EA037612B1 - Штамм бактерий lactobacillus rhamnosus, композиция на его основе и способ получения ферментированного молочного продукта с его использованием - Google Patents

Штамм бактерий lactobacillus rhamnosus, композиция на его основе и способ получения ферментированного молочного продукта с его использованием Download PDF

Info

Publication number
EA037612B1
EA037612B1 EA201891889A EA201891889A EA037612B1 EA 037612 B1 EA037612 B1 EA 037612B1 EA 201891889 A EA201891889 A EA 201891889A EA 201891889 A EA201891889 A EA 201891889A EA 037612 B1 EA037612 B1 EA 037612B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
fermentum
milk
fermented
lactobacillus
concentration
Prior art date
Application number
EA201891889A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201891889A1 (ru
Inventor
Сесилие Люкке Марвиг Нильсен
Тина Хорнбек
Пиа Расмуссен
Лоне Польсен
Томас Экхардт
Гуннар Оэрегорд
Элахе Гханей Могхадам
Original Assignee
Кхр. Хансен А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Кхр. Хансен А/С filed Critical Кхр. Хансен А/С
Publication of EA201891889A1 publication Critical patent/EA201891889A1/ru
Publication of EA037612B1 publication Critical patent/EA037612B1/ru

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1236Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using Leuconostoc, Pediococcus or Streptococcus sp. other than Streptococcus Thermophilus; Artificial sour buttermilk in general
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1238Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using specific L. bulgaricus or S. thermophilus microorganisms; using entrapped or encapsulated yoghurt bacteria; Physical or chemical treatment of L. bulgaricus or S. thermophilus cultures; Fermentation only with L. bulgaricus or only with S. thermophilus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23KFODDER
    • A23K10/00Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/3571Microorganisms; Enzymes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • A61K35/744Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04Antibacterial agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10Antimycotics
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00Function of food ingredients
    • A23V2200/10Preserving against microbes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/113Acidophilus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/137Delbrueckii
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/143Fermentum
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/147Helveticus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/157Lactis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/165Paracasei
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/169Plantarum
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/175Rhamnosus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/21Streptococcus, lactococcus
    • A23V2400/215Cremoris
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/21Streptococcus, lactococcus
    • A23V2400/249Thermophilus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/31Leuconostoc
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51Bifidobacterium
    • A23V2400/519Breve
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225Lactobacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

Изобретение относится к штамму бактерий вида Lactobacillus rhamnosus CHCC15860, депонированному в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур под номером доступа DSM32092, для получения ферментированного молочного продукта. Изобретение дополнительно относится к композициям и пищевым или кормовым продуктам, содержащим указанный штамм, способам получения ферментированных молочных продуктов с использованием указанного штамма и к продуктам, полученным таким образом.

