EA037612B1 - Штамм бактерий lactobacillus rhamnosus, композиция на его основе и способ получения ферментированного молочного продукта с его использованием - Google Patents
Штамм бактерий lactobacillus rhamnosus, композиция на его основе и способ получения ферментированного молочного продукта с его использованием Download PDFInfo
- Publication number
- EA037612B1 EA037612B1 EA201891889A EA201891889A EA037612B1 EA 037612 B1 EA037612 B1 EA 037612B1 EA 201891889 A EA201891889 A EA 201891889A EA 201891889 A EA201891889 A EA 201891889A EA 037612 B1 EA037612 B1 EA 037612B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- fermentum
- milk
- fermented
- lactobacillus
- concentration
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 title claims abstract description 17
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 title claims abstract description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 62
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 43
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 35
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 32
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 107
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 claims description 94
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 74
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 74
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 74
- 229940012969 lactobacillus fermentum Drugs 0.000 claims description 64
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 claims description 52
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 16
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000000959 cryoprotective effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 72
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 72
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 36
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 32
- 239000000047 product Substances 0.000 description 31
- 241000228145 Penicillium brevicompactum Species 0.000 description 30
- 241000864268 Penicillium solitum Species 0.000 description 30
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 26
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 26
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 25
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 23
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 22
- 238000003988 headspace gas chromatography Methods 0.000 description 21
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical group CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 20
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 20
- 230000004044 response Effects 0.000 description 18
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 17
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 15
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 12
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 11
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 8
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 8
- 235000020603 homogenised milk Nutrition 0.000 description 8
- 238000012764 semi-quantitative analysis Methods 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 241000186673 Lactobacillus delbrueckii Species 0.000 description 7
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 239000003039 volatile agent Substances 0.000 description 7
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 6
- 241000960405 Penicillium paneum Species 0.000 description 6
- 240000000064 Penicillium roqueforti Species 0.000 description 6
- 244000233952 Polygonum bistorta Species 0.000 description 6
- 230000000513 bioprotective effect Effects 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 6
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 6
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 5
- 241001507662 Penicillium crustosum Species 0.000 description 5
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 5
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 5
- 229940098377 penicillium brevicompactum Drugs 0.000 description 5
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 5
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 5
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 4
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 4
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 241001134770 Bifidobacterium animalis Species 0.000 description 3
- 241000235036 Debaryomyces hansenii Species 0.000 description 3
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 3
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 3
- 240000002129 Malva sylvestris Species 0.000 description 3
- 235000006770 Malva sylvestris Nutrition 0.000 description 3
- 244000253897 Saccharomyces delbrueckii Species 0.000 description 3
- 241000235015 Yarrowia lipolytica Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 229940118852 bifidobacterium animalis Drugs 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 3
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 235000008939 whole milk Nutrition 0.000 description 3
- 235000008924 yoghurt drink Nutrition 0.000 description 3
- JVKXKIBYHWRLOJ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethyl methanesulfonate Chemical compound CS(=O)(=O)OCCO JVKXKIBYHWRLOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- UDHXJZHVNHGCEC-UHFFFAOYSA-N Chlorophacinone Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)C(=O)C1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O UDHXJZHVNHGCEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 240000002605 Lactobacillus helveticus Species 0.000 description 2
- 235000013967 Lactobacillus helveticus Nutrition 0.000 description 2
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 2
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 235000018370 Saccharomyces delbrueckii Nutrition 0.000 description 2
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 2
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 2
- 235000014681 Torulaspora delbrueckii Nutrition 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 229940054346 lactobacillus helveticus Drugs 0.000 description 2
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 2
- 235000020121 low-fat milk Nutrition 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- SRKQWNFPTBNUKE-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1,2-dinitroguanidine Chemical compound [O-][N+](=O)N(C)\C(N)=N/[N+]([O-])=O SRKQWNFPTBNUKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186425 Acidipropionibacterium jensenii Species 0.000 description 1
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 description 1
- 241000208223 Anacardiaceae Species 0.000 description 1
- 244000303258 Annona diversifolia Species 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 241000186012 Bifidobacterium breve Species 0.000 description 1
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 235000012766 Cannabis sativa ssp. sativa var. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 235000012765 Cannabis sativa ssp. sativa var. spontanea Nutrition 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- 240000006162 Chenopodium quinoa Species 0.000 description 1
- 241000222290 Cladosporium Species 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 1
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 241000723382 Corylus Species 0.000 description 1
- 235000007466 Corylus avellana Nutrition 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 235000021102 Greek yogurt Nutrition 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 1
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 1
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 1
- 241001147746 Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis Species 0.000 description 1
- 241000917016 Lactobacillus rhamnosus Lc 705 Species 0.000 description 1
- 241000186610 Lactobacillus sp. Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 1
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 150000001491 aromatic compounds Chemical class 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 235000015155 buttermilk Nutrition 0.000 description 1
- 235000009120 camo Nutrition 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 235000020226 cashew nut Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 235000005607 chanvre indien Nutrition 0.000 description 1
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 235000020379 cucumber juice Nutrition 0.000 description 1
- 235000015142 cultured sour cream Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000000909 electrodialysis Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 235000021105 fermented cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000013332 fish product Nutrition 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 235000015061 fromage frais Nutrition 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011617 hard cheese Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000011487 hemp Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl propionaldehyde Natural products CCC(=O)CO GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 235000021243 milk fat Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021116 parmesan Nutrition 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 235000020245 plant milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 235000020185 raw untreated milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000008983 soft cheese Nutrition 0.000 description 1
- 235000021262 sour milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 235000020238 sunflower seed Nutrition 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1236—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using Leuconostoc, Pediococcus or Streptococcus sp. other than Streptococcus Thermophilus; Artificial sour buttermilk in general
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1238—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using specific L. bulgaricus or S. thermophilus microorganisms; using entrapped or encapsulated yoghurt bacteria; Physical or chemical treatment of L. bulgaricus or S. thermophilus cultures; Fermentation only with L. bulgaricus or only with S. thermophilus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
- A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
- A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
- A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
- A23L3/3571—Microorganisms; Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/10—Preserving against microbes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/113—Acidophilus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/137—Delbrueckii
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/143—Fermentum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/147—Helveticus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/157—Lactis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/165—Paracasei
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/175—Rhamnosus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/21—Streptococcus, lactococcus
- A23V2400/215—Cremoris
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/21—Streptococcus, lactococcus
- A23V2400/249—Thermophilus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/31—Leuconostoc
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/51—Bifidobacterium
- A23V2400/519—Breve
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Physiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
Изобретение относится к штамму бактерий вида Lactobacillus rhamnosus CHCC15860, депонированному в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур под номером доступа DSM32092, для получения ферментированного молочного продукта. Изобретение дополнительно относится к композициям и пищевым или кормовым продуктам, содержащим указанный штамм, способам получения ферментированных молочных продуктов с использованием указанного штамма и к продуктам, полученным таким образом.
Description
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к бактериям Lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью, композициям, содержащим указанные бактерии, в частности к вспомогательным культурам, содержащим указанные бактерии, способам получения ферментированного молочного продукта с использованием указанных бактерий или к культурам и ферментированным молочным продуктам, полученным таким образом, включая пищевые, кормовые и фармацевтические продукты.
Предшествующий уровень техники
Молочнокислые бактерии (LAB) использовали десятилетиями для увеличения срока хранения пищевых продуктов. Во время ферментации LAB продуцируют молочную кислоту, а также другие органические кислоты, которые вызывают снижение рН ферментированного продукта. Продукты, имеющие кислотный рН, не поддерживают дальнейший рост большинства микроорганизмов, включая патогенные бактерии и бактерии, вызывающие порчу продуктов. Однако рост дрожжей и плесневых грибов не подвергается влиянию низкого рН и часто вызывает порчу ферментированных молочных продуктов.
Помимо продукции органических кислот, некоторые LAB также продуцируют метаболиты с антимикробной и, в частности, противогрибковой активностью.
Например, в Европейской патентной заявке № ЕР 0221499 описаны противогрибковые свойства Lactobacillus rhamnosus NRRL-B-15972, которая способна ингибировать рост разных плесневых грибов при культивировании на агаризованной среде, дополненной огуречным соком. Аналогичным образом, Европейская патентная заявка № ЕР 0576780 относится к Lactobacillus rhamnosus LC-705 - штамму, который, по-видимому, ингибирует рост Penicillium, Cladosporium, Fusarium и Candida на среде на основе лактосыворотки, дополненной гидролизатом казеина и дрожжевым экстрактом. В Европейской патентной заявке № ЕР 1442113 описаны смеси Propionibacterium jensenii и Lactobacillus sp., такой как Lactobacillus rhamnosus, с антимикробными эффектами и их применение для биозащиты. В Европейской патентной заявке № ЕР 13717237 описаны штаммы Lactobacillus paracasei с противогрибковыми эффектами, и в Европейской патентной заявке № ЕР 13714671 описаны штаммы Lactobacillus rhamnosus с противогрибковыми эффектами.
Обзор LAB с противогрибковыми эффектами и их применение для защиты хлеба и фруктов приводится Gerez et al., 2013.
Культуры с противогрибковыми эффектами, кроме того, имеются в продаже и включают культуры FreshQ® Chr Hansen, а также культуры Dupont, SACCO и Bioprox. Разработка культур с противогрибковыми эффектами представляет сложную задачу, так как она требует идентификации культур, которые обеспечивают значительный противогрибковый эффект в реальных пищевых приложениях. Другим фактором, для которого необходима тщательная оценка при отборе биозащитных культур-кандидатов, является влияние на органолептические свойства пищевого продукта. Проблемой, которая была идентифицирована в имеющихся в продаже продуктах, является степень последующего закисления, т.е. продолжение закисления культуры после достижения продуктом желательного рН. Это представляет проблему, в частности, при повышенных температурах хранения, во время выдерживания ферментированного продукта в ферментационных чанах перед охлаждением продукта или на протяжении стадий созревания.
Кроме того, считается, что имеющиеся в продаже биозащитные культуры дают избыточный диацетильный вкусовой компонент, вызывающий кремовый привкус, который может восприниматься в качестве нежелательного вкусового влияния (Aunsbjerg et al., 2015).
Следовательно, все еще существует потребность в новых и имеющих преимущества бактериях, подходящих для пищевого применения, с противогрибковыми эффектами и минимальным влиянием на вкус.
Краткое изложение сущности изобретения
Согласно настоящему изобретению предложены бактерии вида Lactobacillus fermentum, имеющие способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50%.
Посредством целенаправленных усилий была идентифицирована новая группа штаммов Lactobacillus fermentum, которые обеспечивают значимые противогрибковые эффекты и дополнительные преимущества при использовании в качестве биозащитного штамма в способах получения ферментированных продуктов. Всего было идентифицировано 10 разных штаммов Lactobacillus fermentum, которые ингибируют рост P. solitum или P. brevicompactum по меньшей мере на 50%.
Штаммы Lactobacillus fermentum no настоящему изобретению могут быть дополнительно охарактеризованы по наличию способности уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцированного заквасочной культурой на протяжении ферментации, в ферментированном молочном продукте по меньшей мере на 50%.
В родственном воплощении штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут быть дополнительно охарактеризованы тем, что указанная бактерия секретирует только маленькие количества диацетила, например в интервале от 0 до 5 млн-1.
Штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут альтернативно или дополни- 1 037612 тельно быть охарактеризованы тем, что они увеличивают рН ферментированного молочного продукта, содержащего Lactobacillus fermentum, во время хранения после ферментации по сравнению с молочным продуктом, ферментированным такой же заквасочной культурой, не содержащей Lactobacillus fermentum.
Согласно настоящему изобретению, следовательно, предложены бактерии, как описано выше, содержащие их композиции, способы применения данных бактерий для получения ферментированных молочных продуктов, а также продукты, полученные таким образом.
