hTRPV1/HEK293细胞诱导产生明显的跨膜电流，蛇床子水提物滴加入空转的HEK293细胞中不产生跨膜电流。
2.2蛇床子乙醇提取物量效研究
将第Ⅰ组蛇床子醇提物予细胞外液稀释成3mg/ml和10mg/ml，测试这两个浓度的蛇床子醇提物对表达hTRPV1的HEK293细胞跨膜电流的影响。结果显示：与正常细胞外液(Pre)对比，蛇床子醇提物3mg/ml、10mg/ml这两个浓度均可以使细胞产生跨膜电流(P＜0.01)，且3mg/ml、10mg/ml这两个浓度产生的跨膜电流无显著差异(图2)。
同样地，将第Ⅱ组蛇床子醇提物予细胞外液稀释成3mg/ml和10mg/ml，测试这两个浓度的蛇床子醇提物对表达hTRPV1的HEK293细胞跨膜电流的影响。结果显示：与正常细胞外液(Pre)对比，蛇床子醇提物3mg/ml、10mg/ml这两个浓度均可以使细胞产生跨膜电流(P＜0.01)，且3mg/ml、10mg/ml这两个浓度产生的跨膜电流无显著差异。
同样地，将第Ⅲ组蛇床子醇提物予细胞外液稀释成3mg/ml和10mg/ml，测试这两个浓度的蛇床子醇提物对表达hTRPV1的HEK293细胞跨膜电流的影响。结果显示：与正常细胞外液(Pre)对比，蛇床子醇提物3mg/ml、10mg/ml这两个浓度均可以使细胞产生跨膜电流(P＜0.01)，且3mg/ml、10mg/ml这两个浓度产生的跨膜电流无显著差异。
2.3结论
蛇床子的水提物和醇提物都激活TRPV1通道，产生跨膜电流。蛇床子的辛温之性很可能是TRPV1活化的结果。而TRPV1与瘙痒与疼痛的关系可以帮助我们很好地理解蛇床子的相关功效。
3讨论
从分子方面理解蛇床子的功效有重要意义，近来随着热敏通道的发现以及部分结构和作用的揭示，使得对蛇床子的部分功效和主治可以得到进一步的理解。热敏通道是感受寒热的一类生命攸关的蛋白质，在机械和热传导、皮肤稳态、味觉、肾、内分泌、呼吸道、免疫、心血管、中枢神经系统、生育和衰老方面都发挥作用。它们大量分布在外周感觉神经上，以感知内外环境的温度、化学、机械等伤害性刺激，与寒热、疼痛和瘙痒等感觉有重要关联。热敏通道(TRPV1、TRPA1和TRPM8等)是自然界许多芳香物质的分子靶点，它与温热感有关，也与瘙痒和疼痛密切相关。
3.1蛇床子的化学成分
蛇床子的化学成分主要有香豆素类和挥发油类以及其他微量元素，且具有生物活性的香豆素类化合物的含量最高。
3.2蛇床子的温热感与止痛作用
外周神经调节阴道的平滑肌张力，血流量和疼痛敏感性。而子宫表达TRPV1、TRPA1的神经随着性激素水平的生理波动，如怀孕、分娩、性周期和青春期时产生巨大改变，局部性激素也参与其间。这些部位的疼痛与局部神经重塑有关，外阴痛的特征是在外阴前庭区域有痛苦的烧灼感，异常性疼痛和痛觉过敏，局部上皮内和乳突的神经支配，其间的TRPV1表达大量增加。
蛇床子对外阴和盆腔的疼痛均有良好效果，蛇床子的全身或局部运用可产生温热感，这应该是蛇床子外用“绵裹内之，自然温”的分子基础，如同辣椒或大蒜。阴道内使用的蛇床子除了产生温热感，对宫寒发挥治疗作用，还会通过神经的交叉脱敏对多种因素如膀胱炎、前列腺炎、结肠炎或腰肌劳损等引起的盆腔疼痛发挥的止痛作用。动物行为学实验也证明蛇床子素能够显著减少醋酸致痛小鼠的扭体次数和升高热致痛小鼠的痛阈，对物理和化学引起的疼痛和炎症均有明显的对抗作用。
3.3蛇床子的止痒作用
瘙痒和疼痛是密切相关但是截然不同的感觉，它们的源头均在感觉神经的皮肤末梢，它们共享大部分重叠的介质和受体，瘙痒反应的神经元对疼痛刺激也很敏感，瘙痒的复杂机制并不清楚。疼痛刺激可引起一些慢性病(例如特应性皮炎)的瘙痒，一些治疗慢性疼痛的药物对慢性瘙痒也有效。
3.4蛇床子的其他作用
古人用蛇床子治疗癫痫。长期以来，认为海马神经元中的钙离子累积是癫痫的主要发病因素。依古籍记载，蛇床子可能会作用于大脑，这需要证实其有效成分可以穿过血脑屏障。蛇床子素通过血脑屏障的证据是确定的。蛇床子的抗癫痫作用，作用靶点可能不是唯一的，蛇床子所含总香豆素可以作用于GABAA受体，该受体在癫痫发作有重要意义。蛇床子抗癫痫的同一信号通路中的作用可能是多靶点的。
蛇床子对神经系统的影响还包括改善学习记忆作用、抗帕金森作用、镇静催眠等。对于蛇床子的研究显示其有性激素样作用。性激素在不同的感觉细胞中发挥多效性作用，促进神经系统的再生，具有重要的功能。性激素的减少与认知和心理健康受损以及神经病变性疾病的风险增加有关，恢复神经－内分泌轴的关键在于老化过程中可通过神经保护和神经再生。
精子生成依赖睾丸的酸性微环境，Sertoli细胞为调控和维持精子发生提供了一个受控的微环境，其中酸性环境对男性生育力至关重要。它是由酸敏氯离子通道(ASCC)调节的。精子运动到受精地点是一个复杂过程，这与精子有趋热性有关，即精子具有温度导向的运动，这样才能与卵子结合而授孕。这些研究对蛇床子在阴道的使用，产生温热感，治疗宫寒不孕有重要意义。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。
Claims (2)
1.一种蛇床子提取物用于制备TRPV1激动剂的用途，其特征在于，所述蛇床子提取物为蛇床子水提物，其用于激活hTRPV1/HEK293细胞中的TRPV1通道，使hTRPV1/HEK293细胞产生跨膜电流；
采用全细胞膜片钳实验对所述TRPV1通道激活后所产生的跨膜电流进行验证；
所述蛇床子水提物的制备方法，包括如下步骤:
称量50g蛇床子，蛇床子与水的质量体积比例范围为50g:400～500ml；
倒入双蒸水浸泡30～40min；
加热至沸腾30～40min后倒出药汁；
剩余的药渣加双蒸水250～400ml第二次煎煮，合并两次药汁；
合并后的药汁，双层滤纸过滤，99℃恒温水浴锅加热浓缩调浓度为0.9～1.1g/ml，3500r/min离心15min后取上液，即得蛇床子水提物。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述蛇床子提取物为所述TRPV1激动剂的唯一有效成分或有效成分之一。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810632937.9A CN108619187B (zh) | 2018-06-20 | 2018-06-20 | 蛇床子提取物及其制备与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810632937.9A CN108619187B (zh) | 2018-06-20 | 2018-06-20 | 蛇床子提取物及其制备与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108619187A CN108619187A (zh) | 2018-10-09 |
| CN108619187B true CN108619187B (zh) | 2024-05-28 |
Family
ID=63691956
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810632937.9A Active CN108619187B (zh) | 2018-06-20 | 2018-06-20 | 蛇床子提取物及其制备与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108619187B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109568362A (zh) * | 2018-11-19 | 2019-04-05 | 广东方制药有限公司 | 一种利用连续动态逆流提取工艺制备蛇床子配方颗粒的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101830883A (zh) * | 2010-05-26 | 2010-09-15 | 南京泽朗农业发展有限公司 | 一种提取蛇床子素的工艺 |
| CN101973977A (zh) * | 2010-11-03 | 2011-02-16 | 西安应化生物技术有限公司 | 一种蛇床子素的制备方法 |
-
2018
- 2018-06-20 CN CN201810632937.9A patent/CN108619187B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101830883A (zh) * | 2010-05-26 | 2010-09-15 | 南京泽朗农业发展有限公司 | 一种提取蛇床子素的工艺 |
| CN101973977A (zh) * | 2010-11-03 | 2011-02-16 | 西安应化生物技术有限公司 | 一种蛇床子素的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Osthole inhibits histaminedependent itch via modulating TRPV1 activity;Niu-Niu Yang等人;《Scientific Reports》;20160510;第1页第3段，第9页第2段 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108619187A (zh) | 2018-10-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100579541C (zh) | 一种治疗风湿、类风湿病的药酒 | |
| CN102416062B (zh) | 枳实或枳实提取物的新用途 | |
| CN109700901A (zh) | 一种改善痛风的医用冷敷凝胶及其制备方法和应用 | |
| CN102120015A (zh) | 一种用于舒肝解郁、安神定志的中药及制法和质量标准 | |
| CN104667044A (zh) | 一种治疗痹症的中药制剂及其制备方法 | |
| CN108619187B (zh) | 蛇床子提取物及其制备与应用 | |
| CN102085248B (zh) | 一种治疗宫颈疾病的中药组合物及其制备方法和检测方法 | |
| Tian et al. | Phenylethanoid Glycosides of Cistanche on menopausal syndrome model in mice | |
| CN110898102B (zh) | 防治寒冷损伤的肉桂提取物和中药复方及其应用 | |
| CN101310758B (zh) | 一种抗抑郁复方中药及其制备方法 | |
| WO2017124826A1 (zh) | 用于治疗肝气郁结型经前期紧张综合症的中药药物 | |
| Chen et al. | Pingchong Jiangni recipe through nerve growth factor/transient receptor potential vanilloid 1 signaling pathway to relieve pain in endometriosis model rats | |
| CN104189349B (zh) | 一种治疗月经量少的中药组合物 | |
| CN107496725B (zh) | 以湖北海棠和竹取物为有效成分的组合物及用途 | |
| CN109223904A (zh) | 一种补肾活血方及其制备方法 | |
| CN105616839B (zh) | 一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方 | |
| CN104001118A (zh) | 用于治疗湿热浸淫型运动神经元病的药物及其制备方法 | |
| CN102038913A (zh) | 一种治疗脑卒中的口服制剂及其制备方法与用途 | |
| CN101890077B (zh) | 一种元胡止痛软胶囊的制备方法与质量检测方法 | |
| CN104771695A (zh) | 一种治疗女性不孕症的促排卵的中药 | |
| CN100502913C (zh) | 蔓荆子提取物及其制备方法和用途 | |
| CN103405616B (zh) | 一种补肾壮阳的中药组合物及其制备和检测方法 | |
| CN108310315B (zh) | 一种活血止痛的克痛酊及其制备方法 | |
| CN113855754B (zh) | 一种祛瘀止血的中药组合物及其制备方法和应用 | |
| CN101690778B (zh) | 一种治疗胰岛素抵抗病症的中药制剂及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |