CN108530532B - 猪瘟病毒单克隆抗体hk 44及医用用途 - Google Patents

猪瘟病毒单克隆抗体hk 44及医用用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种猪瘟病毒单克隆抗体HK 44，能与猪瘟病毒E2蛋白特异性地结合,并且能够十分有效地阻断病毒对细胞的侵入,对细胞有明显的保护作用。可用于针对抗猪瘟病毒的生物制剂的研发，以及猪瘟病毒检测的相关研究。

Description

猪瘟病毒单克隆抗体HK 44及医用用途
技术领域
本发明属于生物技术和分子免疫学领域，涉及一种能有效抗猪瘟病毒抗体HK 44及其相应序列。具体为抗猪瘟病毒E2蛋白的抗体及医用用途。
技术背景
猪瘟（Classical swine fever, CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fevervirus, CSFV）感染引起猪的一种烈性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）列为须申报的动物传染病目录，具有急性、热性、高度接触性等特点。在危害我国养猪业的疾病和疫情中，猪瘟是具有代表性的重大疫病。
猪瘟病毒结构蛋白主要包括C蛋白和E2（gp55），囊膜糖蛋白Erns（gp44/48）和E1（gp33）蛋白。位于病毒粒子表面的E2 为囊膜糖蛋白，是在CSFV中起保护作用的抗原蛋白，主要存在形式为同源二聚体E2-E2 或异源E1-E2 二聚体，能够使宿主的免疫系统激活，产生中和抗体，是与宿主相互作用的主要靶点。在CSFV 病毒粒子的表面，E2 蛋白被认为是有可能作为的受体结合的主要蛋白之一。
抗体（Antibody）,也叫免疫球蛋白 (Ig),是一种能特异性结合抗原的蛋白,由B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞产生，是介导体液免疫的重要免疫分子。作为抵御清除机体内外来病原微生物的主要应答分子，其在疾病的免疫预防、诊断和治疗等方面有着重要的使用价值。由于其作用的特异性、高效性，已广泛应用于抗病毒等方面的研究。
本发明针对猪瘟病毒E2蛋白，提供了一种具有中和活性的猪瘟病毒特异性单克隆抗体，为猪瘟病毒血清学的快速诊断，开发猪瘟新型疫苗及猪瘟的防治提供了候选者。
发明内容
本发明提供了一种能够结合猪瘟病毒E2蛋白，并且有效中和猪瘟病的抗体HK44及其序列。
本发明所述的一种猪瘟病毒单克隆抗体HK44，包括轻链和重链，其特征在于：
所述单克隆抗体的重链全长氨基酸序列为SEQ ID 1，可变区氨基酸序列为序列表中的SEQ ID 3；
所述单克隆抗体的轻链全长氨基酸序列为SEQ ID 5，可变区氨基酸序列为序列表中的SEQ ID 7；
所述的猪瘟病毒单克隆抗体HK44，其特征在于：
能够编码抗体重链全长核酸序列为SEQ ID 2；所述抗体的重链可变区包含核苷酸序列为SEQ ID 4；
能够编码抗体轻链全长核酸序列为SEQ ID 6；所述抗体的轻链可变区包含核苷酸序列为SEQ ID 8。
所述单克隆抗体或其抗原结合片段选自Fab、Fab’、F (ab’)2、Fd、Fv、Fc、dAb、互补决定区片段、单链抗体。
所述的单克隆抗体包括非CDR区，且所述非CDR区来自不是猪类的物种。
所述的猪瘟病毒单克隆抗体HK44在诊断或检测猪瘟病毒试剂中的用途。
所述的猪瘟病毒单克隆抗体HK44在预防治疗猪瘟生物制剂中的用途。
本发明猪瘟病毒单克隆抗体HK44的制备方法，包括以下步骤：
在猪21-30日龄和65日龄时分别注射1次猪瘟疫苗，间隔一周后加强免疫一次，共免疫三次。用猪瘟病毒抗体检测试剂盒检测免疫后猪血清中抗体含量，选择抗体含量较高的实验猪，前腔静脉采血获得血样，之后使用淋巴细胞分离液对血样进行密度梯度离心，分离出猪淋巴细胞；
所得淋巴细胞使用FITC标记的抗猪IgG 和5-tamra标记的特异性表位CTAVSPTTLRTEVVK同时标记，利用流式细胞术筛选出抗体分泌细胞群，并使用显微操作技术将所得细胞群分离为单个状态，即为单个抗体分泌细胞；
使用Smart-seq2技术获得单个抗体分泌细胞cDNA，步骤为：将单个细胞放入含有2μl裂解液（1 μl RNase抑制剂和19 μl 0.2% (vol/vol) Triton X-100）1 μl oligo-dT 和1 μl dNTP的0.2-ml PCR 管中进行裂解；
利用SuperScript II 反转录酶获取单个抗体分泌细胞全长cDNA，并使用KAPAHiFi HotStart ReadyMix进行预扩增，之后使用特定引物，以预扩增产物为模版进行巢式PCR，扩增得到抗体重链、轻链基因全长序列，通过表达及鉴定获得了一对能够特异性结合并中和猪瘟病毒的单克隆抗体（命名为HK44）。
本发明所述的单克隆抗体HK44可在体外高量表达，并可以在猪瘟病毒的检测，以及猪瘟病毒的预防和紧急治疗等方面进行应用。
本发明的积极效果在于：
本发明的单克隆抗体，能与猪瘟病毒E2蛋白特异性地结合,并且能够十分有效地阻断病毒对细胞的侵入,对细胞有明显的保护作用。可用于针对抗猪瘟病毒的生物制剂的研发，以及猪瘟病毒检测的相关研究。
附图说明