Description

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к бактериям Lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью, композициям, содержащим указанные бактерии, в частности к вспомогательным культурам, содержащим указанные бактерии, способам получения ферментированного молочного продукта с использованием указанных бактерий или к культурам и ферментированным молочным продуктам, полученным таким образом, включая пищевые, кормовые и фармацевтические продукты.
Предшествующий уровень техники
Молочнокислые бактерии (LAB) использовали десятилетиями для увеличения срока хранения пищевых продуктов. Во время ферментации LAB продуцируют молочную кислоту, а также другие органические кислоты, которые вызывают снижение рН ферментированного продукта. Продукты, имеющие кислотный рН, не поддерживают дальнейший рост большинства микроорганизмов, включая патогенные бактерии и бактерии, вызывающие порчу продуктов. Однако рост дрожжей и плесневых грибов не подвергается влиянию низкого рН и часто вызывает порчу ферментированных молочных продуктов.
Помимо продукции органических кислот, некоторые LAB также продуцируют метаболиты с антимикробной и, в частности, противогрибковой активностью.
Например, в Европейской патентной заявке № ЕР 0221499 описаны противогрибковые свойства Lactobacillus rhamnosus NRRL-B-15972, которая способна ингибировать рост разных плесневых грибов при культивировании на агаризованной среде, дополненной огуречным соком. Аналогичным образом, Европейская патентная заявка № ЕР 0576780 относится к Lactobacillus rhamnosus LC-705 - штамму, который, по-видимому, ингибирует рост Penicillium, Cladosporium, Fusarium и Candida на среде на основе лактосыворотки, дополненной гидролизатом казеина и дрожжевым экстрактом. В Европейской патентной заявке № ЕР 1442113 описаны смеси Propionibacterium jensenii и Lactobacillus sp., такой как Lactobacillus rhamnosus, с антимикробными эффектами и их применение для биозащиты. В Европейской патентной заявке № ЕР 13717237 описаны штаммы Lactobacillus paracasei с противогрибковыми эффектами, и в Европейской патентной заявке № ЕР 13714671 описаны штаммы Lactobacillus rhamnosus с противогрибковыми эффектами.
Обзор LAB с противогрибковыми эффектами и их применение для защиты хлеба и фруктов приводится Gerez et al., 2013.
Культуры с противогрибковыми эффектами, кроме того, имеются в продаже и включают культуры FreshQ® Chr Hansen, а также культуры Dupont, SACCO и Bioprox. Разработка культур с противогрибковыми эффектами представляет сложную задачу, так как она требует идентификации культур, которые обеспечивают значительный противогрибковый эффект в реальных пищевых приложениях. Другим фактором, для которого необходима тщательная оценка при отборе биозащитных культур-кандидатов, является влияние на органолептические свойства пищевого продукта. Проблемой, которая была идентифицирована в имеющихся в продаже продуктах, является степень последующего закисления, т.е. продолжение закисления культуры после достижения продуктом желательного рН. Это представляет проблему, в частности, при повышенных температурах хранения, во время выдерживания ферментированного продукта в ферментационных чанах перед охлаждением продукта или на протяжении стадий созревания.
Кроме того, считается, что имеющиеся в продаже биозащитные культуры дают избыточный диацетильный вкусовой компонент, вызывающий кремовый привкус, который может восприниматься в качестве нежелательного вкусового влияния (Aunsbjerg et al., 2015).
Следовательно, все еще существует потребность в новых и имеющих преимущества бактериях, подходящих для пищевого применения, с противогрибковыми эффектами и минимальным влиянием на вкус.
Краткое изложение сущности изобретения
Согласно настоящему изобретению предложены бактерии вида Lactobacillus fermentum, имеющие способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50%.
Посредством целенаправленных усилий была идентифицирована новая группа штаммов Lactobacillus fermentum, которые обеспечивают значимые противогрибковые эффекты и дополнительные преимущества при использовании в качестве биозащитного штамма в способах получения ферментированных продуктов. Всего было идентифицировано 10 разных штаммов Lactobacillus fermentum, которые ингибируют рост P. solitum или P. brevicompactum по меньшей мере на 50%.
Штаммы Lactobacillus fermentum no настоящему изобретению могут быть дополнительно охарактеризованы по наличию способности уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцированного заквасочной культурой на протяжении ферментации, в ферментированном молочном продукте по меньшей мере на 50%.
В родственном воплощении штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут быть дополнительно охарактеризованы тем, что указанная бактерия секретирует только маленькие количества диацетила, например в интервале от 0 до 5 млн-1.
Штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут альтернативно или дополни- 1 037612 тельно быть охарактеризованы тем, что они увеличивают рН ферментированного молочного продукта, содержащего Lactobacillus fermentum, во время хранения после ферментации по сравнению с молочным продуктом, ферментированным такой же заквасочной культурой, не содержащей Lactobacillus fermentum.
Согласно настоящему изобретению, следовательно, предложены бактерии, как описано выше, содержащие их композиции, способы применения данных бактерий для получения ферментированных молочных продуктов, а также продукты, полученные таким образом.
Подробное описание изобретения
Согласно настоящему изобретению предложена бактерия вида Lactobacillus fermentum, имеющая способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50%. В предпочтительном воплощении настоящее изобретение относится к бактерии вида Lactobacillus fermentum, имеющей способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50% при выращивании в молоке или субстрате на основе молока, таком как, например, ферментированный молочный продукт. Способность ингибировать рост гриба может быть определена многочисленными разными анализами, известными в данной области. В контексте настоящего изобретения способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50% предпочтительно определена с использованием анализа, включающего:
(1) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ (колониеобразующая единица)/г и заквасочной культурой, (б) ферментирования до достижения рН 4,6 и (в) отверждения ферментированного молока посредством добавления агара;
(2) получение по меньшей мере одного пятна P. solitum или P. brevicompactum на отвержденном агаром ферментированном молоке с концентрацией 500 спор/пятно и его инкубирование в течение 7 суток при 25°C;
(3) определение процента ингибирования посредством определения наибольшего диаметра колонии, образованной ростом P. solitum или P. brevicompactum, и выражения указанного диаметра в виде процентной доли наибольшего диаметра, образованного при тех же самых условиях, но в отсутствие штамма Lactobacillus fermentum.
Штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению имеют особые преимущества, так как они увеличивают срок хранения пищевых продуктов, полученных с этими бактериями. При одной альтернативе штаммы Lactobacillus fermentum no настоящему изобретению ингибируют рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, и рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50%. В родственном воплощении штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению ингибируют рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, и/или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70% или по меньшей мере на 75%.
Следует понимать то, что концентрация штаммов Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению по меньшей мере 107 КОЕ/г, идентифицированная в приведенном выше анализе, представляет собой концентрацию, дающую превосходные противогрибковые эффекты. В то время как данное изобретение, следовательно, охватывает штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г, как, например, в концентрации от 107 КОЕ/г до 1011 КОЕ/г, от 107 КОЕ/г до 1010 КОЕ/г и от 107 КОЕ/г до 109 КОЕ/г, данное изобретение не ограничивается данными концентрациями, так как хорошие противогрибковые эффекты также были получены с меньшей концентрацией.
Согласно одному аспекту бактерии по изобретению дополнительно характеризуются секрецией малых количеств или, по существу, отсутствием секреции летучих соединений, которые влияют на органолептические свойства пищевого продукта. Известно, что обычные заквасочные культуры, такие как имеющиеся в продаже смеси Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus, продуцируют летучие соединения, которые значительно содействуют органолептическим свойствам ферментированных продуктов. Например, ацетальдегид, диацетил и ацетоин представляют собой известные летучие соединения, которые влияют на органолептические свойства пищевого продукта. В родственном воплощении бактерии по настоящему изобретению характеризуются уменьшением присутствия ацетальдегида, продуцируемого другими бактериями в заквасочной культуре. Например, определенные штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут дополнительно характеризоваться наличием способности уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцируемого заквасочной культурой во время ферментации, в ферментированном молочном продукте по меньшей мере на 50%. Данное уменьшение, таким образом, определено по сравнению с ферментированным продуктом, приготовленным без штаммов Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению. В данной области известны разные анализы для определения концентрации ацетальдегида в ферментированном продукте, и их можно использовать
- 2 037612 для этой цели согласно настоящему изобретению. Способность уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцируемого заквасочной культурой на протяжении ферментации, в ферментированном молочном продукте по меньшей мере на 50% предпочтительно определена в анализе, включающем:
(1) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой, (б) ферментирования до достижения рН 4,6, и;
(2) хранение ферментированного молочного продукта при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток;
(3) добавление 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г ферментированного молочного продукта и определение концентрации ацетальдегида посредством статической парофазной газовой хроматографии.
Ацетальдегид представляет собой вкусовой компонент, продуцируемый молочнокислыми бактериями во время ферментации. В то время как данный компонент является желательным в некоторых применениях, в других применениях было бы полезным уменьшение или устранение присутствия ацетальдегида. Бактерии Lactobacillus fermentum, уменьшающие концентрацию ацетальдегида в ферментированном молочном продукте, следовательно, дают преимущества в конкретных применениях, например при приготовлении йогурта с легким вкусом или подслащенного йогурта. Штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению, например, могут уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцируемого заквасочной культурой во время ферментации, в ферментированном молочном продукте по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98%.
Альтернативно или дополнительно, штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут характеризоваться тем, что указанная бактерия секретирует диацетил в интервале от 0 до 5 млн-1. Секрецию диацетила можно определять с использованием разных анализов, известных в данной области, но предпочтительно она определена в анализе, включающем:
(1) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой, (б) ферментирования до достижения рН 4,6, и (2) хранение ферментированного молочного продукта при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток;
(3) добавление 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г ферментированного молочного продукта и определение концентрации диацетила посредством статической парофазной газовой хроматографии.
Бактерии Lactobacillus fermentum, секретирующие низкие концентрации диацетила, имеют преимущества в способах производства пищевых продуктов с данными бактериями, поскольку другие штаммы, оказывающие противогрибковую активность, которые продуцируют высокие концентрации данных летучих соединений, влияют на вкус конечного продукта и, следовательно, не могут использоваться для всех применений. Штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут характеризоваться тем, что указанная бактерия секретирует диацетил в интервале от 0 до 3 млн-1 или от 0 до 2 млн-1.
Штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут характеризоваться дополнительными полезными эффектами. Например, данные штаммы могут характеризоваться тем, что они увеличивают рН (т.е. противодействуют последующему закислению) ферментированного молочного продукта, содержащего Lactobacillus fermentum, на протяжении хранения после ферментации по сравнению с молочным продуктом, ферментированным такой же заквасочной культурой, не содержащей Lactobacillus fermentum. Увеличение рН составляет по меньшей мере на значение 0,1 и предпочтительно определяется после хранения ферментированного продукта на протяжении 21 суток при 25°C. Как указано выше, наблюдали то, что противогрибковые бактерии предшествующего уровня техники способствуют последующему закислению. Авторы изобретения неожиданно обнаружили то, что штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению не только не могут способствовать последующему закислению, но, на самом деле, оказывают антагонистический эффект на последующее закисление посредством увеличения значения рН. Как показано в Примерах ниже, данный эффект является особенно заметным в ферментационных процессах с использованием заквасочных культур, демонстрирующих значительное последующее закисление, включая целый ряд имеющихся в продаже заквасочных культур и, в частности, при использовании совместно с имеющимися в продаже противогрибковыми бактериями.
Штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению, например, могут характеризоваться тем, что они увеличивают рН ферметированного молочного продукта, содержащего Lactobacillus fermentum, на протяжении хранения после ферментации по сравнению с молочным продуктом, ферментируемым такой же заквасочной культурой, не содержащей Lactobacillus fermentum, где указанное увеличение рН осуществляется по меньшей мере на значение 0,1 и определено после хранения ферментированного продукта на протяжении 21 суток при 25°C, и где заквасочная культура содержит LAB, которые способны уменьшать рН молочного продукта на протяжении ферментации до значения рН 4,6 за 10 ч или меньше. Например, данный анализ может быть основан на смесях Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus. Соответствующие смеси часто используются для производства йогурта, и известно то, что они вызывают последующее закисление.
В родственном воплощении в ферментированном молочном продукте, содержащем Lactobacillus
- 3 037612 fermentum, поддерживается рН выше 4,0 при хранении в течение по меньшей мере 14 суток при 25°C, где данный ферментированный молочный продукт получают способом, включающим инокулирование молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой, ферментирование до достижения рН 4,6, встряхивание ферментированного продукта и охлаждение. Данные штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению, следовательно, уменьшают эффект последующего закисления, наблюдаемый в биозащитных культурах предшествующего уровня техники и даже в традиционных заквасочных культурах. Следует понимать то, что свойство, определяющее то, что штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению могут поддерживать рН выше 4,0 при хранении в течение по меньшей мере 14 суток при 25°C, просто характеризует анализ, обычно используемый для определения данного эффекта. Не является необходимым или не требуется, чтобы штаммы Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению, содержащие их композиции, включающие пищевые или кормовые продукты, на самом деле хранились при данных условиях. Опять-таки, в одном аспекте данный анализ можно проводить с использованием заквасочной культуры, содержащей LAB, которые способны снижать рН молочного продукта во время ферментации до значения рН 4,6 за 10 ч или меньше. Например, данный анализ может быть основан на смесях Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus.
