CN108610434A - 褐藻多糖硫酸酯环保提取纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及制药领域，即褐藻多糖硫酸酯环保提取纯化方法。其步骤如下：（1）干海带经破碎成小片，加16倍量一级纯化水,加热至回流，提取5小时。（2）提取液浓缩，浓缩液加1%氯化钙，静置1小时。（3）药液先用转鼓真空过滤机进行初滤，离心，离心后的清液再用硅藻土助滤过滤系统进行两次过滤；（4）滤液二步超滤。5）药液浓缩，加活性炭脱色；（6）浓缩液加10%氯化钾，二次加乙醇使含醇量达70%，静止得沉淀物，离心，滤饼用95%乙醇洗涤；（7）滤饼在60℃下真空减压干燥4小时；（8）粉碎干燥物，制得乳白色或浅黄色粉末的褐藻多糖硫酸酯。经检测，收率由原来的0.2‑0.3%提高到1.2%～1.3%，效果显著。

Description

褐藻多糖硫酸酯环保提取纯化方法

技术领域

本发明涉及制药领域，即褐藻多糖硫酸酯环保提取纯化方法。

背景技术

在现有技术中，褐藻多糖硫酸酯原料药(制剂商品名称;海昆肾喜胶囊)作为海洋植物海带中提取的二类药物(国家药品标准YBZ00902003-2008)，是一种具有独特结构和功能的硫酸酯离子型多糖。具有原材料成本低，来源容易，功效显著的特点。褐藻多糖硫酸酯是从海洋藻类海带中提取的有效成分，是自然界中少有的硫酸酯离子型多糖。经过中国科学院海洋研究所和吉林省辉南长龙生化药业股份有限公司的协力合作，褐藻多糖硫酸酯原料药和海昆肾喜胶囊获得国家新药证书，实现产业化，为广大慢性肾病患者开辟了一条新的治疗途径，取得了一定得经济和社会效益。功能与主治：化浊排毒，用于慢性肾功能衰竭(代偿期、失代偿期和尿毒症早期)湿浊症。症见恶心，呕吐，纳差，腹胀，身重困倦，尿少，浮肿，苔厚腻。湿浊证是慢性肾衰的最常见的中医证型，针对慢性肾衰湿浊证的药物在临床应用范围广，适用病员众多，并且海昆肾喜胶囊服用量小，无增加胃肠道负担和水负荷过多之忧，同时对慢性肾衰湿浊证主要症状及症候积分也有明显的改善作用，无常见的治疗肾衰竭药物胃肠道反应大及腹泻等副作用，故该药有其优势及独特性。

褐藻多糖硫酸酯原料药制法：将8000kg海带切段于溶解池中加140000kg水，室温浸泡4 小时，浸泡液加氢氧化钠，调pH值至12，得到碱凝聚物，取凝聚物一次板框滤布过滤，滤饼加酸溶解，调节pH值3.5，溶液二次板框滤布过滤，取滤液，弃去滤饼残渣，溶液调pH值4-5，三次板框滤布过滤，取滤液加乙醇调至乙醇浓度70%，形成沉淀，取沉淀物干燥得干固物，将干固物粉碎得海带提取物。在搪瓷反应釜中加饮用水900kg，然后投入本批海带提取物，搅拌30分钟，缓缓加入盐酸476kg，调节pH值2-3，加酸完毕继续搅拌8小时，将溶解液转入沉降罐静置12小时，取上清液用49kg硅藻土真空转鼓滤过。滤液电渗析脱盐，脱盐液加浓氨水中和至中性。料液用单效蒸发器减压浓缩至420L，浓缩液转移至醇析罐，加1.4L 10%的氯化钾溶液，加乙醇使醇量达70%，搅拌30分钟，静置12小时，沉淀物离心，滤饼用95%乙醇洗涤一次，滤饼用真空减压干燥箱于60℃真空干燥，干燥膏粉碎，得褐藻多糖硫酸酯17kg。粉碎，密闭保存。本品以干燥品计，含褐藻糖不得少于25％，含水解硫酸基不得少于22％。

其缺点是：采用常规海带浸泡提取，褐藻糖浸出率低仅能达到0.2%左右，加碱、盐酸纯化去除杂质，消耗大量的酸和碱，增加了污水处理难度，对环境有污染。3次板框滤布过滤，规模生产效率低，耗时长；49kg硅藻土真空转鼓滤过对海洋生物特有的褐藻胶不易分离去除，常出现成品酸不溶灰分过高的情况，对于药物的吸收有影响。由于有效成分为多糖成分，成品分子量不易控制。