图1：单克隆抗体HK44表达纯化后SDS-PAGE检测（从左至右3个泳道样品依次为：Maker；猪IgG；HK44）；
图2：单克隆抗体HK44表达纯化后Western-blot检测对猪瘟病毒的结合活性（从左至右样品依次为：正常PK细胞蛋白样品，CSFV感染PK细胞蛋白样品）；
图3：单克隆抗体HK44中和活性检测；
图4：FITC标记表位检测抗体表达。
具体实施方式
通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
实施例1
单克隆抗体的轻链和重链序列的获得
在猪21-30日龄和65日龄时分别注射1次猪瘟疫苗（兔化弱毒株，吉林正业生物制品股份有限公司），间隔一周后加强免疫一次，共免疫三次。用猪瘟病毒抗体检测试剂盒（美国爱德士，IDEXX）检测免疫后猪血清中抗体含量，选择抗体含量较高的实验猪，前腔静脉采血获得血样，之后使用淋巴细胞分离液对血样进行密度梯度离心，分离出猪淋巴细胞。所得淋巴细胞使用FITC标记的抗猪IgG 和5-tamra标记的特异性表位CTAVSPTTLRTEVVK同时标记，利用流式细胞术筛选出抗体分泌细胞群，并使用显微操作技术将所得细胞群分离为单个状态，即为单个抗体分泌细胞。使用Smart-seq2技术获得单个抗体分泌细胞cDNA，步骤为：将单个细胞放入含有2μl裂解液（1 μl RNase抑制剂和19 μl 0.2% (vol/vol) TritonX-100）1 μl oligo-dT 和 1 μl dNTP的0.2-ml PCR 管中进行裂解。利用SuperScript II反转录酶（Invitrogen ,货号18064014）获取单个抗体分泌细胞全长cDNA，并使用KAPAHiFi HotStart ReadyMix进行预扩增，之后使用特定引物，以预扩增产物为模版进行巢式PCR，扩增得到抗体重链、轻链基因全长序列，通过表达及鉴定获得了一对能够特异性结合并中和猪瘟病毒的单克隆抗体（命名为HK44）；
挑取单克隆测序，并对抗体序列中的可变区进行预测鉴别，结果如下：
抗体重链全长核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；重链全长氨基酸序列如 SEQ IDNO.1所示；
抗体重链可变区核苷酸序列如SEQ ID NO. 4所示；重链可变区氨基酸序列如 SEQID NO. 3所示；
轻链全长核苷酸序列如SEQ ID NO. 6所示；轻链全长氨基酸序列如SEQ ID NO. 5所示；
抗体轻链可变区核酸序列如SEQ ID NO. 8所示；抗体轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO. 7所示。
试验例1
HK44抗体的制备和SDS-PAGE电泳检测
将HK44的重链全长序列（SEQ ID NO：1）和轻链全长序列（SEQ ID NO：5）分别克隆到含有启动子EF1α的表达载体中（酶切位点：NdeI和XhoI），共转染293FT细胞。细胞培养4天后，将培养液1000rpm/min离心5min收集上清，0.45µm滤膜过滤后利用ProteinA磁珠纯化获得重组抗体，进行SDS-PAGE电泳检测。结果如图1所示，目标蛋白大约在55kD和24kD处与预期相符。
试验例2
Western-blot检测HK44抗体与猪瘟病毒结合活性
1、猪瘟病毒感染PK-15细胞72h后收集胞内蛋白，以未感染病毒的PK-15细胞做阴性对照；
2、吸取等量的病毒组及非病毒组蛋白，加入SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（1×）补齐至相同体积，100℃水浴5-10 分钟，充分变性蛋白。依照试剂盒配制12%的 SDS-PAGE分离胶和5%的浓缩胶。按照一定顺序上样到SDS-PAGE 胶加样孔中，浓缩胶以 90mV,分离胶以120mV 恒压电泳约 1 个小时，待蓝色染料到达胶的底端处附近停止电泳；
3、电泳后按说明书操作将样品转至NC膜，并用5%脱脂奶粉封闭2h；
4、加入HK44抗体（1：100稀释在封闭液中）4℃孵育过夜；
5、次日，用TBST震荡洗涤 3次，每次10分钟，随后加入辣根过氧化酶标记兔抗猪IgG的二抗（PBST 1：2000稀释），室温摇床中放置1小时，再次充分洗涤；
6、显色；
7、结果如图2所示，病毒组检测到目标蛋白大约在55kD，无病毒组未检测到目标蛋白。
试验例3
病毒中和实验检测HK44抗体的中和活性
1、HK44抗体两倍连续稀释在DMEM中，与等体积的TCID50/ml CSFV 37℃混合，孵育1小时；
2、100ul的抗体-病毒混合物加入到含有PK15细胞的96孔板中，37℃孵育2小时；
3、弃去培养液，并用PBS清洗三次，加入新鲜含有5%FBS 的完全培养基，37℃孵育72小时；
4、弃去培养液，用PBS清洗3次，每次10分钟，逐孔加入100µl预冷的80%丙酮，-20℃固定过夜；
5、吸出个各培养孔中的固定液，各孔加入100µl PBST，放到摇床上，清洗10min，重复2~3次；
6、用抗体稀释液按1:100的比例稀释一抗，加入到各细胞培养孔中，37℃，孵育1~2小时；
7、各孔加入100µl PBST，放到摇床上，清洗10min，重复2~3次；
