CN108587968A - 乳杆菌细菌和组合物以及采用其生产产品的方法和用途 - Google Patents

乳杆菌细菌和组合物以及采用其生产产品的方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)细菌。本发明还涉及包含所述细菌的组合物、使用所述细菌来生产发酵乳产品的方法、由此获得的产品和所述细菌用于生产发酵乳产品的用途。

Description

乳杆菌细菌和组合物以及采用其生产产品的方法和用途
本申请是申请日为2016年8月30日、申请人为科.汉森有限公司、发明名称为“具有抗真菌活性的发酵乳杆菌细菌”的中国专利申请201680059331.X的分案申请。
技术领域
本发明涉及具有抗真菌活性的发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)细菌，包含所述细菌的组合物、特别是包含所述细菌的附属培养物，使用所述细菌或所述培养物生产发酵乳产品的方法和由此获得的发酵乳产品，包括食品、饲料和药品。
背景技术
几十年来，乳酸菌(lactic acid bacteria，LAB)已被用于延长食品的保质期。在发酵期间，LAB产生乳酸以及其他有机酸，其引起发酵产品的pH降低。具有酸性pH的产品不能支持大多数微生物(包括病原菌和腐败菌)的进一步生长。然而，酵母菌和霉菌的生长不受低pH影响，并且经常导致发酵乳产品变质。
除产生有机酸之外，一些LAB还产生具有抗微生物活性并且特别是抗真菌活性的代谢物。
例如，欧洲专利申请号EP0221499描述了鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)NRRL-B-15972的抗真菌特性，其当在补充有黄瓜汁的琼脂培养基上培养时能够抑制不同霉菌的生长。类似地，欧洲专利申请号EP0576780涉及鼠李糖乳杆菌LC-705，其是在补充有酪蛋白水解物和酵母提取物的基于乳清的培养基上明显抑制青霉属(Penicillium)、枝孢菌属(Cladosporium)、镰孢霉属(Fusarium)和假丝酵母属(Candida)生长的菌株。欧洲专利申请号EP1442113描述了具有抗微生物作用的詹氏丙酸杆菌(Propionibacterium jensenii)和乳杆菌属物种(Lactobacillus sp.)例如鼠李糖乳杆菌的混合物及其用于生物保护的用途。欧洲专利申请号EP13717237描述了具有抗真菌作用的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)菌株，并且欧洲专利申请号EP13714671描述了具有抗真菌作用的鼠李糖乳杆菌菌株。
Gerez等,2013提供了对具有抗真菌作用的LAB及其用于保护面包和水果的用途的概述。
具有抗真菌作用的培养物还可商购获得，并且包括Chr.Hansen的培养物以及Dupont,SACCO和Bioprox的培养物。开发具有抗真菌作用的培养物是一个巨大的挑战，因为其需要鉴定在实际食品应用中提供显著抗真菌作用的培养物。在选择生物保护性培养物候选物时需要谨慎评估的另一个因素是对食品的感官特性的影响。商业化产品中已经确定的一个问题是后酸化的程度，即产品已达到期望pH后培养物酸化的持续。这代表一个问题，特别是在升高的储存温度下、在产品冷却之前发酵产品保持在发酵罐中期间，或在熟化步骤期间。
还考虑到商业化生物保护性培养物产生过量的双乙酰风味成分，导致“奶油”风味，这可以被视为不期望的风味影响(Aunsbjerg等,2015)。
因此，仍然需要具有抗真菌作用和最小风味影响的新的且有利的食品级细菌。
发明内容
本发明提供了发酵乳杆菌物种的细菌，其具有以至少50％抑制以保藏号:DSM32093保藏的真菌离生青霉(Penicillium solitum)的生长或以保藏号:DSM32094保藏的真菌短密青霉(Penicillium brevicompactum)的生长的能力。
通过不懈努力，鉴定到一组新的发酵乳杆菌菌株，其在生产发酵产品的方法中用作生物保护性菌株时提供显著的抗真菌作用和额外优点。鉴定到总共10种不同的使离生青霉(P.solitum)或短密青霉(P.brevicompactum)的生长抑制至少50％的发酵乳杆菌菌株。
本发明的发酵乳杆菌菌株的进一步特征还可以在于具有使发酵乳产品中由由起子培养物在发酵期间产生的乙醛浓度降低至少50％的能力。
在一个相关实施方案中，本发明的发酵乳杆菌菌株的进一步特征还可以在于，所述细菌仅分泌少量的双乙酰(diacetyl)，例如0至5ppm的范围。
作为替选或补充，本发明的发酵乳杆菌菌株的特征可以在于，与不包含所述发酵乳杆菌的用相同起子培养物发酵的乳产品相比，所述发酵乳杆菌菌株增加包含所述发酵乳杆菌的发酵乳产品在发酵后储存期间的pH。
因此，本发明提供了如上所述的细菌，包含其的组合物，使用所述细菌生产发酵乳产品的方法，以及由此获得的产品。
附图说明
图1：由用单独起子培养物(参考，第一列)、与4一起(第二列)、与 YM-C Plus一起(第三列)或与发酵乳杆菌CHCC14591一起(第四列)发酵的乳制备的平板上霉菌的生长。平板已在7℃±1℃下孵育19天(顶行)和27天(底行)。目标污染物以500孢子/点的浓度添加：(A)P.carneum、(B)P.paneum和(C)娄地青霉(P.roqueforti)。
图2：由用单独起子培养物(参考，第一列)、与4一起(第二列)、与 YM-C Plus一起(第三列)或与发酵乳杆菌CHCC14591一起(第四列)发酵的乳制备的平板上霉菌的生长。平板已在25℃±1℃下孵育6天(顶行)和11天(底行)。目标污染物以500孢子/点的浓度添加：(A)P.carneum、(B)P.paneum和(C)娄地青霉。
图3：由用单独起子培养物(参考，第一列)、与4一起(第二列)、与 YM-C Plus一起(第三列)或与发酵乳杆菌CHCC14591一起(第四列)发酵的乳制备的平板上霉菌的生长。平板已在7℃±1℃下孵育19天(顶行)和27天(底行)。目标污染物以500孢子/点的浓度添加：(A)短密青霉、(B)皮落青霉(P.crustosum)和(C)离生青霉。
图4：由用单独起子培养物(参考，第一列)、与4一起(第二列)、与 YM-C Plus一起(第三列)或与发酵乳杆菌CHCC14591一起(第四列)发酵的乳制备的平板上霉菌的生长。平板已在25℃±1℃下孵育6天(顶行)和11天(底行)。目标污染物以500孢子/点的浓度添加：(A)短密青霉(DSM32093)、(B)皮落青霉和(C)离生青霉(DSM32093)。
图5：由用单独起子培养物(参考，第一列)、与4一起(第二列)、与 YM-C Plus一起(第三列)或与发酵乳杆菌CHCC14591一起(第四列)发酵的乳制备的平板上酵母的生长。平板已在7℃±1℃下孵育11天(顶行)或在25℃±1℃下孵育5天(底行)。目标污染物以1×103cfu/点(最上排)、1×102cfu/点(中间排)和1×101cfu/点(最下排)的浓度添加：(A)戴尔凯氏有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii)、(B)汉逊隐球酵母(Cryptococcus hansenii)、(C)汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)和(D)解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)。
图6：在7℃±1℃下储存14天后发酵乳产品中的双乙酰水平，所述发酵乳产品用单独起子培养物(参考)或者用与4、 YM-C Plus或发酵乳杆菌CHCC14591组合的起子培养物发酵。LOD：检测界限。LOQ：定量界限。
图7：由用单独起子培养物(参考，第一列)、与鼠李糖乳杆菌CHCC15860一起(第二列)、与发酵乳杆菌CHCC14591一起(第三列)或与鼠李糖乳杆菌CHCC15860和发酵乳杆菌CHCC14591的组合一起(第四列)发酵的乳制备的平板上霉菌的生长。平板已在25℃±1℃下孵育5天。目标污染物以500孢子/点的浓度添加：(A)P.carneum、(B)P.paneum和(C)娄地青霉。
图8：由用(1)单独起子培养物、(2)与发酵乳杆菌CHCC12798一起、(3)与发酵乳杆菌CHCC12797一起、(4)与发酵乳杆菌CHCC14591一起、(5)与发酵乳杆菌CHCC14588一起、(6)与发酵乳杆菌CHCC15844一起、(7)与发酵乳杆菌CHCC15865一起、(8)与发酵乳杆菌CHCC15847一起、(9)与发酵乳杆菌CHCC15848一起、(10)与发酵乳杆菌CHCC15926一起和(11)与发酵乳杆菌CHCC2008一起发酵的乳制备的平板上霉菌的生长。平板已在25℃±1℃下孵育5天(照片的左列)或7天(照片的右列)。目标污染物以500孢子/点的浓度添加：(A)短密青霉(DSM32094)、(B)皮落青霉和(C)离生青霉(DSM32093)。
图9：在7℃±1℃下储存14天后发酵乳产品中的双乙酰水平，所述发酵乳产品用单独起子培养物(参考)或者与4、 YM-C Plus或发酵乳杆菌菌株组合的起子培养物发酵。LOD：检测界限。LOQ：定量界限。
图10：当在(A)7℃±1℃和(B)25℃±1℃下储存28天时发酵乳产品中随时间的pH发展。产品用仅起子培养物(参考)或与4、 YM-C Plus或发酵乳杆菌菌株组合的起子培养物发酵。
