CN113735988B - 一种香菇多糖的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种香菇多糖的提取方法，属于生物提取技术领域，其方法为在粉碎的香菇浆水中加入乳酸，搅拌之后过滤，滤液中加入油酸钠/氯化钠使提取液形成双水相，将上层水相进行脱色、超滤、浓缩、冻干得到纯品香菇多糖。本申请工艺简单、能源消耗少，成本低，工艺过程中没有使用有机溶剂，环境友好。

Description

一种香菇多糖的提取方法
技术领域
本发明属于生物提取技术领域，具体涉及一种香菇多糖的提取方法。
背景技术
香菇又名香覃、厚菇，为担子菌纲伞形科真菌，素有“山珍之王”之称，集食用、药用于一身，是高蛋白、低脂肪的营养保健食品。早在《本草纲目》中就有记载，香菇“性平、味甘，能益气不饥，治风破血，化痰理气，益味助食，理小便不禁”。
香菇多糖是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，香菇多糖中的活性成分是具有分支的β—(1—3)—D—葡聚糖，主链由β—(1—3)—连接的葡萄糖基组成，沿主链随机分布着由β—(1—6)连接的葡萄糖基，呈梳状结构。大量研究工作表明香菇多糖具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、调节免疫、抗衰老等功能，并能减轻放疗和化疗的毒副作用，提高患者的生活质量和延长存活时间。由于香菇多糖的医学功效广泛且几乎没有任何副作用，因而被认为是继手术、放疗、化疗之后的第4种生物免疫疗法。
现有的香菇多糖提取工艺主要包括：传统热水浸提法、稀酸(碱)浸提法、酶解提取、超声波辅助浸提法、酶法等。其中水浸提法、碱浸提法、酶提取法是先将香菇打浆，加入水/碱水/酶提取，过滤，滤液加入乙醇沉降，过滤得到香菇多糖。或在提取过程中使用超声辅助提取法、微波辅助提取法等来提高提取效率。然而，水浸提法、碱浸提法、酶提取法容易将蛋白质、苷类其他成分一起提取出来，造成后续分离精制困难，且会用到有机溶剂，对环保带来压力。超声辅助提取法、微波辅助提取法等方法虽提高提取效率，但用到大型设备，投入比较大，带来成本的提高。这些方法都存在着周期长、提取率不高、有效成分损耗较大、成本高等缺点。
因此现在急需一种低成本的高效环保的提取香菇多糖的方法。
发明内容
本发明公开了一种香菇多糖的提取方法，提取效率提高、环保，并且得到的香菇多糖纯度更高。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种香菇多糖的提取方法，其特征在于：在粉碎的香菇浆水中加入乳酸进行提取，搅拌之后过滤，滤液中加入油酸钠/氯化钠混合物使提取液形成双水相，将上层水相进行脱色、超滤、浓缩、冻干，得到纯品香菇多糖。
一种香菇多糖的提取方法，包括以下步骤：
S1、将鲜香菇加入到粉粹机中高速搅拌打浆；
S2、将香菇浆倒入容器中，加入温水搅拌，搅拌均匀之后加入乳酸继续搅拌得到混合液；
S3、将上述混合液过滤，滤液搅拌过程中加入油酸钠/氯化钠混合物，继续搅拌半小时后进行静置分层；
S4、上述溶液静置形成双水层，分离，得到上层水相，过层析柱进行过柱洗脱，层析柱内装大孔吸附脱色树脂，收集洗脱液；
S5、将洗脱液进行超滤，浓缩，冻干得到白色香菇多糖固体。本发明技术方案的进一步改进在于：步骤S3油酸钠/氯化钠混合物中油酸钠和氯化钠的比例为1:8-12，油酸钠/氯化钠混合物的加入量为鲜香菇质量的10-30％。