8、用抗体稀释液按1:100的比例稀释荧光二抗，加入到各细胞培养孔中，37℃孵育30分钟；
9、各孔加入100µl PBST，放到摇床上，清洗10min，重复2~3次；
10、各孔加入100µlPBST，在倒置荧光显微镜显微镜下进行分析。
11、结果如图3所示，抗体HK44对猪瘟病毒具有明显中和能力。
试验例4
FITC标记表位检测抗体表达
1、重链轻链表达质粒共转染293FT细胞，转至96孔板，正常培养24小时；
2、弃去培养液，用PBS清洗3次，每次10分钟，逐孔加入100µl预冷的80%丙酮，-20℃固定过夜；
3、吸出个各培养孔中的固定液，各孔加入100µl PBST，放到摇床上，清洗10min，重复2~3次；
4、将FITC标记的所用筛选表位（1mg/ml）100µl，加入到各细胞培养孔中，37℃，孵育30分钟；
5、各孔加入100µl PBST，放到摇床上，清洗10min，重复2~3次；
6、各孔加入100µlPBST，在倒置荧光显微镜显微镜下进行分析；
7、结果如图4所示。
序列表
<110> 吉林大学
<120> 猪瘟病毒单克隆抗体HK 44及医用用途
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 471
<212> PRT
<213> 猪(Sus scrofa)
<400> 1
Met Gly Pro Ala Leu Ala Thr Val Val Leu Pro Ala Leu Leu Gly Gly
1 5 10 15
Val Gly Gly Gly Gly Leu Leu Val Gly Ser Gly Gly Gly Leu Val Gly
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Ala Leu Ser Cys Val Gly Ser Gly Pro Thr Pro
35 40 45
Thr Ser Thr Thr Val Ala Thr Val Ala Gly Thr Pro Gly Leu Gly Leu
50 55 60
Gly Thr Leu Ala Ser Ile Ala Thr Ala Gly Gly Ala Thr Ala Thr Ala
65 70 75 80
Ala Ser Val Leu Gly Ala Pro Thr Val Ser Ser Ala Ala Ser Gly Ala
85 90 95
Thr Ala Thr Leu Gly Met Ala Ala Leu Ala Thr Gly Gly Thr Ala Ala
100 105 110
Thr Thr Cys Ala Ala Ile Thr Ala Thr Gly Val Ser Thr Thr Val Pro
115 120 125
Val Ala Leu Ala Ala Pro Ala Leu Thr Gly Pro Gly Val Gly Val Val
130 135 140
Val Ser Ser Ala Pro Leu Thr Ala Pro Ser Val Thr Pro Leu Ala Pro
145 150 155 160
Cys Gly Ala Ala Thr Ser Gly Pro Ala Val Ala Leu Gly Cys Leu Ala
165 170 175
Ser Ser Thr Pro Pro Gly Pro Val Thr Val Thr Thr Ala Ser Gly Ala
180 185 190
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Pro Pro Ser Val Leu Gly Pro Ser Gly
195 200 205
Leu Thr Ser Leu Ser Ser Thr Val Thr Val Pro Ala Ala Ser Ser Ser
210 215 220
Ala Leu Cys Pro Thr Cys Ala Val Ala His Pro Ala Thr Thr Thr Leu
225 230 235 240
Val Ala Leu Cys Val Gly Ala Pro Cys Pro Ile Cys Pro Ala Cys Gly
245 250 255
Gly Pro Gly Pro Ser Ala Pro Ile Pro Pro Pro Leu Pro Leu Ala Thr
260 265 270
Leu Met Ile Ser Ala Thr Pro Gly Val Thr Cys Val Val Val Ala Val
275 280 285
Ser Gly Gly Ala Pro Gly Val Gly Pro Ser Thr Thr Val Ala Gly Val
290 295 300
Gly Val His Thr Ala Gly Thr Ala Pro Leu Gly Ala Gly Pro Ala Ser
305 310 315 320
Thr Thr Ala Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gly Ala Thr Leu
325 330 335