图11：当在(A)7℃±1℃或(B)25℃±1℃下储存21天时发酵乳产品中随时间的pH发展。产品用仅起子培养物(参考，Δ)或与4(◇)、 YM-C Plus(o)或发酵乳杆菌CHCC14591(□)组合的起子培养物发酵。
图12：在7℃±1℃下储存14天后发酵乳产品中的乙醛水平，所述发酵乳产品用单独起子培养物(参考)或者与发酵乳杆菌菌株组合的起子培养物发酵。LOD：检测界限。LOQ：定量界限。
图13：在7℃±1℃下储存14天后发酵乳产品中的乙醛水平，所述发酵乳产品用单独起子培养物(参考)或者与发酵乳杆菌CHCC14591组合的起子培养物发酵。LOD：检测界限。LOQ：定量界限。
图14：在43℃下在乳(1％脂肪和4.5％蛋白质)中生长的四种商业化起子培养物(FD-DVS YF-L812、F-DVS YF-L901、F-DVS YoFlex Mild 2.0和F-DVS CH-1)的酸化曲线。
图15：在6℃下储存多达43天后用四种商业化起子培养物(FD-DVS YF-L812、F-DVSYF-L901、F-DVS YoFlex Mild 2.0和F-DVS CH-1)之一发酵的酸奶的后酸化曲线。
图16：由用(1)单独起子培养物FD-DVS YF-L812、(2)与发酵乳杆菌CHCC12798一起、(3)与发酵乳杆菌CHCC12797一起、(4)与发酵乳杆菌CHCC14591一起、(5)与发酵乳杆菌CHCC14588一起、(6)与发酵乳杆菌CHCC15844一起、(7)与发酵乳杆菌CHCC15865一起、(8)与发酵乳杆菌CHCC15847一起、(9)与发酵乳杆菌CHCC15926一起和(10)与发酵乳杆菌CHCC2008一起发酵的乳制备的平板上霉菌的生长。平板已在25℃±1℃下孵育4天(照片的左列)或8天(照片的右列)。目标污染物短密青霉(DSM32094)以500孢子/点的浓度添加。
图17：由用(1)单独起子培养物F-DVS CH-1、(2)与发酵乳杆菌CHCC12798一起、(3)与发酵乳杆菌CHCC12797一起、(4)与发酵乳杆菌CHCC14591一起、(5)与发酵乳杆菌CHCC14588一起、(6)与发酵乳杆菌CHCC15844一起、(7)与发酵乳杆菌CHCC15865一起、(8)与发酵乳杆菌CHCC15847一起、(9)与发酵乳杆菌CHCC15926一起和(10)与发酵乳杆菌CHCC2008一起发酵的乳制备的平板上霉菌的生长。平板已在25℃±1℃下孵育4天(照片的左列)或8天(照片的右列)。目标污染物短密青霉(DSM32094)以500孢子/点的浓度添加。
图18：由用(1)单独起子培养物FD-DVS YF-L812、(2)与发酵乳杆菌CHCC12798一起、(3)与发酵乳杆菌CHCC12797一起、(4)与发酵乳杆菌CHCC14591一起、(5)与发酵乳杆菌CHCC14588一起、(6)与发酵乳杆菌CHCC15844一起、(7)与发酵乳杆菌CHCC15865一起、(8)与发酵乳杆菌CHCC15847一起、(9)与发酵乳杆菌CHCC15926一起和(10)与发酵乳杆菌CHCC2008一起发酵的乳制备的平板上霉菌的生长。平板已在25℃±1℃下孵育4天(照片的左列)或8天(照片的右列)。目标污染物离生青霉(DSM32093)以500孢子/点的浓度添加。
图19：由用(1)单独起子培养物F-DVS CH-1、(2)与发酵乳杆菌CHCC12798一起、(3)与发酵乳杆菌CHCC12797一起、(4)与发酵乳杆菌CHCC14591一起、(5)与发酵乳杆菌CHCC14588一起、(6)与发酵乳杆菌CHCC15844一起、(7)与发酵乳杆菌CHCC15865一起、(8)与发酵乳杆菌CHCC15847一起、(9)与发酵乳杆菌CHCC15926一起和(10)与发酵乳杆菌CHCC2008一起发酵的乳制备的平板上霉菌的生长。平板已在25℃±1℃下孵育4天(照片的左列)或8天(照片的右列)。目标污染物离生青霉(DSM32093)以500孢子/点的浓度添加。
图20：在7℃±1℃下储存14天后发酵乳产品中的双乙酰水平，所述发酵乳产品用单独起子培养物FD DVS YF-L812或F-DVS CH-1(参考)或与九种发酵乳杆菌菌株之一组合的起子培养物发酵。LOD：检测界限。LOQ：定量界限。
图21：在7℃±1℃下储存14天后发酵乳产品中的乙醛水平，所述发酵乳产品用单独起子培养物FD DVS YF-L812或F-DVS CH-1(参考)或与九种发酵乳杆菌菌株之一组合的起子培养物发酵。LOD：检测界限。LOQ：定量界限。
具体实施方式
本发明提供了具有以至少50％抑制以保藏号:DSM32093保藏的真菌离生青霉的生长或以保藏号:DSM32094保藏的真菌短密青霉的生长的能力的发酵乳杆菌物种的细菌。在一个优选实施方案中，本发明涉及当在乳或基于乳的底物(例如如发酵乳产品)中生长时，具有以至少50％抑制以保藏号:DSM32093保藏的真菌离生青霉的生长或以保藏号:DSM32094保藏的真菌短密青霉的生长的能力的发酵乳杆菌物种的细菌。抑制真菌生长的能力可以通过本领域已知的许多不同测定来确定。在本发明的上下文中，以至少50％抑制以保藏号:DSM32093保藏的真菌离生青霉的生长或以保藏号:DSM32094保藏的真菌短密青霉的生长的能力优选地使用包括以下的测定来确定：
(1)通过以下步骤制备发酵乳产品：
(a)向乳中接种浓度为至少107CFU/g的发酵乳杆菌和起子培养物，
(b)发酵直至达到4.6的pH，以及
(c)通过添加琼脂来固化发酵乳；
(2)在琼脂固化发酵乳上产生浓度为500孢子/点的至少一个点的离生青霉或短密青霉，并将其在25℃下孵育7天；
(3)如下确定百分比抑制：确定由离生青霉或短密青霉生长形成的菌落的最大直径并将所述直径表示为在相同条件下但不存在发酵乳杆菌菌株的情况下形成的最大直径的百分比。
本发明的发酵乳杆菌菌株由于其提高用这些细菌制成的食品的储存稳定性而具有特别的优点。在一个替代方案中，本发明的发酵乳杆菌菌株使以保藏号:DSM32093保藏的真菌离生青霉的生长和以保藏号:DSM32094保藏的真菌短密青霉的生长被抑制至少50％。在一个相关的实施方案中，本发明的发酵乳杆菌菌株使以保藏号:DSM32093保藏的真菌离生青霉的生长和/或以保藏号:DSM32094保藏的真菌短密青霉的生长被抑制至少60％、至少70％或至少75％。
应理解，在上述测定中确定的本发明发酵乳杆菌菌株的至少107CFU/g的浓度代表提供优异抗真菌作用的浓度。虽然本发明因此涵盖浓度为至少107CFU/g，例如浓度为107CFU/g至1011CFU/g、107CFU/g至1010CFU/g和107CFU/g至109CFU/g的本发明发酵乳杆菌菌株，但是本发明不限于这些浓度，因为在较低浓度下也获得良好的抗真菌作用。
根据一个方面，本发明的细菌的进一步特征还在于分泌少量或基本上不分泌影响食品的感官特性的挥发性化合物。已知普通的起子培养物，例如可商购获得的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)和德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillusdelbrueckii subsp.bulgaricus)的混合物产生对发酵产品的感官特性有显著影响的挥发性化合物。例如乙醛、双乙酰和乙偶姻是已知的影响食品的感官特性的挥发性化合物。在一个相关的实施方案中，本发明的细菌的特征在于减少由起子培养物中其他细菌产生的乙醛的存在。例如，本发明的某些发酵乳杆菌菌株的进一步特征可以在于具有使发酵乳产品中由起子培养物在发酵期间产生的乙醛浓度降低至少50％的能力。因此，降低是与在没有本发明发酵乳杆菌菌株的情况下生产的发酵产品相比较确定的。本领域已知用于确定发酵产品中乙醛浓度的不同测定，并且其可以针对根据本发明的目的而使用。使发酵乳产品中由起子培养物在发酵期间产生的乙醛浓度降低至少50％的能力优选地在包括以下的测定中确定：
(1)通过以下步骤制备发酵乳产品：
(a)向乳中接种浓度为至少107CFU/g的发酵乳杆菌和起子培养物，
(b)发酵直至达到4.6的pH，以及
(2)将发酵乳产品在7℃±1℃下储存14天；
(3)向1g发酵乳产品中添加200μl的4N H2SO4并通过静态顶空气相色谱来确定乙醛浓度。
乙醛是由乳酸菌在发酵期间产生的味道组分。尽管该组分在某些应用中是期望的，但在其他应用中减少或避免乙醛的存在将是有利的。因此降低发酵乳产品中乙醛浓度的发酵乳杆菌细菌在特定应用中提供优点，例如在制备温和或甜味酸奶时。本发明的发酵乳杆菌菌株可以例如使发酵乳产品中由起子培养物在发酵期间产生的乙醛浓度降低至少75％、至少95％或至少98％。
作为替代或补充，本发明的发酵乳杆菌菌株的特征可以在于细菌分泌范围为0至5ppm的双乙酰。双乙酰的分泌可以使用本领域已知的不同测定来确定，但优选地在包括以下的测定中确定：
(1)通过以下步骤制备发酵乳产品：
(a)向乳中接种浓度为至少107CFU/g的发酵乳杆菌和起子培养物，
(b)发酵直至达到4.6的pH，以及
(2)将发酵乳产品在7℃±1℃下储存14天；
(3)向1g发酵乳产品中添加200μl的4N H2SO4并通过静态顶空气相色谱来确定双乙酰浓度。
分泌低浓度双乙酰的发酵乳杆菌细菌在用这些细菌生产食品的方法中具有优势，因为产生高浓度这些挥发性化合物的发挥抗真菌活性的其他菌株影响最终产品的味道，并且因此不能用于所有应用。本发明的发酵乳杆菌菌株的特征可以在于细菌分泌范围为0至3ppm或0至2ppm的双乙酰。