Бактерии по настоящему изобретению преимущественно могут происходить из одного из следующих депонированных штаммов:
(а) штамм СНСС12798 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32084;
(б) штамм СНСС12797 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32085;
(в) штамм СНСС14591 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32086;
(г) штамм СНСС14588 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32087;
(д) штамм СНСС15844 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32088;
(е) штамм СНСС15865 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32089;
(ж) штамм СНСС15847 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32090;
(з) штамм СНСС15848 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32091;
(и) штамм СНСС15926 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 32096;
(й) штамм СНСС2008 Lactobacillus fermentum, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, под № доступа 22584;
(к) мутантный штамм, получаемый из одной из депонированных бактерий согласно (а)-(й), имеющий способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного в DSMZ под № доступа 32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного в DSMZ под № доступа 32094, по меньшей мере на 50% в анализе, включающем:
(1) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой, (б) ферментирования до достижения рН 4,6 и (в) отверждения ферментированного молока посредством добавления агара;
(2) получение по меньшей мере одного пятна P. solitum или P. brevicompactum на отвержденном агаром ферментированном молоке с концентрацией 500 спор/пятно и его инкубирование в течение 7 суток при 25°C;
(3) определение процента ингибирования посредством определения наибольшего диаметра колонии, образованной ростом P. solitum или P. brevicompactum, и выражения указанного диаметра в виде
- 4 037612 процентной доли наибольшего диаметра, образованного при тех же самых условиях, но в отсутствие штамма Lactobacillus fermentum.
В контексте настоящей заявки термин молочнокислая бактерия или LAB используется для названия бактерии, пригодной для применения в пищевых продуктах, продуцирующей молочную кислоту в качестве главного метаболического конечного продукта брожения углеводов. Данные бактерии являются родственными по их общим метаболическим и физиологическим характеристикам и обычно представляют собой грамположительные, кислотоустойчивые, неспорообразующие, недышащие палочковидные бациллы или кокки с низким содержанием GC. На протяжении стадии ферментации потребление лактозы данными бактериями вызывает образование молочной кислоты, уменьшая рН и приводя к образованию белкового сгустка. Данные бактерии, таким образом, отвечают за скисание молока и за текстуру молочного продукта. Термин молочнокислая бактерия в том виде, в котором он используется в данном документе, охватывает бактерии, принадлежащие к роду Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp., Streptococcus spp., Lactococcus spp., как, например, Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus lactis, Bifidobacterium animalis, Lactococcus lactis, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium breve и Leuconostoc spp., но не ограничивающиеся ими.
В зависимости от оптимальной температуры для размножения LAB характеризуются как мезофильные или термофильные LAB. Термин мезофильный относится к микроорганизмам, которые лучше всего растут при умеренных температурах. Термин мезофильная ферментация относится в данном документе к ферментации при температуре от примерно 22°C до примерно 35°C. Термин мезофильно ферментированный молочный продукт относится к ферментированным молочным продуктам, полученным посредством мезофильной ферментации мезофильной заквасочной культуры, и включает такие ферментированные молочные продукты, как пахта, простокваша, сквашенное молоко, сметана, сквашенные сливки и молодой сыр, такой как творог кварк, творог и творожный сыр. Наиболее полезные с промышленной точки зрения мезофильные бактерии включают Lactococcus spp. и Leuconostoc spp.
Термин термофил относится к микроорганизмам, которые лучше всего растут при высоких температурах. Термин термофильная ферментация относится к способам ферментации, проводимым при температуре от примерно 35°C до примерно 45°C. Термин термофильно ферментированный молочный продукт относится к ферментированным молочным продуктам, полученным посредством термофильной ферментации с использованием термофильной заквасочной культуры, и он включает такие ферментированные молочные продукты, как йогурт термостатного способа производства, перемешанный йогурт, процеженный йогурт и питьевой йогурт. Самые полезные с промышленной точки зрения термофильные бактерии включают Streptococcus spp. и Lactobacillus spp.
Как будет описано ниже, настоящее изобретение охватывает способы с использованием мезофильной и термофильной ферментации.
Термин ингибировать в связи с грибами, дрожжами и плесневыми грибами относится к уменьшению роста или спорообразования или к уменьшению числа или концентрации грибов, дрожжей и плесневых грибов, например, в пищевых продуктах и/или на поверхности пищевых продуктов, содержащих бактерии по настоящему изобретению, относительно пищевых продуктов, которые не содержат таких бактерий. Степень ингибирования, обеспечиваемая бактериями Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению, предпочтительно определяется по росту на отвержденном агаром ферментированном молоке в присутствии и в отсутствие бактерий Lactobacillus fermentum.
В настоящем контексте термин мутант следует понимать как штамм, полученный из штамма по изобретению, например, посредством генной инженерии, радиации и/или химической обработки. Предпочтительно, чтобы мутант был функционально эквивалентным мутантом, например мутантом, который имеет, по существу, такие же или улучшенные свойства, в частности, в отношении противогрибковых свойств, что и депонированный штамм. Такой мутант является частью настоящего изобретения. В особенности, термин мутант относится к штамму, полученному посредством подвергания штамма по изобретению любой традиционно используемой мутагенизирующей обработке, включающей обработку химическим мутагеном, таким как этанметансульфонат (EMS) или N-метил-N'-нитро-N-нитрогуанидин (NTG), УФ (ультрафиолетовый) светом, или к спонтанно появляющемуся мутанту. Мутант возможно был подвергнут нескольким мутагенизирующим обработкам (одну обработку следует понимать как одну стадию мутагенеза с последующей стадией скрининга/селекции), но в настоящем изобретении предпочтительным является то, что проводится не более чем 20, или не более чем 10, или не более чем 5 обработок (или стадий скрининга/отбора). У предпочтительного в настоящем изобретении мутанта меньше чем 5%, или меньше чем 1%, или даже меньше чем 0,1% нуклеотидов в бактериальном геноме были заменены на другой нуклеотид или подвергнуты делеции по сравнению с материнским штаммом.
Применение терминов в единственном числе в контексте описания изобретения (особенно в контексте следующей формулы изобретения) следует истолковывать как охватывающее и термины в единственном, и во множественном числе, если здесь не указано иное, или это явно не противоречит контексту.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предложены композиции, содержащие по
- 5 037612 меньшей мере одну бактерию вида Lactobacillus fermentum со способностью ингибировать рост гриба
Penicillium solitum CHCC16948, депонированного в DSMZ под № доступа 32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum CHCC16935, депонированного в DSMZ под № доступа 32094, на отвержденном агаром ферментированном молоке по меньшей мере на 50% в анализе, описанном выше.
Соответствующие композиции могут содержать многочисленные другие бактерии, включающие LAB. Предпочтительная композиция по настоящему изобретению, следовательно, характеризуется тем, что данная композиция дополнительно содержит по меньшей мере одну дополнительную бактерию, выбранную из одного или более чем одного из следующих родов и видов: Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp., Streptococcus spp., Lactococcus spp., как, например, Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus lactis, Bifidobacterium animalis, Lactococcus lactis, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium breve и Leuconostoc spp.
В особенно предпочтительном воплощении композиции по настоящему изобретению содержат по меньшей мере одну бактерию вида Lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью, как описано выше, и одну или более чем одну вторую бактерию с противогрибковой активностью. В одном воплощении несколько разных штаммов бактерий Lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью по настоящему изобретению объединяются. В качестве альтернативы эти дополнительные бактерии, например, могут быть выбраны из:
(а) бактерии Lactobacillus rhamnosus штамма CHCC15860, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM32092;
(б) бактерии Lactobacillus rhamnosus штамма СНСС5366, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM23035;
(в) бактерии Lactobacillus rhamnosus штамма СНСС12697, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM24616;
(г) бактерии Lactobacillus paracasei штамма СНСС12777, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM24651; и (д) бактерии Lactobacillus paracasei штамма СНСС14676, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM25612.
Авторы настоящего изобретения обнаружили дополнительные противогрибковые эффекты данных штаммов и неожиданный синергетический противогрибковый эффект, вызванный комбинацией Lb. rhamnosus CHCC15860 и Lb. fermentum CHCC14591, по сравнению с ингибирующим эффектом каждого штамма, используемого одиночно.
Композиции по настоящему изобретению, кроме того, могут содержать многочисленные дополнительные компоненты, включающие одно или более чем одно криопротекторное соединение, а также ароматические соединения.
LAB чаще всего добавляют в молоко в виде заквасочной культуры. Термин закваска или заквасочная культура в том виде, в котором он используется в настоящем контексте, относится к культуре одного или более чем одного микроорганизма, подходящего для применения в пищевых продуктах, в частности молочнокислых бактерий, которые отвечают за скисание молочной основы. Заквасочные культуры могут быть свежими, но чаще всего являются замороженными или лиофилизированными. Данные продукты также известны как культуры для прямого внесения (DVS), и они производятся для непосредственной инокуляции ферментационного сосуда или ванны для производства молочного продукта, такого как ферментированный молочный продукт или сыр. Соответствующие заквасочные культуры имеются в продаже во многих источниках и включают F-DVS YoFlex Mild 2.0, F-DVS YF-L901, FD-DVS YF-812 и F-DVS CH-1 - четыре культуры, имеющиеся в продаже у Chr. Hansen, содержащие смеси Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus.
В одном аспекте настоящего изобретения, следовательно, предложены композиции в виде твердой замороженной или лиофилизированной заквасочной культуры, содержащей молочнокислые бактерии в концентрации по меньшей мере 109 колониеобразующих единиц на г замороженного вещества, или в концентрации по меньшей мере 1010 колониеобразующих единиц на г замороженного вещества, или в концентрации по меньшей мере 1011 колониеобразующих единиц на г замороженного вещества, причем данные композиции включают бактерию вида Lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью, как описано выше.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предложены бактерии Lactobacillus fermentum и содержащие их композиции, которые характеризуются более чем одним из приведенных выше свойств. Например, согласно настоящему изобретению предложена бактерия вида Lactobacillus fermentum, имеющая способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50% при определении в анализе, включающем:
(1) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой,
- 6 037612 (б) ферментирования до достижения рН 4,6 и (в) отверждения ферментированного молока посредством добавления агара;
(2) получение по меньшей мере одного пятна P. solitum или P. brevicompactum на отвержденном агаром ферментированном молоке с концентрацией 500 спор/пятно и его инкубирование в течение 7 суток при 25°C;
(3) определение процента ингибирования посредством определения наибольшего диаметра колонии, образованной ростом P. solitum или P. brevicompactum, и выражения указанного диаметра в виде процентной доли наибольшего диаметра, образованного при тех же самых условиях, но в отсутствие штамма Lactobacillus fermentum;
и дополнительно характеризуемая тем, что бактерия вида Lactobacillus fermentum секретирует диацетил в интервале от 0 до 5 млн-1, где концентрация диацетила определена в анализе, включающем:
(4) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой, (б) ферментирования до достижения рН 4,6, и (5) хранение ферментированного молочного продукта при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток;
(6) добавление 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г ферментированного молочного продукта и определение концентрации диацетила посредством статической парофазной газовой хроматографии.
Данные бактерии могут дополнительно характеризоваться способностью уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцированного заквасочной культурой во время ферментации, в ферментированном молочном продукте по меньшей мере на 50%.
Альтернативно или дополнительно, бактерии вида Lactobacillus fermentum могут дополнительно характеризоваться тем, что они повышают рН ферментированного молочного продукта, содержащего Lactobacillus fermentum, на протяжении хранения после ферментации по сравнению с молочным продуктом, ферментированным такой же заквасочной культурой, не содержащей Lactobacillus fermentum.
В отдельном воплощении согласно изобретению дополнительно предложена бактерия Lactobacillus fermentum, имеющая способность ингибировать рост гриба Penicillium solitum, депонированного под № доступа DSM32093, или рост гриба Penicillium brevicompactum, депонированного под № доступа DSM32094, по меньшей мере на 50% при определении в анализе, включающем:
(1) приготовление ферментированного молочного продукта посредством:
(а) инокулирования молока Lactobacillus fermentum в концентрации по меньшей мере 107 КОЕ/г и заквасочной культурой, (б) ферментирования до достижения рН 4,6 и (в) отверждения ферментированного молока посредством добавления агара;
(2) получение по меньшей мере одного пятна P. solitum или P. brevicompactum на отвержденном агаром ферментированном молоке с концентрацией 500 спор/пятно и его инкубирование в течение 7 суток при 25°C;
(3) определение процента ингибирования посредством определения наибольшего диаметра колонии, образованной ростом P. solitum или P. brevicompactum, и выражения указанного диаметра в виде процентной доли наибольшего диаметра, образованного при тех же самых условиях, но в отсутствие штамма Lactobacillus fermentum;
и дополнительно характеризуемая тем, что бактерия вида Lactobacillus fermentum повышает рН ферментированного молочного продукта, содержащего Lactobacillus fermentum, на протяжении хранения после ферментации по сравнению с молочным продуктом, ферментированным такой же заквасочной культурой, не содержащей Lactobacillus fermentum, где увеличение рН происходит по меньшей мере на значение 0,1, и где увеличение рН определено после хранения ферментированного продукта на протяжении 21 суток при 25°C. Опять-таки, в одном воплощении данные бактерии могут дополнительно иметь способность уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцированного заквасочной культурой на протяжении ферментации, в ферментированном молочном продукте по меньшей мере на 50%.
В другом воплощении согласно настоящему изобретению предложены способы получения ферментированного молочного продукта, которые включают добавление бактерии Lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью, как описано выше, или содержащей ее композиции в молоко или в молочный продукт и ферментирование данной смеси при температуре от примерно 22°C до примерно 43°C до достижения рН меньше чем 4,6.