Leu Gly Leu Gly Pro Gly Cys Leu Val Ala Ala Leu Ala Leu Pro Ala
340 345 350
Pro Ile Thr Ala Ile Ile Ser Leu Ala Leu Gly Pro Ser Ala Gly Pro
355 360 365
Gly Val Thr Thr Leu Ser Pro Ser Ala Gly Gly Leu Ser Ala Ser Leu
370 375 380
Val Ser Ile Thr Cys Leu Val Thr Gly Pro Thr Pro Pro Ala Ile Ala
385 390 395 400
Val Gly Thr Leu Ser Ala Gly Gly Pro Gly Pro Gly Gly Ala Thr Ala
405 410 415
Thr Thr Pro Pro Gly Gly Ala Val Ala Gly Thr Thr Pro Leu Thr Ser
420 425 430
Leu Leu Ala Val Ala Leu Ala Ser Thr Gly Ala Gly Ala Thr Pro Gly
435 440 445
Cys Ala Val Met His Gly Ala Leu His Ala His Thr Thr Gly Leu Ser
450 455 460
Ile Pro Leu Thr Pro Gly Leu
465 470
<210> 2
<211> 1416
<212> DNA
<213> 猪(Sus scrofa)
<400> 2
atggagtttc ggctgaactg ggtggtcttg tttgctctct tacaaggtgt ccagggtgag 60
gagaagctgg tggagtctgg aggaggcctg gtgcagcctg gggggtctct gagactctcc 120
tgtgtcggct ctggattcac cttcactagt acctacgtta actgggtccg ccagactcca 180
gggaaggggc tggagtggct ggcgtctatt gatactagag gtggtagaac cgactacgca 240
gactctgtga agggccgatt caccgtctcc agcgacaatt cccagaatac ggcctatcta 300
caaatgaacg acctgagaac cgaggaaacg gcccgctatt actgtgcaag aatttatcga 360
tatggtgtta gttactatgt gttcgtcgac cttaatgcgt ttgatctctg gggcccaggc 420
gttgaagtcg tcgtgtcctc agcccccaag acggccccat cggtctaccc tctggccccc 480
tgcggcaggg acacgtctgg ccctaacgtg gccttgggct gcctggcctc aagctacttc 540
cccgagccag tgaccgtgac ctggaactcg ggcgccctga ccagtggcgt gcacaccttc 600
ccatccgtcc tgcagccgtc agggctctac tccctcagca gcacggtgac cgtgccggcc 660
aggagctcgt ccagaaagtg cttcacgtgc aatgtcaacc acccggccac caccaccaag 720
gtggacctgt gtgttggacg accatgtccc atatgcccag cctgtgaagg gcccgggccc 780
tcggccttca tcttccctcc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccccgag 840
gtcacgtgcg tggtggtaga tgtgagccag gagaacccgg aggtccagtt ctcctggtat 900
gtggacggcg tagaggtgca cacggcccag acgaggccaa aggaggcgca gttcaacagc 960
acctaccgtg tggtcagcgt cctgcccatc cagcaccagg actggctgaa gggaaaggag 1020
ttcgagtgca aggtcaacaa caaagacctc ccagccccca tcacaaggat catctccaag 1080
gccaaagggc cgagccggga gccgcaggtg tacaccctgt ccccatccgc cgaggagctg 1140
tccaggagca aagtcagcat aacctgcctg gtcactggct tctacccacc tgacatcgat 1200
gtcgagtgga agagcaacgg acagccggag ccagagggca attaccgcac caccccgccc 1260
cagcaggacg tggacgggac ctacttcctg tacagcaagc tcgcggtgga caaggccagc 1320
tggcagcgtg gagacacatt ccagtgtgcg gtgatgcacg aggctctgca caaccactac 1380
acccagaagt ccatcttcaa gactccgggt aaatga 1416
<210> 3
<211> 124
<212> PRT
<213> 猪(Sus scrofa)
<400> 3
Gly Gly Leu Leu Val Gly Ser Gly Gly Gly Leu Val Gly Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Ala Leu Ser Cys Val Gly Ser Gly Pro Thr Pro Thr Ser Thr
20 25 30
Thr Val Ala Thr Val Ala Gly Thr Pro Gly Leu Gly Leu Gly Thr Leu
35 40 45
Ala Ser Ile Ala Thr Ala Gly Gly Ala Thr Ala Thr Ala Ala Ser Val
50 55 60
Leu Gly Ala Pro Thr Val Ser Ser Ala Ala Ser Gly Ala Thr Ala Thr
65 70 75 80
Leu Gly Met Ala Ala Leu Ala Thr Gly Gly Thr Ala Ala Thr Thr Cys
85 90 95
Ala Ala Ile Thr Ala Thr Gly Val Ser Thr Thr Val Pro Val Ala Leu
100 105 110
Ala Ala Pro Ala Leu Thr Gly Pro Gly Val Gly Val
115 120
<210> 4
<211> 372
<212> DNA
<213> 猪(Sus scrofa)
<400> 4
gaggagaagc tggtggagtc tggaggaggc ctggtgcagc ctggggggtc tctgagactc 60
tcctgtgtcg gctctggatt caccttcact agtacctacg ttaactgggt ccgccagact 120
ccagggaagg ggctggagtg gctggcgtct attgatacta gaggtggtag aaccgactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccgtc tccagcgaca attcccagaa tacggcctat 240
ctacaaatga acgacctgag aaccgaggaa acggcccgct attactgtgc aagaatttat 300
cgatatggtg ttagttacta tgtgttcgtc gaccttaatg cgtttgatct ctggggccca 360
ggcgttgaag tc 372
<210> 5
<211> 221
<212> PRT
<213> 猪(Sus scrofa)
<400> 5
Ala Ile Val Leu Thr Gly Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ala Ser Ile Ser Cys Ala Ser Ser Gly Ser Leu Leu His Gly
20 25 30
Ala Gly Leu Ala Thr Leu Ala Thr Thr Leu Gly Leu Pro Gly Gly Ser
35 40 45
Pro Gly Leu Leu Ile Thr Ala Ala Thr Ala Leu Leu Thr Gly Val Pro
50 55 60
Ala Ala Pro Leu Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Pro Thr Leu Leu Ile
65 70 75 80
Ser Ala Val Gly Ala Gly Ala Val Gly Val Thr Thr Cys Pro Gly Gly
85 90 95
Leu Gly Ser Pro Thr His Pro Gly Ala Gly Thr Leu Leu Gly Leu Leu
100 105 110
Ala Ala Ala Ala Leu Pro Ser Val Pro Ile Pro Pro Pro Ser Leu Gly
115 120 125
Gly Leu Gly Thr Gly Thr Val Ser Val Val Cys Leu Leu Ala Ser Pro
130 135 140
Pro Pro Ala Gly Val Ala Val Leu Thr Leu Val Ala Gly Val Val Gly
145 150 155 160
Ser Ser Gly Ile Leu Ala Ser Val Thr Gly Gly Ala Ser Leu Ala Ser
165 170 175
Thr Thr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Ser Leu Pro Thr Ser Gly Thr Leu
