CN108559715A - 筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子及其筛选方法 - Google Patents

筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子及其筛选方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108559715A
CN108559715A CN201810355455.3A CN201810355455A CN108559715A CN 108559715 A CN108559715 A CN 108559715A CN 201810355455 A CN201810355455 A CN 201810355455A CN 108559715 A CN108559715 A CN 108559715A
Authority
CN
China
Prior art keywords
protein
screening
yeast
library
dimer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810355455.3A
Other languages
English (en)
Inventor
赵爱春
刘长英
龙定沛
胡杰
向仲怀
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Southwest University
Original Assignee
Southwest University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Southwest University filed Critical Southwest University
Priority to CN201810355455.3A priority Critical patent/CN108559715A/zh
Publication of CN108559715A publication Critical patent/CN108559715A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Abstract

本发明涉及一种筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子及其筛选方法，该酵母转化子含有桑树β亚基和γ亚基的编码基因；将桑树cDNA文库转化至获得能同时表达β和γ亚基的酵母转化子中，最后利用His和Met两种营养缺陷筛选而得到与βγ二聚体相互作用的阳性克隆，最后成功筛选到与桑树G蛋白βγ二聚体互作的蛋白。该方法可高效筛选蛋白二聚体互作蛋白，并成功地应用于桑树G蛋白βγ二聚体互作蛋白的筛选。