В контексте настоящей заявки термин молоко используется в широком смысле в его обычном значении для названия жидкостей, продуцируемых молочными железами животных или растениями. Согласно настоящему изобретению молоко возможно было переработано, и термин молоко включает цельное молоко, снятое молоко, обезжиренное молоко, молоко с низким содержанием жира, молоко с полным содержанием жира, молоко с пониженным содержанием лактозы или концентрированное молоко. Обезжиренное молоко представляет собой нежирный или снятый молочный продукт. Молоко с низким содержанием жира типично определяется как молоко, которое содержит от примерно 1% до примерно 2% жира. Молоко с полным содержанием жира часто содержит 2% жира или больше. Подразуме- 7 037612 вается то, что термин молоко охватывает молоко от разных млекопитающих и из разных растительных источников. Млекопитающие - источники молока включают корову, овцу, козу, буйвола, верблюда, ламу, кобылу и оленя, но не ограничиваются ими. Растительные источники молока включают молоко, выделенное из соевых бобов, гороха, арахиса, ячменя, риса, овса, квиноа, миндаля, кешью, кокоса, фундука, конопли, семян кунжута и семян подсолнечника, но не ограничиваются ими. В способах и продуктах по настоящему изобретению молоко, полученное от коров, наиболее предпочтительно используется в качестве исходного вещества для ферментации.
Термин молоко также включает молочные продукты с пониженным содержанием жира и/или с пониженным содержанием лактозы. Соответствующие продукты могут быть получены с использованием способов, хорошо известных в данной области, и они имеются в продаже (например, у Select Milk Producers Inc., Техас, США). Молоко с пониженным содержанием лактозы может быть получено согласно любому способу, известному в данной области, включающему осуществление гидролиза лактозы до глюкозы и галактозы ферментом лактазой или посредством нанофильтрации, электродиализа, ионообменной хроматографии и центрифугирования.
Термин молочный продукт или молочная основа широко используется в настоящей заявке для названия композиции, основанной на молоке или компонентах молока, которую можно использовать в качестве среды для роста и ферментации LAB. Молочный продукт или основа содержат компоненты, происходящие из молока, и любой другой компонент, который может быть использован с целью выращивания или осуществления ферментации LAB.
Стадия ферментации способа изготовления ферментированных молочных продуктов включает добавление LAB в молоко. Способы ферментации, используемые в производстве молочных продуктов, хорошо известны, и обычный специалист может выбрать условия ферментационного процесса, включающие температуру, содержание кислорода, количество и характеристики микроорганизма(ов) и время ферментации.
До ферментации молочный субстрат можно гомогенизировать и пастеризовать согласно способам, известным в данной области. Термин гомогенизация в том виде, как он здесь используется, означает интенсивное перемешивание с получением растворимой суспензии или эмульсии. При проведении гомогенизации до ферментации ее можно проводить таким образом, чтобы разрушать молочный жир до меньших размеров таким образом, что он больше не отделяется от молока. Это может осуществляться посредством пропускания молока под высоким давлением через маленькие отверстия. Термин пастеризация в том виде, как он здесь используется, означает обработку молочного субстрата для уменьшения или устранения присутствия живых организмов, таких как микроорганизмы. Предпочтительно пастеризация достигается поддержанием определенной температуры в течение определенного периода времени. Определенная температура обычно достигается посредством нагревания. Температуру и продолжительность можно выбирать для того, чтобы умерщвлять или инактивировать определенные бактерии, такие как вредные бактерии. Затем может следовать стадия быстрого охлаждения.
В особенно полезном способе по настоящему изобретению бактерию Lactobacillus fermentum с противогрибковыми эффектами, как описано выше, или содержащую ее композицию добавляют в молоко или в молочный продукт, и данную смесь ферментируют таким образом, что (а) концентрация бактерий Lactobacillus fermentum с противогрибковыми эффектами составляет по меньшей мере 1х106 КОЕ/г или по меньшей мере 1х107 КОЕ/г при завершении ферментации в ферментированном молочном продукте; и/или (б) таким образом, что концентрация бактерий Lactobacillus fermentum с противогрибковыми эффектами составляет по меньшей мере 1х105 КОЕ/см2 на поверхности ферментированного молочного продукта.
Этот способ действий имеет преимущество в том, что может полностью использоваться противогрибковый эффект бактерии Lactobacillus fermentum.
Одним способом достижения данной концентрации является применение способа производства ферментированного молочного продукта, в котором параметры ферментации поддерживаются таким образом, что описанная выше концентрация бактерий Lactobacillus fermentum возрастает на протяжении ферментации. Применение традиционных заквасочных культур и условий для ферментации (как описано в Примерах) обычно будет увеличивать описанную выше концентрацию бактерий Lactobacillus fermentum на протяжении ферментации по меньшей мере на 0,5 log. В качестве альтернативы, параметры ферментации поддерживаются таким образом, что описанная выше концентрация бактерий Lactobacillus fermentum значимо не уменьшается, например не уменьшается больше чем на 30%, не больше чем на 25% или не больше чем на 20% на протяжении ферментации и хранения.
Согласно настоящему изобретению также предложен ферментат, который можно получать посредством ферментирования молочного продукта бактериями Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению. Термин ферментат используется для названия продукта ферментации. Соответствующий ферментат может представлять собой жидкость, полученную в результате процесса ферментации с использованием бактерий Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению. Данная жидкость может содер- 8 037612 жать бактерии, но не обязательно должна их содержать. Данная жидкость предпочтительно содержит противогрибковые метаболиты, продуцируемые бактериями Lactobacillus fermentum по настоящему изобретению. Ферментат можно использовать для производства пищевых, кормовых или фармацевтических продуктов. Например, ферментат можно распылять на пищевые или кормовые продукты с достижением противогрибкового эффекта.
Согласно изобретению дополнительно предложены способы производства пищевого, кормового или фармацевтического продукта, включающие способ производства ферментированного молочного продукта, как описано выше, и пищевого, кормового или фармацевтического продукта, которые можно получать этим способом.
Ферментация проводится для получения пищевых продуктов, кормовых продуктов или фармацевтических средств. Термины ферментированный молочный продукт, пищевой или кормовой продукт относятся к продуктам, которые можно получать способами ферментации по настоящему изобретению, и они включают сыр, йогурт, фруктовый йогурт, йогуртовый напиток, процеженный йогурт (греческий йогурт, лабне), творог кварк, свежий сыр (fromage frais) и творожный сыр. Термин пища дополнительно охватывает другие ферментированные пищевые продукты, включающие ферментированное мясо, такое как ферментированные колбасы и ферментированные рыбные продукты.
Понятно то, что термин сыр охватывает любой сыр, включающий твердый, полутвердый и мягкие сыры, такие как сыры следующих типов: домашний, фета, чеддер, пармезан, моцарелла, эмменталер, данбо, гауда, эдам, фетаподобные сыры, сыры с плесенью, соленые сыры, камамбер и бри. Специалисту в данной области известно как превращать сгусток в сыр, способы можно найти в литературе, см., например, Kosikowski, F.V. and V.V. Mistry, Cheese and Fermented Milk Foods, 1997, 3rd Ed. F.V. Kosikowski, L.L.C. Westport, СТ. Термин сыр с низким содержанием соли в том виде, в котором он здесь используется, относится к сыру, который имеет концентрацию NaCl меньше 1,7% (мас./мас.).
В контексте настоящей заявки термин йогурт относится к продуктам, содержащим Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus и, возможно, другие микроорганизмы, такие как Lactobacillus delbrueckii подвид lactis, Bifidobacterium animalis подвид lactis, Lactococcus lactis, Lactobacillus acidophilus и Lactobacillus paracasei, или любой микроорганизм, полученный из них. Штаммы, продуцирующие молочную кислоту, отличные от Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus, включены для придания конечному продукту разных свойств, таких как свойство стимуляции равновесия флоры. Термин йогурт в том виде, в котором он здесь используется, охватывает йогурт термостатного способа производства, перемешанный йогурт, питьевой йогурт, Petit Suisse, термообработанный йогурт, процеженный йогурт или йогурт в греческом стиле, характеризуемый высоким уровнем белка, и йогуртоподобные продукты.
В частности, термин йогурт охватывает йогурт, определенный согласно французским и европейским правилам, например молочные продукты свертывания, полученные посредством молочнокислого брожения, посредством лишь специфических термофильных молочнокислых бактерий (т.е. Lactobacillus delbrueckii подвид bulgaricus и Streptococcus thermophilus), которые культивируются одновременно и обнаруживаются в конечном продукте живыми в количестве по меньшей мере 10 миллионов КОЕ (колониеобразующих единиц)/г, но не ограничивается им. Йогурты возможно могут содержать добавленное молочное сырье (например, сливки) или другие ингредиенты, такие как сахар или подсластители, один или более чем один корригент, фрукты, злаки или питательные вещества, особенно витамины, минералы и волокна, а также стабилизаторы и загустители. Возможно данный йогурт удовлетворяет спецификациям ферментированного молока и йогуртов стандарта AFNOR NF 04-600 и/или кодексу стандарта StanAIla-1975. Для того чтобы удовлетворять стандарту AFNOR NF 04-600, данный продукт не должен нагреваться после ферментации, и молочное сырье должно представлять минимум 70% (мас./мас.) конечного продукта.
В другом воплощении согласно настоящему изобретению предложены пищевые, кормовые или фармацевтические продукты, содержащие одну или более чем одну бактерию вида Lactobacillus fermentum с противогрибковыми эффектами, как описано выше, и одну или более чем одну из:
(а) по меньшей мере одной дополнительной бактерии, выбранной из одного или более чем одного из следующих родов: Lactococcus spp., Streptococcus spp., Lactobacillus spp., Leuconostoc spp., Pseudoleuconostoc spp., Pediococcus spp., Brevibacterium spp. и Enterococcus spp.;
(б) бактерии Lactobacillus rhamnosus штамма СНСС15860, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM32092;
(в) бактерии Lactobacillus rhamnosus штамма СНСС5366, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM23035;
(г) бактерии Lactobacillus rhamnosus штамма СНСС12697, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM24616;
(д) бактерии Lactobacillus paracasei штамма СНСС12777, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM24651; и (е) бактерии Lactobacillus paracasei штамма СНСС14676, депонированного в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (DSMZ) под № доступа DSM25612.
- 9 037612
Описание графических материалов
Фиг. 1 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного одной заквасочной культурой (контроль, первая колонка), вместе с FreshQ®4 (вторая колонка), вместе с Holdbac® YM-C Plus (третья колонка) или вместе с Lb. fermentum CHCC14591 (четвертая колонка). Чашки инкубировали при 7 плюс/минус 1°C в течение 19 суток (верхний ряд) и 27 суток (нижний ряд). Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 500 спор/пятно: (А) Р. carneum, (В) Р. paneum и (С) Р. roqueforti.
Фиг. 2 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного одной заквасочной культурой (контроль, первая колонка), вместе с FreshQ®4 (вторая колонка), вместе с Holdbac® YM-C Plus (третья колонка) или вместе с Lb. fermentum CHCC14591 (четвертая колонка). Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 6 суток (верхний ряд) и 11 суток (нижний ряд). Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 500 спор/пятно: (А) Р. carneum, (В) Р. paneum и (С) Р. roqueforti.
Фиг. 3 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного одной заквасочной культурой (контроль, первая колонка), вместе с FreshQ®4 (вторая колонка), вместе с Holdbac® YM-C Plus (третья колонка) или вместе с Lb. fermentum CHCC14591 (четвертая колонка). Чашки инкубировали при 7 плюс/минус 1°C в течение 19 суток (верхний ряд) и 27 суток (нижний ряд). Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 500 спор/пятно: (А) Р. brevicompactum, (В) P. crustosum и (С) P. solitum.
Фиг. 4 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного одной заквасочной культурой (контроль, первая колонка), вместе с FreshQ®4 (вторая колонка), вместе с Holdbac® YM-C Plus (третья колонка) или вместе с Lb. fermentum CHCC14591 (четвертая колонка). Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 6 суток (верхний ряд) и 11 суток (нижний ряд). Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 500 спор/пятно: (А) Р. brevicompactum (DSM32093), (В) Р. crustosum и (С) P. solitum (DSM32093).
Фиг. 5 - рост дрожжей на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного одной заквасочной культурой (контроль, первая колонка), вместе с FreshQ®4 (вторая колонка), вместе с Holdbac® YM-C Plus (третья колонка) или вместе с Lb. fermentum CHCC14591 (четвертая колонка). Чашки инкубировали при 7 плюс/минус 1°C в течение 11 суток (верхний ряд) или при 25 плюс/минус 1°C в течение 5 суток (нижний ряд). Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 1х103 КОЕ/пятно (верхний ряд), 1х102 КОЕ/пятно (средний ряд) и 1х 101 КОЕ/пятно (нижний ряд): (А) Torulaspora delbrueckii, (В) Cryptococcus hansenii, (С) Debaryomyces hansenii и (D) Yarrowia lipolytica.
Фиг. 6 - уровни диацетила после хранение при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток в ферментированных молочных продуктах, ферментированных одной заквасочной культурой (контроль) или заквасочными культурами в комбинации с FreshQ®4, Holdbac® YM-C Plus или Lb. fermentum CHCC14591. LOD - предельный уровень определения. LOQ - предельный уровень количественного измерения.
Фиг. 7 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного одной заквасочной культурой (контроль, первая колонка), вместе с Lb. rhamosus CHCC15860 (вторая колонка), вместе с Lb. fermentum CHCC14591 (третья колонка) или вместе с комбинацией Lb. rhamnosus CHCC15860 и Lb. fermentum СНСС14591 (четвертая колонка). Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 5 суток. Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 500 спор/пятно: (А) Р. carneum, (В) Р. paneum и (С) P. roqueforti.
Фиг. 8 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного (1) одной заквасочной культурой, вместе с (2) Lb. fermentum СНСС12798, (3) Lb. fermentum CHCC12797, (4) Lb. fermentum CHCC14591, (5) Lb. fermentum CHCC14588, (6) Lb. fermentum CHCC15844, (7) Lb. fermentum CHCC15865, (8) Lb. fermentum CHCC15847, (9) Lb. fermentum CHCC15848, (10) Lb. fermentum CHCC15926 и (11) Lb. fermentum CHCC2008. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 5 суток (левая колонка фотографий) или 7 суток (правая колонка фотографий). Добавляли целевые загрязнители в концентрациях 500 спор/пятно: (А) Р. brevicompactum (DSM32094), (В) P. crustosum и (С) P. solitum (DSM32093).
Фиг. 9 - уровни диацетила после хранение при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток в ферментированных молочных продуктах, ферментированных одной заквасочной культурой (контроль) или заквасочными культурами в комбинации с FreshQ®4, Holdbac® YM-C Plus или штаммами Lb. fermentum. LOD - предельный уровень определения. LOQ - предельный уровень количественного измерения.
Фиг. 10 - развитие рН в ферментированных молочных продуктах с течением времени при хранении при (А) 7 плюс/минус 1°C и (Б) 25 плюс/минус 1°C в течение 28 суток. Данные продукты ферментируются только заквасочной культурой - контроль, или заквасочной культурой в комбинации с FreshQ®4, Holdbac® YM-C Plus или штаммами Lb. fermentum.
Фиг. 11 - развитие рН в ферментированных молочных продуктах с течением времени при хранении при (А) 7 плюс/минус 1°C или (Б) 25 плюс/минус 1°C в течение 21 суток. Данные продукты ферментируются только заквасочной культурой (контроль, А) или заквасочной культурой в комбинации с
- 10 037612
FreshQ®4 (◊), Holdbac® YM-C Plus (о) или Lb. fermentum CHCC14591 (□).
Фиг. 12 - уровни ацетальдегида после хранение при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток в ферментированных молочных продуктах, ферментированных одной заквасочной культурой (контроль) или заквасочными культурами в комбинации со штаммами Lb. fermentum. LOD - предельный уровень определения. LOQ - предельный уровень количественного измерения.