本发明技术方案的进一步改进在于：步骤S2中加入的温水的温度为25～40℃。
本发明技术方案的进一步改进在于：步骤S2中加入的乳酸的量为鲜香菇质量的20％～30％。
本发明技术方案的进一步改进在于：步骤S5中的冻干采用先用液氮进行快速冷冻结冰，然后放入冷冻干燥机进行冻干，冻干温度-10～-30℃。
本发明技术方案的进一步改进在于：步骤S1中打浆时的转速24000r/min，粉碎2min。
本发明技术方案的进一步改进在于：步骤S2中加入乳酸后继续搅拌1h。
本发明技术方案的进一步改进在于：步骤S5中超滤步骤所用的膜为陶瓷膜。
由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术效果如下：
本发明工艺简单、能源消耗少，成本低，工艺过程中没有使用有机溶剂，环境友好；本申请使用乳酸代替传统的热水浸提法、稀酸(碱)浸提法、酶解提取等方法中的热水、酸、碱或者酶，操作简单安全便捷；并且本申请使用双水相进行提取，避免了传统的工艺的分离困难问题。同时，本申请也不用使用超声辅助或者微波辅助，不用使用大型设备，可以快速工业化。
附图说明
图1是本发明实施例1制得的香菇多糖的红外图；
图2是本发明实施例2制得的香菇多糖的红外图；
图3是本发明实施例3制得的香菇多糖的红外图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明技术方案进行详细说明。
一种香菇多糖的提取方法包括以下步骤：
S1、将鲜香菇加入到粉粹机中高速搅拌打浆；
S2、将香菇浆倒入容器中，加入温水搅拌，搅拌均匀之后加入乳酸继续搅拌得到混合液；
S3、将上述混合液过滤，滤液搅拌过程中加入油酸钠/氯化钠混合物，继续搅拌半小时后进行静置分层；
S4、上述溶液静置形成双水层，分离，得到上层水相，过层析柱进行过柱洗脱，层析柱内装大孔吸附脱色树脂，收集洗脱液；
S5、将洗脱液进行超滤、浓缩、冻干得到白色香菇多糖固体。
实验中所用仪器设备：
粉粹机 天津市泰斯特仪器有限公司 型号：FW177
电动搅拌器 金坛市中大仪器厂 型号JJ-1
冷冻干燥机 北京博医康实验仪器有限公司 型号：FD-1A-50
香菇多糖含量检测方法：按照国家食品药品监督管理局国家药品标准WS1-(X-032)-2004Z进行检测。
提取率：提取出的香菇多糖的质量/鲜香菇×100％
实施例1：
将1kg的鲜香菇加入中草药粉粹机中，开动粉碎机，高速搅拌打浆，转速24000r/min，粉碎2min。停止搅拌，将粉粹机中的香菇浆水倾入10L烧杯中，加入6L 40℃纯化水，开动定时电动搅拌器，转速2000r/min，加入200g乳酸，加入完毕后，继续搅拌1h，将香菇多糖提取到水中。
用滤纸真空过滤萃取液，得到棕色溶液，将该溶液加入10L烧杯中，开动定时电动搅拌器，转速500r/min，加入200g油酸钠/氯化钠(1:12)的混合物，加入完毕后，继续搅拌0.5h，倾入10L分液漏斗中，静置分层。将香菇多糖所在的上层水相分离出来。
取一根直径10cm，高度130cm的层析柱，内装3kg大孔吸附脱色树脂。将香菇多糖水相倾入脱色树脂上，进行柱层析，倾入香菇多糖水相完毕后，继续用3L纯化水洗涤层析柱，保持层析柱脱色树脂上保持约2cm的水层，并收集柱下脱色液；收集的脱色液使用管式陶瓷膜(支撑体二氧化钛，截留分子量15KD)进行超滤、浓缩。
将浓缩液放入不锈钢盘中，用液氮快速使其结冰。将其放入冷冻干燥机，-10～-30℃真空冻干，至不锈钢盘中无纯化水。得到白色香菇多糖，所得多糖的提取率0.04％，含量98.2％。