Подробное описание изобретения
Согласно настоящему изобретению предложена бактерия вида Lactobacillus fermentum, имеющая способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50%. В предпочтительном воплощении настоящее изобретение относится к бактерии вида Lactobacillus fermentum, имеющей способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50% при выращивании в молоке или субстрате на основе молока, таком как, например, ферментированный молочный продукт. Способность ингибировать рост гриба может быть определена многочисленными разными анализами, известными в данной области. В контексте настоящего изобретения способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50% предпочтительно определена с использованием анализа, включающего:
(1) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ (колониеобразующая единица)/г и заквасочной культурой, (б) ферментирования до достижения рН 4,6 и (в) отверждения ферментированного молока посредством добавления агара;
(2) получение по меньшей мере одного пятна P. solitum или P. brevicompactum на отвержденном агаром ферментированном молоке с концентрацией 500 спор/пятно и его инкубирование в течение 7 суток при 25°C;
(3) определение процента ингибирования посредством определения наибольшего диаметра колонии, образованной ростом P. solitum или P. brevicompactum, и выражения указанного диаметра в виде процентной доли наибольшего диаметра, образованного при тех же самых условиях, но в отсутствие штамма Lactobacillus fermentum.
Штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению имеют особые преимущества, так как они увеличивают срок хранения пищевых продуктов, полученных с этими бактериями. При одной альтернативе штаммы Lactobacillus fermentum no настоящему изобретению ингибируют рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, и рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50%. В родственном воплощении штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению ингибируют рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, и/или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70% или по меньшей мере на 75%.
Следует понимать то, что концентрация штаммов Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению по меньшей мере 107 КОЕ/г, идентифицированная в приведенном выше анализе, представляет собой концентрацию, дающую превосходные противогрибковые эффекты. В то время как данное изобретение, следовательно, охватывает штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г, как, например, в концентрации от 107 КОЕ/г до 1011 КОЕ/г, от 107 КОЕ/г до 1010 КОЕ/г и от 107 КОЕ/г до 109 КОЕ/г, данное изобретение не ограничивается данными концентрациями, так как хорошие противогрибковые эффекты также были получены с меньшей концентрацией.
Согласно одному аспекту бактерии по изобретению дополнительно характеризуются секрецией малых количеств или, по существу, отсутствием секреции летучих соединений, которые влияют на органолептические свойства пищевого продукта. Известно, что обычные заквасочные культуры, такие как имеющиеся в продаже смеси Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus, продуцируют летучие соединения, которые значительно содействуют органолептическим свойствам ферментированных продуктов. Например, ацетальдегид, диацетил и ацетоин представляют собой известные летучие соединения, которые влияют на органолептические свойства пищевого продукта. В родственном воплощении бактерии по настоящему изобретению характеризуются уменьшением присутствия ацетальдегида, продуцируемого другими бактериями в заквасочной культуре. Например, определенные штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут дополнительно характеризоваться наличием способности уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцируемого заквасочной культурой во время ферментации, в ферментированном молочном продукте по меньшей мере на 50%. Данное уменьшение, таким образом, определено по сравнению с ферментированным продуктом, приготовленным без штаммов Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению. В данной области известны разные анализы для определения концентрации ацетальдегида в ферментированном продукте, и их можно использовать
- 2 037612 для этой цели согласно настоящему изобретению. Способность уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцируемого заквасочной культурой на протяжении ферментации, в ферментированном молочном продукте по меньшей мере на 50% предпочтительно определена в анализе, включающем:
(1) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой, (б) ферментирования до достижения рН 4,6, и;
(2) хранение ферментированного молочного продукта при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток;
(3) добавление 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г ферментированного молочного продукта и определение концентрации ацетальдегида посредством статической парофазной газовой хроматографии.
Ацетальдегид представляет собой вкусовой компонент, продуцируемый молочнокислыми бактериями во время ферментации. В то время как данный компонент является желательным в некоторых применениях, в других применениях было бы полезным уменьшение или устранение присутствия ацетальдегида. Бактерии Lactobacillus fermentum, уменьшающие концентрацию ацетальдегида в ферментированном молочном продукте, следовательно, дают преимущества в конкретных применениях, например при приготовлении йогурта с легким вкусом или подслащенного йогурта. Штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению, например, могут уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцируемого заквасочной культурой во время ферментации, в ферментированном молочном продукте по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98%.
Альтернативно или дополнительно, штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут характеризоваться тем, что указанная бактерия секретирует диацетил в интервале от 0 до 5 млн-1. Секрецию диацетила можно определять с использованием разных анализов, известных в данной области, но предпочтительно она определена в анализе, включающем:
(1) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой, (б) ферментирования до достижения рН 4,6, и (2) хранение ферментированного молочного продукта при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток;
(3) добавление 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г ферментированного молочного продукта и определение концентрации диацетила посредством статической парофазной газовой хроматографии.
Бактерии Lactobacillus fermentum, секретирующие низкие концентрации диацетила, имеют преимущества в способах производства пищевых продуктов с данными бактериями, поскольку другие штаммы, оказывающие противогрибковую активность, которые продуцируют высокие концентрации данных летучих соединений, влияют на вкус конечного продукта и, следовательно, не могут использоваться для всех применений. Штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут характеризоваться тем, что указанная бактерия секретирует диацетил в интервале от 0 до 3 млн-1 или от 0 до 2 млн-1.
Штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут характеризоваться дополнительными полезными эффектами. Например, данные штаммы могут характеризоваться тем, что они увеличивают рН (т.е. противодействуют последующему закислению) ферментированного молочного продукта, содержащего Lactobacillus fermentum, на протяжении хранения после ферментации по сравнению с молочным продуктом, ферментированным такой же заквасочной культурой, не содержащей Lactobacillus fermentum. Увеличение рН составляет по меньшей мере на значение 0,1 и предпочтительно определяется после хранения ферментированного продукта на протяжении 21 суток при 25°C. Как указано выше, наблюдали то, что противогрибковые бактерии предшествующего уровня техники способствуют последующему закислению. Авторы изобретения неожиданно обнаружили то, что штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению не только не могут способствовать последующему закислению, но, на самом деле, оказывают антагонистический эффект на последующее закисление посредством увеличения значения рН. Как показано в Примерах ниже, данный эффект является особенно заметным в ферментационных процессах с использованием заквасочных культур, демонстрирующих значительное последующее закисление, включая целый ряд имеющихся в продаже заквасочных культур и, в частности, при использовании совместно с имеющимися в продаже противогрибковыми бактериями.
Штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению, например, могут характеризоваться тем, что они увеличивают рН ферметированного молочного продукта, содержащего Lactobacillus fermentum, на протяжении хранения после ферментации по сравнению с молочным продуктом, ферментируемым такой же заквасочной культурой, не содержащей Lactobacillus fermentum, где указанное увеличение рН осуществляется по меньшей мере на значение 0,1 и определено после хранения ферментированного продукта на протяжении 21 суток при 25°C, и где заквасочная культура содержит LAB, которые способны уменьшать рН молочного продукта на протяжении ферментации до значения рН 4,6 за 10 ч или меньше. Например, данный анализ может быть основан на смесях Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus. Соответствующие смеси часто используются для производства йогурта, и известно то, что они вызывают последующее закисление.
В родственном воплощении в ферментированном молочном продукте, содержащем Lactobacillus
- 3 037612 fermentum, поддерживается рН выше 4,0 при хранении в течение по меньшей мере 14 суток при 25°C, где данный ферментированный молочный продукт получают способом, включающим инокулирование молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой, ферментирование до достижения рН 4,6, встряхивание ферментированного продукта и охлаждение. Данные штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению, следовательно, уменьшают эффект последующего закисления, наблюдаемый в биозащитных культурах предшествующего уровня техники и даже в традиционных заквасочных культурах. Следует понимать то, что свойство, определяющее то, что штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут поддерживать рН выше 4,0 при хранении в течение по меньшей мере 14 суток при 25°C, просто характеризует анализ, обычно используемый для определения данного эффекта. Не является необходимым или не требуется, чтобы штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению, содержащие их композиции, включающие пищевые или кормовые продукты, на самом деле хранились при данных условиях. Опять-таки, в одном аспекте данный анализ можно проводить с использованием заквасочной культуры, содержащей LAB, которые способны снижать рН молочного продукта во время ферментации до значения рН 4,6 за 10 ч или меньше. Например, данный анализ может быть основан на смесях Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus.
Бактерии по настоящему изобретению преимущественно могут происходить из одного из следующих депонированных штаммов:
(а) штамм СНСС12798 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32084;
(б) штамм СНСС12797 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32085;
(в) штамм СНСС14591 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32086;
(г) штамм СНСС14588 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32087;
(д) штамм СНСС15844 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32088;
(е) штамм СНСС15865 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32089;
(ж) штамм СНСС15847 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32090;
(з) штамм СНСС15848 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32091;
(и) штамм СНСС15926 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32096;
(й) штамм СНСС2008 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 22584;
(к) мутантный штамм, получаемый из одной из депонированных бактерий согласно (а)-(й), имеющий способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного в DSMZ под № доступа 32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного в DSMZ под № доступа 32094, по меньшей мере на 50% в анализе, включающем:
(1) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой, (б) ферментирования до достижения рН 4,6 и (в) отверждения ферментированного молока посредством добавления агара;
(2) получение по меньшей мере одного пятна P. solitum или P. brevicompactum на отвержденном агаром ферментированном молоке с концентрацией 500 спор/пятно и его инкубирование в течение 7 суток при 25°C;
(3) определение процента ингибирования посредством определения наибольшего диаметра колонии, образованной ростом P. solitum или P. brevicompactum, и выражения указанного диаметра в виде
- 4 037612 процентной доли наибольшего диаметра, образованного при тех же самых условиях, но в отсутствие штамма Lactobacillus fermentum.
В контексте настоящей заявки термин молочнокислая бактерия или LAB используется для названия бактерии, пригодной для применения в пищевых продуктах, продуцирующей молочную кислоту в качестве главного метаболического конечного продукта брожения углеводов. Данные бактерии являются родственными по их общим метаболическим и физиологическим характеристикам и обычно представляют собой грамположительные, кислотоустойчивые, неспорообразующие, недышащие палочковидные бациллы или кокки с низким содержанием GC. На протяжении стадии ферментации потребление лактозы данными бактериями вызывает образование молочной кислоты, уменьшая рН и приводя к образованию белкового сгустка. Данные бактерии, таким образом, отвечают за скисание молока и за текстуру молочного продукта. Термин молочнокислая бактерия в том виде, в котором он используется в данном документе, охватывает бактерии, принадлежащие к роду Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp., Streptococcus spp., Lactococcus spp., как, например, Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus lactis, Bifidobacterium animalis, Lactococcus lactis, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium breve и Leuconostoc spp., но не ограничивающиеся ими.
В зависимости от оптимальной температуры для размножения LAB характеризуются как мезофильные или термофильные LAB. Термин мезофильный относится к микроорганизмам, которые лучше всего растут при умеренных температурах. Термин мезофильная ферментация относится в данном документе к ферментации при температуре от примерно 22°C до примерно 35°C. Термин мезофильно ферментированный молочный продукт относится к ферментированным молочным продуктам, полученным посредством мезофильной ферментации мезофильной заквасочной культуры, и включает такие ферментированные молочные продукты, как пахта, простокваша, сквашенное молоко, сметана, сквашенные сливки и молодой сыр, такой как творог кварк, творог и творожный сыр. Наиболее полезные с промышленной точки зрения мезофильные бактерии включают Lactococcus spp. и Leuconostoc spp.