Фиг. 13 - уровни ацетальдегида после хранение при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток в ферментированных молочных продуктах, ферментированных одной заквасочной культурой (контроль) или заквасочными культурами в комбинации с Lb. fermentum СНСС14591. LOD - предельный уровень определения. LOQ - предельный уровень количественного измерения.
Фиг. 14 - кривые закисления четырех имеющихся в продаже заквасочных культур: FD-DVS YFL812, F-DVS YF-L901, F-DVS YoFlex Mild 2.0 и F-DVS СН-1, выращенных в молоке (1% жира и 4,5% белка) при 43°C.
Фиг. 15 - кривые последующего закисления йогурта, ферментированного одной из четырех имеющихся в продаже заквасочных культур: FD-DVS YF-L812, F-DVS YF-L901, F-DVS YoFlex Mild 2.0 и FDVS СН-1 после хранения при 6°C в течение вплоть до 43 суток.
Фиг. 16 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного (1) одной заквасочной культурой - FD-DVS YF-L812, вместе с (2) Lb. fermentum CHCC12798, (3) Lb. fermentum CHCC12797, (A) Lb. fermentum CHCC14591, (5) Lb. fermentum CHCC14588, (6) Lb. fermentum CHCC15844, (7) Lb. fermentum CHCC15865, (8) Lb. fermentum CHCC15847, (9) Lb. fermentum CHCC15926 и (10) Lb. fermentum CHCC2008. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 4 суток (левый столбец фотографий) или 8 суток (правый столбец фотографий). Добавляли целевой загрязнитель - P. brevicompactum (DSM32094) - в концентрации 500 спор/пятно.
Фиг. 17 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного (1) одной заквасочной культурой - FD-DVS СН-1, вместе с (2) Lb. fermentum CHCC12798, (3) Lb. fermentum CHCC12797, (4) Lb. fermentum CHCC14591, (5) Lb. fermentum CHCC14588, (6) Lb. fermentum CHCC15844, (7) Lb. fermentum CHCC15865, (8) Lb. fermentum CHCC15847, (9) Lb. fermentum CHCC15926 и (10) Lb. fermentum CHCC2008. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 4 суток (левый столбец фотографий) или 8 суток (правый столбец фотографий). Добавляли целевой загрязнитель - P. brevicompactum (DSM32094) - в концентрации 500 спор/пятно.
Фиг. 18 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного (1) одной заквасочной культурой - FD-DVS YF-L812, вместе с (2) Lb. fermentum CHCC12798, (3) Lb. fermentum CHCC12797, (4) Lb. fermentum CHCC14591, (5) Lb. fermentum CHCC14588, (6) Lb. fermentum CHCC15844, (7) Lb. fermentum CHCC15865, (8) Lb. fermentum CHCC15847, (9) Lb. fermentum CHCC15926 и (10) Lb. fermentum CHCC2008. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 4 суток (левый столбец фотографий) или 8 суток (правый столбец фотографий). Добавляли целевой загрязнитель - P. solitum (DSM32093) - в концентрации 500 спор/пятно.
Фиг. 19 - рост плесневых грибов на чашках, полученных с использованием молока, ферментированного (1) одной заквасочной культурой - F-DVS СН-1, вместе с (2) Lb. fermentum CHCC12798, (3) Lb. fermentum CHCC12797, (4) Lb. fermentum CHCC14591, (5) Lb. fermentum CHCC14588, (6) Lb. fermentum CHCC15844, (7) Lb. fermentum CHCC15865, (8) Lb. fermentum CHCC15847, (9) Lb. fermentum CHCC15926 и (10) Lb. fermentum CHCC2008. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C в течение 4 суток (левый столбец фотографий) или 8 суток (правый столбец фотографий). Добавляли целевой загрязнитель - P. solitum (DSM32093) - в концентрации 500 спор/пятно.
Фиг. 20 - уровни диацетила после хранения при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток в ферментированных молочных продуктах, ферментированных одной заквасочной культурой (контроль) - FD DVS YF-L812 или F-DVS СН-1 - или заквасочными культурами в комбинации с одним из девяти штаммов Lb. fermentum. LOD - предельный уровень определения. LOQ - предельный уровень количественного измерения.
Фиг. 21 - уровни ацетальдегида после хранения при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток в ферментированных молочных продуктах, ферментированных одной заквасочной культурой (контроль) - FD DVS YF-L812 или F-DVS СН-1 - или заквасочными культурами в комбинации с одним из девяти штаммов Lb. fermentum. LOD - предельный уровень определения. LOQ - предельный уровень количественного измерения.
Пример 1. Полуколичественный анализ ингибирующего эффекта Lb. fermentum СНСС14591 против разных дрожжевых и плесневых загрязнителей и образования диацетила.
Для полуколичественного анализа ингибирующего эффекта Lb. fermentum СНСС14591 использовали анализ на основе агара, имеющий сходство со способом изготовления и продуктом - йогуртом.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Имеющуюся в продаже заквасочную культуру (F-DVS Mild 2.0) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Одну бутыль инокулировали Lb. fermentum CHCC14591 в
- 11 037612 общей концентрации 2х107 КОЕ/г, две бутыли инокулировали одной из двух имеющихся в продаже биозащитных культур (FreshQ®4 и Holdbac® YM-C Plus) в рекомендованных дозировках (100 U/T и 20 DCU/100 л для FreshQ®4 и Holdbac® YM-C Plus соответственно), и одну бутыль использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,60 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Затем ферментированное молоко нагревали до температуры 40°C и добавляли 40 мл 5%-го стерильного раствора агара, который был расплавлен и охлажден до 60°C. Этот раствор ферментированного молока и агара затем разливали в стерильные чашки Петри, и данные чашки сушили в ламинаре в течение 30 мин.
Суспензию спор шести разных плесневых грибов наносили в виде пятен в концентрации 500 спор/пятно: Penicillium brevicompactum (DSM32094), P. crustosum, P. solitum (DSM32093), P. carneum, P. paneum и Р. roqueforti. На каждую чашку наносили в виде пятен три плесневых гриба. Наносили в виде пятен четыре вида дрожжей, включающих Torulaspora delbrueckii, Cryptococcus hansenii, Debaryomyces hansenii и Yarrowia lipolytica, в концентрациях 104, 103 и 102 КОЕ/пятно. Чашки инкубировали при 7 плюс/минус 1°C и 25 плюс/минус 1°C и регулярно проверяли на рост плесневых грибов и дрожжей.
В сутки 14 образцы анализировали на диацетил посредством статической парофазной газовой хроматографии (HSGC) - чувствительного способа проведения анализа летучих веществ в сложных матрицах. Данная установка состояла из статического парофазного пробоотборника, соединенного с газовым хроматографом с пламенным ионизационным детектором (FID). С этой целью использовали следующее оборудование:
HS-пробоотборник: HS40XI, TurboMatrix 110, Perkin Elmer.
Программа HS: HSControl v.2.00, Perkin Elmer.
GC: Autosystem XL, Perkin Elmer.
Программа GC: Turbochrom navigator, Perkin Elmer.
Колонка: HP-FFAP 25 мх0,20 ммх0,33 мкм, Agilent Technologies.
Для определения коэффициентов отклика (калибровка) использовали стандарты известной концентрации, контроли использовали для контроля того, что использованные коэффициенты отклика были стабильными в пределах аналитической серии, а также между сериями и с течением времени (месяцы). Концентрацию летучих веществ (млн-1) в образцах и контролях определяли с использованием коэффициентов отклика, полученных от стандартов. Образцы получали путем добавления 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г образца йогурта и немедленно анализировали посредством HSGC.
Результаты анализа на основе агара представлены на фиг. 1-5, демонстрируя то, что все протестированные плесневые грибы очень хорошо росли на чашках с агаром, полученных с использованием молока, ферментированного только заквасочной культурой (контроль). Однако, когда на протяжении ферментации молока присутствовала Lb. fermentum CHCC14591, на полученных в результате чашках ингибировался рост всех протестированных видов Penicillum. Уровень ингибирования был сравнимым или даже более высоким, чем ингибирование, наблюдаемое для двух имеющихся в продаже биозащитных культур. На фиг. 3 показано то, что все протестированные дрожжи росли на чашках с агаром, полученных с использованием молока, ферментированного только заквасочной культурой (контроль). Когда на протяжении ферментации молока присутствовала Lb. fermentum CHCC14591, на полученных в результате чашках предотвращался рост С. fragiola и Y. lipolytica, добавленных во всех концентрациях. Рост Т. delbrueckii и D. hansenii ингибировался в меньших концентрациях при наличии Lb. fermentum CHCC14591 на протяжении ферментации молока. Уровень ингибирования был сравнимым или даже более высоким, чем ингибирование, наблюдаемое для двух имеющихся в продаже биозащитных культур.
Влияние на продукцию диацетила проиллюстрировано на фиг. 6, демонстрирующей то, что добавление Lb. fermentum CHCC14591 во время ферментации молока дает минимальное количество диацетила по сравнению с альтернативами, имеющимися в продаже.
Пример 2. Полуколичественный анализ ингибирующего эффекта Lb. fermentum СНСС14591 в комбинации с Lb. rhamnosus CHCC15860 против разных плесневых загрязнителей.
Для полуколичественного анализа ингибирующего эффекта комбинации Lb. fermentum CHCC14591 и Lb. rhamnosus CHCC15860 использовали анализ на основе агара, имеющий сходство со способом изготовления и продуктом - йогуртом.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Имеющуюся в продаже заквасочную культуру (F-DVS Mild 2.0) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Одну бутыль инокулировали Lb. rhamnosus CHCC15860 в общей концентрации 1х107 КОЕ/г, одну бутыль инокулировали Lb. fermentum СНСС14591 в общей концентрации 1х107 КОЕ/г, одну бутыль инокулировали Lb. fermentum СНСС14591 и Lb. rhamnosus CHCC15860 в концентрации 5х106 КОЕ/г каждой, и одну бутыль использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,60 плюс/минус 0,1. После
- 12 037612 ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Затем ферментированное молоко нагревали до температуры 40°C и добавляли 40 мл 5%-го стерильного раствора агара, который был расплавлен и охлажден до 60°C. Этот раствор ферментированного молока и агара затем разливали в стерильные чашки Петри, и данные чашки сушили в ламинаре в течение 30 мин.
Суспензию спор трех разных плесневых грибов наносили в виде пятен в концентрации 500 спор/пятно: Р. carneum, Р. paneum и P. roqueforti. На каждую чашку наносили в виде пятен три плесневых гриба. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C и регулярно проверяли на рост плесневых грибов.
Результаты анализа на основе агара представлены на фиг. 7, демонстрирующей то, что все протестированные плесневые грибы очень хорошо росли на чашках с агаром, полученных с использованием молока, ферментированного только заквасочной культурой (контроль). Однако, когда на протяжении ферментации молока присутствовали Lb. rhamnosus CHCC15860 или Lb. fermentum CHCC14591, на полученных в результате чашках ингибировался рост трех протестированных видов Penicillum. Кроме того, при использовании Lb. rhamnosus CHCC15860 и Lb. fermentum CHCC14591 в комбинации был обнаружен синергетический ингибирующий эффект, по сравнению с ингибирующим эффектом каждого штамма, использованного одиночно.
Пример 3. Полуколичественный анализ ингибирующего эффекта десяти штаммов Lb. fermentum против разных плесневых загрязнителей.
Для полуколичественного анализа ингибирующего эффекта десяти штаммов Lb. fermentum использовали анализ на основе агара, имеющий сходство со способом изготовления и продуктом - йогуртом.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Имеющуюся в продаже заквасочную культуру (F-DVS YF-L901) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. 10 бутылей инокулировали штаммами Lb. fermentum в концентрациях 1х107 КОЕ/г, и одну бутыль использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,60 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Затем ферментированное молоко нагревали до температуры 40°C и добавляли 40 мл 5%-го стерильного раствора агара, который был расплавлен и охлажден до 60°C. Этот раствор ферментированного молока и агара затем разливали в стерильные чашки Петри, и данные чашки сушили в ламинаре в течение 30 мин.
Протестированными штаммами Lb. fermentum были следующие: Lb. fermentum СНСС12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum CHCC14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15848, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008.
Суспензию спор шести разных плесневых грибов наносили в виде пятен в концентрации 500 спор/пятно: Penicillium brevicompactum (DSM32094), P. crustosum, P. solitum (DSM32093), P. carneum, P. paneum и Р. roqueforti. На каждую чашку наносили в виде пятен три плесневых гриба. Чашки инкубировали при 25 плюс/минус 1°C и регулярно проверяли на рост плесневых грибов.
В сутки 14 образцы анализировали на диацетил посредством статической парофазной газовой хроматографии (HSGC) - чувствительного способа проведения анализа летучих веществ в сложных матрицах. Данная установка состояла из статического парофазного пробоотборника, соединенного с газовым хроматографом с пламенным ионизационным детектором (FID). С этой целью использовали следующее оборудование:
HS-пробоотборник: HS40XI, TurboMatrix 110, Perkin Elmer.
Программа HS: HSControl v.2.00, Perkin Elmer.
GC: Autosystem XL, Perkin Elmer.
Программа GC: Turbochrom navigator, Perkin Elmer.
Колонка: HP-FFAP 25 мх0,20 ммх0,33 мкм, Agilent Technologies.
Для определения коэффициентов отклика (калибровки) использовали стандарты известной концентрации, контроли использовали для контроля того, что использованные коэффициенты отклика были стабильными в пределах аналитической серии, а также между сериями и с течением времени (месяцы). Концентрацию летучих веществ (млн-1) в образцах и контролях определяли с использованием коэффициентов отклика, полученных от стандартов. Образцы получали путем добавления 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г образца йогурта и немедленно анализировали посредством HSGC.
Для отслеживания влияния на последующее закисление 11 образцов ферментированного молока (одна заквасочная культура и заквасочная культура в комбинации с 10 штаммами Lb. fermentum) хранили при 7 плюс/минус 1°C и 25 плюс/минус 1°C в течение 28 суток, и рН измеряли в сутки 1, 7, 14, 21 и 28.
Результаты анализа на основе агара представлены на фиг. 8, демонстрируя то, что все протестированные плесневые грибы очень хорошо росли на чашках с агаром, полученных с использованием молока, ферментированного только заквасочной культурой (контроль). Для P. brevicompactum (DSM32094) и P. solitum (DSM32093) наблюдали большую задержку роста для всех штаммов Lb. fermentum, когда они
- 13 037612 присутствовали во время ферментации молока. Для остальных протестированных плесневых грибов наблюдали варьирующую задержку роста в присутствии во время ферментации молока штаммов
Lb.fermentum. Бактерии штамма Lb. fermentum CHCC14591 достигали значимого ингибирования, по существу, всех протестированных в данном анализе плесневых грибов.
Влияние на продукцию диацетила проиллюстрировано на фиг. 9, демонстрирующей то, что каждый из противогрибковых штаммов Lb. fermentum СНСС12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum CHCC14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15848, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008 либо не секретирует, либо секретирует очень мало диацетила.
Эффекты на последующее закисление проиллюстрированы на фиг. 10 и показывают то, что каждая из Lb. fermentum CHCC12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum CHCC14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15848, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008 не способствует последующему закислению или даже уменьшает последующее закисление по сравнению с контрольным йогуртом.
Эти данные были неожиданными и весьма важными, так как наблюдали то, что противогрибковые бактерии предшествующего уровня техники, пригодные для применения в пищевых продуктах, способствуют секреции летучих соединений и увеличивают эффекты последующего закисления, вызванного заквасочной культурой.
Пример 4. Эффект одного штамма Lb. fermentum на последующее закисление.
Один штамм Lb. fermentum (CHCC14591) тестировали на влияние на последующее закисление.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Имеющуюся в продаже заквасочную культуру (F-DVS Mild 2.0) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Одну бутыль инокулировали Lb. fermentum CHCC14591 в общей концентрации 2х107 КОЕ/г, две бутыли инокулировали одной из двух имеющихся в продаже биозащитных культур (FreshQ®4 и Holdbac® YM-C Plus) в рекомендованных дозировках (100U/T и 20 DCU/100 л для FreshQ®4 и Holdbac® YM-C Plus соответственно), и одну бутыль использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,60 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду.