Description

筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子及其筛 选方法
技术领域
本发明属于遗传生物技术领域，涉及筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子；还涉及筛选方法和应用。
背景技术
蛋白质与蛋白质之间相互作用是指两个或两个以上的蛋白质分子通过非共价键形成蛋白质复合体而行使功能，该过程是构成细胞生化反应网络的一个主要组成部分。目前用于研究蛋白质相互作用的方法包括酵母双杂交系统、噬茵体展示技术、等离子共振技术、荧光能量转移技术、抗体与蛋白质阵列技术、免疫共沉淀技术和pull-down技术等。其中酵母双杂交系统是最为快速和直接的蛋白质互作研究的方法，其基本原理是：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域DNA结合域(DNA-BD)和转录激活域(AD)。正常条件下，BD不能与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成bait融合蛋白(bait-BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果bait和prey发生相互作用，就会促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。酵母双杂交技术还应用于对目标蛋白的未知互作蛋白的大规模筛选中，相较于其它筛选方法，具有筛选量大、效率高及应用广泛等优点。
在细胞中，有些蛋白不能单独行使功能，而是通过与其他蛋白质形成聚合体后才能与其下游蛋白结合，如三聚体G蛋白由α、β和γ亚基组成，在失活的情况下，三种亚基以三聚体的形式存在，不能传递信号，而当G蛋白被激活后，三聚体发生解离，其中β和γ亚基仍然保持着二聚体的形式行使功能。为筛选和鉴定βγ二聚体的下游信号元件，研究者通常是鉴定与β和γ亚基单独互作的蛋白，并不能完全反映βγ二聚体的功能。因此，开发一种筛选与蛋白二聚体相互作用的蛋白质的方法是比较迫切的需要。
酵母三杂交技术由酵母双杂交技术开发而来，与酵母双杂交一样，也利用了转录激活子调控真核基因转录的特点。不同的是，酵母三杂交研究了两个蛋白与第三个成分之间的相互作用，第三个分子包含了蛋白质。目前还没有太多关于大规模筛选蛋白二聚体如βγ二聚体的互作蛋白的报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子；本发明的目的之二在于提供利用所述酵母转化自筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的方法。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
1.筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子，包括如下步骤：
1)将桑树β亚基和γ亚基的编码基因分别插入到将pBridge载体的MCS I和MCSII，重组质粒pBridge-βγ；
2)将步骤1)获得的重组质粒pBridge-βγ转化AH109酵母中，获得筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子。
优选的，所述γ亚基为γ1亚基或γ2亚基。
2.利用所述酵母转化自筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的方法，包括如下步骤：提取桑树RNA，反转合成cDNA，然后连接线性化的pGADT7载体，形成桑树文库质粒，然后将桑树文库质粒转入所述酵母转化子中，用SD-Trp-Leu-His-Met+5mM 3AT筛选阳性克隆子，然后阳性克隆中提取质粒，转化大肠杆菌后测序、分析得到与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质。
优选的，所述桑树文库的文库库容大于3×106CFU ml-1，平均插入片段大于1200bp，阳性率为100％。
优选的，筛选阳性克隆的方法如下，将转入文库质粒的筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子，涂于SD-Trp-Leu-His-Met和5mM 3AT平板上，30℃恒温培养3～4天，在培养到第3天时，用无菌绒布对筛库平板进行影印清除后，继续培养20天，从筛库平板中挑取长出的阳性克隆单菌落，分别各挑取了初始阳性克隆转化子转接到SD-Trp-Leu-His-Met缺陷型平板中继续培养2～3天，最终获得了阳性克隆子。
本发明的有益效果在于：本发明公开了筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子，该转化子可基于酵母三杂交筛选与桑树G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的方法，该方法简单易行，成功筛选到βγ二聚体互作的候选蛋白，为研究多种蛋白质的相互作用提供了技术支持。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：
图1为总RNA的提取(A)、mRNA的分离(B)和酵母双杂交文库插入片段长度的结果(C)。
图2为pBridge-βγ1和pBridge-βγ2自激活检测结果。
图3为pBridge-Gβγ1筛选文库的转化效率。
图4为Gβγ1筛库酵母转化子菌落对HIS3报告基因激活的检测。
图5为Gβγ1筛库酵母转化子菌落对HIS3报告基因回转验证的检测。
图6为pBridge-Gβγ2筛选文库的转化效率。
图7为Gβγ2筛库酵母转化子菌落对HIS3报告基因激活的检测。
图8为Gβγ2筛库酵母转化子菌落对HIS3报告基因回转验证的检测。
具体实施方式
下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1、筛选与G蛋白βγ1二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子
筛选与G蛋白βγ1二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子构建方法，包括如下步骤：
1)将桑树β亚基的编码基因(Genbank登录号：KX099865)插入到将pBridge载体的MCS I的EcoR I和Sal I酶切位点之间，γ1亚基的编码基因(Genbank登录号：KX099866)插入到将pBridge载体的MCS II的Not I和Bgl II酶切位点之间，重组质粒pBridge-βγ1。
2)将步骤1)获得的重组质粒pBridge-βγ1转化AH109酵母中，获得含pBridge-Gβγ1诱饵质粒的AH109酵母转化子。
实施例2、酵母三杂交筛选与桑树βγ1相互作用蛋白质的方法
酵母三杂交筛选与桑树βγ1相互作用蛋白质的方法，包括如下步骤：
1)用质量分数0.6％NaCl处理15d苗龄的桑树幼苗，利用Trizol法提取及分离RNA(图1，A和B)，进行cDNA第一链和第二链合成，随后将其转到线性化的pGADT7载体上去，获得文库质粒，最后对其进行库容量的鉴定和插入片段大小鉴定(图1，C)，文库库容大于3×106CFU ml-1，平均插入片段大于1200bp，阳性率为100％，文库指标合格；
2)将其重组质粒pBridge-βγ1和pGADT7共转化AH109酵母中，随机挑取6个菌落进行自激活检测，进行HIS3报告基因的检测(图2)；同时pGADT7-LargeT和pGBKT7-p53作为阳性对照转入AH109酵母中，pGADT7-LargeT和pGBKT7-Lamin C作为阴性对照转入AH109酵母中。结果显示，对照菌株在SD-Trp-Leu-Met缺陷平板上都能正常生长，而仅有阳性对照可在SD-Trp-Leu-His-Ade-Met缺陷平板生长；
3)用含有正确pBridge-Gβγ1诱饵质粒的AH109酵母转化子作为受体菌制备感受态，将文库质粒转入其中，涂于SD-Trp-Leu-His-Met和5mM 3AT(3-氨基-1,2,4-三氮唑)平板上，30℃恒温培养3～4天，观察转化结果(图3)，记录转化效率；为了消除背景生长菌落的干扰，在培养到第3天时，用无菌绒布对筛库平板进行影印清除后，继续培养7～14天。分批挑取再次长出的转化子菌落进行下一步检测。
4)至影印清除后继续培养20天，从βγ1筛库平板中挑取长出的阳性克隆单菌落，分别各挑取了12个初始阳性克隆转化子转接到SD-Trp-Leu-Met和SD-Trp-Leu-His-Met缺陷型平板中继续培养2～3天，最终获得了11个候选克隆子(图4)。
5)将获得的11个阳性克隆菌株分别接入SD-Trp-Leu液体培养基，振荡培养过夜后采用酵母小量抽提试剂盒抽提酵母质粒，将其转化大肠杆菌Top10新鲜感受态进行扩增，最终进行DNA测序和BLAST比对，有1个阳性克隆测序失败，其余10种阳性克隆分别属于4种不同的蛋白编码基因。
6)用含有正确pBridge-Gβγ1诱饵质粒的AH109酵母转化子作为受体菌制备感受态，将4种Gβγ1阳性克隆转化其中，涂布SD-Trp-Leu-Met平板和SD-Trp-Leu-His-Met平板上，Gβγ1从文库中筛到的4种阳性克隆全部能通过HIS3报告基因的回转验证(图5)。
7)4种通过回转验证的阳性克隆中有一个40S核糖体蛋白编码基因(Genbank登录号：XM_010096438.1)，表明Gβγ1可能有调控核糖体的功能。
实施例3、筛选与G蛋白βγ2二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子
筛选与G蛋白βγ2二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子构建方法，包括如下步骤：
1)将桑树β亚基的编码基因(Genbank登录号：KX099865)插入到将pBridge载体的MCS I的EcoR I和Sal I酶切位点之间，γ2亚基的编码基因(Genbank登录号：KX099867)分别插入到将pBridge载体的MCS II的Not I和Bgl II酶切位点之间，重组质粒pBridge-βγ2。
2)将步骤1)获得的重组质粒pBridge-βγ2转化AH109酵母中，获得含pBridge-Gβγ2诱饵质粒的AH109酵母转化子。
实施例4、酵母三杂交筛选与桑树βγ2相互作用蛋白质的方法
1)将其重组质粒pBridge-βγ2和pGADT7共转化AH109酵母中，随机挑取6个菌落进行自激活检测，进行HIS3报告基因的检测(图2)。结果显示，对照菌株在SD-Trp-Leu-Met缺陷平板上都能正常生长，而仅有阳性对照可在SD-Trp-Leu-His-Ade-Met缺陷平板生长。
2)将其重组质粒pBridge-βγ2和pGADT7共转化AH109酵母中，随机挑取6个菌落进行自激活检测，进行HIS3报告基因的检测(图2)；同时pGADT7-LargeT和pGBKT7-p53作为阳性对照转入AH109酵母中，pGADT7-LargeT和pGBKT7-Lamin C作为阴性对照转入AH109酵母中。结果显示，对照菌株在SD-Trp-Leu-Met缺陷平板上都能正常生长，而仅有阳性对照可在SD-Trp-Leu-His-Ade-Met缺陷平板生长；
3)用含有正确pBridge-Gβγ2诱饵质粒的AH109酵母转化子作为受体菌制备感受态，将桑树文库质粒转入其中，涂于SD-Trp-Leu-His-Met+5mM 3AT平板上，30℃恒温培养3～4天，观察转化结果，记录转化效率(图6)；为了消除背景生长菌落的干扰，在培养到第3天时，用无菌绒布对筛库平板进行影印清除后，继续培养7～14天；分批挑取再次长出的转化子菌落进行下一步检测；
4)至影印清除后继续培养20天，从βγ2筛库平板中挑取长出的阳性克隆单菌落，分别各挑取了12个初始阳性克隆转化子转接到SD-Trp-Leu-Met和SD-Trp-Leu-His-Met缺陷型平板中继续培养2～3天，最终获得了8个候选克隆子(图7)；
5)将获得的8个阳性克隆菌株分别接入SD-Trp-Leu液体培养基，振荡培养过夜后采用酵母小量抽提试剂盒抽提酵母质粒，将其转化大肠杆菌Top10新鲜感受态进行扩增，最终进行DNA测序和BLAST比对，有2个阳性克隆测序失败，其余6种阳性克隆分别属于6种不同的蛋白编码基因。
6)用含有正确pBridge-Gβγ2诱饵质粒的AH109酵母转化子作为受体菌制备感受态，将6种Gβγ2阳性克隆转化其中，涂布SD-Trp-Leu-Met平板和SD-Trp-Leu-His-Met平板上，Gβγ2从文库中筛到的1种阳性克隆通过HIS3报告基因的回转验证(图8)。
7)通过回转验证的阳性克隆为LEA蛋白编码基因(Genbank登录号：AF326120.1)，表明βγ2可能参与调控桑树逆境胁迫。
上述结果表明，本发明的方法可以用于通过酵母三杂交技术筛选互作蛋白。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (5)