Термин термофил относится к микроорганизмам, которые лучше всего растут при высоких температурах. Термин термофильная ферментация относится к способам ферментации, проводимым при температуре от примерно 35°C до примерно 45°C. Термин термофильно ферментированный молочный продукт относится к ферментированным молочным продуктам, полученным посредством термофильной ферментации с использованием термофильной заквасочной культуры, и он включает такие ферментированные молочные продукты, как йогурт термостатного способа производства, перемешанный йогурт, процеженный йогурт и питьевой йогурт. Самые полезные с промышленной точки зрения термофильные бактерии включают Streptococcus spp. и Lactobacillus spp.
Как будет описано ниже, настоящее изобретение охватывает способы с использованием мезофильной и термофильной ферментации.
Термин ингибировать в связи с грибами, дрожжами и плесневыми грибами относится к уменьшению роста или спорообразования или к уменьшению числа или концентрации грибов, дрожжей и плесневых грибов, например, в пищевых продуктах и/или на поверхности пищевых продуктов, содержащих бактерии по настоящему изобретению, относительно пищевых продуктов, которые не содержат таких бактерий. Степень ингибирования, обеспечиваемая бактериями Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению, предпочтительно определяется по росту на отвержденном агаром ферментированном молоке в присутствии и в отсутствие бактерий Lactobacillus fermentum.
В настоящем контексте термин мутант следует понимать как штамм, полученный из штамма по изобретению, например, посредством генной инженерии, радиации и/или химической обработки. Предпочтительно, чтобы мутант был функционально эквивалентным мутантом, например мутантом, который имеет, по существу, такие же или улучшенные свойства, в частности, в отношении противогрибковых свойств, что и депонированный штамм. Такой мутант является частью настоящего изобретения. В особенности, термин мутант относится к штамму, полученному посредством подвергания штамма по изобретению любой традиционно используемой мутагенизирующей обработке, включающей обработку химическим мутагеном, таким как этанметансульфонат (EMS) или N-метил-N'-нитро-N-нитрогуанидин (NTG), УФ (ультрафиолетовый) светом, или к спонтанно появляющемуся мутанту. Мутант возможно был подвергнут нескольким мутагенизирующим обработкам (одну обработку следует понимать как одну стадию мутагенеза с последующей стадией скрининга/селекции), но в настоящем изобретении предпочтительным является то, что проводится не более чем 20, или не более чем 10, или не более чем 5 обработок (или стадий скрининга/отбора). У предпочтительного в настоящем изобретении мутанта меньше чем 5%, или меньше чем 1%, или даже меньше чем 0,1% нуклеотидов в бактериальном геноме были заменены на другой нуклеотид или подвергнуты делеции по сравнению с материнским штаммом.
Применение терминов в единственном числе в контексте описания изобретения (особенно в контексте следующей формулы изобретения) следует истолковывать как охватывающее и термины в единственном, и во множественном числе, если здесь не указано иное, или это явно не противоречит контексту.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предложены композиции, содержащие по
- 5 037612 меньшей мере одну бактерию вида Lactobacillus fermentum со способностью ингибировать рост гриба
Penicillium solitum CHCC16948, депонированного в DSMZ под № доступа 32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum CHCC16935, депонированного в DSMZ под № доступа 32094, на отвержденном агаром ферментированном молоке по меньшей мере на 50% в анализе, описанном выше.
Соответствующие композиции могут содержать многочисленные другие бактерии, включающие LAB. Предпочтительная композиция по настоящему изобретению, следовательно, характеризуется тем, что данная композиция дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную бактерию, выбранную из одного или более чем одного из следующих родов и видов: Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp., Streptococcus spp., Lactococcus spp., как, например, Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus lactis, Bifidobacterium animalis, Lactococcus lactis, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium breve и Leuconostoc spp.
В особенно предпочтительном воплощении композиции по настоящему изобретению содержат по меньшей мере одну бактерию вида Lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью, как описано выше, и одну или более чем одну вторую бактерию с противогрибковой активностью. В одном воплощении несколько разных штаммов бактерий Lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью по настоящему изобретению объединяются. В качестве альтернативы эти дополнительные бактерии, например, могут быть выбраны из:
(а) бактерии Lactobacillus rhamnosus штамма CHCC15860, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM32092;
(б) бактерии Lactobacillus rhamnosus штамма СНСС5366, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM23035;
(в) бактерии Lactobacillus rhamnosus штамма СНСС12697, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM24616;
(г) бактерии Lactobacillus paracasei штамма СНСС12777, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM24651; и (д) бактерии Lactobacillus paracasei штамма СНСС14676, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM25612.
Авторы настоящего изобретения обнаружили дополнительные противогрибковые эффекты данных штаммов и неожиданный синергетический противогрибковый эффект, вызванный комбинацией Lb. rhamnosus CHCC15860 и Lb. fermentum CHCC14591, по сравнению с ингибирующим эффектом каждого штамма, используемого одиночно.
Композиции по настоящему изобретению, кроме того, могут содержать многочисленные дополнительные компоненты, включающие одно или более чем одно криопротекторное соединение, а также ароматические соединения.
LAB чаще всего добавляют в молоко в виде заквасочной культуры. Термин закваска или заквасочная культура в том виде, в котором он используется в настоящем контексте, относится к культуре одного или более чем одного микроорганизма, подходящего для применения в пищевых продуктах, в частности молочнокислых бактерий, которые отвечают за скисание молочной основы. Заквасочные культуры могут быть свежими, но чаще всего являются замороженными или лиофилизированными. Данные продукты также известны как культуры для прямого внесения (DVS), и они производятся для непосредственной инокуляции ферментационного сосуда или ванны для производства молочного продукта, такого как ферментированный молочный продукт или сыр. Соответствующие заквасочные культуры имеются в продаже во многих источниках и включают F-DVS YoFlex Mild 2.0, F-DVS YF-L901, FD-DVS YF-812 и F-DVS CH-1 - четыре культуры, имеющиеся в продаже у Chr. Hansen, содержащие смеси Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus.
В одном аспекте настоящего изобретения, следовательно, предложены композиции в виде твердой замороженной или лиофилизированной заквасочной культуры, содержащей молочнокислые бактерии в концентрации по меньшей мере 109 колониеобразующих единиц на г замороженного вещества, или в концентрации по меньшей мере 1010 колониеобразующих единиц на г замороженного вещества, или в концентрации по меньшей мере 1011 колониеобразующих единиц на г замороженного вещества, причем данные композиции включают бактерию вида Lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью, как описано выше.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предложены бактерии Lactobacillus fermentum и содержащие их композиции, которые характеризуются более чем одним из приведенных выше свойств. Например, согласно настоящему изобретению предложена бактерия вида Lactobacillus fermentum, имеющая способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50% при определении в анализе, включающем:
(1) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой,
- 6 037612 (б) ферментирования до достижения рН 4,6 и (в) отверждения ферментированного молока посредством добавления агара;
(2) получение по меньшей мере одного пятна P. solitum или P. brevicompactum на отвержденном агаром ферментированном молоке с концентрацией 500 спор/пятно и его инкубирование в течение 7 суток при 25°C;
(3) определение процента ингибирования посредством определения наибольшего диаметра колонии, образованной ростом P. solitum или P. brevicompactum, и выражения указанного диаметра в виде процентной доли наибольшего диаметра, образованного при тех же самых условиях, но в отсутствие штамма Lactobacillus fermentum;
и дополнительно характеризуемая тем, что бактерия вида Lactobacillus fermentum секретирует диацетил в интервале от 0 до 5 млн-1, где концентрация диацетила определена в анализе, включающем:
(4) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой, (б) ферментирования до достижения рН 4,6, и (5) хранение ферментированного молочного продукта при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток;
(6) добавление 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г ферментированного молочного продукта и определение концентрации диацетила посредством статической парофазной газовой хроматографии.
Данные бактерии могут дополнительно характеризоваться способностью уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцированного заквасочной культурой во время ферментации, в ферментированном молочном продукте по меньшей мере на 50%.
Альтернативно или дополнительно, бактерии вида Lactobacillus fermentum могут дополнительно характеризоваться тем, что они повышают рН ферментированного молочного продукта, содержащего Lactobacillus fermentum, на протяжении хранения после ферментации по сравнению с молочным продуктом, ферментированным такой же заквасочной культурой, не содержащей Lactobacillus fermentum.
В отдельном воплощении согласно изобретению дополнительно предложена бактерия Lactobacillus fermentum, имеющая способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50% при определении в анализе, включающем:
(1) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой, (б) ферментирования до достижения рН 4,6 и (в) отверждения ферментированного молока посредством добавления агара;
(2) получение по меньшей мере одного пятна P. solitum или P. brevicompactum на отвержденном агаром ферментированном молоке с концентрацией 500 спор/пятно и его инкубирование в течение 7 суток при 25°C;
(3) определение процента ингибирования посредством определения наибольшего диаметра колонии, образованной ростом P. solitum или P. brevicompactum, и выражения указанного диаметра в виде процентной доли наибольшего диаметра, образованного при тех же самых условиях, но в отсутствие штамма Lactobacillus fermentum;
и дополнительно характеризуемая тем, что бактерия вида Lactobacillus fermentum повышает рН ферментированного молочного продукта, содержащего Lactobacillus fermentum, на протяжении хранения после ферментации по сравнению с молочным продуктом, ферментированным такой же заквасочной культурой, не содержащей Lactobacillus fermentum, где увеличение рН происходит по меньшей мере на значение 0,1, и где увеличение рН определено после хранения ферментированного продукта на протяжении 21 суток при 25°C. Опять-таки, в одном воплощении данные бактерии могут дополнительно иметь способность уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцированного заквасочной культурой на протяжении ферментации, в ферментированном молочном продукте по меньшей мере на 50%.
В другом воплощении согласно настоящему изобретению предложены способы получения ферментированного молочного продукта, которые включают добавление бактерии Lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью, как описано выше, или содержащей ее композиции в молоко или в молочный продукт и ферментирование данной смеси при температуре от примерно 22°C до примерно 43°C до достижения рН меньше чем 4,6.
В контексте настоящей заявки термин молоко используется в широком смысле в его обычном значении для названия жидкостей, продуцируемых молочными железами животных или растениями. Согласно настоящему изобретению молоко возможно было переработано, и термин молоко включает цельное молоко, снятое молоко, обезжиренное молоко, молоко с низким содержанием жира, молоко с полным содержанием жира, молоко с пониженным содержанием лактозы или концентрированное молоко. Обезжиренное молоко представляет собой нежирный или снятый молочный продукт. Молоко с низким содержанием жира типично определяется как молоко, которое содержит от примерно 1% до примерно 2% жира. Молоко с полным содержанием жира часто содержит 2% жира или больше. Подразуме- 7 037612 вается то, что термин молоко охватывает молоко от разных млекопитающих и из разных растительных источников. Млекопитающие - источники молока включают корову, овцу, козу, буйвола, верблюда, ламу, кобылу и оленя, но не ограничиваются ими. Растительные источники молока включают молоко, выделенное из соевых бобов, гороха, арахиса, ячменя, риса, овса, квиноа, миндаля, кешью, кокоса, фундука, конопли, семян кунжута и семян подсолнечника, но не ограничиваются ими. В способах и продуктах по настоящему изобретению молоко, полученное от коров, наиболее предпочтительно используется в качестве исходного вещества для ферментации.
Термин молоко также включает молочные продукты с пониженным содержанием жира и/или с пониженным содержанием лактозы. Соответствующие продукты могут быть получены с использованием способов, хорошо известных в данной области, и они имеются в продаже (например, у Select Milk Producers Inc., Техас, США). Молоко с пониженным содержанием лактозы может быть получено согласно любому способу, известному в данной области, включающему осуществление гидролиза лактозы до глюкозы и галактозы ферментом лактазой или посредством нанофильтрации, электродиализа, ионообменной хроматографии и центрифугирования.
Термин молочный продукт или молочная основа широко используется в настоящей заявке для названия композиции, основанной на молоке или компонентах молока, которую можно использовать в качестве среды для роста и ферментации LAB. Молочный продукт или основа содержат компоненты, происходящие из молока, и любой другой компонент, который может быть использован с целью выращивания или осуществления ферментации LAB.