实施例2：
将1kg的鲜香菇加入中草药粉粹机中，开动粉碎机，高速搅拌打浆，转速24000r/min，粉碎2min。停止搅拌，将粉粹机中的香菇浆水倾入10L烧杯中，加入6L 35℃纯化水，开动定时电动搅拌器，转速2000r/min，加入250g乳酸，加入完毕后，继续搅拌1h，将香菇多糖提取到水中。
用滤纸真空过滤萃取液，得到棕色香菇多糖溶液。将溶液加入10L烧杯中，开动定时电动搅拌器，转速500r/min，加入120g油酸钠/氯化钠(1:10)的混合物，加入完毕后，继续搅拌0.5h，倾入10L分液漏斗中，静置分层。将香菇多糖所在的上层水相分离出来。
取一根直径10cm，高度130cm的层析柱，内装3kg大孔吸附脱色树脂。将香菇多糖水相倾入脱色树脂上，进行柱层析，倾入香菇多糖水相完毕后，继续用3L纯化水洗涤层析柱，保持层析柱脱色树脂上保持约2cm的水层，并收集柱下脱色液；收集的脱色液使用陶瓷膜(支撑体二氧化钛，截留分子量15KD)进行超滤、浓缩。
将浓缩液放入不锈钢盘中，用液氮快速使其结冰。将其放入冷冻干燥机，-10～-30℃真空冻干，至不锈钢盘中无纯化水。得到白色香菇多糖，所得多糖的提取率0.05％，含量97.3％。
实施例3：
将1kg的鲜香菇加入中草药粉粹机中，开动粉碎机，高速搅拌打浆，转速24000r/min，粉碎2min。停止搅拌，将粉粹机中的香菇浆水倾入10L烧杯中，加入6L 25℃纯化水，开动定时电动搅拌器，转速2000r/min，加入300g乳酸，加入完毕后，继续搅拌1h，将香菇多糖萃取到水中。
用滤纸真空过滤萃取液，得到棕色香菇多糖溶液。将溶液加入10L烧杯中，开动定时电动搅拌器，转速500r/min，加入300g油酸钠/氯化钠(1:8)的混合物，加入完毕后，继续搅拌0.5h，倾入10L分液漏斗中，静置分层。将香菇多糖所在的上层水相分离出来。
取一根直径10cm，高度130cm的层析柱，内装3kg大孔吸附脱色树脂。将香菇多糖水相倾入脱色树脂上，进行柱层析，倾入香菇多糖水相完毕后，继续用3L纯化水洗涤层析柱，保持层析柱脱色树脂上保持约2cm的水层，并收集柱下脱色液；收集的脱色液使用陶瓷膜(支撑体二氧化钛，截留分子量15KD)进行超滤、浓缩。
将浓缩液放入不锈钢盘中，用液氮快速使其结冰。将其放入冷冻干燥机，将将浓缩液放入不锈钢盘中，用液氮快速使其结冰。-10～-30℃真空冻干，至不锈钢盘中无纯化水。得到白色香菇多糖，所得多糖的提取率0.04％，含量96.0％。
对比例1：
将1kg的鲜香菇加入中草药粉粹机中，开动粉碎机，高速搅拌打浆，转速24000r/min，粉碎2min。停止搅拌，将粉粹机中的香菇多糖倾入10L烧杯中，加入6L 40℃纯化水，开动定时电动搅拌器，转速2000r/min，加入200g三氟乙酸，加入完毕后，继续搅拌1h，将香菇多糖萃取到水中。
用滤纸真空过滤萃取液，得到棕色香菇多糖溶液。将溶液加入10L烧杯中，开动定时电动搅拌器，转速500r/min，加入200g油酸钠/氯化钠(1:12)的混合物，加入完毕后，继续搅拌0.5h，倾入10L分液漏斗中，静置分层。将香菇多糖所在的上层水相分离出来。
取一根直径10cm，高度130cm的层析柱，内装3kg大孔吸附脱色树脂。将香菇多糖水相倾入脱色树脂上，进行柱层析，倾入香菇多糖水相完毕后，继续用3L纯化水洗涤层析柱，保持层析柱脱色树脂上保持约2cm的水层，并收集柱下脱色液，收集的脱色液使用陶瓷膜(支撑体二氧化钛，截留分子量15KD)进行超滤、浓缩。
将浓缩液放入不锈钢盘中，用液氮快速使其结冰。将其放入冷冻干燥机，-10～-30℃真空冻干，至不锈钢盘中无纯化水。得到香菇多糖，所得多糖的提取率0.03％，含量86.0％。
对上述实施例1-3和对比例1制得的产品进行鉴别试验。
(1)取经五氧化二磷减压干燥至恒重的各实施例和对比例的样品12mg，精密称定，加0.5mol/L的氢氧化钠溶液10mL，研磨，使溶解，加水分次转移至500ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀。取定容后的溶液2mL,加0.2％蒽酮硫酸溶液(取蒽酮35mg置100mL容量瓶中加硫酸溶解，并用硫酸稀释至刻度，临用现配)5mL，振摇均匀，置水浴中加热，皆显蓝绿色。
(2)取各实施例和对比例的样品的干燥品约10mg，研磨，加0.5mol/L的氢氧化钠溶液0.5mL研磨使溶解，滴加0.5mol/L盐酸溶液至pH试纸呈6～8，加水稀释成每1mL中含有0.5mg的溶液，取10ml，加高碘酸钠溶液(取高碘酸钠4.28g，加0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000mL)1mL，摇匀，立即取反应液适量，以水为空白对照，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录ⅣA)，在295nm的波长处测定吸光度(A1)，剩余的反应液置30℃恒温水浴避光连续振摇6小时，冷却，测定吸光度(A2)，得到两次的吸光度之差。
样品 A1-A2
实施例1 0.19
实施例2 0.20
实施例3 0.21
对比例1 0.20
A1-A2应为0.15～0.25。
(3)取各实施例的样品的红外光吸收光谱在890cm-1附近有弱的特征吸收峰。

Claims (5)

1.一种香菇多糖的提取方法，其特征在于：在粉碎的香菇浆水中加入乳酸进行提取，搅拌之后过滤，滤液中加入油酸钠/氯化钠混合物使滤液形成双水层，将上层水相进行脱色、超滤、浓缩、冻干，得到纯品香菇多糖；
包括以下步骤：
S1、将鲜香菇加入到粉粹机中高速搅拌打浆得到香菇浆水；
S2、将上一步骤得到的香菇浆水倒入容器中，加入温水搅拌，搅拌均匀之后加入乳酸继续搅拌得到混合液；
S3、将上述混合液过滤，滤液搅拌过程中加入油酸钠/氯化钠混合物，继续搅拌半小时后进行静置分层；
S4、上述溶液静置形成双水层，分离，得到上层水相，过层析柱进行过柱洗脱，层析柱内装大孔吸附脱色树脂，收集洗脱液；
S5、将洗脱液进行超滤，浓缩，冻干得到白色香菇多糖固体；
步骤S3油酸钠/氯化钠混合物中油酸钠和氯化钠的比例为1:8-12，油酸钠/氯化钠混合物的加入量为鲜香菇质量的10%-30%；
步骤S2中加入的温水的温度为25~40℃；
步骤S2中加入的乳酸的量为鲜香菇质量的20%~30%。
2.根据权利要求1所述的一种香菇多糖的提取方法，其特征在于：步骤S5中的冻干采用先用液氮进行快速冷冻结冰，然后放入冷冻干燥机进行冻干，冻干温度-10～-30℃。
3.根据权利要求1所述的一种香菇多糖的提取方法，其特征在于：步骤S1中打浆时的转速24000r/min，粉碎2min。
4.根据权利要求1所述的一种香菇多糖的提取方法，其特征在于：步骤S2中加入乳酸后继续搅拌1h。
5.根据权利要求1所述的一种香菇多糖的提取方法，其特征在于：步骤S5中超滤步骤所用的膜为陶瓷膜。
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