Для отслеживания влияния на последующее закисление четыре образца ферментированного молока (только заквасочная культура, FreshQ®4, Holdbac® YM-C Plus и Lb. fermentum CHCC14591) хранили при 7 плюс/минус 1°C и 25 плюс/минус 1°C в течение 21 суток, и рН измеряли в сутки 1, 7, 14 и 21.
Влияние на последующее закисление проиллюстрировано на фиг. 11, демонстрирующей то, что добавление Lb. fermentum CHCC14591 во время ферментации молока предотвращает последующее закисление ферментированного молочного продукта. Одна заквасочная культура дает легкое последующее закисление, и две имеющиеся в продаже биозащитные культуры обе способствуют последующему закислению.
Пример 5. Влияние 10 штаммов Lb. fermentum на содержание ацетальдегида.
штаммов Lb. fermentum тестировали на их способность снижать содержание ацетальдегида.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Имеющуюся в продаже заквасочную культуру (F-DVS YF-L901 Yo-Flex®) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. 10 бутылей инокулировали штаммами Lb. fermentum в концентрациях 1х107 КОЕ/г, и одну бутыль использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,60 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Бутыли хранили при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток.
В сутки 14 образцы анализировали на ацетальдегид посредством статической парофазной газовой хроматографии (HSGC) - чувствительного способа проведения анализа летучих веществ в сложных матрицах. Данная установка состояла из статического парофазного пробоотборника, соединенного с газовым хроматографом с пламенным ионизационным детектором (FID). С этой целью использовали следующее оборудование:
HS-пробоотборник: HS40XI, TurboMatrix 110, Perkin Elmer.
Программа HS: HSControl v.2.00, Perkin Elmer.
GC: Autosystem XL, Perkin Elmer.
Программа GC: Turbochrom navigator, Perkin Elmer.
Колонка: HP-FFAP 25 мх0,20 ммх0,33 мкм, Agilent Technologies.
Для определения коэффициентов отклика (калибровки) использовали стандарты известной концентрации, контроли использовали для контроля того, что использованные коэффициенты отклика были
- 14 037612 стабильными в пределах аналитической серии, а также между сериями и с течением времени (месяцы).
Концентрацию летучих веществ (млн-1) в образцах и контролях определяли с использованием коэффициентов отклика, полученных от стандартов. Образцы получали путем добавления 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г образца йогурта и немедленно анализировали посредством HSGC.
Результаты проиллюстрированы на фиг. 12 и показывают то, что каждый из штаммов Lb. fermentum CHCC12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum СНСС14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15848, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008 имеет способность уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцированного заквасочной культурой во время ферментации, в ферментированном молочном продукте.
Пример 6. Влияние одного штамма Lb. fermentum на содержание ацетальдегида.
Один штамм Lb. fermentum тестировали на способность снижать содержание ацетальдегида.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Имеющуюся в продаже заквасочную культуру (F-DVS Mild 2.0) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Одну бутыль инокулировали штаммами Lb. fermentum в концентрациях 1х107 КОЕ/г, и одну бутыль использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,60 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Бутыли хранили при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток.
В сутки 14 образцы анализировали на ацетальдегид посредством статической парофазной газовой хроматографии (HSGC) - чувствительного способа проведения анализа летучих веществ в сложных матрицах. Данная установка состояла из статического парофазного пробоотборника, соединенного с газовым хроматографом с пламенным ионизационным детектором (FID). С этой целью использовали следующее оборудование:
HS-пробоотборник: HS40XI, TurboMatrix 110, Perkin Elmer.
Программа HS: HSControl v.2.00, Perkin Elmer.
GC: Autosystem XL, Perkin Elmer.
Программа GC: Turbochrom navigator, Perkin Elmer.
Колонка: HP-FFAP 25 мх0,20 ммх0,33 мкм, Agilent Technologies.
Для определения коэффициентов отклика (калибровки) использовали стандарты известной концентрации, контроли использовали для контроля того, что использованные коэффициенты отклика были стабильными в пределах аналитической серии, а также между сериями и с течением времени (месяцы). Концентрацию летучих веществ (млн-1) в образцах и контролях определяли с использованием коэффициентов отклика, полученных от стандартов. Образцы получали путем добавления 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г образца йогурта и немедленно анализировали посредством HSGC.
Результаты проиллюстрированы на фиг. 13 и показывают то, что Lb. fermentum СНСС14591 имеет способность уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцированного заквасочной культурой во время ферментации, в ферментированном молочном продукте.
Пример 7. Функциональный анализ имеющихся в продаже заквасочных культур.
Включенные сюда четыре имеющиеся в продаже заквасочные культуры были выбраны на основе их разных профилей закисления. Три были замороженными - F-DVS СН-1, F-DVS YoFlex Mild 2.0 и FDVS YF-L901, и одна была лиофилизированной - FD-DVS YF-L812. Для тестирования различия в профилях закисления полужирное молоко стандартизировали до содержания 1% жира и 4,5% белка с использованием обезжиренного сухого молока, обрабатывали нагреванием при 85 плюс/минус 1°C в течение 30 мин и немедленно охлаждали. Одну из четырех разных имеющихся в продаже заквасочных культур (F-DVS СН-1, F-DVS YoFlex Mild 2.0, F-DVS YF-L901 или FD-DVS YF-L812) инокулировали в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Данные бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,5. рН непрерывно измеряли на всем протяжении ферментации. Затем бутыли хранили при 6°C в течение 43 суток, и рН измеряли с интервалами 7 суток для определения уровня последующего закисления.
Профили закисления четырех имеющихся в продаже заквасочных культур - F-DVS СН-1, F-DVS YoFlex Mild 2.0, F-DVS YF-L901 и FD-DVS YF-L812 - показаны на фиг. 14. F-DVS СН-1 демонстрировала быстрое время ферментации, достигая рН 4,55 за 4,87 ч. F-DVS YoFlex Mild 2.0 демонстрировала промежуточное время ферментации, достигая рН 4,55 за 5,29 ч. FD-DVS YF-L812 и F-DVS YF-L901 демонстрировали более медленную ферментацию, достигая рН 4,55 за 6,45 и 5,87 ч соответственно. Профили последующего закисления демонстрировали очень низкие уровни последующего закисления для FDDVS YF-L812 и F-DVS YoFlex Mild 2.0 (ΔρΗ равно 0,12 и (ΔρΗ равно 0,11 после хранения при 6°C в течение 43 суток), промежуточные уровни последующего закисления для F-DVS YF-L901 (ΔρΗ равно 0,26
- 15 037612 после хранения при 6°C в течение 43 суток) и высокий уровень последующего закисления для F-DVS
СН-1 (ΔρΗ равно 0,55 после хранения при 6°C в течение 43 суток) (фиг. 15).
Пример 8. Полуколичественный анализ ингибирующего эффекта девяти штаммов Lb. fermentum против разных плесневых загрязнителей при ферментации с использованием двух разных заквасочных культур.
Для полуколичественного анализа ингибирующего эффекта девяти штаммов Lb. fermentum использовали анализ на основе агара, имеющий сходство со способом изготовления и продуктом - йогуртом.
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Молоко инокулировали одной из двух имеющихся в продаже заквасочных культур (F-DVS СН-1 или FD-DVS YF-L812) в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Девять бутылей, инокулированных каждой заквасочной культурой, дополнительно инокулировали штаммами Lb. fermentum в концентрациях 1х107 КОЕ/г, и одну бутыль, инокулированную каждой заквасочной культурой, использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,55 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Затем ферментированное молоко нагревали до температуры 40°C и добавляли 40 мл 5%-го стерильного раствора агара, который был расплавлен и охлажден до 60°C. Этот раствор ферментированного молока и агара затем разливали в стерильные чашки Петри, и данные чашки сушили в ламинаре в течение 30 мин.
Протестированными штаммами Lb. fermentum были следующие: Lb. fermentum СНСС12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum CHCC14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC 15926 и Lb. fermentum CHCC2008.
Суспензии спор двух разных плесневых грибов наносили в виде пятен в концентрации 500 спор/пятно; Penicillium brevicompactum (DSM32094) и P. solitum (DSM32093). На каждую чашку наносили в виде пятен один плесневый гриб. Чашки инкубировали при 7 плюс/минус 1°C и 25 плюс/минус 1°C и регулярно проверяли на рост плесневых грибов.
В сутки 14 образцы анализировали на диацетил посредством статической парофазной газовой хроматографии (HSGC) - чувствительного способа проведения анализа летучих веществ в сложных матрицах. Данная установка состояла из статического парофазного пробоотборника, соединенного с газовым хроматографом с пламенным ионизационным детектором (FID). С этой целью использовали следующее оборудование:
HS-пробоотборник: HS40XI, TurboMatrix 110, Perkin Elmer.
Программа HS: HSControl v.2.00, Perkin Elmer.
GC: Autosystem XL, Perkin Elmer.
Программа GC: Turbochrom navigator, Perkin Elmer.
Колонка: HP-FFAP 25 мх0,20 ммх0,33 мкм, Agilent Technologies.
Для определения коэффициентов отклика (калибровки) использовали стандарты известной концентрации, контроли использовали для контроля того, что использованные коэффициенты отклика были стабильными в пределах аналитической серии, а также между сериями и с течением времени (месяцы). Концентрацию летучих веществ (млн-1) в образцах и контролях определяли с использованием коэффициентов отклика, полученных от стандартов. Образцы получали путем добавления 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г образца йогурта и немедленно анализировали посредством HSGC.
Результаты анализа на основе агара представлены на фиг. 16-19, демонстрируя то, что оба протестированных плесневых гриба очень хорошо росли на чашках с агаром, полученных с использованием молока, ферментированного только одной из заквасочных культур (контроль). И для P. brevicompactum (DSM32094), и для P. solitum (DSM32093) наблюдали большую задержку роста для всех штаммов Lb. fermentum, когда они присутствовали во время ферментации молока, независимо от использованной заквасочной культуры.
Влияние на продукцию диацетила проиллюстрировано на фиг. 20, демонстрирующей то, что каждый из противогрибковых штаммов Lb. fermentum СНСС12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum CHCC14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008 не добавляет диацетила к уровню, продуцированному заквасочной культурой.
Эти данные были неожиданными и весьма важными, так как наблюдали то, что противогрибковые бактерии предшествующего уровня техники, пригодные для применения в пищевых продуктах, способствуют секреции летучих соединений, что вызвано заквасочной культурой.
Пример 9. Влияние девяти штаммов Lb. fermentum на содержание ацетальдегида при ферментации с использованием двух разных заквасочных культур.
Девять штаммов Lb. fermentum тестировали на их способность уменьшать содержание ацетальдегида.
- 16 037612
Гомогенизированное молоко с пониженным содержанием жира (1,5% мас./об.) обрабатывали нагреванием при 90 плюс/минус 1°C в течение 20 мин и немедленно охлаждали. Молоко инокулировали одной из двух имеющихся в продаже заквасочных культур (F-DVS СН-1 или FD-DVS YF-L812) в концентрации 0,02% (об./мас.), и инокулированное молоко распределяли в 200 мл бутыли. Девять бутылей, инокулированных штаммами Lb. fermentum в концентрациях 1х107 КОЕ/г, и одну бутыль, инокулированную каждой заквасочной культурой, использовали в качестве контроля и инокулировали лишь заквасочной культурой. Все бутыли выдерживали на водяной бане при 43 плюс/минус 1°C и ферментировали при данных условиях до достижения рН 4,55 плюс/минус 0,1. После ферментации бутыли энергично встряхивали для разрушения сгустка и охлаждали на льду. Бутыли хранили при 7 плюс/минус 1°C в течение 14 суток.
Протестированными штаммами Lb. fermentum были следующие: Lb. fermentum СНСС12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum CHCC14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008.
В сутки 14 образцы анализировали на ацетальдегид посредством статической парофазной газовой хроматографии (HSGC) - чувствительного способа проведения анализа летучих веществ в сложных матрицах. Данная установка состояла из статического парофазного пробоотборника, соединенного с газовым хроматографом с пламенным ионизационным детектором (FID). С этой целью использовали следующее оборудование:
HS-пробоотборник: HS40XI, TurboMatrix 110, Perkin Elmer.
Программа HS: HSControl v.2.00, Perkin Elmer.
GC: Autosystem XL, Perkin Elmer.
Программа GC: Turbochrom navigator, Perkin Elmer.
Колонка: HP-FFAP 25 мх0,20 ммх0,33 мкм, Agilent Technologies.
Для определения коэффициентов отклика (калибровки) использовали стандарты известной концентрации, контроли использовали для контроля того, что использованные коэффициенты отклика были стабильными в пределах аналитической серии, а также между сериями и с течением времени (месяцы). Концентрацию летучих веществ (млн-1) в образцах и контролях определяли с использованием коэффициентов отклика, полученных от стандартов. Образцы получали путем добавления 200 мкл 4 н. H2SO4 к 1 г образца йогурта и немедленно анализировали посредством HSGC.
Результаты проиллюстрированы на фиг. 21 и показывают то, что каждый из штаммов Lb. fermentum CHCC12798, Lb. fermentum CHCC12797, Lb. fermentum СНСС14591, Lb. fermentum CHCC14588, Lb. fermentum CHCC15844, Lb. fermentum CHCC15865, Lb. fermentum CHCC15847, Lb. fermentum CHCC15926 и Lb. fermentum CHCC2008 имеет способность уменьшать концентрацию ацетальдегида, продуцированного заквасочной культурой во время ферментации, в ферментированном молочном продукте.
Ссылки
EP0221499
EP0576780
EP1442113
US5378458
EP2693885
EP13717237
EP13714671
Gerez et al., Control of spoilage fungi by lactic acid bacteria, Biological Control, vol. 64 (2013): 231-237
Aunsbjerg et al., Contribution of volatiles to the antifungal effect of Lactobacillus paracasei in defined medium and yoghurt, Int J Food Microbiology, vol. 194 (2015): 46-53
Kosikowski, F.V. and Mistry, V.V., Cheese and Fermented Milk Foods, 1997, 3rd Ed.
F.V. Kosikowski, L.L.C. Westport, CT
Депонирования и экспертное решение.
Заявитель ходатайствует о том, чтобы образец депонированных микроорганизмов, изложенных ниже, мог быть сделан доступным только для эксперта до даты, на которую выдан патент.
Штамм СНСС12798 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32084.
Штамм СНСС12797 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32085.
Штамм СНСС14591 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32086.
- 17 037612
Штамм СНСС14588 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ),
Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32087.
Штамм СНСС15844 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32088.
Штамм СНСС15865 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32089.
Штамм СНСС15847 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32090.
Штамм СНСС15848 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32091.
Штамм СНСС15926 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 22.07.2015 г. под № доступа 32096.
Штамм СНСС2008 Lactobacillus fermentum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 19.05.2009 г. под № доступа 22584.
Штамм СНСС15860 Lactobacillus rhamnosus был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32092.
Штамм СНСС16948 Penicillium solitum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32093.
Штамм СНСС16935 Penicillium brevicompactum был депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; DSMZ), Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig с депонированием 16.07.2015 г. под № доступа 32094.
Депонирования осуществляли согласно Будапештскому договору о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры.