1.筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子，其特征在于，包括如下步骤：
1)将桑树β亚基和γ亚基的编码基因分别插入到将pBridge载体的MCS I和MCS II，重组质粒pBridge-βγ；
2)将步骤1)获得的重组质粒pBridge-βγ转化AH109酵母中，获得筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子。
2.根据权利要求1所述筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子，其特征在于：所述γ亚基为γ1亚基或γ2亚基。
3.利用权利要求1或2所述酵母转化自筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的方法，其特征在于，包括如下步骤：提取桑树RNA，反转合成cDNA，然后连接线性化的pGADT7载体，形成桑树文库质粒，然后将桑树文库质粒转入所述酵母转化子中，用SD-Trp-Leu-His-Met+5mM 3AT筛选阳性克隆子，然后阳性克隆中提取质粒，转化大肠杆菌后测序、分析得到与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述桑树文库的文库库容大于3×106CFUml-1，平均插入片段大于1200bp，阳性率为100％。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：筛选阳性克隆的方法如下，将转入文库质粒的筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子，涂于SD-Trp-Leu-His-Met+5mM3AT平板上，30℃恒温培养3～4天，在培养到第3天时，用无菌绒布对筛库平板进行影印清除后，继续培养20天，从筛库平板中挑取长出的阳性克隆单菌落，分别各挑取了初始阳性克隆转化子转接到SD-Trp-Leu-His-Met缺陷型平板中继续培养2～3天，最终获得了阳性克隆子。
CN201810355455.3A 2018-04-19 2018-04-19 筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子及其筛选方法 Pending CN108559715A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810355455.3A CN108559715A (zh) 2018-04-19 2018-04-19 筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子及其筛选方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810355455.3A CN108559715A (zh) 2018-04-19 2018-04-19 筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子及其筛选方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108559715A true CN108559715A (zh) 2018-09-21