180 185 190
Ser His Ala Leu Thr Ser Cys Gly Val Thr His Leu Thr Leu Ala Ser
195 200 205
Pro Leu Val Leu Ser Pro Ala Ala Ala Gly Cys Gly Ala
210 215 220
<210> 6
<211> 666
<212> DNA
<213> 猪(Sus scrofa)
<400> 6
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tacctgcaga aaccaggcca gtctccacag ctcctgatct acgctgctac caacaaaaag 180
actggggtcc cggacaggtt caagggcagt ggatcaggca cagatttcac cctgaaaatc 240
agcagggtgg aggctgagga tgtgggagtt tattattgtt ttcaaggttt acaatctcct 300
tatcatttcg gcgcggggac caagctggag ctcaaacggg ctgatgccaa gccatccgtc 360
ttcatcttcc cgccatcgaa ggagcagtta gagacccaaa ctgtctctgt ggtgtgcttg 420
ctcaatagct tcttccccag agaagtcaat gtcaagtgga aagtggatgg ggtggtccaa 480
agcagtggca tcctggatag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tctcgctgcc cacgtcacag tacctaagtc ataatttata ttcctgtgag 600
gtcacccaca agaccctggc ctcccctctg gtcaaaagct tcaacaggaa cgagtgtgag 660
gcttaa 666
<210> 7
<211> 112
<212> PRT
<213> 猪(Sus scrofa)
<400> 7
Ala Ile Val Leu Thr Gly Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ala Ser Ile Ser Cys Ala Ser Ser Gly Ser Leu Leu His Gly
20 25 30
Ala Gly Leu Ala Thr Leu Ala Thr Thr Leu Gly Leu Pro Gly Gly Ser
35 40 45
Pro Gly Leu Leu Ile Thr Ala Ala Thr Ala Leu Leu Thr Gly Val Pro
50 55 60
Ala Ala Pro Leu Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Pro Thr Leu Leu Ile
65 70 75 80
Ser Ala Val Gly Ala Gly Ala Val Gly Val Thr Thr Cys Pro Gly Gly
85 90 95
Leu Gly Ser Pro Thr His Pro Gly Ala Gly Thr Leu Leu Gly Leu Leu
100 105 110
<210> 8
<211> 336
<212> DNA
<213> 猪(Sus scrofa)
<400> 8
gccatcgtgc tgacccagac tccactctcc ctgtcagtaa gccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtccagtca gagcctccta cacggtgatg gaaagaatta tttgaattgg 120
tacctgcaga aaccaggcca gtctccacag ctcctgatct acgctgctac caacaaaaag 180
actggggtcc cggacaggtt caagggcagt ggatcaggca cagatttcac cctgaaaatc 240
agcagggtgg aggctgagga tgtgggagtt tattattgtt ttcaaggttt acaatctcct 300
tatcatttcg gcgcggggac caagctggag ctcaaa 336

Claims (3)

1.一种猪瘟病毒单克隆抗体HK 44，包括轻链和重链，其特征在于：
所述单克隆抗体的重链全长氨基酸序列为SEQ ID No 1，可变区氨基酸序列为序列表中的SEQ ID No 3；
所述单克隆抗体的轻链全长氨基酸序列为SEQ ID No 5，可变区氨基酸序列为序列表中的SEQID No 7。
2.根据权利要求1所述的猪瘟病毒单克隆抗体HK 44在制备诊断或检测猪瘟病毒试剂中的用途。
3.根据权利要求1所述的猪瘟病毒单克隆抗体HK 44在制备预防治疗猪瘟生物制剂中的用途。
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