本发明的发酵乳杆菌菌株的特征可以在于另外的有利效果。例如，所述菌株的特征可以在于，与用不含发酵乳杆菌的相同起子培养物发酵的乳产品相比，所述细菌增加包含发酵乳杆菌的发酵乳产品在发酵后储存期间的pH(即抵消后酸化)。pH的增加为至少0.1的值，并且优选地在将发酵产品在25℃下储存21天后确定。如上所述，观察到现有技术的抗真菌细菌有助于后酸化。本发明人惊奇地发现：本发明的发酵乳杆菌菌株不仅不能对后酸化作出贡献，而且实际上通过增加pH值来拮抗后酸化。如以下实施例中所示，在使用显示出明显后酸化的起子培养物(包括许多可商购获得的起子培养物并且特别是当与商业化抗真菌细菌一起使用时)的发酵过程中，该效应特别显著。
本发明的发酵乳杆菌菌株的特征例如可以在于，与用不含发酵乳杆菌的相同起子培养物发酵的乳产品相比，所述发酵乳杆菌菌株增加包含发酵乳杆菌的发酵乳产品在发酵后储存期间的pH，其中pH的增加为至少0.1的值且在将发酵产品在25℃下储存21天后确定，并且其中起子培养物包含LAB，所述LAB能够在发酵期间在10小时或更短时间内使乳产品的pH降低至4.6的值。例如，该测定可以基于嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种的混合物。各混合物经常用于生产酸奶，并且已知会导致后酸化。
在一个相关的实施方案中，包含发酵乳杆菌的发酵乳产品当在25℃下储存至少14天时维持高于4.0的pH，其中发酵乳产品通过包含以下的方法获得：向乳中接种浓度为至少107CFU/g的发酵乳杆菌和起子培养物，发酵直至达到4.6的pH，摇动发酵产品并冷却。因此，本发明的这些发酵乳杆菌菌株降低在现有技术生物保护性培养物中和甚至在常规起子培养物中观察到的后酸化作用。应理解，指定本发明的发酵乳杆菌菌株当在25℃下储存至少14天时可维持高于4.0的pH的特征仅表征通常用于确定该效果的测定。并非必需或要求本发明的发酵乳杆菌菌株、包含其的组合物(包括食品或饲料产品)实际上储存在这些条件下。此外，在一个方面，可以使用包含LAB的起子培养物来进行测定，LAB能够在发酵期间在10小时或更短时间内使乳产品的pH降低至pH4.6的值。例如，该测定可以基于嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种的混合物。
本发明的细菌可有利地来源于以下保藏菌株之一：
(a)以保藏号:32084保藏于德国微生物保藏中心(German Collection ofMicroorganisms and Cell Cultures)(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH；DSMZ)布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B的发酵乳杆菌菌株CHCC12798；
(b)以保藏号:32085保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ)布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B的发酵乳杆菌菌株CHCC12797；
(c)以保藏号:32086保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ)布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B的发酵乳杆菌菌株CHCC14591；
(d)以保藏号:32087保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ)布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B的发酵乳杆菌菌株CHCC14588；
(e)以保藏号:32088保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ)布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B的发酵乳杆菌菌株CHCC15844；
(f)以保藏号:32089保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ)布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B的发酵乳杆菌菌株CHCC15865；
(g)以保藏号:32090保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ)布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B的发酵乳杆菌菌株CHCC15847；
(h)以保藏号:32091保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ)布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B的发酵乳杆菌菌株CHCC15848；
(i)以保藏号:32096保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ)布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B的发酵乳杆菌菌株CHCC15926；
(j)以保藏号:22584保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ)布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B的发酵乳杆菌菌株CHCC2008；
(k)能够由根据(a)至(j)的保藏细菌之一获得的突变体菌株，其中所述突变体具有在以下测定中使以保藏号:32093保藏在DSMZ的真菌离生青霉的生长或以保藏号:32094保藏在DSMZ的真菌短密青霉的生长被抑制至少50％的能力，所述测定包括：
(1)通过以下步骤制备发酵乳产品：
(a)向乳中接种浓度为至少107CFU/g的发酵乳杆菌和起子培养物，
(b)发酵直至达到4.6的pH，以及
(c)通过添加琼脂来固化发酵乳；
(2)在琼脂固化发酵乳上产生浓度为500孢子/点的至少一个点的离生青霉或短密青霉，并将其在25℃下孵育7天；
(3)如下确定百分比抑制：确定由离生青霉或短密青霉生长形成的菌落的最大直径并将所述直径表示为在相同条件下但不存在发酵乳杆菌菌株的情况下形成的最大直径的百分比。
在本申请的上下文中，术语“乳酸菌”或“LAB”用于指产生乳酸作为碳水化合物发酵的主要代谢终产品的食品级细菌。这些细菌由于其共同的代谢和生理特征而相关，并且通常是革兰氏阳性的、低GC的、耐酸的非孢子形成的、非呼吸的、棒状杆菌或球菌。在发酵阶段期间，这些细菌对乳糖的消耗引起乳酸的形成，从而降低pH并导致形成蛋白质凝结物。因此，这些细菌负责乳的酸化和乳产品的质地。本文使用的术语“乳酸菌”包括但不限于属于以下属的细菌：乳杆菌属(Lactobacillus spp.)、双歧杆菌属(Bifidobacterium spp.)、链球菌属(Streptococcus spp.)、乳球菌属(Lactococcus spp.)，例如德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜热链球菌、乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、动物双歧杆菌(Bifidobacteriumanimalis)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)；和明串珠菌属(Leuconostoc spp.)。
根据最佳增殖温度，LAB被表征为嗜温性或嗜热性LAB。术语“嗜温性”是指在适中温度下生长最好的微生物。本文中的术语“嗜温性发酵”是指在约22℃至约35℃的温度下的发酵。术语“嗜温性发酵乳产品”是指通过嗜温性起子培养物的嗜温性发酵制备的发酵乳产品，并且包括例如以下发酵乳产品：酪乳、酸乳、发酵乳、斯美塔那(smetana)、酸奶油和新鲜乳酪，例如夸克乳酪、tvarog和奶油乳酪。工业上最有用的嗜温性细菌包括乳球菌属和明串珠菌属。
术语“嗜热菌”是指在高温下生长最好的微生物。术语“嗜热性发酵”是指在约35℃至约45℃的温度下进行的发酵方法。术语“嗜热性发酵乳产品”是指使用嗜热性起子培养物通过嗜热性发酵制备的发酵乳产品，并且包括例如以下发酵乳产品：凝固型酸奶、搅拌型酸奶、脱乳清酸奶和饮用型酸奶。工业上最有用的嗜热性细菌包括链球菌属和乳杆菌属。
如下所述，本发明包括使用嗜温性和嗜热性发酵的方法。
关于真菌、酵母和霉菌的术语“抑制”是指相对于不包含本发明细菌的食品，在例如包含这样的细菌的食品中和/或在包含这样的细菌的食品的表面上真菌、酵母和霉菌的生长或孢子形成降低或者真菌、酵母和霉菌的数目或浓度减少。由本发明的发酵乳杆菌细菌提供的抑制程度优选地通过在存在和不存在该发酵乳杆菌细菌的情况下在琼脂固化发酵乳上的生长来确定。
在本发明上下中，术语“突变体”应理解为由本发明的菌株通过例如基因工程、辐射和/或化学处理获得的菌株。优选的是，突变体是功能上等同的突变体，例如，与保藏菌株具有基本上相同或改善的特性，特别是关于抗真菌特性的突变体。这样的突变体是本发明的一部分。尤其地，术语“突变体”是指通过对本发明菌株进行任何常规使用的诱变处理而获得的菌株或者是指自发发生的突变体，所述处理包括用化学诱变剂如乙烷甲烷磺酸盐(EMS)或N-甲基-N'-硝基-N-硝基胍(NTG)、UV光进行的处理。突变体可以已进行数次诱变处理(单次处理应理解为在一个诱变步骤之后是筛选/选择步骤)，但目前优选地进行不超过20次、或不超过10次、或不超过5次处理(或筛选/选择步骤)。在目前优选的突变体中，与母本菌株相比，细菌基因组中少于5％或少于1％或甚至少于0.1％的核苷酸已经变换为另一核苷酸或缺失。
除非本文另外指出或明显与上下文矛盾，否则在描述本发明的上下文中(尤其是在下面的权利要求书的上下文中)术语“a(一)”和“an(一)”和“所述”以及类似指代词的使用应解释为涵盖一个/种和/或多个/种。
本发明还提供了包含至少一种发酵乳杆菌物种的细菌的组合物，其具有在如上所述的测定中使以保藏号:32093保藏在DSMZ的真菌离生青霉CHCC16948在琼脂固化发酵乳的生长或以保藏号:32094保藏在DSMZ的真菌短密青霉CHCC16935在琼脂固化发酵乳的生长抑制至少50％的能力。
相应的组合物可以包含许多其他细菌，包括LAB。因此，本发明的优选组合物的特征在于：所述组合物还包含至少一种选自一个或多个以下属和种的另外细菌：乳杆菌属、双歧杆菌属、链球菌属、乳球菌属，例如德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜热链球菌、乳酸乳杆菌、动物双歧杆菌、乳酸乳球菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、瑞士乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短双歧杆菌；和明串珠菌属。
在一个特别优选的实施方案中，本发明的组合物包含至少一种如上所述具有抗真菌活性的发酵乳杆菌物种的细菌和一种或多种具有抗真菌活性的第二细菌。在一个实施方案中，将本发明的具有抗真菌活性的发酵乳杆菌细菌的几种不同菌株组合。或者，这些另外细菌可以例如选自：
(a)以保藏号DSM32092保藏于德国微生物保藏中心(DSMZ)的鼠李糖乳杆菌细菌的菌株CHCC15860；
(b)以保藏号DSM23035保藏于德国微生物保藏中心(DSMZ)的鼠李糖乳杆菌细菌的菌株CHCC5366；
(c)以保藏号DSM24616保藏于德国微生物保藏中心(DSMZ)的鼠李糖乳杆菌细菌的菌株CHCC12697；
(d)以保藏号DSM24651保藏于德国微生物保藏中心(DSMZ)的副干酪乳杆菌细菌的菌株CHCC12777；和
(e)以保藏号DSM25612保藏于德国微生物保藏中心(DSMZ)的副干酪乳杆菌细菌的菌株CHCC14676。
本发明人发现了这些菌株的附加抗真菌作用和与单独使用每种菌株的抑制作用相比由鼠李糖乳杆菌(Lb.rhamnosus)CHCC15860和发酵乳杆菌(Lb.fermentum)CHCC14591的组合产生的令人惊讶的协同抗真菌作用。
本发明的组合物可另外包含许多其他组分，包括一种或多种冷冻保护性化合物以及调味化合物。
LAB最常以起子培养物的形式添加到乳中。在本发明上下文中使用的术语“起子”或“起子培养物”是指一种或多种食品级微生物，特别是乳酸菌的培养物，其负责乳基质的酸化。起子培养可以是新鲜的，但是最经常是冷冻或冷冻干燥的。这些产品也被称为“直投式(Direct Vat Set)”(DVS)培养物，并被生产用于直接接种发酵容器或槽以生产乳产品，例如发酵乳产品或乳酪。各种起子培养物可从多种来源商购获得，并且包括F-DVS YoFlexMild 2.0、F-DVS YF-L901、FD-DVS YF-812和F-DVS CH-1，四种培养物可从Chr.Hansen商购获得，包含嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种的混合物。
因此，在一方面，本发明提供了固体冷冻或冷冻干燥的起子培养物形式的组合物，其包含浓度为至少109个菌落形成单位/g冷冻材料或浓度为至少1010个菌落形成单位/g冷冻材料或浓度为至少1011个菌落形成单位/g冷冻材料的乳酸菌，所述组合物包含如上所述具有抗真菌活性的发酵乳杆菌物种的细菌。
本发明还提供了发酵乳杆菌细菌和包含所述发酵乳杆菌细菌的组合物，其特征在于多于一种上述特征和包含其的组合物。例如，本发明提供了发酵乳杆菌物种的细菌，所述细菌具有使以保藏号:DSM32093保藏的真菌离生青霉的生长或以保藏号:DSM32094保藏的真菌短密青霉的生长抑制至少50％的能力，所述能力在包括以下的测定中确定：
(1)通过以下步骤制备发酵乳产品：
(a)向乳中接种浓度为至少107CFU/g的发酵乳杆菌和起子培养物，
(b)发酵直至达到4.6的pH，以及
(c)通过添加琼脂来固化发酵乳；
(2)在琼脂固化发酵乳上产生浓度为500孢子/点的至少一个点的离生青霉或短密青霉，并将其在25℃下孵育7天；
(3)如下确定百分比抑制：确定由离生青霉或短密青霉生长形成的菌落的最大直径并将所述直径表示为在相同条件但不存在发酵乳杆菌菌株的情况下形成的最大直径的百分比。
并且进一步特征在于：该发酵乳杆菌物种的细菌分泌0至5ppm的双乙酰，其中双乙酰浓度在包括以下的测定中确定：
(4)通过以下步骤制备发酵乳产品：
(a)向乳中接种浓度为至少107CFU/g的发酵乳杆菌和起子培养物，
(b)发酵直至达到4.6的pH；以及
(5)将发酵乳产品在7℃±1℃下储存14天；
(6)向1g发酵乳产品中添加200μl的4N H2SO4并通过静态顶空气相色谱来确定双乙酰浓度。
这些细菌的特征进一步可以在于：使发酵乳产品中由起子培养物在发酵期间产生的乙醛浓度降低至少50％的能力。
作为替代或补充，发酵乳杆菌物种的细菌的特征可以进一步在于，与用不包含发酵乳杆菌的相同起子培养物发酵的乳产品相比，所述细菌增加包含发酵乳杆菌的发酵乳产品在发酵后储存期间的pH。
在一个单独的实施方案中，本发明还提供了发酵乳杆菌细菌，其具有使以保藏号:DSM32093保藏的真菌离生青霉的生长或以保藏号:DSM32094保藏的真菌短密青霉的生长抑制至少50％的能力，所述能力在包括以下的测定中确定：
(1)通过以下步骤制备发酵乳产品：
(a)向乳中接种浓度为至少107CFU/g的发酵乳杆菌和起子培养物，
(b)发酵直至达到4.6的pH，以及
(c)通过添加琼脂来固化发酵乳；
(2)在琼脂固化发酵乳上产生浓度为500孢子/点的至少一个点的离生青霉或短密青霉，并将其在25℃下孵育7天；
(3)如下确定百分比抑制：确定由离生青霉或短密青霉生长形成的菌落的最大直径并将所述直径表示为在相同条件但不存在发酵乳杆菌菌株的情况下形成的最大直径的百分比。
并且进一步特征在于，与用不包含发酵乳杆菌的相同起子培养物发酵的乳产品相比，该发酵乳杆菌物种的细菌增加包含发酵乳杆菌的发酵乳产品在发酵后储存期间的pH，其中pH的增加为至少0.1的值，并且其中pH的增加在将发酵产品在25℃下储存21天后确定。此外，在一个实施方案中，这些细菌可以进一步具有使发酵乳产品中由起子培养物在发酵期间产生的乙醛浓度降低至少50％的能力。
在另一个实施方案中，本发明提供了生产发酵乳产品的方法，其包括向乳或乳产品中添加如上所述具有抗真菌活性的发酵乳杆菌细菌或包含其的组合物，并在约22℃至约43℃的温度下发酵混合物直至达到小于4.6的pH。
在本申请的上下文中，术语“乳”广泛地以其常用含义使用，是指由动物的乳腺或由植物产生的液体。根据本发明，乳可以已经加工，并且术语“乳”包括全乳、脱脂乳、无脂乳、低脂乳、全脂乳、降乳糖乳或浓缩乳。无脂乳是无脂肪或脱脂乳产品。低脂乳通常被限定为含有约1％至约2％脂肪的乳。全脂乳通常含有2％或更多的脂肪。术语“乳”旨在涵盖来自不同哺乳动物和植物来源的乳。乳的哺乳动物来源包括但不限于牛、绵羊、山羊、水牛、骆驼、美洲驼、母马和鹿。植物来源的乳包括但不限于从以下提取的乳：大豆、豌豆、花生、大麦、稻、燕麦、藜麦、杏仁、腰果、椰子、榛子、大麻、芝麻籽和向日葵籽。在本发明的方法和产品中，来源于牛的乳最优选地用作发酵的起始材料。
术语“乳”还包括降低脂肪和/或降低乳糖的乳产品。相应的产品可以使用本领域公知的方法来制备，并且可以商购获得(例如从Select Milk Producers Inc.,Texas,USA商购获得)。乳糖降低的乳可以根据本领域已知的任何方法来产生，包括通过乳糖酶将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖，或者通过纳米过滤、电渗析、离子交换色谱和离心。
术语“乳产品”或“乳基质”在本申请中广泛地用于指可用作用于LAB生长和发酵的介质的基于乳或乳组分的组合物。乳产品或乳基质包含来源于乳的组分和可用于生长或发酵LAB的目的的任何其他组分。
用于制造发酵乳产品的方法的发酵步骤包括向乳中添加LAB。用于生产乳产品的发酵方法是公知的，并且普通技术人员可以选择发酵过程条件，包括温度、氧、微生物的量和特征以及发酵时间。
在发酵之前，可以根据本领域已知的方法来将乳底物均化并巴氏杀菌。本文使用的“均化”意指强烈混合以获得可溶性悬浮液或乳液。如果在发酵之前进行均化，则可以进行均化以将乳脂分解成更小的尺寸，使得其不再从乳中分离。这可以通过在高压下迫使乳通过小孔来完成。本文使用的“巴氏灭菌”意指处理乳底物以减少或消除活生物如微生物的存在。优选地，巴氏杀菌通过将特定温度维持特定时间段来实现。特定的温度通常通过加热来实现。可以选择温度和持续时间以杀死或灭活某些细菌，例如有害细菌。可随后进行快速冷却步骤。
在本发明的一种特别有利的方法中，将如上所述具有抗真菌作用的发酵乳杆菌细菌或包含其的组合物添加到乳或乳产品中，并以以下方式发酵混合物：
(a)在发酵乳产品中发酵终止时，具有抗真菌作用的发酵乳杆菌细菌的浓度为至少1×106cfu/g或至少1×107cfu/g；和/或
(b)使得在发酵乳产品的表面上具有抗真菌作用的发酵乳杆菌细菌的浓度为至少1×105cfu/cm2。
这种处理方式具有可充分利用发酵乳杆菌细菌的抗真菌作用的优点。
实现浓缩的一种方式是使用生产发酵乳产品的方法，其中维持发酵参数使得在发酵期间上述发酵乳杆菌细菌的浓度增加。使用常规起子培养物和发酵条件(如实施例中所述)通常使发酵期间上述发酵乳杆菌细菌的浓度增加至少0.5log。或者，维持发酵参数使得上述发酵乳杆菌细菌的浓度不显著降低，例如在发酵和储存期间降低不超过30％、不超过25％或不超过20％。
本发明还提供了通过用本发明的发酵乳杆菌细菌发酵乳产品而能获得的发酵物。术语发酵物用于指代发酵产品。相应的发酵物可以是从使用本发明发酵乳杆菌细菌的发酵过程获得的液体。液体可以含有细菌，但不需要含有细菌。液体优选地含有由本发明的发酵乳杆菌细菌产生的抗真菌代谢物。发酵物可以用于生产食品、饲料或药物产品。例如，发酵物可以喷射在食品或饲料产品上以实现抗真菌效果。
本发明还提供了生产食品、饲料或药物产品的方法，其包括如上所述的生产发酵乳产品的方法，和能够通过该方法获得的食品、饲料或药物产品。
进行发酵以生产食品、饲料产品或药品。术语“发酵乳产品”、“食品”或“饲料”产品是指能够通过本发明的发酵方法获得的产品，并且包括乳酪、酸奶、水果酸奶、酸奶饮料、脱乳清酸奶(希腊式酸奶，Labneh)、夸克乳酪、白干酪(fromage frais)和奶油乳酪。术语食品还包括其他发酵食品，包括发酵肉类，例如发酵香肠和发酵鱼类产品。
术语“乳酪”理解为包括任何乳酪，包括硬质、半硬质和软质乳酪，例如以下类型的乳酪：乡村乳酪(Cottage)、菲达乳酪(Feta)、切达乳酪(Cheddar)、帕尔玛乳酪(Parmesan)、马苏里拉乳酪(Mozzarella)、大孔乳酪(Emmentaler)、丹博乳酪(Danbo)、豪达乳酪(Gouda)、埃德姆乳酪(Edam)、Feta型乳酪、蓝纹乳酪(blue cheese)、盐水乳酪(brinecheese)、卡门贝尔乳酪(Camembert)和布里乳酪(Brie)。本领域技术人员知道如何将凝固物转化成乳酪，方法可以见于文献中，参见例如Kosikowski,F.V.,和V.V.Mistry,"Cheeseand Fermented Milk Foods",1997,第3版F.V.Kosikowski,L.L.C.Westport,CT。如本文所用，具有低于1.7％(w/w)的NaCl浓度的乳酪被称为“低盐乳酪”。
在本申请的上下文中，术语“酸奶”是指包含嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种以及任选地其他微生物的产品，所述其他微生物例如德氏乳杆菌乳酸亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.lactis)、动物双歧杆菌乳酸亚种(Bifidobacteriumanimalis subsp.lactis)、乳酸乳球菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌，或由其获得的任何微生物。除嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种之外的乳酸菌株包含在内以赋予成品各种特性，例如促进菌群平衡的特性。本文使用的术语“酸乳”涵盖凝固型酸乳、搅拌型酸乳、饮用型酸乳、Petit Suisse、热处理酸乳、特征在于高蛋白质水平的脱乳清或希腊式酸奶，和酸奶样产品。
特别地，术语“酸奶”涵盖但不限于根据法国和欧洲法规定义的酸奶，例如由仅特定嗜热性乳酸菌(即，德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌)通过乳酸发酵获得的凝固型乳产品，所述乳酸菌同时培养并且发现以至少1000万CFU(菌落形成单位)/g的量存活于最终产品中。酸奶可以任选地含有添加的乳原料(例如奶油)或其他成分例如糖或甜味剂、一种或多种调味剂、水果、谷物或营养物质，尤其是维生素、矿物质和纤维以及稳定剂和增稠剂。任选地，酸奶符合AFNOR NF 04-600标准和/或法典StanA-11a-1975标准对发酵乳和酸奶的规定。为了满足AFNOR NF 04-600标准，产品在发酵后不得加热，并且乳原料必须占最终产品的最少70％(m/m)。
在另一个实施方案中，本发明提供了食品、饲料或药物产品，其包含一种或多种如上所述具有抗真菌作用的发酵乳杆菌物种的细菌和以下一种或多种：
(a)至少一种选自一个或多个以下属的另外细菌：乳球菌属(Lactococcus spp.)、链球菌属(Streptococcus spp.)、乳杆菌属(Lactobacillus spp.)、明串珠菌属(Leuconostoc spp.)、伪明串珠菌属(Pseudoleuconostoc spp.)、片球菌属(Pediococcusspp.)、短杆菌属(Brevibacterium spp.)和肠球菌属(Enterococcus spp.)；
(b)以保藏号DSM32092保藏于德国微生物保藏中心(DSMZ)的鼠李糖乳杆菌细菌的菌株CHCC15860；
(c)以保藏号DSM23035保藏于德国微生物保藏中心(DSMZ)的鼠李糖乳杆菌细菌的菌株CHCC5366；
(d)以保藏号DSM24616保藏于德国微生物保藏中心(DSMZ)的鼠李糖乳杆菌细菌的菌株CHCC12697；
(e)以保藏号DSM24651保藏于德国微生物保藏中心(DSMZ)的副干酪乳杆菌细菌的菌株CHCC12777；和
(f)以保藏号DSM25612保藏于德国微生物保藏中心(DSMZ)的副干酪乳杆菌细菌的菌株CHCC14676。
实施例1：
半定量分析发酵乳杆菌CHCC14591针对不同的酵母和霉菌污染物的抑制作用以及双乙酰产生
对于发酵乳杆菌CHCC14591的抑制作用的半定量分析，使用琼脂测定，类似于酸奶的制造方法和产品：
将脂肪降低(1.5％w/v)的均化乳在90℃±1℃下热处理20分钟并立即冷却。以0.02％(v/w)接种商业化起子培养物(F-DVS Mild 2.0)，并将经接种的乳分配到200ml瓶中。向一瓶接种总浓度为2×107CFU/g的发酵乳杆菌CHCC14591，向两瓶接种推荐剂量(对于4和 YM-C Plus分别为100U/T和20DCU/100L)的两种商业化生物保护性培养物(4和 YM-C Plus)中的任一种，一瓶用作参考并且仅接种起子培养物。将所有瓶子在43℃±1℃下在水浴中孵育并在这些条件下发酵直至达到4.60±0.1的pH。在发酵后，剧烈摇动瓶子以破裂凝块并在冰上冷却。然后，将发酵乳温热至40℃的温度，并添加40ml已经熔化并冷却至60℃的5％无菌琼脂溶液。然后，将发酵乳和琼脂的这一溶液倒入无菌培养皿中，并将平板在LAF工作台中干燥30分钟。
6种不同霉菌的孢子悬浮液以500个孢子/点的浓度点样：短密青霉(DSM32094)、皮落青霉、离生青霉(DSM32093)、P.carneum、P.paneum和娄地青霉。在每个平板上点样三种霉菌。包括戴尔凯氏有孢圆酵母、汉逊隐球酵母、汉逊德巴利酵母和解脂耶氏酵母的四种酵母以104、103和102CFU/点的浓度点样。将平板在7℃±1℃和25℃±1℃下孵育，并定期检查霉菌和酵母菌的生长。
在第14天，通过静态顶空气相色谱(static head space gas chromatography，HSGC)分析样品的双乙酰，静态顶空气相色谱是用于分析复杂基质中挥发物的灵敏方法。装置由与具有火焰电离检测器(FID)的气相色谱仪连接的静态顶空取样器组成。为此目的，使用以下设备：
HS自动取样器：HS40XI,TurboMatrix 110,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
HS软件:HSControl v.2.00,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
GC:Autosystem XL,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
GC软件:Turbochrom navigator,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
柱:HP-FFAP 25m x 0.20mm x 0.33μιη,Agilent Technologies(安捷伦科技)
已知浓度的标准品用于确定响应因子(校准)，对照用于控制所使用的响应因子在分析系列内以及系列间并且随时间(月)是稳定的。使用来自标准品的响应因子来确定样品和对照中挥发物的浓度(ppm)。通过向1g酸乳样品中添加200μl的4N H2SO4来制备样品并立即通过HSGC进行分析。
图1至图5示出了琼脂测定的结果，显示所有受试霉菌在由仅用起子培养物(参考)发酵的乳制成的琼脂平板上生长良好。然而，当在乳发酵期间存在发酵乳杆菌CHCC14591时，所得平板抑制所有受试青霉属物种的生长。抑制水平与对两种商业化生物保护性培养物观察到的抑制相当或甚至更高。图3显示，所有受试酵母在由仅用起子培养物(参考)发酵的乳制成的琼脂平板上生长。当在乳发酵期间存在发酵乳杆菌CHCC14591时，所得平板阻止以所有浓度添加的C.fragiola和解脂耶氏酵母(Y.lipolytica)的生长。当在乳发酵期间存在发酵乳杆菌CHCC14591时，在较低浓度下戴尔凯氏有孢圆酵母(T.delbrueckii)和汉逊德巴利酵母(D.hansenii)的生长受到抑制。抑制水平与对两种商业化生物保护性培养物观察到的抑制相当或甚至更高。
图6示出了对双乙酰产生的作用，表明与可商购获得的替代品相比，在乳发酵期间添加发酵乳杆菌CHCC14591产生极少量的双乙酰。
实施例2：
与鼠李糖乳杆菌CHCC15860组合的发酵乳杆菌CHCC14591针对不同霉菌污染物的抑制作用的半定量分析
对于发酵乳杆菌CHCC14591和鼠李糖乳杆菌CHCC15860的组合的抑制作用的半定量分析，使用琼脂测定，类似于酸奶的制造方法和产品：
将脂肪降低(1.5％w/v)的均化乳在90℃±1℃下热处理20分钟并立即冷却。以0.02％(v/w)接种商业化起子培养物(F-DVS Mild 2.0)，并将经接种的乳分配到200ml瓶中。向一瓶接种总浓度为1×107CFU/g的鼠李糖乳杆菌CHCC15860，向一瓶接种总浓度为1×107CFU/g的发酵乳杆菌CHCC14591，向一瓶接种浓度分别为5x 106CFU/g的发酵乳杆菌CHCC14591和鼠李糖乳杆菌CHCC15860，一瓶用作参考并且仅接种起子培养物。将所有瓶子在43℃±1℃下在水浴中孵育并在这些条件下发酵直至达到4.60±0.1的pH。在发酵后，剧烈摇动瓶子以破裂凝结物并在冰上冷却。然后，将发酵乳温热至40℃的温度，并添加40ml已经熔化并冷却至60℃的5％无菌琼脂溶液。然后，将发酵乳和琼脂的这一溶液倒入无菌培养皿中，并将平板在LAF工作台中干燥30分钟。
3种不同霉菌的孢子悬浮液以500个孢子/点的浓度点样：P.carneum、P.paneum和娄地青霉。在每个平板上点样三种霉菌。将平板在25℃±1℃下孵育，并定期检查霉菌的生长。
图7示出了琼脂测定的结果，显示所有受试霉菌在由仅用起子培养物(参考)发酵的乳制成的琼脂平板上生长非常良好。然而，当在乳发酵期间存在鼠李糖乳杆菌15860或发酵乳杆菌CHCC14591时，所得平板抑制三种受试青霉属物种的生长。此外，与单独使用每种菌株的抑制作用相比，当将鼠李糖乳杆菌CHCC15860和发酵乳杆菌CHCC14591组合使用时，发现协同抑制作用。
实施例3：
发酵乳杆菌菌株针对不同霉菌污染物的抑制作用的半定量分析
对于10种发酵乳杆菌菌株的抑制作用的半定量分析，使用琼脂测定，类似于酸奶的制造方法和产品：
将脂肪降低(1.5％w/v)的均化乳在90℃±1℃下热处理20分钟并立即冷却。以0.02％(v/w)接种商业化起子培养物(F-DVS Mild 2.0)，并将经接种的乳分配到200ml瓶中。向10瓶接种浓度为1×107CFU/g的发酵乳杆菌菌株，一瓶用作参考并且仅接种起子培养物。将所有瓶子在43℃±1℃下在水浴中孵育并在这些条件下发酵直至达到4.60±0.1的pH。在发酵后，剧烈摇动瓶子以破裂凝块并在冰上冷却。然后，将发酵乳温热至40℃的温度，并添加40ml已经熔化并冷却至60℃的5％无菌琼脂溶液。然后，将发酵乳和琼脂的这一溶液倒入无菌培养皿中，并将平板在LAF工作台中干燥30分钟。
受试发酵乳杆菌菌株为：发酵乳杆菌CHCC12798、发酵乳杆菌CHCC12797、发酵乳杆菌CHCC14591、发酵乳杆菌CHCC14588、发酵乳杆菌CHCC15844、发酵乳杆菌CHCC15865、发酵乳杆菌CHCC15847、发酵乳杆菌CHCC15848、发酵乳杆菌CHCC15926和发酵乳杆菌CHCC2008。
6种不同霉菌的孢子悬浮液以500个孢子/点的浓度点样：短密青霉(DSM32094)、皮落青霉、离生青霉(DSM32093)、P.carneum、P.paneum和娄地青霉。在每个平板上点样三种霉菌。将平板在25℃±1℃下孵育，并定期检查霉菌的生长。
在第14天，通过静态顶空气相色谱(HSGC)分析样品的双乙酰，静态顶空气相色谱是用于分析复杂基质中挥发物的灵敏方法。装置由与具有火焰电离检测器(FID)的气相色谱仪连接的静态顶空取样器组成。为此目的，使用以下设备：
HS自动取样器：HS40XI,TurboMatrix 110,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
HS软件:HSControl v.2.00,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
GC:Autosystem XL,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
GC软件:Turbochrom navigator,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
柱:HP-FFAP 25m x 0.20mm x 0.33μιη,Agilent Technologies(安捷伦科技)
已知浓度的标准品用于确定响应因子(校准)，对照用于控制所使用的响应因子在分析系列内以及系列间并且随时间(月)是稳定的。使用来自标准品的响应因子来确定样品和对照中挥发物的浓度(ppm)。通过向1g酸奶样品中添加200μl的4N H2SO4来制备样品并立即通过HSGC进行分析。
为了监测对后酸化的作用，将11种发酵乳样品(单独的起子培养物和与10种发酵乳杆菌菌株组合的起子培养物)在7℃±1℃和25℃±1℃下储存28天，并在第1、7、14、21和28天测量pH。
图8示出了琼脂测定结果，显示所有受试霉菌在由仅用起子培养物(参考)发酵的乳制成的琼脂平板上生长良好。对于短密青霉(DSM32094)和离生青霉(DSM32093)，对于所有发酵乳杆菌菌株当在乳发酵期间存在时观察到大的生长延迟。对于剩余的受试霉菌，当在乳发酵期间存在发酵乳杆菌菌株时，观察到不同的生长延迟。发酵乳杆菌CHCC14591菌株的细菌实现对本测定中测试的基本上所有霉菌的显著抑制。
图9示出了对双乙酰产生的作用，显示每种抗真菌菌株发酵乳杆菌CHCC12798、发酵乳杆菌CHCC12797、发酵乳杆菌CHCC14591、发酵乳杆菌CHCC14588、发酵乳杆菌CHCC15844、发酵乳杆菌CHCC15865、发酵乳杆菌CHCC15847、发酵乳杆菌CHCC15848、发酵乳杆菌CHCC15926和发酵乳杆菌CHCC2008不分泌双乙酰或分泌很少双乙酰。
图10示出了对后酸化的作用，并且显示与参考酸奶相比，发酵乳杆菌CHCC12798、发酵乳杆菌CHCC12797、发酵乳杆菌CHCC14591、发酵乳杆菌CHCC14588、发酵乳杆菌CHCC15844、发酵乳杆菌CHCC15865、发酵乳杆菌CHCC15847、发酵乳杆菌CHCC15848、发酵乳杆菌CHCC15926和发酵乳杆菌CHCC2008中的每一种都不会促进后酸化或甚至降低后酸化。
这些发现是出乎意料的并且高度显著，因为观察到现有技术的抗真菌食品级细菌有助于挥发性化合物的分泌并且提高由起子培养物引起的后酸化作用。
实施例4：
一种发酵乳杆菌菌株对后酸化的作用
测试一种发酵乳杆菌菌株(CHCC14591)对后酸化的作用。
将脂肪降低(1.5％w/v)的均化乳在90℃±1℃下热处理20分钟并立即冷却。以0.02％(v/w)接种商业化起子培养物(F-DVS Mild 2.0)，并将经接种的乳分配到200ml瓶中。向一瓶接种总浓度为2×107CFU/g的发酵乳杆菌CHCC14591，向两瓶接种推荐剂量(对于4和 YM-C Plus分别为100U/T和20DCU/100L)的两种商业化生物保护性培养物(4和 YM-C Plus)中的任一种，一瓶用作参考并且仅接种起子培养物。将所有瓶子在43℃±1℃下在水浴中孵育并在这些条件下发酵直至达到4.60±0.1的pH。在发酵后，剧烈摇动瓶子以破裂凝块并在冰上冷却。
为了监测对后酸化的作用，将4种发酵乳样品(仅起子、4、YM-C Plus和发酵乳杆菌CHCC14591)在7℃±1℃和25℃±1℃下储存21天，并在第1、7、14和21天测量pH。
图11示出了对后酸化的作用，显示在乳发酵期间添加发酵乳杆菌CHCC14591阻止发酵乳产品的后酸化。单独的起子培养物会产生轻微的后酸化，并且两种商业化生物保护性培养物都有助于后酸化。
实施例5：
10种发酵乳杆菌菌株对乙醛含量的作用
测试10种发酵乳杆菌菌株降低乙醛含量的能力。
将脂肪降低(1.5％w/v)的均化乳在90℃±1℃下热处理20分钟并立即冷却。以0.02％(v/w)接种商业化起子培养物(F-DVS YF-L901)，并将经接种的乳分配到200ml瓶中。向10瓶接种浓度为1×107CFU/g的发酵乳杆菌菌株，一瓶用作参考并且仅接种起子培养物。将所有瓶子在43℃±1℃下在水浴中孵育并在这些条件下发酵直至达到4.60±0.1的pH。在发酵后，剧烈摇动瓶子以破裂凝块并在冰上冷却。将瓶子在7℃±1℃下储存14天。
在第14天，通过静态顶空气相色谱(HSGC)分析样品的乙醛，静态顶空气相色谱是用于分析复杂基质中挥发物的灵敏方法。装置由与具有火焰电离检测器(FID)的气相色谱仪连接的静态顶空取样器组成。为此目的，使用以下设备：
HS自动取样器：HS40XI,TurboMatrix 110,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
HS软件:HSControl v.2.00,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
GC:Autosystem XL,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
GC软件:Turbochrom navigator,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
柱:HP-FFAP 25m x 0.20mm x 0.33μιη,Agilent Technologies(安捷伦科技)
已知浓度的标准品用于确定响应因子(校准)，对照用于控制所使用的响应因子在分析系列内以及系列间并且随时间(月)是稳定的。使用来自标准品的响应因子来确定样品和对照中挥发物的浓度(ppm)。通过向1g酸奶样品中添加200μl的4N H2SO4来制备样品并立即通过HSGC进行分析。
结果示于图12中，并且显示菌株发酵乳杆菌CHCC12798、发酵乳杆菌CHCC12797、发酵乳杆菌CHCC14591、发酵乳杆菌CHCC14588、发酵乳杆菌CHCC15844、发酵乳杆菌CHCC15865、发酵乳杆菌CHCC15847、发酵乳杆菌CHCC15848、发酵乳杆菌CHCC15926和发酵乳杆菌CHCC2008中的每一种都具有降低发酵乳产品中由起子培养物在发酵期间产生的乙醛浓度的能力。
实施例6：
一种发酵乳杆菌菌株对乙醛含量的作用
测试一种发酵乳杆菌菌株降低乙醛含量的能力。
将脂肪降低(1.5％w/v)的均化乳在90℃±1℃下热处理20分钟并立即冷却。以0.02％(v/w)接种商业化起子培养物(F-DVS Mild 2.0)，并将经接种的乳分配到两个200ml瓶中。向一瓶接种浓度为1×107CFU/g的发酵乳杆菌菌株，一瓶用作参考并且仅接种起子培养物。将两个瓶子在43℃±1℃下在水浴中孵育并在这些条件下发酵直至达到4.60±0.1的pH。在发酵后，剧烈摇动瓶子以破裂凝块并在冰上冷却。将瓶子在7℃±1℃下储存14天。
在第14天，通过静态顶空气相色谱(HSGC)分析样品的乙醛，静态顶空气相色谱是用于分析复杂基质中挥发物的灵敏方法。装置由与具有火焰电离检测器(FID)的气相色谱仪连接的静态顶空取样器组成。为此目的，使用以下设备：
HS自动取样器HS40XI,TurboMatrix 110,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
HS软件:HSControl v.2.00,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
GC:Autosystem XL,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
GC软件:Turbochrom navigator,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
柱:HP-FFAP 25m x 0.20mm x 0.33μιη,Agilent Technologies(安捷伦科技)
已知浓度的标准品用于确定响应因子(校准)，对照用于控制所使用的响应因子在分析系列内以及系列间并且随时间(月)是稳定的。使用来自标准品的响应因子来确定样品和对照中挥发物的浓度(ppm)。通过向1g酸奶样品中添加200μl的4N H2SO4来制备样品并立即通过HSGC进行分析。
结果示于图13中所示，并且显示发酵乳杆菌CHCC14591具有降低发酵乳产品中由起子培养物在发酵期间产生的乙醛浓度的能力。
实施例7
商业化起子培养物的功能分析
本文中包括的四种商业化起子培养物是基于其不同的酸化特征来选择的。三种是冷冻的：F-DVS CH-1、F-DVS YoFlex Mild 2.0和F-DVS YF-L901；并且一种是冷冻干燥的：FD-DVS YF-L812。为了测试酸化特征的差异，将半脂乳用脱脂乳粉标准化为1％脂肪和4.5％蛋白质，在85℃±1℃下热处理30分钟并立即冷却。以0.02％(v/w)接种四种不同的商业化起子培养物中的一种(F-DVS CH-1、F-DVS YoFlex Mild 2.0、F-DVS YF-L901或FD-DVSYF-L812)，并将经接种的乳分配到200ml瓶中。将瓶子在43℃±1℃下在水浴中孵育并在这些条件下发酵直至达到pH 4.5。在整个发酵期间连续测量pH。随后，将瓶子在6℃下储存43天，并且以7天的间隔测量pH以确定后酸化的水平。
四种商业化起子培养物F-DVS CH-1、F-DVS YoFlex Mild 2.0、F-DVS YF-L901和FD-DVS YF-L812的酸化特征示于图14中。F-DVS CH-1显示在4.87小时内达到pH 4.55的快速发酵时间。F-DVS YoFlex Mild 2.0显示在5.29小时内达到pH 4.55的中间发酵时间。FD-DVS YF-L812和F-DVS YF-L901分别显示在6.45和5.87小时内达到pH 4.55的较慢发酵。后酸化特征显示，FD-DVS YF-L812和F-DVS YoFlex Mild 2.0具有非常低的后酸化水平(ΔpH＝0.12和ΔpH＝0.11，在6℃下储存43天后)，F-DVS YF-L901具有中等后酸化水平(ΔpH＝0.26，在6℃下储存43天后)，并且F-DVS CH-1具有高度后酸化(ΔpH＝0.55，在6℃下储存43天后)(图15)。
实施例8：
9种发酵乳杆菌菌株当与两种不同的起子培养物一起发酵时针对不同的霉菌污染物的抑制作用的半定量分析
对于9种发酵乳杆菌菌株的抑制作用的半定量分析，使用琼脂测定，类似于酸奶的制造方法和产品：
将脂肪降低(1.5％w/v)的均化乳在90℃±1℃下热处理20分钟并立即冷却。以0.02％(v/w)向乳中接种两种商业化起子培养物中的一种(F-DVS CH-1或FD-DVS YF-L812)，并将经接种的乳分配到200ml瓶中。向接种每种起子培养物的9瓶另外接种浓度为1×107CFU/g的发酵乳杆菌菌株，接种每种起子培养物的一瓶用作参考并且仅接种起子培养物。将所有瓶子在43℃±1℃下在水浴中孵育并在这些条件下发酵直至达到4.55±0.1的pH。在发酵后，剧烈摇动瓶子以破裂凝块儿并在冰上冷却。然后，将发酵乳温热至40℃的温度，并添加40ml已经熔化并冷却至60℃的5％无菌琼脂溶液。然后，将发酵乳和琼脂的这一溶液倒入无菌培养皿中，并将平板在LAF工作台中干燥30分钟。
受试发酵乳杆菌菌株为：发酵乳杆菌CHCC12798、发酵乳杆菌CHCC12797、发酵乳杆菌CHCC14591、发酵乳杆菌CHCC14588、发酵乳杆菌CHCC15844、发酵乳杆菌CHCC15865、发酵乳杆菌CHCC15847、发酵乳杆菌CHCC15926和发酵乳杆菌CHCC2008。
两种不同霉菌的孢子悬浮液以500个孢子/点的浓度点样：短密青霉(DSM32094)和离生青霉(DSM32093)。在每个平板上点样一种霉菌。将平板在7℃±1℃和25℃±1℃下孵育，并定期检查霉菌的生长。
在第14天，通过静态顶空气相色谱(HSGC)分析样品的双乙酰，静态顶空气相色谱是用于分析复杂基质中挥发物的灵敏方法。装置由与具有火焰电离检测器(FID)的气相色谱仪连接的静态顶空取样器组成。为此目的，使用以下设备：
HS自动取样器：HS40XI,TurboMatrix 110,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
HS软件:HSControl v.2.00,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
GC:Autosystem XL,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
GC软件:Turbochrom navigator,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
柱:HP-FFAP 25m x 0.20mm x 0.33μιη,Agilent Technologies(安捷伦科技)
已知浓度的标准品用于确定响应因子(校准)，对照用于控制所使用的响应因子在分析系列内以及系列间并且随时间(月)是稳定的。使用来自标准品的响应因子来确定样品和对照中挥发物的浓度(ppm)。通过向1g酸奶样品中添加200μl的4N H2SO4来制备样品并立即通过HSGC进行分析。
图16至图19示出了琼脂测定的结果，显示两种受试霉菌在由仅用起始培养物之一(参考)发酵的乳制成的琼脂平板上生长得非常好。对于短密青霉(DSM32094)和离生青霉(DSM32093)二者，对于所有发酵乳杆菌菌株当在乳发酵期间存在时都观察到大的生长延迟，与所使用的起子培养物无关。
图20示出了对双乙酰产生的作用，显示抗真菌菌株发酵乳杆菌CHCC12798、发酵乳杆菌CHCC12797、发酵乳杆菌CHCC14591、发酵乳杆菌CHCC14588、发酵乳杆菌CHCC15844、发酵乳杆菌CHCC15865、发酵乳杆菌CHCC15847、发酵乳杆菌CHCC15926和发酵乳杆菌CHCC2008中的每一种都不向由起子培养物产生的水平增加双乙酰。
这些发现是出乎意料的并且高度显著，因为观察到现有技术的抗真菌食品级细菌有助于由起子培养物引起的挥发性化合物分泌。
实施例9
9种发酵乳杆菌菌株当与两种不同的起子培养物一起发酵时对乙醛含量的作用
测试9种发酵乳杆菌菌株降低乙醛含量的能力。
将脂肪降低(1.5％w/v)的均化乳在90℃±1℃下热处理20分钟并立即冷却。以0.02％(v/w)向乳中接种两种商业化起子培养物中的一种(F-DVS CH-1或FD-DVS YF-L812)，并将经接种的乳分配到200ml瓶中。向9瓶接种浓度为1×107CFU/g的发酵乳杆菌菌株，接种每种起子培养物的一瓶用作参考并且仅接种起子培养物。将所有瓶子在43℃±1℃下在水浴中孵育并在这些条件下发酵直至达到4.55±0.1的pH。在发酵后，剧烈摇动瓶子以破裂凝块并在冰上冷却。将瓶子在7℃±1℃下储存14天。
受试发酵乳杆菌菌株为：发酵乳杆菌CHCC12798、发酵乳杆菌CHCC12797、发酵乳杆菌CHCC14591、发酵乳杆菌CHCC14588、发酵乳杆菌CHCC15844、发酵乳杆菌CHCC15865、发酵乳杆菌CHCC15847、发酵乳杆菌CHCC15926和发酵乳杆菌CHCC2008。
在第14天，通过静态顶空气相色谱(HSGC)分析样品的乙醛，静态顶空气相色谱是用于分析复杂基质中挥发物的灵敏方法。装置由与具有火焰电离检测器(FID)的气相色谱仪连接的静态顶空取样器组成。为此目的，使用以下设备：
HS自动取样器：HS40XI,TurboMatrix 110,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
HS软件:HSControl v.2.00,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
GC:Autosystem XL,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
GC软件:Turbochrom navigator,Perkin Elmer(珀金埃尔默).
柱:HP-FFAP 25m x 0.20mm x 0.33μιη,Agilent Technologies(安捷伦科技)
已知浓度的标准品用于确定响应因子(校准)，对照用于控制所使用的响应因子在分析系列内以及系列间并且随时间(月)是稳定的。使用来自标准品的响应因子来确定样品和对照中挥发物的浓度(ppm)。通过向1g酸奶样品中添加200μl的4N H2SO4来制备样品并立即通过HSGC进行分析。
结果示于图21中，并且显示菌株发酵乳杆菌CHCC12798、发酵乳杆菌CHCC12797、发酵乳杆菌CHCC14591、发酵乳杆菌CHCC14588、发酵乳杆菌CHCC15844、发酵乳杆菌CHCC15865、发酵乳杆菌CHCC15847、发酵乳杆菌CHCC15926和发酵乳杆菌CHCC2008中的每一种都具有降低发酵乳产品中由起子培养物在发酵期间产生的乙醛浓度的能力。
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保藏和专家解决方案
申请人要求：下述保藏微生物的样品只能供专家使用，直至专利被授予专利权的日期。
发酵乳杆菌菌株CHCC12798于2015年7月16日以保藏号:32084保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ),布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B。
发酵乳杆菌菌株CHCC12797于2015年7月16日以保藏号:32085保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ),布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B。
发酵乳杆菌菌株CHCC14591于2015年7月16日以保藏号:32086保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ),布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B。
发酵乳杆菌菌株CHCC14588于2015年7月16日以保藏号:32087保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ),布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B。
发酵乳杆菌菌株CHCC15844于2015年7月16日以保藏号:32088保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ),布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B。
发酵乳杆菌菌株CHCC15865于2015年7月16日以保藏号:32089保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ),布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B。
发酵乳杆菌菌株CHCC15847于2015年7月16日以保藏号:32090保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ),布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B。
发酵乳杆菌菌株CHCC15848于2015年7月16日以保藏号:32091保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ),布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B。
发酵乳杆菌菌株CHCC15926于2015年7月22日以保藏号:32096保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ),布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B。
发酵乳杆菌菌株CHCC2008于2009年5月19日以保藏号:22584保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ),布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B。
鼠李糖乳杆菌菌株CHCC15860于2015年7月16日以保藏号:32092保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ),布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B。
离生青霉菌株CHCC16948于2015年7月16日以保藏号:32093保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ),布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B。
短密青霉菌株CHCC16935于2015年7月16日以保藏号:32094保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH；DSMZ),布伦瑞克D-38124，茵霍芬街7B。
该保藏是根据用于专利程序目的关于微生物保藏的国际认可的布达佩斯条约进行的。

Claims (10)

1.以保藏号DSM32092保藏于德国微生物保藏中心(DSMZ)的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)细菌的菌株CHCC15860。
2.组合物，其包含根据权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌细菌的菌株。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物还包含保藏为DSM32086的发酵乳杆菌菌株。
4.根据权利要求2或3所述的组合物，其进一步包含至少一种冷冻保护性化合物。
5.根据权利要求2至3中任一项所述的组合物，其中所述组合物是固体冷冻或冷冻干燥的起子培养物，所述起子培养物包含浓度为至少109个菌落形成单位/g冷冻材料或浓度为至少1010个菌落形成单位/g冷冻材料或浓度为至少1011个菌落形成单位/g冷冻材料的乳酸菌。
6.生产发酵乳产品的方法，其包括将根据权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌细菌或根据权利要求2至5中任一项所述的组合物添加到乳或到乳产品中并在约22℃至约43℃的温度下发酵混合物，直至达到小于4.6的pH。
7.生产食品、饲料或药物产品的方法，其包括根据权利要求6所述的生产发酵乳产品的方法。
8.食品、饲料或药物产品，其能够通过权利要求7所述的方法获得。
9.食品、饲料或药物产品，其包含根据权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌细菌或根据权利要求2至5中任一项所述的组合物。
10.根据权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌细菌或根据权利要求2至5中任一项所述的组合物在制备食品、饲料或药物产品中的用途。
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