发明内容

本发明的目的是针对上述不足而提供一种改进的方法，改变多糖提取方法，使有效成分浸出率提高，纯化过程中不用碱凝聚，除褐藻胶的步骤不采用加酸法，同时改变过滤方式提高效率，并对于褐藻胶去除效果显著，提高褐藻糖含量，进而提高疗效。

褐藻多糖硫酸酯环保提取纯化方法, 其步骤如下：

（1）干海带经破碎成小片，加16倍量一级纯化水,加热至回流，提取5小时。采用本步骤，干海带经破碎成小片后更有利于有效成分析出，提取溶剂由饮用水改为一级纯化水，为了减小水中带来的杂质。加水量加大也是为了提取收率提高，回流提取5小时，能使提取收率达到最佳。

（2）提取液浓缩至一半量，浓缩液加1%氯化钙，静置1小时。采用本步骤，意在去除褐藻胶，使褐藻胶与氯化钙形成沉淀，后经过滤可去除干净。替代了原来加碱凝聚，加盐酸调PH2-3的步骤，省去消耗大量酸碱，氯化钙为盐，在后面的工序可将多余的盐脱掉。

（3）药液先用转鼓真空过滤机进行初滤，滤液再经蝶式离心机离心，离心后的清液再用硅藻土助滤过滤系统进行两次过滤，第一次过滤用硅藻土选择300号粗土，第二次过滤用硅藻土选择20号细土。采用本步骤，原工艺将加盐酸后产生的酸不溶褐藻胶沉淀经沉降后用转鼓过滤机过滤一遍，改进后工艺，采用了由粗到细的方式逐级过滤，先用转鼓真空过滤机过滤粗渣，再用蝶式离心机进一步除细渣，再经过硅藻土助滤过滤系统过滤两次，通过调节硅藻土细度，提升药液的澄清度，通过这四步过滤，可大大降低药液中褐藻胶沉淀的含量，使成品纯度提升，酸不溶灰分指标降低。

（4）滤液二步超滤，第一步通过5000分子量超滤浓缩脱盐系统进行超滤脱盐并筛掉小分子多糖，第二步再通过10000分子量超滤浓缩脱盐系统二次超滤筛掉大分子多糖，并将药液浓缩至一半药液。采用本步骤，第一次超滤可将滤液中多余的无机盐、甘露醇、以及小分子量的多糖滤掉，第二道超滤的作用，主要是将大于130000分子量的多糖滤掉，通过二步超滤将混合多糖中分子量大于130000和小于60000的多糖筛选出去，只剩临床效果最好的的多糖成分。

（5）药液浓缩，加活性炭脱色。

（6）浓缩液加10%氯化钾，二次加乙醇使含醇量达70%，静止得沉淀物，离心，滤饼用95%乙醇洗涤。

（7）滤饼在60℃下真空减压干燥4小时。

（8）粉碎干燥物，制得乳白色或浅黄色粉末的褐藻多糖硫酸酯。

本发明优点是：1、本发明工艺路线采用海带回流提取，大大提高了收率。加氯化钙沉淀法，和由粗到细逐级过滤法，有效的去除褐藻胶，提升了产品纯度，解决了海洋植物中褐藻胶不宜分离的难题，提高收率，降低成本，减少污染，有利于实现规模化生产。采取的二步超滤法，有效的控制了分子量，使得产品的分子量更稳定。2、经检测，本方法带来的显著效果是提高了褐藻糖的含量，≥28mg/粒，提高了水解硫酸基含量，≥25mg/粒，酸不溶成分明显降低，收率由原来的0.2-0.3%提高到1.2%～1.3%，改进后的工艺效果显著。3、经实验，提纯后原料，治疗效果明显提高。

下面将结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。

具体实施方式

实施例1

褐藻多糖硫酸酯环保提取纯化方法, 其特征在于步骤如下：

（1）干海带经破碎成片，加16倍量一级纯化水,加热至回流，提取5小时，得提取液。

（2）提取液浓缩至一半量，浓缩液加1%氯化钙，静置1小时，得药液。

（3）药液先用转鼓真空过滤机进行初滤，滤液再经蝶式离心机离心，离心后的清液再用硅藻土助滤过滤系统进行两次过滤，第一次过滤用硅藻土选择300号粗土，第二次过滤用硅藻土选择20号细土。