Claims (9)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Штамм бактерий вида Lactobacillus rhamnosus CHCC15860, депонированный в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур под номером доступа DSM32092, для получения ферментированного молочного продукта.
  2. 2. Композиция для получения ферментированного молочного продукта, содержащая штамм Lactobacillus rhamnosus по п. 1.
  3. 3. Композиция по п.2, отличающаяся тем, что дополнительно содержит штамм Lactobacillus fermentum DSM32086.
  4. 4. Композиция по п.2 или 3, отличающаяся тем, что дополнительно содержит по меньшей мере одно криопротекторное соединение.
  5. 5. Композиция по любому из пп.2-4, отличающаяся тем, что представляет собой твердую замороженную или лиофилизированную заквасочную культуру, содержащую молочнокислые бактерии в концентрации по меньшей мере 109 КОЕ/г, или в концентрации по меньшей мере 1010 КОЕ/г, или в концентрации по меньшей мере 1011 КОЕ/г.
  6. 6. Способ получения ферментированного молочного продукта, включающий добавление штамма бактерий Lactobacillus rhamnosus по п. 1 или композиции по любому из пп.2-5 в молоко или в молочный продукт и ферментирование указанной смеси при температуре от примерно 22°C до примерно 43°C до достижения рН 4,5-4,7.
  7. 7. Ферментированный молочный продукт, полученный способом по п.6.
  8. 8. Пищевой или кормовой продукт, содержащий штамм бактерий вида Lactobacillus rhamnosus по п.1.
  9. 9. Применение штамма бактерий вида Lactobacillus rhamnosus по п.1 для получения пищевого или кормового продукта.
EA201891889A 2015-08-31 2016-08-30 Штамм бактерий lactobacillus rhamnosus, композиция на его основе и способ получения ферментированного молочного продукта с его использованием EA037612B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15183198 2015-08-31

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201891889A1 EA201891889A1 (ru) 2019-02-28
EA037612B1 true EA037612B1 (ru) 2021-04-21

Family

ID=56852257

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201890404A EA201890404A1 (ru) 2015-08-31 2016-08-30 Бактерии lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью
EA201891889A EA037612B1 (ru) 2015-08-31 2016-08-30 Штамм бактерий lactobacillus rhamnosus, композиция на его основе и способ получения ферментированного молочного продукта с его использованием

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201890404A EA201890404A1 (ru) 2015-08-31 2016-08-30 Бактерии lactobacillus fermentum с противогрибковой активностью

Country Status (15)

Country Link
US (2) US20180249727A1 (ru)
EP (2) EP3344749A1 (ru)
JP (2) JP2018526993A (ru)
KR (2) KR20180101636A (ru)
CN (2) CN108138124A (ru)
AR (2) AR105866A1 (ru)
AU (2) AU2016315133A1 (ru)
BR (2) BR122018013713B1 (ru)
EA (2) EA201890404A1 (ru)
IL (2) IL257682A (ru)
MX (1) MX2018002278A (ru)
PE (2) PE20181133A1 (ru)
UA (1) UA127431C2 (ru)
WO (1) WO2017037046A1 (ru)
ZA (2) ZA201800859B (ru)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2018526993A (ja) 2015-08-31 2018-09-20 セーホーエル.ハンセン アクティーゼルスカブ 抗真菌活性を有するラクトバチルス・ファーメンタム菌
EP3344051A1 (en) * 2015-08-31 2018-07-11 Chr. Hansen A/S Lactobacillus fermentum bacteria reducing the concentration of acetaldehyde
CN108347952A (zh) * 2015-08-31 2018-07-31 科.汉森有限公司 抑制后酸化的发酵乳杆菌细菌
EA202090863A1 (ru) * 2017-10-27 2020-09-04 Кхр. Хансен А/С Lactobacillus rhamnosus с повышенным продуцированием по диацетилу
EA202092322A1 (ru) * 2018-04-19 2021-02-02 Кхр. Хансен А/С Ингибирование роста грибов за счет истощения уровня марганца
CN109370948B (zh) * 2018-11-26 2020-08-04 江南大学 一株高产6-磷酸-β-半乳糖苷酶的乳酸乳球菌及其应用
BR112022007560A2 (pt) * 2019-10-23 2022-08-23 Chr Hansen As Composição bacteriana para controlar deterioração por fungos e seus usos
CN111647521A (zh) * 2020-04-02 2020-09-11 玉林市容县奇昌种猪养殖有限公司 一种乳杆菌gm_1及其选育方法
CA3173014A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Mikkel Gulmann MADSEN Method of reducing growth of listeria in food products
US20220022478A1 (en) 2020-07-27 2022-01-27 Sargento Foods Inc. Flavor Ferment to Produce Natural Cheese With Specific Flavor Attributes
US11510416B1 (en) 2021-02-18 2022-11-29 Sargento Foods Inc. Natural pasta-filata style cheese with improved texture
JP7207804B1 (ja) 2022-10-23 2023-01-18 規雄 酒井 乳酸菌株、乳酸菌の取得方法、ヨーグルトの製造方法、ヨーグルトのスターター、ヨーグルトおよび乳酸菌発酵豆乳食品
CN118580983A (zh) * 2023-03-01 2024-09-03 重庆市天友乳业股份有限公司 发酵乳杆菌ty-f13及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013153070A1 (en) * 2012-04-09 2013-10-17 Chr. Hansen A/S Bioprotection using lactobacillus paracasei strains

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4956177A (en) 1985-11-04 1990-09-11 Microlife Technics, Inc. Method for inhibiting fungi
FI92498C (fi) 1992-06-10 1994-11-25 Valio Meijerien Uusi mikro-organismikanta, sitä sisältävät bakteerivalmisteet ja näiden käyttö hiivojen ja homeiden torjuntaan
EP1308506A1 (en) 2001-11-06 2003-05-07 Eidgenössische Technische Hochschule Zürich Mixtures of Propionibacterium jensenii and Lactobacillus sp. with antimicrobial activities for use as a natural preservation system
JP2004236638A (ja) 2003-02-10 2004-08-26 Taiyo Corp 発酵乳乳清発酵液の製造法
ITMI20062451A1 (it) * 2006-12-20 2008-06-21 Mofin S R L Metodo per la preparazione di un latte destinato ad applicazioni lattiero-casearie il latte ottenuto con detto metodo ed i suoi usi
CN101273737B (zh) * 2007-03-28 2011-08-24 哈尔滨正方科技有限公司 一种在常温下保持高活菌数的发酵乳饮料的制备方法
TW200927141A (en) * 2007-11-22 2009-07-01 Bayer Schering Pharma Oy Vaginal delivery system
US20120107451A1 (en) * 2009-06-30 2012-05-03 Chr-Hansen A/S Method for producing a fermented milk product
IT1405780B1 (it) 2010-07-12 2014-01-24 Giuliani Spa Miscela arricchita di isoflavoni-agliconi, equolo e lunasina a base di soia fermentata, procedimento per la sua preparazione e relativi usi in campo alimentare, medico e cosmetico.
DK2654417T3 (en) * 2010-12-23 2018-10-29 Dupont Nutrition Biosci Aps COLD PROTECTIVE COMPOSITIONS AND APPLICATIONS THEREOF
BR112013025640B1 (pt) * 2011-04-08 2019-09-10 Chr Hansen As lactobacillus rhamnosus melhoradores de sabor
KR101869498B1 (ko) * 2011-04-08 2018-06-22 시에이치알. 한센 에이/에스 시너지적 항균 효과
EA033656B1 (ru) * 2012-04-09 2019-11-13 Chr Hansen As Штамм lactobacillus rhamnosus, обладающий противогрибковыми свойствами
US20150132270A1 (en) * 2012-05-21 2015-05-14 Dupont Nutrition Biosciences Aps Strains of lactobacillus with antifungal properties
JP6153218B2 (ja) 2012-12-28 2017-06-28 日本ブレーキ工業株式会社 金属異物検知装置
CN104855674A (zh) * 2015-05-18 2015-08-26 上海佳俊生物科技有限公司 组合菌种联合转化的微生物发酵全价饲料生产方法
JP2018526993A (ja) 2015-08-31 2018-09-20 セーホーエル.ハンセン アクティーゼルスカブ 抗真菌活性を有するラクトバチルス・ファーメンタム菌
EP3344051A1 (en) * 2015-08-31 2018-07-11 Chr. Hansen A/S Lactobacillus fermentum bacteria reducing the concentration of acetaldehyde
CN108347952A (zh) * 2015-08-31 2018-07-31 科.汉森有限公司 抑制后酸化的发酵乳杆菌细菌

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013153070A1 (en) * 2012-04-09 2013-10-17 Chr. Hansen A/S Bioprotection using lactobacillus paracasei strains

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GEREZ C.L.; TORRES M.J.; FONT DE VALDEZ G.; ROLLÁN G.: "Control of spoilage fungi by lactic acid bacteria", BIOLOGICAL CONTROL, SAN DIEGO, CA, US, vol. 64, no. 3, 7 November 2012 (2012-11-07), US, pages 231 - 237, XP028983262, ISSN: 1049-9644, DOI: 10.1016/j.biocontrol.2012.10.009 *
VOULGARI, K. ; HATZIKAMARI, M. ; DELEPOGLOU, A. ; GEORGAKOPOULOS, P. ; LITOPOULOU-TZANETAKI, E. ; TZANETAKIS, N.: "Antifungal activity of non-starter lactic acid bacteria isolates from dairy products", FOOD CONTROL, BUTTERWORTH, LONDON, GB, vol. 21, no. 2, 1 February 2010 (2010-02-01), GB, pages 136 - 142, XP026574807, ISSN: 0956-7135, DOI: 10.1016/j.foodcont.2009.04.007 *

Also Published As

Publication number Publication date
IL261588A (en) 2018-10-31
WO2017037046A1 (en) 2017-03-09
BR122018013713B1 (pt) 2024-01-23
ZA201804542B (en) 2019-09-25
BR122018013713A2 (pt) 2019-09-10
IL257682A (en) 2018-04-30
US20180249727A1 (en) 2018-09-06
KR20180101636A (ko) 2018-09-12
BR112018003018A2 (pt) 2018-09-18
US11096396B2 (en) 2021-08-24
PE20181133A1 (es) 2018-07-17
AU2018204698A1 (en) 2018-07-19
US20190059406A1 (en) 2019-02-28
CN108138124A (zh) 2018-06-08
JP2019013240A (ja) 2019-01-31
JP7094850B2 (ja) 2022-07-04
EA201890404A1 (ru) 2018-09-28
EP3553166A1 (en) 2019-10-16
EA201891889A1 (ru) 2019-02-28
MX2018002278A (es) 2018-03-23
AR105866A1 (es) 2017-11-15
PE20211663A1 (es) 2021-08-26
EP3344749A1 (en) 2018-07-11
AU2016315133A1 (en) 2018-03-08
AR112198A2 (es) 2019-10-02
UA127431C2 (uk) 2023-08-23
JP2018526993A (ja) 2018-09-20
KR20180042407A (ko) 2018-04-25
CN108587968A (zh) 2018-09-28
AU2018204698B2 (en) 2020-05-21
ZA201800859B (en) 2019-01-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11096396B2 (en) Lactobacillus fermentum bacteria with antifungal activity
EP3344052B1 (en) Lactobacillus fermentum bacteria inhibiting post-acidification
JP6430931B2 (ja) ラクトバチルス・ラムノサス株を使用した生物防除
JP6430930B2 (ja) ラクトバチルス・パラカゼイ株を使用した生物防除
US11723378B2 (en) Lactobacillus rhamnosus with increased diacetyl production
US20180235249A1 (en) Lactobacillus fermentum bacteria reducing the concentration of acetaldehyde
US20230189831A1 (en) Bioprotective lactic acid bacteria with low postacidification
WO2024141408A1 (en) Bioprotective lacticaseibacillus rhamnosus with low postacidification
WO2024218223A1 (en) Storage stable lacticaseibacillus rhamnosus
EA042154B1 (ru) Lactobacillus rhamnosus с повышенным продуцированием по диацетилу

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM