CN108546261A - 一种制备原苏木素a的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备原苏木素A的方法，包括如下步骤：步骤S1，将木蝴蝶的干燥树皮粉碎后用75％～95％乙醇提取，过滤、浓缩至无醇味作为上样液；步骤S2，上样液上样于大孔树脂柱，依次用35％、55％、75％乙醇以12BV/h的流速分别洗脱8、8、5BV，收集75％乙醇的4‑5BV洗脱液，浓缩干燥得原苏木素粗品；步骤S3，以体积比为20:3:2:10的乙酸乙酯‑正丁醇‑四氢呋喃‑水作为溶剂系统，上相作固定相，下相作流动相；将固定相泵满管路，850r/min正转，泵入流动相，主机出口流出流动相时，将用下相溶解的原苏木素粗品注入进样圈；检测波长245nm，根据色谱图收集原苏木素A对应的洗脱液，浓缩干燥。
Description
技术领域
本发明属于化学领域，涉及一种制备原苏木素A、B、C的方法。
背景技术
原苏木素A、B、C是最早从苏木中发现的三个简单联苯化合物，化学结构式如下。
研究表明，原苏木素A、B、C具有多种药理活性，前景广阔(参考文献：原苏木素A对胃癌SGC-7901细胞系放疗增敏作用的研究，实用肿瘤学杂志2017年6期；原苏木素A调控树突状细胞成熟和功能状态的实验研究，心血管康复医学杂志2017年4期；原苏木素B对肿瘤细胞BTTT24Hela及SW480的抑制作用研究，中国药物与临床2015年8期；原苏木素B对膀胱癌细胞BTT和T24的增殖抑制作用，中国药物与临床2015年7期)。
但是，原苏木素A、B、C在苏木中的含量较低，且苏木较贵，若完全从苏木中提取分离制备原苏木素A、B、C，成本太高。有研究试图通过化学合成的方法制备原苏木素A、B、C，但是使用的原料和试剂毒性较大，合成步骤多，大量合成难度大(参考文献：原苏木素A及其中间体合成的初步研究，黑龙江大学2010年硕士毕业论文)。
木蝴蝶Oroxylum indicum(L.)Vent.为紫葳科的直立小乔木，高6-10米，树皮灰褐色。木蝴蝶的种子和树皮可以入药，《中国药典》2015版第一部收载的饮片木蝴蝶即为其干燥成熟种子，秋、冬二季采收成熟果实，曝晒至果实开裂，取出种子，晒干。其树皮药用价值远远小于种子，且木蝴蝶种植广泛，所以木蝴蝶的树皮非常廉价。
现有技术没有公开过木蝴蝶的树皮中含有较高含量的原苏木素A、B、C。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种制备原苏木素A、B、C的方法。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
原苏木素A的制备方法：
一种制备原苏木素A的方法，包括如下步骤：
步骤S1，将木蝴蝶的干燥树皮粉碎后用体积百分浓度为75％～95％的乙醇水溶液提取，提取液过滤后收集滤液，将滤液浓缩至无醇味作为大孔树脂的上样液；
步骤S2，将所得上样液上样于大孔树脂柱，拌样树脂占树脂总量的1/10，湿法装柱，拌树脂上样；依次用35％、55％、75％乙醇以12BV/h的流速分别洗脱8、8、5BV，收集75％乙醇的4-5BV洗脱液，浓缩干燥得原苏木素粗品；
步骤S3，高速逆流纯化：以体积比为20:3:2:10的乙酸乙酯-正丁醇-四氢呋喃-水作为溶剂系统，充分混匀后静置过夜，两相分离后脱气，上相作固定相，下相作流动相；将固定相泵满管路，850r/min正转，泵入流动相，主机出口流出流动相时，将用下相溶解的原苏木素粗品注入进样圈；检测波长245nm，根据色谱图收集原苏木素A对应的洗脱液，浓缩干燥。
优选地，步骤S1提取方法为热回流。
优选地，步骤S1提取溶剂优选85％乙醇。
优选地，步骤S1提取时固液比为1:15-25。
优选地，步骤S2采用AB-8型大孔树脂。
优选地，步骤S2树脂柱中树脂径高比为1:10。
优选地，步骤S3两相分离后超声脱气30min。
优选地，步骤S3将固定相以20mL/min泵满管路。
优选地，步骤S3流速2mL/min的条件泵入流动相。
优选地，步骤S3高速逆流分离温度为25℃。
原苏木素B的制备方法：
一种制备原苏木素B的方法，包括如下步骤：
步骤S1，将木蝴蝶的干燥树皮粉碎后用体积百分浓度为75％～95％的乙醇水溶液提取，提取液过滤后收集滤液，将滤液浓缩至无醇味作为大孔树脂的上样液；
步骤S2，将所得上样液上样于大孔树脂柱，拌样树脂占树脂总量的1/10，湿法装柱，拌树脂上样；依次用35％、55％、75％乙醇以12BV/h的流速分别洗脱8、8、5BV，收集75％乙醇的4-5BV洗脱液，浓缩干燥得原苏木素粗品；
步骤S3，高速逆流纯化：以体积比为20:3.5:1.5:10的乙酸乙酯-正丁醇-四氢呋喃-水作为溶剂系统，充分混匀后静置过夜，两相分离后脱气，上相作固定相，下相作流动相；将固定相泵满管路，850r/min正转，泵入流动相，主机出口流出流动相时，将用下相溶解的原苏木素粗品注入进样圈；检测波长245nm，根据色谱图收集原苏木素B对应的洗脱液，浓缩干燥。