Family

ID=63535906

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810355455.3A Pending CN108559715A (zh) 2018-04-19 2018-04-19 筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子及其筛选方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108559715A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113699182A (zh) * 2021-08-31 2021-11-26 西南大学 沉默桑实杯盘菌G蛋白γ亚基编码基因CsGγ的沉默载体及其应用和方法
CN114606255A (zh) * 2022-03-21 2022-06-10 后加乐 一种多重基因调控下游基因检测方法
CN114891823A (zh) * 2022-03-30 2022-08-12 南京瑞源生物技术有限公司 一种用于发酵酵母的筛选标记基因敲除方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1306576A (zh) * 1996-06-27 2001-08-01 昂尼克斯药物公司 G－β－γ调控的磷脂酰肌醇－3'激酶
CN102899325A (zh) * 2011-07-29 2013-01-30 上海交通大学医学院附属仁济医院 一种针对trappc4基因靶点的小干扰rna及用途
CN106232818A (zh) * 2013-10-25 2016-12-14 浙江大学 改良植株
CN107034286A (zh) * 2017-05-18 2017-08-11 武汉科技大学 一种酵母双杂交筛选与mkl‑1蛋白质相互作用蛋白质的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1306576A (zh) * 1996-06-27 2001-08-01 昂尼克斯药物公司 G－β－γ调控的磷脂酰肌醇－3'激酶
CN102899325A (zh) * 2011-07-29 2013-01-30 上海交通大学医学院附属仁济医院 一种针对trappc4基因靶点的小干扰rna及用途
CN106232818A (zh) * 2013-10-25 2016-12-14 浙江大学 改良植株
CN107034286A (zh) * 2017-05-18 2017-08-11 武汉科技大学 一种酵母双杂交筛选与mkl‑1蛋白质相互作用蛋白质的方法

Non-Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KATO C等: "Characterization of heterotrimeric G protein complexes in rice plasma membrane", 《PLANT J》 *
LIU C等: "Heterotrimeric G-protein γ subunits regulate ABA signaling in response to drought through interacting with PP2Cs and SnRK2s in mulberry (Morus alba L.)", 《PLANT PHYSIOL BIOCHEM》 *
LIU C等: "Plant G-protein β subunits positively regulate drought tolerance by elevating detoxification of ROS", 《BIOCHEM BIOPHYS RES COMMUN》 *
WHITEWAY MS等: "Association of the yeast pheromone response G protein beta gamma subunits with the MAP kinase scaffold Ste5p", 《SCIENCE》 *
刘长英: "桑树G蛋白信号基因的鉴定与非生物胁迫调控分子机理研究", 《中国博士学位论文全文数据库（电子期刊）农业科技辑》 *
宋冬梅等: "酿酒酵母GSH Ⅰ基因的克隆、表达与结构分析", 《食品工业科技》 *
李旌军等: "Gβ，Gβγ与腺苷酸环化酶Ⅱ在酵母双杂交和三杂交系统中的相互作用", 《中国医学科学院学报》 *
杨雪娇: "拟南芥异三聚体G蛋白β和γ亚基在毕赤酵母中的表达及β亚基和RACK1相互作用研究", 《中国学位论文全文数据库》 *
王彦芹等主编: "《现代分子生物学试验指导》", 31 March 2017, 西安交通大学出版社 *
赵瑞等: "caspase-3在颞叶癫痫大鼠海马神经凋亡中作用的实验研究", 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 *
赵瑞等: "海人藻酸致痫大鼠海马神经元凋亡中caspase-3作用的实验研究", 《神经科学通报》 *
陈慧等: "蛋白激酶CK2B的相互作用蛋白筛选", 《安徽医科大学学报》 *
鲁宁: "应用酵母双杂交和酵母三杂交系统研究G蛋白信号传导通路中的相关蛋白因子", 《中国学位论文全文数据库》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113699182A (zh) * 2021-08-31 2021-11-26 西南大学 沉默桑实杯盘菌G蛋白γ亚基编码基因CsGγ的沉默载体及其应用和方法
CN113699182B (zh) * 2021-08-31 2023-09-15 西南大学 沉默桑实杯盘菌G蛋白γ亚基编码基因CsGγ的沉默载体及其应用和方法
CN114606255A (zh) * 2022-03-21 2022-06-10 后加乐 一种多重基因调控下游基因检测方法
CN114891823A (zh) * 2022-03-30 2022-08-12 南京瑞源生物技术有限公司 一种用于发酵酵母的筛选标记基因敲除方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Yamanishi et al. A genome-wide activity assessment of terminator regions in Saccharomyces cerevisiae provides a ″terminatome ″toolbox
Hepler et al. Polarized cell growth in higher plants
Ditty et al. A cyanobacterial circadian timing mechanism
CN108559715A (zh) 筛选与G蛋白βγ二聚体相互作用蛋白质的酵母转化子及其筛选方法
EP3660852B1 (en) Codon optimization method based on immune algorithm
Bhaskarla et al. Comparative root transcriptomics provide insights into drought adaptation strategies in chickpea (Cicer arietinum L.)
Rodríguez-Cousiño et al. Variation and distribution of LA helper totiviruses in Saccharomyces sensu stricto yeasts producing different killer toxins
CN107034286A (zh) 一种酵母双杂交筛选与mkl‑1蛋白质相互作用蛋白质的方法
Adams et al. Genetically engineered peptides for inorganics: study of an unconstrained bacterial display technology and bulk aluminum alloy
Donovan et al. Basis of specificity for a conserved and promiscuous chromatin remodeling protein
Erben et al. Insights into the functions and RNA binding of Trypanosoma brucei ZC3H22, RBP9 and DRBD7
Jansen et al. Identification of host factors binding to dengue and Zika virus subgenomic RNA by efficient yeast three-hybrid screens of the human ORFeome
CN1721529B (zh) 捕获载体及用该载体进行基因捕获的方法
CN101037707B (zh) 一种验证性筛选目的结构域结合配体的方法
Zhang et al. iTRAQ-based proteomics analysis and network integration for kernel tissue development in maize
CN102220257A (zh) 一种新的酵母双杂交方法及其应用
Buckholz et al. Automation of yeast two-hybrid screening
CN102964431A (zh) 一对特异识别肌肉生长抑制素基因的多肽及其编码基因和应用
Ji et al. Induced mutation in GmCOP1b enhances the performance of soybean under dense planting conditions
CN109867715A (zh) 一种叶绿体蛋白和ATPase酶活性突变体在提高植物抗逆性中的应用
Du et al. Optimization of protoplast preparation system from leaves and establishment of a transient transformation system in Apium graveolens
CN108203704A (zh) 一种定向修饰肽核酸的生物纳米磁珠及其mRNA提取应用
Li et al. Improvement of Rice Agronomic Traits by Editing Type-B Response Regulators
CA3218633A1 (en) Compositions and methods for expressing genes of interest in host cells
Damodaran et al. GmZPR3d interacts with GmHD-ZIP III proteins and regulates soybean root and nodule vascular development

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180921