Стадия ферментации способа изготовления ферментированных молочных продуктов включает добавление LAB в молоко. Способы ферментации, используемые в производстве молочных продуктов, хорошо известны, и обычный специалист может выбрать условия ферментационного процесса, включающие температуру, содержание кислорода, количество и характеристики микроорганизма(ов) и время ферментации.
До ферментации молочный субстрат можно гомогенизировать и пастеризовать согласно способам, известным в данной области. Термин гомогенизация в том виде, как он здесь используется, означает интенсивное перемешивание с получением растворимой суспензии или эмульсии. При проведении гомогенизации до ферментации ее можно проводить таким образом, чтобы разрушать молочный жир до меньших размеров таким образом, что он больше не отделяется от молока. Это может осуществляться посредством пропускания молока под высоким давлением через маленькие отверстия. Термин пастеризация в том виде, как он здесь используется, означает обработку молочного субстрата для уменьшения или устранения присутствия живых организмов, таких как микроорганизмы. Предпочтительно пастеризация достигается поддержанием определенной температуры в течение определенного периода времени. Определенная температура обычно достигается посредством нагревания. Температуру и продолжительность можно выбирать для того, чтобы умерщвлять или инактивировать определенные бактерии, такие как вредные бактерии. Затем может следовать стадия быстрого охлаждения.
В особенно полезном способе по настоящему изобретению бактерию Lactobacillus fermentum с противогрибковыми эффектами, как описано выше, или содержащую ее композицию добавляют в молоко или в молочный продукт, и данную смесь ферментируют таким образом, что (а) концентрация бактерий Lactobacillus fermentum с противогрибковыми эффектами составляет по меньшей мере 1х106 КОЕ/г или по меньшей мере 1х107 КОЕ/г при завершении ферментации в ферментированном молочном продукте; и/или (б) таким образом, что концентрация бактерий Lactobacillus fermentum с противогрибковыми эффектами составляет по меньшей мере 1х105 КОЕ/см2 на поверхности ферментированного молочного продукта.
Этот способ действий имеет преимущество в том, что может полностью использоваться противогрибковый эффект бактерии Lactobacillus fermentum.
Одним способом достижения данной концентрации является применение способа производства ферментированного молочного продукта, в котором параметры ферментации поддерживаются таким образом, что описанная выше концентрация бактерий Lactobacillus fermentum возрастает на протяжении ферментации. Применение традиционных заквасочных культур и условий для ферментации (как описано в Примерах) обычно будет увеличивать описанную выше концентрацию бактерий Lactobacillus fermentum на протяжении ферментации по меньшей мере на 0,5 log. В качестве альтернативы, параметры ферментации поддерживаются таким образом, что описанная выше концентрация бактерий Lactobacillus fermentum значимо не уменьшается, например не уменьшается больше чем на 30%, не больше чем на 25% или не больше чем на 20% на протяжении ферментации и хранения.
Согласно настоящему изобретению также предложен ферментат, который можно получать посредством ферментирования молочного продукта бактериями Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению. Термин ферментат используется для названия продукта ферментации. Соответствующий ферментат может представлять собой жидкость, полученную в результате процесса ферментации с использованием бактерий Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению. Данная жидкость может содер- 8 037612 жать бактерии, но не обязательно должна их содержать. Данная жидкость предпочтительно содержит противогрибковые метаболиты, продуцируемые бактериями Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению. Ферментат можно использовать для производства пищевых, кормовых или фармацевтических продуктов. Например, ферментат можно распылять на пищевые или кормовые продукты с достижением противогрибкового эффекта.
Согласно изобретению дополнительно предложены способы производства пищевого, кормового или фармацевтического продукта, включающие способ производства ферментированного молочного продукта, как описано выше, и пищевого, кормового или фармацевтического продукта, которые можно получать этим способом.
Ферментация проводится для получения пищевых продуктов, кормовых продуктов или фармацевтических средств. Термины ферментированный молочный продукт, пищевой или кормовой продукт относятся к продуктам, которые можно получать способами ферментации по настоящему изобретению, и они включают сыр, йогурт, фруктовый йогурт, йогуртовый напиток, процеженный йогурт (греческий йогурт, лабне), творог кварк, свежий сыр (fromage frais) и творожный сыр. Термин пища дополнительно охватывает другие ферментированные пищевые продукты, включающие ферментированное мясо, такое как ферментированные колбасы и ферментированные рыбные продукты.
Понятно то, что термин сыр охватывает любой сыр, включающий твердый, полутвердый и мягкие сыры, такие как сыры следующих типов: домашний, фета, чеддер, пармезан, моцарелла, эмменталер, данбо, гауда, эдам, фетаподобные сыры, сыры с плесенью, соленые сыры, камамбер и бри. Специалисту в данной области известно как превращать сгусток в сыр, способы можно найти в литературе, см., например, Kosikowski, F.V. and V.V. Mistry, Cheese and Fermented Milk Foods, 1997, 3rd Ed. F.V. Kosikowski, L.L.C. Westport, СТ. Термин сыр с низким содержанием соли в том виде, в котором он здесь используется, относится к сыру, который имеет концентрацию NaCl меньше 1,7% (мас./мас.).
В контексте настоящей заявки термин йогурт относится к продуктам, содержащим Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus и, возможно, другие микроорганизмы, такие как Lactobacillus delbrueckii подвид lactis, Bifidobacterium animalis подвид lactis, Lactococcus lactis, Lactobacillus acidophilus и Lactobacillus paracasei, или любой микроорганизм, полученный из них. Штаммы, продуцирующие молочную кислоту, отличные от Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus, включены для придания конечному продукту разных свойств, таких как свойство стимуляции равновесия флоры. Термин йогурт в том виде, в котором он здесь используется, охватывает йогурт термостатного способа производства, перемешанный йогурт, питьевой йогурт, Petit Suisse, термообработанный йогурт, процеженный йогурт или йогурт в греческом стиле, характеризуемый высоким уровнем белка, и йогуртоподобные продукты.
В частности, термин йогурт охватывает йогурт, определенный согласно французским и европейским правилам, например молочные продукты свертывания, полученные посредством молочнокислого брожения, посредством лишь специфических термофильных молочнокислых бактерий (т.е. Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus и Streptococcus thermophilus), которые культивируются одновременно и обнаруживаются в конечном продукте живыми в количестве по меньшей мере 10 миллионов КОЕ (колониеобразующих единиц)/г, но не ограничивается им. Йогурты возможно могут содержать добавленное молочное сырье (например, сливки) или другие ингредиенты, такие как сахар или подсластители, один или более чем один корригент, фрукты, злаки или питательные вещества, особенно витамины, минералы и волокна, а также стабилизаторы и загустители. Возможно данный йогурт удовлетворяет спецификациям ферментированного молока и йогуртов стандарта AFNOR NF 04-600 и/или кодексу стандарта StanAIla-1975. Для того чтобы удовлетворять стандарту AFNOR NF 04-600, данный продукт не должен нагреваться после ферментации, и молочное сырье должно представлять минимум 70% (мас./мас.) конечного продукта.
В другом воплощении согласно настоящему изобретению предложены пищевые, кормовые или фармацевтические продукты, содержащие одну или более чем одну бактерию вида Lactobacillus fermentum с противогрибковыми эффектами, как описано выше, и одну или более чем одну из:
(а) по меньшей мере одной дополнительной бактерии, выбранной из одного или более чем одного из следующих родов: Lactococcus spp., Streptococcus spp., Lactobacillus spp., Leuconostoc spp., Pseudoleuconostoc spp., Pediococcus spp., Brevibacterium spp. и Enterococcus spp.;
(б) бактерии Lactobacillus rhamnosus штамма СНСС15860, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM32092;
(в) бактерии Lactobacillus rhamnosus штамма СНСС5366, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM23035;
(г) бактерии Lactobacillus rhamnosus штамма СНСС12697, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM24616;
(д) бактерии Lactobacillus paracasei штамма СНСС12777, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM24651; и (е) бактерии Lactobacillus paracasei штамма СНСС14676, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM25612.
- 9 037612
Описание графических материалов
Фиг. 1 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного одной заквасочной культурой (контроль, первая колонка), вместе с FreshQ®4 (вторая колонка), вместе с Holdbac® YM-C Plus (третья колонка) или вместе с Lb. fermentum CHCC14591 (четвертая колонка). Чашки инкубировали при 7 плюс/минус 1°C в течение 19 суток (верхний ряд) и 27 суток (нижний ряд). Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 500 спор/пятно: (А) Р. carneum, (В) Р. paneum и (С) Р. roqueforti.
Фиг. 2 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного одной заквасочной культурой (контроль, первая колонка), вместе с FreshQ®4 (вторая колонка), вместе с Holdbac® YM-C Plus (третья колонка) или вместе с Lb. fermentum CHCC14591 (четвертая колонка). Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 6 суток (верхний ряд) и 11 суток (нижний ряд). Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 500 спор/пятно: (А) Р. carneum, (В) Р. paneum и (С) Р. roqueforti.
Фиг. 3 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного одной заквасочной культурой (контроль, первая колонка), вместе с FreshQ®4 (вторая колонка), вместе с Holdbac® YM-C Plus (третья колонка) или вместе с Lb. fermentum CHCC14591 (четвертая колонка). Чашки инкубировали при 7 плюс/минус 1°C в течение 19 суток (верхний ряд) и 27 суток (нижний ряд). Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 500 спор/пятно: (А) Р. brevicompactum, (В) P. crustosum и (С) P. solitum.
Фиг. 4 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного одной заквасочной культурой (контроль, первая колонка), вместе с FreshQ®4 (вторая колонка), вместе с Holdbac® YM-C Plus (третья колонка) или вместе с Lb. fermentum CHCC14591 (четвертая колонка). Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 6 суток (верхний ряд) и 11 суток (нижний ряд). Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 500 спор/пятно: (А) Р. brevicompactum (DSM32093), (В) Р. crustosum и (С) P. solitum (DSM32093).
Фиг. 5 - рост дрожжей на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного одной заквасочной культурой (контроль, первая колонка), вместе с FreshQ®4 (вторая колонка), вместе с Holdbac® YM-C Plus (третья колонка) или вместе с Lb. fermentum CHCC14591 (четвертая колонка). Чашки инкубировали при 7 плюс/минус 1°C в течение 11 суток (верхний ряд) или при 25 плюс/минус 1°C в течение 5 суток (нижний ряд). Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 1х103 КОЕ/пятно (верхний ряд), 1х102 КОЕ/пятно (средний ряд) и 1х 101 КОЕ/пятно (нижний ряд): (А) Torulaspora delbrueckii, (В) Cryptococcus hansenii, (С) Debaryomyces hansenii и (D) Yarrowia lipolytica.
Фиг. 6 - уровни диацетила после хранение при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток в ферментированных молочных продуктах, ферментированных одной заквасочной культурой (контроль) или заквасочными культурами в комбинации с FreshQ®4, Holdbac® YM-C Plus или Lb. fermentum CHCC14591. LOD - предельный уровень определения. LOQ - предельный уровень количественного измерения.
Фиг. 7 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного одной заквасочной культурой (контроль, первая колонка), вместе с Lb. rhamosus CHCC15860 (вторая колонка), вместе с Lb. fermentum CHCC14591 (третья колонка) или вместе с комбинацией Lb. rhamnosus CHCC15860 и Lb. fermentum СНСС14591 (четвертая колонка). Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 5 суток. Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 500 спор/пятно: (А) Р. carneum, (В) Р. paneum и (С) P. roqueforti.
Фиг. 8 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного (1) одной заквасочной культурой, вместе с (2) Lb. fermentum СНСС12798, (3) Lb. fermentum CHCC12797, (4) Lb. fermentum CHCC14591, (5) Lb. fermentum CHCC14588, (6) Lb. fermentum CHCC15844, (7) Lb. fermentum CHCC15865, (8) Lb. fermentum CHCC15847, (9) Lb. fermentum CHCC15848, (10) Lb. fermentum CHCC15926 и (11) Lb. fermentum CHCC2008. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 5 суток (левая колонка фотографий) или 7 суток (правая колонка фотографий). Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 500 спор/пятно: (А) Р. brevicompactum (DSM32094), (В) P. crustosum и (С) P. solitum (DSM32093).
Фиг. 9 - уровни диацетила после хранение при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток в ферментированных молочных продуктах, ферментированных одной заквасочной культурой (контроль) или заквасочными культурами в комбинации с FreshQ®4, Holdbac® YM-C Plus или штаммами Lb. fermentum. LOD - предельный уровень определения. LOQ - предельный уровень количественного измерения.
Фиг. 10 - развитие рН в ферментированных молочных продуктах с течением времени при хранении при (А) 7 плюс/минус 1°C и (Б) 25 плюс/минус 1°C в течение 28 суток. Данные продукты ферментируются только заквасочной культурой - контроль, или заквасочной культурой в комбинации с FreshQ®4, Holdbac® YM-C Plus или штаммами Lb. fermentum.
Фиг. 11 - развитие рН в ферментированных молочных продуктах с течением времени при хранении при (А) 7 плюс/минус 1°C или (Б) 25 плюс/минус 1°C в течение 21 суток. Данные продукты ферментируются только заквасочной культурой (контроль, А) или заквасочной культурой в комбинации с
- 10 037612
FreshQ®4 (◊), Holdbac® YM-C Plus (о) или Lb. fermentum CHCC14591 (□).
Фиг. 12 - уровни ацетальдегида после хранение при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток в ферментированных молочных продуктах, ферментированных одной заквасочной культурой (контроль) или заквасочными культурами в комбинации со штаммами Lb. fermentum. LOD - предельный уровень определения. LOQ - предельный уровень количественного измерения.
Фиг. 13 - уровни ацетальдегида после хранение при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток в ферментированных молочных продуктах, ферментированных одной заквасочной культурой (контроль) или заквасочными культурами в комбинации с Lb. fermentum СНСС14591. LOD - предельный уровень определения. LOQ - предельный уровень количественного измерения.
Фиг. 14 - кривые закисления четырех имеющихся в продаже заквасочных культур: FD-DVS YFL812, F-DVS YF-L901, F-DVS YoFlex Mild 2.0 и F-DVS СН-1, выращенных в молоке (1% жира и 4,5% белка) при 43°C.
Фиг. 15 - кривые последующего закисления йогурта, ферментированного одной из четырех имеющихся в продаже заквасочных культур: FD-DVS YF-L812, F-DVS YF-L901, F-DVS YoFlex Mild 2.0 и FDVS СН-1 после хранения при 6°C в течение вплоть до 43 суток.
Фиг. 16 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного (1) одной заквасочной культурой - FD-DVS YF-L812, вместе с (2) Lb. fermentum CHCC12798, (3) Lb. fermentum CHCC12797, (A) Lb. fermentum CHCC14591, (5) Lb. fermentum CHCC14588, (6) Lb. fermentum CHCC15844, (7) Lb. fermentum CHCC15865, (8) Lb. fermentum CHCC15847, (9) Lb. fermentum CHCC15926 и (10) Lb. fermentum CHCC2008. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 4 суток (левый столбец фотографий) или 8 суток (правый столбец фотографий). Добавляли целевой загрязнитель - P. brevicompactum (DSM32094) - в концентрации 500 спор/пятно.
Фиг. 17 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного (1) одной заквасочной культурой - FD-DVS СН-1, вместе с (2) Lb. fermentum CHCC12798, (3) Lb. fermentum CHCC12797, (4) Lb. fermentum CHCC14591, (5) Lb. fermentum CHCC14588, (6) Lb. fermentum CHCC15844, (7) Lb. fermentum CHCC15865, (8) Lb. fermentum CHCC15847, (9) Lb. fermentum CHCC15926 и (10) Lb. fermentum CHCC2008. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 4 суток (левый столбец фотографий) или 8 суток (правый столбец фотографий). Добавляли целевой загрязнитель - P. brevicompactum (DSM32094) - в концентрации 500 спор/пятно.
Фиг. 18 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного (1) одной заквасочной культурой - FD-DVS YF-L812, вместе с (2) Lb. fermentum CHCC12798, (3) Lb. fermentum CHCC12797, (4) Lb. fermentum CHCC14591, (5) Lb. fermentum CHCC14588, (6) Lb. fermentum CHCC15844, (7) Lb. fermentum CHCC15865, (8) Lb. fermentum CHCC15847, (9) Lb. fermentum CHCC15926 и (10) Lb. fermentum CHCC2008. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 4 суток (левый столбец фотографий) или 8 суток (правый столбец фотографий). Добавляли целевой загрязнитель - P. solitum (DSM32093) - в концентрации 500 спор/пятно.
Фиг. 19 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного (1) одной заквасочной культурой - F-DVS СН-1, вместе с (2) Lb. fermentum CHCC12798, (3) Lb. fermentum CHCC12797, (4) Lb. fermentum CHCC14591, (5) Lb. fermentum CHCC14588, (6) Lb. fermentum CHCC15844, (7) Lb. fermentum CHCC15865, (8) Lb. fermentum CHCC15847, (9) Lb. fermentum CHCC15926 и (10) Lb. fermentum CHCC2008. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 4 суток (левый столбец фотографий) или 8 суток (правый столбец фотографий). Добавляли целевой загрязнитель - P. solitum (DSM32093) - в концентрации 500 спор/пятно.
Фиг. 20 - уровни диацетила после хранения при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток в ферментированных молочных продуктах, ферментированных одной заквасочной культурой (контроль) - FD DVS YF-L812 или F-DVS СН-1 - или заквасочными культурами в комбинации с одним из девяти штаммов Lb. fermentum. LOD - предельный уровень определения. LOQ - предельный уровень количественного измерения.
Фиг. 21 - уровни ацетальдегида после хранения при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток в ферментированных молочных продуктах, ферментированных одной заквасочной культурой (контроль) - FD DVS YF-L812 или F-DVS СН-1 - или заквасочными культурами в комбинации с одним из девяти штаммов Lb. fermentum. LOD - предельный уровень определения. LOQ - предельный уровень количественного измерения.
Пример 1. Полуколичественный анализ ингибирующего эффекта Lb. fermentum СНСС14591 против разных дрожжевых и плесневых загрязнителей и образования диацетила.
Для полуколичественного анализа ингибирующего эффекта Lb. fermentum СНСС14591 использовали анализ на основе агара, имеющий сходство со способом изготовления и продуктом - йогуртом.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Имеющуюся в продаже заквасочную культуру (F-DVS Mild 2.0) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Одну бутыль инокулировали Lb. fermentum CHCC14591 в
- 11 037612 общей концентрации 2х107 КОЕ/г, две бутыли инокулировали одной из двух имеющихся в продаже биозащитных культур (FreshQ®4 и Holdbac® YM-C Plus) в рекомендованных дозировках (100 U/T и 20 DCU/100 л для FreshQ®4 и Holdbac® YM-C Plus соответственно), и одну бутыль использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,60 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Затем ферментированное молоко нагревали до температуры 40°C и добавляли 40 мл 5%-го стерильного раствора агара, который был расплавлен и охлажден до 60°C. Этот раствор ферментированного молока и агара затем разливали в стерильные чашки Петри, и данные чашки сушили в ламинаре в течение 30 мин.
Суспензию спор шести разных плесневых грибов наносили в виде пятен в концентрации 500 спор/пятно: Penicillium brevicompactum (DSM32094), P. crustosum, P. solitum (DSM32093), P. carneum, P. paneum и Р. roqueforti. На каждую чашку наносили в виде пятен три плесневых гриба. Наносили в виде пятен четыре вида дрожжей, включающих Torulaspora delbrueckii, Cryptococcus hansenii, Debaryomyces hansenii и Yarrowia lipolytica, в концентрациях 104, 103 и 102 КОЕ/пятно. Чашки инкубировали при 7 плюс/минус 1°C и 25 плюс/минус 1°C и регулярно проверяли на рост плесневых грибов и дрожжей.
В сутки 14 образцы анализировали на диацетил посредством статической парофазной газовой хроматографии (HSGC) - чувствительного способа проведения анализа летучих веществ в сложных матрицах. Данная установка состояла из статического парофазного пробоотборника, соединенного с газовым хроматографом с пламенным ионизационным детектором (FID). С этой целью использовали следующее оборудование:
HS-пробоотборник: HS40XI, TurboMatrix 110, Perkin Elmer.
Программа HS: HSControl v.2.00, Perkin Elmer.
GC: Autosystem XL, Perkin Elmer.
Программа GC: Turbochrom navigator, Perkin Elmer.
Колонка: HP-FFAP 25 мх0,20 ммх0,33 мкм, Agilent Technologies.
Для определения коэффициентов отклика (калибровка) использовали стандарты известной концентрации, контроли использовали для контроля того, что использованные коэффициенты отклика были стабильными в пределах аналитической серии, а также между сериями и с течением времени (месяцы). Концентрацию летучих веществ (млн-1) в образцах и контролях определяли с использованием коэффициентов отклика, полученных от стандартов. Образцы получали путем добавления 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г образца йогурта и немедленно анализировали посредством HSGC.
Результаты анализа на основе агара представлены на фиг. 1-5, демонстрируя то, что все протестированные плесневые грибы очень хорошо росли на чашках с агаром, полученных с использованием молока, ферментированного только заквасочной культурой (контроль). Однако, когда на протяжении ферментации молока присутствовала Lb. fermentum CHCC14591, на полученных в результате чашках ингибировался рост всех протестированных видов Penicillum. Уровень ингибирования был сравнимым или даже более высоким, чем ингибирование, наблюдаемое для двух имеющихся в продаже биозащитных культур. На фиг. 3 показано то, что все протестированные дрожжи росли на чашках с агаром, полученных с использованием молока, ферментированного только заквасочной культурой (контроль). Когда на протяжении ферментации молока присутствовала Lb. fermentum CHCC14591, на полученных в результате чашках предотвращался рост С. fragiola и Y. lipolytica, добавленных во всех концентрациях. Рост Т. delbrueckii и D. hansenii ингибировался в меньших концентрациях при наличии Lb. fermentum CHCC14591 на протяжении ферментации молока. Уровень ингибирования был сравнимым или даже более высоким, чем ингибирование, наблюдаемое для двух имеющихся в продаже биозащитных культур.
Влияние на продукцию диацетила проиллюстрировано на фиг. 6, демонстрирующей то, что добавление Lb. fermentum CHCC14591 во время ферментации молока дает минимальное количество диацетила по сравнению с альтернативами, имеющимися в продаже.
Пример 2. Полуколичественный анализ ингибирующего эффекта Lb. fermentum СНСС14591 в комбинации с Lb. rhamnosus CHCC15860 против разных плесневых загрязнителей.
Для полуколичественного анализа ингибирующего эффекта комбинации Lb. fermentum CHCC14591 и Lb. rhamnosus CHCC15860 использовали анализ на основе агара, имеющий сходство со способом изготовления и продуктом - йогуртом.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Имеющуюся в продаже заквасочную культуру (F-DVS Mild 2.0) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Одну бутыль инокулировали Lb. rhamnosus CHCC15860 в общей концентрации 1х107 КОЕ/г, одну бутыль инокулировали Lb. fermentum СНСС14591 в общей концентрации 1х107 КОЕ/г, одну бутыль инокулировали Lb. fermentum СНСС14591 и Lb. rhamnosus CHCC15860 в концентрации 5х106 КОЕ/г каждой, и одну бутыль использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,60 плюс/минус 0,1. После
- 12 037612 ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Затем ферментированное молоко нагревали до температуры 40°C и добавляли 40 мл 5%-го стерильного раствора агара, который был расплавлен и охлажден до 60°C. Этот раствор ферментированного молока и агара затем разливали в стерильные чашки Петри, и данные чашки сушили в ламинаре в течение 30 мин.
Суспензию спор трех разных плесневых грибов наносили в виде пятен в концентрации 500 спор/пятно: Р. carneum, Р. paneum и P. roqueforti. На каждую чашку наносили в виде пятен три плесневых гриба. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C и регулярно проверяли на рост плесневых грибов.
Результаты анализа на основе агара представлены на фиг. 7, демонстрирующей то, что все протестированные плесневые грибы очень хорошо росли на чашках с агаром, полученных с использованием молока, ферментированного только заквасочной культурой (контроль). Однако, когда на протяжении ферментации молока присутствовали Lb. rhamnosus CHCC15860 или Lb. fermentum CHCC14591, на полученных в результате чашках ингибировался рост трех протестированных видов Penicillum. Кроме того, при использовании Lb. rhamnosus CHCC15860 и Lb. fermentum CHCC14591 в комбинации был обнаружен синергетический ингибирующий эффект, по сравнению с ингибирующим эффектом каждого штамма, использованного одиночно.
Пример 3. Полуколичественный анализ ингибирующего эффекта десяти штаммов Lb. fermentum против разных плесневых загрязнителей.
Для полуколичественного анализа ингибирующего эффекта десяти штаммов Lb. fermentum использовали анализ на основе агара, имеющий сходство со способом изготовления и продуктом - йогуртом.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Имеющуюся в продаже заквасочную культуру (F-DVS YF-L901) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. 10 бутылей инокулировали штаммами Lb. fermentum в концентрациях 1х107 КОЕ/г, и одну бутыль использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,60 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Затем ферментированное молоко нагревали до температуры 40°C и добавляли 40 мл 5%-го стерильного раствора агара, который был расплавлен и охлажден до 60°C. Этот раствор ферментированного молока и агара затем разливали в стерильные чашки Петри, и данные чашки сушили в ламинаре в течение 30 мин.
Протестированными штаммами Lb. fermentum были следующие: Lb. fermentum СНСС12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum CHCC14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15848, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008.
Суспензию спор шести разных плесневых грибов наносили в виде пятен в концентрации 500 спор/пятно: Penicillium brevicompactum (DSM32094), P. crustosum, P. solitum (DSM32093), P. carneum, P. paneum и Р. roqueforti. На каждую чашку наносили в виде пятен три плесневых гриба. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C и регулярно проверяли на рост плесневых грибов.
В сутки 14 образцы анализировали на диацетил посредством статической парофазной газовой хроматографии (HSGC) - чувствительного способа проведения анализа летучих веществ в сложных матрицах. Данная установка состояла из статического парофазного пробоотборника, соединенного с газовым хроматографом с пламенным ионизационным детектором (FID). С этой целью использовали следующее оборудование:
HS-пробоотборник: HS40XI, TurboMatrix 110, Perkin Elmer.
Программа HS: HSControl v.2.00, Perkin Elmer.
GC: Autosystem XL, Perkin Elmer.
Программа GC: Turbochrom navigator, Perkin Elmer.
Колонка: HP-FFAP 25 мх0,20 ммх0,33 мкм, Agilent Technologies.
Для определения коэффициентов отклика (калибровки) использовали стандарты известной концентрации, контроли использовали для контроля того, что использованные коэффициенты отклика были стабильными в пределах аналитической серии, а также между сериями и с течением времени (месяцы). Концентрацию летучих веществ (млн-1) в образцах и контролях определяли с использованием коэффициентов отклика, полученных от стандартов. Образцы получали путем добавления 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г образца йогурта и немедленно анализировали посредством HSGC.
Для отслеживания влияния на последующее закисление 11 образцов ферментированного молока (одна заквасочная культура и заквасочная культура в комбинации с 10 штаммами Lb. fermentum) хранили при 7 плюс/минус 1°C и 25 плюс/минус 1°C в течение 28 суток, и рН измеряли в сутки 1, 7, 14, 21 и 28.
Результаты анализа на основе агара представлены на фиг. 8, демонстрируя то, что все протестированные плесневые грибы очень хорошо росли на чашках с агаром, полученных с использованием молока, ферментированного только заквасочной культурой (контроль). Для P. brevicompactum (DSM32094) и P. solitum (DSM32093) наблюдали большую задержку роста для всех штаммов Lb. fermentum, когда они
- 13 037612 присутствовали во время ферментации молока. Для остальных протестированных плесневых грибов наблюдали варьирующую задержку роста в присутствии во время ферментации молока штаммов
Lb.fermentum. Бактерии штамма Lb. fermentum CHCC14591 достигали значимого ингибирования, по существу, всех протестированных в данном анализе плесневых грибов.
Влияние на продукцию диацетила проиллюстрировано на фиг. 9, демонстрирующей то, что каждый из противогрибковых штаммов Lb. fermentum СНСС12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum CHCC14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15848, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008 либо не секретирует, либо секретирует очень мало диацетила.
Эффекты на последующее закисление проиллюстрированы на фиг. 10 и показывают то, что каждая из Lb. fermentum CHCC12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum CHCC14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15848, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008 не способствует последующему закислению или даже уменьшает последующее закисление по сравнению с контрольным йогуртом.
Эти данные были неожиданными и весьма важными, так как наблюдали то, что противогрибковые бактерии предшествующего уровня техники, пригодные для применения в пищевых продуктах, способствуют секреции летучих соединений и увеличивают эффекты последующего закисления, вызванного заквасочной культурой.
Пример 4. Эффект одного штамма Lb. fermentum на последующее закисление.
Один штамм Lb. fermentum (CHCC14591) тестировали на влияние на последующее закисление.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Имеющуюся в продаже заквасочную культуру (F-DVS Mild 2.0) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Одну бутыль инокулировали Lb. fermentum CHCC14591 в общей концентрации 2х107 КОЕ/г, две бутыли инокулировали одной из двух имеющихся в продаже биозащитных культур (FreshQ®4 и Holdbac® YM-C Plus) в рекомендованных дозировках (100U/T и 20 DCU/100 л для FreshQ®4 и Holdbac® YM-C Plus соответственно), и одну бутыль использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,60 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду.
Для отслеживания влияния на последующее закисление четыре образца ферментированного молока (только заквасочная культура, FreshQ®4, Holdbac® YM-C Plus и Lb. fermentum CHCC14591) хранили при 7 плюс/минус 1°C и 25 плюс/минус 1°C в течение 21 суток, и рН измеряли в сутки 1, 7, 14 и 21.
Влияние на последующее закисление проиллюстрировано на фиг. 11, демонстрирующей то, что добавление Lb. fermentum CHCC14591 во время ферментации молока предотвращает последующее закисление ферментированного молочного продукта. Одна заквасочная культура дает легкое последующее закисление, и две имеющиеся в продаже биозащитные культуры обе способствуют последующему закислению.
Пример 5. Влияние 10 штаммов Lb. fermentum на содержание ацетальдегида.
штаммов Lb. fermentum тестировали на их способность снижать содержание ацетальдегида.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Имеющуюся в продаже заквасочную культуру (F-DVS YF-L901 Yo-Flex®) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. 10 бутылей инокулировали штаммами Lb. fermentum в концентрациях 1х107 КОЕ/г, и одну бутыль использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,60 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Бутыли хранили при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток.
В сутки 14 образцы анализировали на ацетальдегид посредством статической парофазной газовой хроматографии (HSGC) - чувствительного способа проведения анализа летучих веществ в сложных матрицах. Данная установка состояла из статического парофазного пробоотборника, соединенного с газовым хроматографом с пламенным ионизационным детектором (FID). С этой целью использовали следующее оборудование:
HS-пробоотборник: HS40XI, TurboMatrix 110, Perkin Elmer.
Программа HS: HSControl v.2.00, Perkin Elmer.
GC: Autosystem XL, Perkin Elmer.
Программа GC: Turbochrom navigator, Perkin Elmer.
Колонка: HP-FFAP 25 мх0,20 ммх0,33 мкм, Agilent Technologies.
Для определения коэффициентов отклика (калибровки) использовали стандарты известной концентрации, контроли использовали для контроля того, что использованные коэффициенты отклика были
- 14 037612 стабильными в пределах аналитической серии, а также между сериями и с течением времени (месяцы).
Концентрацию летучих веществ (млн-1) в образцах и контролях определяли с использованием коэффициентов отклика, полученных от стандартов. Образцы получали путем добавления 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г образца йогурта и немедленно анализировали посредством HSGC.
Результаты проиллюстрированы на фиг. 12 и показывают то, что каждый из штаммов Lb. fermentum CHCC12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum СНСС14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15848, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008 имеет способность уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцированного заквасочной культурой во время ферментации, в ферментированном молочном продукте.
Пример 6. Влияние одного штамма Lb. fermentum на содержание ацетальдегида.
Один штамм Lb. fermentum тестировали на способность снижать содержание ацетальдегида.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Имеющуюся в продаже заквасочную культуру (F-DVS Mild 2.0) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Одну бутыль инокулировали штаммами Lb. fermentum в концентрациях 1х107 КОЕ/г, и одну бутыль использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,60 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Бутыли хранили при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток.
В сутки 14 образцы анализировали на ацетальдегид посредством статической парофазной газовой хроматографии (HSGC) - чувствительного способа проведения анализа летучих веществ в сложных матрицах. Данная установка состояла из статического парофазного пробоотборника, соединенного с газовым хроматографом с пламенным ионизационным детектором (FID). С этой целью использовали следующее оборудование:
HS-пробоотборник: HS40XI, TurboMatrix 110, Perkin Elmer.
Программа HS: HSControl v.2.00, Perkin Elmer.
GC: Autosystem XL, Perkin Elmer.
Программа GC: Turbochrom navigator, Perkin Elmer.
Колонка: HP-FFAP 25 мх0,20 ммх0,33 мкм, Agilent Technologies.
Для определения коэффициентов отклика (калибровки) использовали стандарты известной концентрации, контроли использовали для контроля того, что использованные коэффициенты отклика были стабильными в пределах аналитической серии, а также между сериями и с течением времени (месяцы). Концентрацию летучих веществ (млн-1) в образцах и контролях определяли с использованием коэффициентов отклика, полученных от стандартов. Образцы получали путем добавления 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г образца йогурта и немедленно анализировали посредством HSGC.
Результаты проиллюстрированы на фиг. 13 и показывают то, что Lb. fermentum СНСС14591 имеет способность уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцированного заквасочной культурой во время ферментации, в ферментированном молочном продукте.
Пример 7. Функциональный анализ имеющихся в продаже заквасочных культур.
Включенные сюда четыре имеющиеся в продаже заквасочные культуры были выбраны на основе их разных профилей закисления. Три были замороженными - F-DVS СН-1, F-DVS YoFlex Mild 2.0 и FDVS YF-L901, и одна была лиофилизированной - FD-DVS YF-L812. Для тестирования различия в профилях закисления полужирное молоко стандартизировали до содержания 1% жира и 4,5% белка с использованием обезжиренного сухого молока, обрабатывали нагреванием при 85 плюс/минус 1°C в течение 30 мин и немедленно охлаждали. Одну из четырех разных имеющихся в продаже заквасочных культур (F-DVS СН-1, F-DVS YoFlex Mild 2.0, F-DVS YF-L901 или FD-DVS YF-L812) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Данные бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,5. рН непрерывно измеряли на всем протяжении ферментации. Затем бутыли хранили при 6°C в течение 43 суток, и рН измеряли с интервалами 7 суток для определения уровня последующего закисления.