优选地，步骤S1提取方法为热回流。
优选地，步骤S1提取溶剂优选85％乙醇。
优选地，步骤S1提取时固液比为1:15-25。
优选地，步骤S2采用AB-8型大孔树脂。
优选地，步骤S2树脂柱中树脂径高比为1:10。
优选地，步骤S3两相分离后超声脱气30min。
优选地，步骤S3将固定相以20mL/min泵满管路。
优选地，步骤S3流速2mL/min的条件泵入流动相。
优选地，步骤S3高速逆流分离温度为25℃。
原苏木素C的制备方法：
一种制备原苏木素C的方法，包括如下步骤：
步骤S1，将木蝴蝶的干燥树皮粉碎后用体积百分浓度为75％～95％的乙醇水溶液提取，提取液过滤后收集滤液，将滤液浓缩至无醇味作为大孔树脂的上样液；
步骤S2，将所得上样液上样于大孔树脂柱，拌样树脂占树脂总量的1/10，湿法装柱，拌树脂上样；依次用35％、55％、75％乙醇以12BV/h的流速分别洗脱8、8、5BV，收集75％乙醇的4-5BV洗脱液，浓缩干燥得原苏木素粗品；
步骤S3，高速逆流纯化：以体积比为20:2:3:10的乙酸乙酯-正丁醇-四氢呋喃-水作为溶剂系统，充分混匀后静置过夜，两相分离后脱气，上相作固定相，下相作流动相；将固定相泵满管路，850r/min正转，泵入流动相，主机出口流出流动相时，将用下相溶解的原苏木素粗品注入进样圈；检测波长245nm，根据色谱图收集原苏木素C对应的洗脱液，浓缩干燥。
优选地，步骤S1提取方法为热回流。
优选地，步骤S1提取溶剂优选85％乙醇。
优选地，步骤S1提取时固液比为1:15-25。
优选地，步骤S2采用AB-8型大孔树脂。
优选地，步骤S2树脂柱中树脂径高比为1:10。
优选地，步骤S3两相分离后超声脱气30min。
优选地，步骤S3将固定相以20mL/min泵满管路。
优选地，步骤S3流速2mL/min的条件泵入流动相。
优选地，步骤S3高速逆流分离温度为25℃。
有益效果：
1、本发明首次发现木蝴蝶的树皮中含有较高含量的原苏木素A、B、C，且因为木蝴蝶的树皮非常廉价，以木蝴蝶的树皮为原料制备原苏木素A、B、C成本低廉；
2、本发明提供的制备方法无需反复使用硅胶柱层析，通过大孔树脂和高速逆流即可大量制备原苏木素A、B、C。
附图说明
图1为实施例1制备原苏木素A的高速逆流色谱图；
图2为实施例2制备原苏木素B的高速逆流色谱图；
图3为实施例3制备原苏木素C的高速逆流色谱图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。
实施例1：原苏木素A的制备方法
一种制备原苏木素A的方法，包括如下步骤：
步骤S1，将木蝴蝶的干燥树皮粉碎后用体积百分浓度为85％的乙醇水溶液热回流提取3次，每次2h，固液比为1:20；合并3次所得提取液，过滤，收集滤液，将滤液浓缩至无醇味作为大孔树脂的上样液；
步骤S2，将所得上样液上样于AB-8型大孔树脂柱，树脂径高比为1:10，拌样树脂占树脂总量的1/10，湿法装柱，拌树脂上样；依次用35％、55％、75％乙醇以12BV/h的流速分别洗脱8、8、5BV，收集75％乙醇的4-5BV洗脱液，浓缩干燥得原苏木素粗品；
步骤S3，高速逆流纯化：以体积比为20:3:2:10的乙酸乙酯-正丁醇-四氢呋喃-水作为溶剂系统，充分混匀后静置过夜，两相分离后脱气30min，上相作固定相，下相作流动相；将固定相以20mL/min泵满管路，850r/min正转，流速2mL/min的条件泵入流动相，主机出口流出流动相时，将20mL用下相溶解的原苏木素粗品(10mg/mL)注入进样圈；分离温度为25℃，检测波长为245nm，根据色谱图(图1)收集原苏木素A对应的洗脱液，浓缩干燥。
高速逆流色谱仪参数：TBE-300A聚四氟乙烯柱，内径1.6mm，柱容积280mL，转速0～1000r/min，上海同田公司。
采用上述方法，1kg木蝴蝶的干燥树皮可以分离得到约17.2g原苏木素A，纯度98.2％。
实施例2：原苏木素B的制备方法
一种制备原苏木素B的方法，包括如下步骤：
步骤S1，将木蝴蝶的干燥树皮粉碎后用体积百分浓度为85％的乙醇水溶液热回流提取3次，每次2h，固液比为1:20；合并3次所得提取液，过滤，收集滤液，将滤液浓缩至无醇味作为大孔树脂的上样液；
步骤S2，将所得上样液上样于AB-8型大孔树脂柱，树脂径高比为1:10，拌样树脂占树脂总量的1/10，湿法装柱，拌树脂上样；依次用35％、55％、75％乙醇以12BV/h的流速分别洗脱8、8、5BV，收集75％乙醇的4-5BV洗脱液，浓缩干燥得原苏木素粗品；
步骤S3，高速逆流纯化：以体积比为20:3.5:1.5:10的乙酸乙酯-正丁醇-四氢呋喃-水作为溶剂系统，充分混匀后静置过夜，两相分离后脱气30min，上相作固定相，下相作流动相；将固定相以20mL/min泵满管路，850r/min正转，流速2mL/min的条件泵入流动相，主机出口流出流动相时，将20mL用下相溶解的原苏木素粗品(10mg/mL)注入进样圈；分离温度为25℃，检测波长为245nm，根据色谱图(图2)收集原苏木素B对应的洗脱液，浓缩干燥。
高速逆流色谱仪参数：TBE-300A聚四氟乙烯柱，内径1.6mm，柱容积280mL，转速0～1000r/min，上海同田公司。
采用上述方法，1kg木蝴蝶的干燥树皮可以分离得到约15.5g原苏木素B，纯度98.5％。
实施例3：原苏木素C的制备方法
一种制备原苏木素C的方法，包括如下步骤：
步骤S1，将木蝴蝶的干燥树皮粉碎后用体积百分浓度为85％的乙醇水溶液热回流提取3次，每次2h，固液比为1:20；合并3次所得提取液，过滤，收集滤液，将滤液浓缩至无醇味作为大孔树脂的上样液；
步骤S2，将所得上样液上样于AB-8型大孔树脂柱，树脂径高比为1:10，拌样树脂占树脂总量的1/10，湿法装柱，拌树脂上样；依次用35％、55％、75％乙醇以12BV/h的流速分别洗脱8、8、5BV，收集75％乙醇的4-5BV洗脱液，浓缩干燥得原苏木素粗品；
步骤S3，高速逆流纯化：以体积比为20:2:3:10的乙酸乙酯-正丁醇-四氢呋喃-水作为溶剂系统，充分混匀后静置过夜，两相分离后脱气30min，上相作固定相，下相作流动相；将固定相以20mL/min泵满管路，850r/min正转，流速2mL/min的条件泵入流动相，主机出口流出流动相时，将20mL用下相溶解的原苏木素粗品(10mg/mL)注入进样圈；分离温度为25℃，检测波长为245nm，根据色谱图(图3)收集原苏木素C对应的洗脱液，浓缩干燥。
高速逆流色谱仪参数：TBE-300A聚四氟乙烯柱，内径1.6mm，柱容积280mL，转速0～1000r/min，上海同田公司。
采用上述方法，1kg木蝴蝶的干燥树皮可以分离得到约13.6g原苏木素C，纯度98.4％。
上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。
Claims (10)
1.一种制备原苏木素A的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤S1，将木蝴蝶的干燥树皮粉碎后用体积百分浓度为75％～95％的乙醇水溶液提取，提取液过滤后收集滤液，将滤液浓缩至无醇味作为大孔树脂的上样液；
步骤S2，将所得上样液上样于大孔树脂柱，拌样树脂占树脂总量的1/10，湿法装柱，拌树脂上样；依次用35％、55％、75％乙醇以12BV/h的流速分别洗脱8、8、5BV，收集75％乙醇的4-5BV洗脱液，浓缩干燥得原苏木素粗品；
步骤S3，高速逆流纯化：以体积比为20:3:2:10的乙酸乙酯-正丁醇-四氢呋喃-水作为溶剂系统，充分混匀后静置过夜，两相分离后脱气，上相作固定相，下相作流动相；将固定相泵满管路，850r/min正转，泵入流动相，主机出口流出流动相时，将用下相溶解的原苏木素粗品注入进样圈；检测波长245nm，根据色谱图收集原苏木素A对应的洗脱液，浓缩干燥。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1提取方法为热回流。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1提取溶剂优选85％乙醇。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1提取时固液比为1:15-25。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S2采用AB-8型大孔树脂。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S2树脂柱中树脂径高比为1:10。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S3两相分离后超声脱气30min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S3将固定相以20mL/min泵满管路。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S3流速2mL/min的条件泵入流动相。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S3高速逆流分离温度为25℃。
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