（4）滤液二步超滤，第一步通过5000分子量超滤浓缩脱盐系统进行超滤脱盐并筛掉小分子多糖，第二步再通过10000分子量超滤浓缩脱盐系统二次超滤筛掉大分子多糖，并将药液浓缩至一半药液。

（5）药液浓缩，加活性炭脱色。

（6）浓缩液加10%氯化钾，二次加乙醇使含醇量达70%，静止得沉淀物，离心，滤饼用95%乙醇洗涤。

（7）滤饼在60℃下真空减压干燥4小时。

（8）粉碎干燥物，制得乳白色或浅黄色粉末的褐藻多糖硫酸酯。

实施例2

褐藻多糖硫酸酯环保提取纯化方法, 其特征在于步骤如下：

将干海带破碎成小片，称量8000kg，均成16份，每份500kg，分别装于12500L提取罐中，分别向提取罐中加入8000㎏一级纯化水，加热回流5小时，过滤，提取液浓缩至一半，浓缩液加1%氯化钙，静置1小时。药液进行硅藻土转鼓过滤，滤液过DHC500蝶式离心，离心的清液用CL-B-T10助滤过滤系统过滤两次。滤液先通过5000分子量超滤浓缩脱盐系统进行脱盐，10000分子量超滤浓缩脱盐系统二次超滤筛掉大分子多糖，并将药液浓缩至一半药液。将上述药液再减压浓缩至约一半，加入活性炭12.6kg，静置8小时后，CQ105-A管式离心脱炭，0.22微米滤膜不锈钢板框过滤器过滤。进行二次浓缩至约一半药液。浓缩后的药液加入10%氯化钠溶液70ml，再加乙醇使含醇量达72%，搅拌生成絮状沉淀，静置12小时。离心，沉淀用95%乙醇（体积百分比）洗涤一次,真空干燥，干浸膏用WLF低温涡流式粉碎机粉碎，制得乳白色或浅黄色粉末的褐藻多糖硫酸酯。密闭保存。经含量测定（具体方法符合褐藻多糖硫酸酯原料药国家药品标准YBZ00902003-2008规定)，褐藻糖的含量达到了28%以上，水解硫酸基含量达到26%以上（见表1），既符合标准要求，又明显提高了褐藻糖、水解硫酸基的含量及收率。

实验例

临床报告:

本发明得到的海昆肾喜胶囊的临床研究总结：本试验采用海昆肾喜胶囊Ⅰ号（治疗组）与海昆肾喜胶囊Ⅱ号（对照组）分别治疗慢性肾功能衰竭湿浊证患者40例，试验结果显示：

治疗组40例患者中，显效12例，有效10例，稳定13例，无效5例，有效率为55%。治疗组有效稳定率为87.5%。

对照组40例患者中，显效8例，有效8例，稳定15例，无效9例，有效率为40.0%。

对照组有效稳定率为60.0%。

安全性评估：本组临床试验中未发现明显不良反应，对治疗前后临床症状、白细胞、肝功能、血糖、大便隐血、心、肺等指标检测，均未发现异常，提示该药安全，无明显副作用。

Claims (1)

1.褐藻多糖硫酸酯环保提取纯化方法, 其特征在于步骤如下：

（1）干海带经破碎成片，加16倍量一级纯化水,加热至回流，提取5小时，得提取液；

（2）提取液浓缩至一半量，浓缩液加1%氯化钙，静置1小时，得药液；

（3）药液先用转鼓真空过滤机进行初滤，滤液再经蝶式离心机离心，离心后的清液再用硅藻土助滤过滤系统进行两次过滤，第一次过滤用硅藻土选择300号粗土，第二次过滤用硅藻土选择20号细土；

（4）滤液二步超滤，第一步通过5000分子量超滤浓缩脱盐系统进行超滤脱盐并筛掉小分子多糖，第二步再通过10000分子量超滤浓缩脱盐系统二次超滤筛掉大分子多糖，并将药液浓缩至一半药液；

（5）药液浓缩，加活性炭脱色；

（6）浓缩液加10%氯化钾，二次加乙醇使含醇量达70%，静止得沉淀物，离心，滤饼用95%乙醇洗涤；

（7）滤饼在60℃下真空减压干燥4小时；

（8）粉碎干燥物，制得乳白色或浅黄色粉末的褐藻多糖硫酸酯。