Профили закисления четырех имеющихся в продаже заквасочных культур - F-DVS СН-1, F-DVS YoFlex Mild 2.0, F-DVS YF-L901 и FD-DVS YF-L812 - показаны на фиг. 14. F-DVS СН-1 демонстрировала быстрое время ферментации, достигая рН 4,55 за 4,87 ч. F-DVS YoFlex Mild 2.0 демонстрировала промежуточное время ферментации, достигая рН 4,55 за 5,29 ч. FD-DVS YF-L812 и F-DVS YF-L901 демонстрировали более медленную ферментацию, достигая рН 4,55 за 6,45 и 5,87 ч соответственно. Профили последующего закисления демонстрировали очень низкие уровни последующего закисления для FDDVS YF-L812 и F-DVS YoFlex Mild 2.0 (ΔρΗ равно 0,12 и (ΔρΗ равно 0,11 после хранения при 6°C в течение 43 суток), промежуточные уровни последующего закисления для F-DVS YF-L901 (ΔρΗ равно 0,26
- 15 037612 после хранения при 6°C в течение 43 суток) и высокий уровень последующего закисления для F-DVS
СН-1 (ΔρΗ равно 0,55 после хранения при 6°C в течение 43 суток) (фиг. 15).
Пример 8. Полуколичественный анализ ингибирующего эффекта девяти штаммов Lb. fermentum против разных плесневых загрязнителей при ферментации с использованием двух разных заквасочных культур.
Для полуколичественного анализа ингибирующего эффекта девяти штаммов Lb. fermentum использовали анализ на основе агара, имеющий сходство со способом изготовления и продуктом - йогуртом.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Молоко инокулировали одной из двух имеющихся в продаже заквасочных культур (F-DVS СН-1 или FD-DVS YF-L812) в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Девять бутылей, инокулированных каждой заквасочной культурой, дополнительно инокулировали штаммами Lb. fermentum в концентрациях 1х107 КОЕ/г, и одну бутыль, инокулированную каждой заквасочной культурой, использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,55 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Затем ферментированное молоко нагревали до температуры 40°C и добавляли 40 мл 5%-го стерильного раствора агара, который был расплавлен и охлажден до 60°C. Этот раствор ферментированного молока и агара затем разливали в стерильные чашки Петри, и данные чашки сушили в ламинаре в течение 30 мин.
Протестированными штаммами Lb. fermentum были следующие: Lb. fermentum СНСС12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum CHCC14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC 15926 и Lb. fermentum CHCC2008.
Суспензии спор двух разных плесневых грибов наносили в виде пятен в концентрации 500 спор/пятно; Penicillium brevicompactum (DSM32094) и P. solitum (DSM32093). На каждую чашку наносили в виде пятен один плесневый гриб. Чашки инкубировали при 7 плюс/минус 1°C и 25 плюс/минус 1°C и регулярно проверяли на рост плесневых грибов.
В сутки 14 образцы анализировали на диацетил посредством статической парофазной газовой хроматографии (HSGC) - чувствительного способа проведения анализа летучих веществ в сложных матрицах. Данная установка состояла из статического парофазного пробоотборника, соединенного с газовым хроматографом с пламенным ионизационным детектором (FID). С этой целью использовали следующее оборудование:
HS-пробоотборник: HS40XI, TurboMatrix 110, Perkin Elmer.
Программа HS: HSControl v.2.00, Perkin Elmer.
GC: Autosystem XL, Perkin Elmer.
Программа GC: Turbochrom navigator, Perkin Elmer.
Колонка: HP-FFAP 25 мх0,20 ммх0,33 мкм, Agilent Technologies.
Для определения коэффициентов отклика (калибровки) использовали стандарты известной концентрации, контроли использовали для контроля того, что использованные коэффициенты отклика были стабильными в пределах аналитической серии, а также между сериями и с течением времени (месяцы). Концентрацию летучих веществ (млн-1) в образцах и контролях определяли с использованием коэффициентов отклика, полученных от стандартов. Образцы получали путем добавления 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г образца йогурта и немедленно анализировали посредством HSGC.
Результаты анализа на основе агара представлены на фиг. 16-19, демонстрируя то, что оба протестированных плесневых гриба очень хорошо росли на чашках с агаром, полученных с использованием молока, ферментированного только одной из заквасочных культур (контроль). И для P. brevicompactum (DSM32094), и для P. solitum (DSM32093) наблюдали большую задержку роста для всех штаммов Lb. fermentum, когда они присутствовали во время ферментации молока, независимо от использованной заквасочной культуры.
Влияние на продукцию диацетила проиллюстрировано на фиг. 20, демонстрирующей то, что каждый из противогрибковых штаммов Lb. fermentum СНСС12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum CHCC14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008 не добавляет диацетила к уровню, продуцированному заквасочной культурой.
Эти данные были неожиданными и весьма важными, так как наблюдали то, что противогрибковые бактерии предшествующего уровня техники, пригодные для применения в пищевых продуктах, способствуют секреции летучих соединений, что вызвано заквасочной культурой.
Пример 9. Влияние девяти штаммов Lb. fermentum на содержание ацетальдегида при ферментации с использованием двух разных заквасочных культур.
Девять штаммов Lb. fermentum тестировали на их способность уменьшать содержание ацетальдегида.
- 16 037612
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Молоко инокулировали одной из двух имеющихся в продаже заквасочных культур (F-DVS СН-1 или FD-DVS YF-L812) в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Девять бутылей, инокулированных штаммами Lb. fermentum в концентрациях 1х107 КОЕ/г, и одну бутыль, инокулированную каждой заквасочной культурой, использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,55 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Бутыли хранили при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток.
Протестированными штаммами Lb. fermentum были следующие: Lb. fermentum СНСС12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum CHCC14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008.
В сутки 14 образцы анализировали на ацетальдегид посредством статической парофазной газовой хроматографии (HSGC) - чувствительного способа проведения анализа летучих веществ в сложных матрицах. Данная установка состояла из статического парофазного пробоотборника, соединенного с газовым хроматографом с пламенным ионизационным детектором (FID). С этой целью использовали следующее оборудование:
HS-пробоотборник: HS40XI, TurboMatrix 110, Perkin Elmer.
Программа HS: HSControl v.2.00, Perkin Elmer.
GC: Autosystem XL, Perkin Elmer.
Программа GC: Turbochrom navigator, Perkin Elmer.
Колонка: HP-FFAP 25 мх0,20 ммх0,33 мкм, Agilent Technologies.
Для определения коэффициентов отклика (калибровки) использовали стандарты известной концентрации, контроли использовали для контроля того, что использованные коэффициенты отклика были стабильными в пределах аналитической серии, а также между сериями и с течением времени (месяцы). Концентрацию летучих веществ (млн-1) в образцах и контролях определяли с использованием коэффициентов отклика, полученных от стандартов. Образцы получали путем добавления 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г образца йогурта и немедленно анализировали посредством HSGC.
Результаты проиллюстрированы на фиг. 21 и показывают то, что каждый из штаммов Lb. fermentum CHCC12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum СНСС14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008 имеет способность уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцированного заквасочной культурой во время ферментации, в ферментированном молочном продукте.
Ссылки
EP0221499
EP0576780
EP1442113
US5378458
EP2693885
EP13717237
EP13714671
Gerez et al., Control of spoilage fungi by lactic acid bacteria, Biological Control, vol. 64 (2013): 231-237
Aunsbjerg et al., Contribution of volatiles to the antifungal effect of Lactobacillus paracasei in defined medium and yoghurt, Int J Food Microbiology, vol. 194 (2015): 46-53
Kosikowski, F.V. and Mistry, V.V., Cheese and Fermented Milk Foods, 1997, 3rd Ed.
F.V. Kosikowski, L.L.C. Westport, CT
Депонирования и экспертное решение.
Заявитель ходатайствует о том, чтобы образец депонированных микроорганизмов, изложенных ниже, мог быть сделан доступным только для эксперта до даты, на которую выдан патент.
Штамм СНСС12798 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32084.
Штамм СНСС12797 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32085.
Штамм СНСС14591 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32086.
- 17 037612
Штамм СНСС14588 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ),
Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32087.
Штамм СНСС15844 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32088.
Штамм СНСС15865 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32089.
Штамм СНСС15847 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32090.
Штамм СНСС15848 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32091.
Штамм СНСС15926 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 22.07.2015 г. под № доступа 32096.
Штамм СНСС2008 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 19.05.2009 г. под № доступа 22584.
Штамм СНСС15860 Lactobacillus rhamnosus был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32092.
Штамм СНСС16948 Penicillium solitum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32093.
Штамм СНСС16935 Penicillium brevicompactum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32094.
Депонирования осуществляли согласно Будапештскому договору о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры.
Claims (9)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Штамм бактерий вида Lactobacillus rhamnosus CHCC15860, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур под номером доступа DSM32092, для получения ферментированного молочного продукта.
- 2. Композиция для получения ферментированного молочного продукта, содержащая штамм Lactobacillus rhamnosus по п. 1.
- 3. Композиция по п.2, отличающаяся тем, что дополнительно содержит штамм Lactobacillus fermentum DSM32086.
- 4. Композиция по п.2 или 3, отличающаяся тем, что дополнительно содержит по меньшей мере одно криопротекторное соединение.
- 5. Композиция по любому из пп.2-4, отличающаяся тем, что представляет собой твердую замороженную или лиофилизированную заквасочную культуру, содержащую молочнокислые бактерии в концентрации по меньшей мере 109 КОЕ/г, или в концентрации по меньшей мере 1010 КОЕ/г, или в концентрации по меньшей мере 1011 КОЕ/г.
- 6. Способ получения ферментированного молочного продукта, включающий добавление штамма бактерий Lactobacillus rhamnosus по п. 1 или композиции по любому из пп.2-5 в молоко или в молочный продукт и ферментирование указанной смеси при температуре от примерно 22°C до примерно 43°C до достижения рН 4,5-4,7.
- 7. Ферментированный молочный продукт, полученный способом по п.6.
- 8. Пищевой или кормовой продукт, содержащий штамм бактерий вида Lactobacillus rhamnosus по п.1.
- 9. Применение штамма бактерий вида Lactobacillus rhamnosus по п.1 для получения пищевого или кормового продукта.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP15183198 | 2015-08-31 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201891889A1 EA201891889A1 (ru) | 2019-02-28 |
| EA037612B1 true EA037612B1 (ru) | 2021-04-21 |
Family
ID=56852257
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201890404A EA201890404A1 (ru) | 2015-08-31 | 2016-08-30 | Бактерии lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью |
| EA201891889A EA037612B1 (ru) | 2015-08-31 | 2016-08-30 | Штамм бактерий lactobacillus rhamnosus, композиция на его основе и способ получения ферментированного молочного продукта с его использованием |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201890404A EA201890404A1 (ru) | 2015-08-31 | 2016-08-30 | Бактерии lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20180249727A1 (ru) |
| EP (2) | EP3344749A1 (ru) |
| JP (2) | JP2018526993A (ru) |
| KR (2) | KR20180101636A (ru) |
| CN (2) | CN108138124A (ru) |
| AR (2) | AR105866A1 (ru) |
| AU (2) | AU2016315133A1 (ru) |
| BR (2) | BR122018013713B1 (ru) |
| EA (2) | EA201890404A1 (ru) |
| IL (2) | IL257682A (ru) |
| MX (1) | MX2018002278A (ru) |
| PE (2) | PE20181133A1 (ru) |
| UA (1) | UA127431C2 (ru) |
| WO (1) | WO2017037046A1 (ru) |
| ZA (2) | ZA201800859B (ru) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2018526993A (ja) | 2015-08-31 | 2018-09-20 | セーホーエル．ハンセン アクティーゼルスカブ | 抗真菌活性を有するラクトバチルス・ファーメンタム菌 |
| EP3344051A1 (en) * | 2015-08-31 | 2018-07-11 | Chr. Hansen A/S | Lactobacillus fermentum bacteria reducing the concentration of acetaldehyde |
| CN108347952A (zh) * | 2015-08-31 | 2018-07-31 | 科.汉森有限公司 | 抑制后酸化的发酵乳杆菌细菌 |
| EA202090863A1 (ru) * | 2017-10-27 | 2020-09-04 | Кхр. Хансен А/С | Lactobacillus rhamnosus с повышенным продуцированием по диацетилу |
| EA202092322A1 (ru) * | 2018-04-19 | 2021-02-02 | Кхр. Хансен А/С | Ингибирование роста грибов за счет истощения уровня марганца |
| CN109370948B (zh) * | 2018-11-26 | 2020-08-04 | 江南大学 | 一株高产6-磷酸-β-半乳糖苷酶的乳酸乳球菌及其应用 |
| BR112022007560A2 (pt) * | 2019-10-23 | 2022-08-23 | Chr Hansen As | Composição bacteriana para controlar deterioração por fungos e seus usos |
| CN111647521A (zh) * | 2020-04-02 | 2020-09-11 | 玉林市容县奇昌种猪养殖有限公司 | 一种乳杆菌gm_1及其选育方法 |
| CA3173014A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Mikkel Gulmann MADSEN | Method of reducing growth of listeria in food products |
| US20220022478A1 (en) | 2020-07-27 | 2022-01-27 | Sargento Foods Inc. | Flavor Ferment to Produce Natural Cheese With Specific Flavor Attributes |
| US11510416B1 (en) | 2021-02-18 | 2022-11-29 | Sargento Foods Inc. | Natural pasta-filata style cheese with improved texture |
| JP7207804B1 (ja) | 2022-10-23 | 2023-01-18 | 規雄 酒井 | 乳酸菌株、乳酸菌の取得方法、ヨーグルトの製造方法、ヨーグルトのスターター、ヨーグルトおよび乳酸菌発酵豆乳食品 |
| CN118580983A (zh) * | 2023-03-01 | 2024-09-03 | 重庆市天友乳业股份有限公司 | 发酵乳杆菌ty-f13及其应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013153070A1 (en) * | 2012-04-09 | 2013-10-17 | Chr. Hansen A/S | Bioprotection using lactobacillus paracasei strains |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4956177A (en) | 1985-11-04 | 1990-09-11 | Microlife Technics, Inc. | Method for inhibiting fungi |
| FI92498C (fi) | 1992-06-10 | 1994-11-25 | Valio Meijerien | Uusi mikro-organismikanta, sitä sisältävät bakteerivalmisteet ja näiden käyttö hiivojen ja homeiden torjuntaan |
| EP1308506A1 (en) | 2001-11-06 | 2003-05-07 | Eidgenössische Technische Hochschule Zürich | Mixtures of Propionibacterium jensenii and Lactobacillus sp. with antimicrobial activities for use as a natural preservation system |
| JP2004236638A (ja) | 2003-02-10 | 2004-08-26 | Taiyo Corp | 発酵乳乳清発酵液の製造法 |
| ITMI20062451A1 (it) * | 2006-12-20 | 2008-06-21 | Mofin S R L | Metodo per la preparazione di un latte destinato ad applicazioni lattiero-casearie il latte ottenuto con detto metodo ed i suoi usi |
| CN101273737B (zh) * | 2007-03-28 | 2011-08-24 | 哈尔滨正方科技有限公司 | 一种在常温下保持高活菌数的发酵乳饮料的制备方法 |
| TW200927141A (en) * | 2007-11-22 | 2009-07-01 | Bayer Schering Pharma Oy | Vaginal delivery system |
| US20120107451A1 (en) * | 2009-06-30 | 2012-05-03 | Chr-Hansen A/S | Method for producing a fermented milk product |
| IT1405780B1 (it) | 2010-07-12 | 2014-01-24 | Giuliani Spa | Miscela arricchita di isoflavoni-agliconi, equolo e lunasina a base di soia fermentata, procedimento per la sua preparazione e relativi usi in campo alimentare, medico e cosmetico. |
| DK2654417T3 (en) * | 2010-12-23 | 2018-10-29 | Dupont Nutrition Biosci Aps | COLD PROTECTIVE COMPOSITIONS AND APPLICATIONS THEREOF |
| BR112013025640B1 (pt) * | 2011-04-08 | 2019-09-10 | Chr Hansen As | lactobacillus rhamnosus melhoradores de sabor |
| KR101869498B1 (ko) * | 2011-04-08 | 2018-06-22 | 시에이치알. 한센 에이/에스 | 시너지적 항균 효과 |
| EA033656B1 (ru) * | 2012-04-09 | 2019-11-13 | Chr Hansen As | Штамм lactobacillus rhamnosus, обладающий противогрибковыми свойствами |
| US20150132270A1 (en) * | 2012-05-21 | 2015-05-14 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Strains of lactobacillus with antifungal properties |
| JP6153218B2 (ja) | 2012-12-28 | 2017-06-28 | 日本ブレーキ工業株式会社 | 金属異物検知装置 |
| CN104855674A (zh) * | 2015-05-18 | 2015-08-26 | 上海佳俊生物科技有限公司 | 组合菌种联合转化的微生物发酵全价饲料生产方法 |
| JP2018526993A (ja) | 2015-08-31 | 2018-09-20 | セーホーエル．ハンセン アクティーゼルスカブ | 抗真菌活性を有するラクトバチルス・ファーメンタム菌 |
| EP3344051A1 (en) * | 2015-08-31 | 2018-07-11 | Chr. Hansen A/S | Lactobacillus fermentum bacteria reducing the concentration of acetaldehyde |
| CN108347952A (zh) * | 2015-08-31 | 2018-07-31 | 科.汉森有限公司 | 抑制后酸化的发酵乳杆菌细菌 |
-
2016
- 2016-08-30 JP JP2018510815A patent/JP2018526993A/ja not_active Withdrawn
- 2016-08-30 KR KR1020187025725A patent/KR20180101636A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-08-30 CN CN201680059331.XA patent/CN108138124A/zh active Pending
- 2016-08-30 EA EA201890404A patent/EA201890404A1/ru unknown
- 2016-08-30 BR BR122018013713-4A patent/BR122018013713B1/pt active IP Right Grant
- 2016-08-30 KR KR1020187008642A patent/KR20180042407A/ko active Application Filing
- 2016-08-30 PE PE2018000327A patent/PE20181133A1/es unknown
- 2016-08-30 CN CN201810426755.6A patent/CN108587968A/zh active Pending
- 2016-08-30 UA UAA201809178A patent/UA127431C2/uk unknown
- 2016-08-30 MX MX2018002278A patent/MX2018002278A/es unknown
- 2016-08-30 BR BR112018003018A patent/BR112018003018A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2016-08-30 AU AU2016315133A patent/AU2016315133A1/en not_active Abandoned
- 2016-08-30 EP EP16759737.6A patent/EP3344749A1/en not_active Withdrawn
- 2016-08-30 PE PE2021000842A patent/PE20211663A1/es unknown
- 2016-08-30 WO PCT/EP2016/070381 patent/WO2017037046A1/en active Application Filing
- 2016-08-30 EA EA201891889A patent/EA037612B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2016-08-30 EP EP19172112.5A patent/EP3553166A1/en active Pending
- 2016-08-30 US US15/755,023 patent/US20180249727A1/en not_active Abandoned
- 2016-08-31 AR ARP160102649A patent/AR105866A1/es unknown
-
2018
- 2018-02-09 ZA ZA2018/00859A patent/ZA201800859B/en unknown
- 2018-02-22 IL IL257682A patent/IL257682A/en unknown
- 2018-06-19 AR ARP180101713 patent/AR112198A2/es unknown
- 2018-06-28 AU AU2018204698A patent/AU2018204698B2/en active Active
- 2018-07-05 ZA ZA2018/04542A patent/ZA201804542B/en unknown
- 2018-09-04 IL IL261588A patent/IL261588A/en unknown
- 2018-09-11 US US16/128,460 patent/US11096396B2/en active Active
- 2018-10-03 JP JP2018187992A patent/JP7094850B2/ja active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013153070A1 (en) * | 2012-04-09 | 2013-10-17 | Chr. Hansen A/S | Bioprotection using lactobacillus paracasei strains |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| GEREZ C.L.; TORRES M.J.; FONT DE VALDEZ G.; ROLLÁN G.: "Control of spoilage fungi by lactic acid bacteria", BIOLOGICAL CONTROL, SAN DIEGO, CA, US, vol. 64, no. 3, 7 November 2012 (2012-11-07), US, pages 231 - 237, XP028983262, ISSN: 1049-9644, DOI: 10.1016/j.biocontrol.2012.10.009 * |
| VOULGARI, K. ; HATZIKAMARI, M. ; DELEPOGLOU, A. ; GEORGAKOPOULOS, P. ; LITOPOULOU-TZANETAKI, E. ; TZANETAKIS, N.: "Antifungal activity of non-starter lactic acid bacteria isolates from dairy products", FOOD CONTROL, BUTTERWORTH, LONDON, GB, vol. 21, no. 2, 1 February 2010 (2010-02-01), GB, pages 136 - 142, XP026574807, ISSN: 0956-7135, DOI: 10.1016/j.foodcont.2009.04.007 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL261588A (en) | 2018-10-31 |
| WO2017037046A1 (en) | 2017-03-09 |
| BR122018013713B1 (pt) | 2024-01-23 |
| ZA201804542B (en) | 2019-09-25 |
| BR122018013713A2 (pt) | 2019-09-10 |
| IL257682A (en) | 2018-04-30 |
| US20180249727A1 (en) | 2018-09-06 |
| KR20180101636A (ko) | 2018-09-12 |
| BR112018003018A2 (pt) | 2018-09-18 |
| US11096396B2 (en) | 2021-08-24 |
| PE20181133A1 (es) | 2018-07-17 |
| AU2018204698A1 (en) | 2018-07-19 |
| US20190059406A1 (en) | 2019-02-28 |
| CN108138124A (zh) | 2018-06-08 |
| JP2019013240A (ja) | 2019-01-31 |
| JP7094850B2 (ja) | 2022-07-04 |
| EA201890404A1 (ru) | 2018-09-28 |
| EP3553166A1 (en) | 2019-10-16 |
| EA201891889A1 (ru) | 2019-02-28 |
| MX2018002278A (es) | 2018-03-23 |
| AR105866A1 (es) | 2017-11-15 |
| PE20211663A1 (es) | 2021-08-26 |
| EP3344749A1 (en) | 2018-07-11 |
| AU2016315133A1 (en) | 2018-03-08 |
| AR112198A2 (es) | 2019-10-02 |
| UA127431C2 (uk) | 2023-08-23 |
| JP2018526993A (ja) | 2018-09-20 |
| KR20180042407A (ko) | 2018-04-25 |
| CN108587968A (zh) | 2018-09-28 |
| AU2018204698B2 (en) | 2020-05-21 |
| ZA201800859B (en) | 2019-01-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11096396B2 (en) | Lactobacillus fermentum bacteria with antifungal activity | |
| EP3344052B1 (en) | Lactobacillus fermentum bacteria inhibiting post-acidification | |
| JP6430931B2 (ja) | ラクトバチルス・ラムノサス株を使用した生物防除 | |
| JP6430930B2 (ja) | ラクトバチルス・パラカゼイ株を使用した生物防除 | |
| US11723378B2 (en) | Lactobacillus rhamnosus with increased diacetyl production | |
| US20180235249A1 (en) | Lactobacillus fermentum bacteria reducing the concentration of acetaldehyde | |
| US20230189831A1 (en) | Bioprotective lactic acid bacteria with low postacidification | |
| WO2024141408A1 (en) | Bioprotective lacticaseibacillus rhamnosus with low postacidification | |
| WO2024218223A1 (en) | Storage stable lacticaseibacillus rhamnosus | |
| EA042154B1 (ru) | Lactobacillus rhamnosus с повышенным продуцированием по диацетилу |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM |