CN110845605A

CN110845605A - 一种抗犬细小病毒的基因工程抗体及其应用

Info

Publication number: CN110845605A
Application number: CN201911333624.4A
Authority: CN
Inventors: 殷玉和; 吴丛梅; 李希辰; 赫玉芳; 李雪; 石晶; 雷欢; 赵林烨
Original assignee: Changchun University of Technology
Current assignee: Changchun University of Technology
Priority date: 2019-12-23
Filing date: 2019-12-23
Publication date: 2020-02-28
Anticipated expiration: 2039-12-23
Also published as: CN110845605B

Abstract

本发明提供了一种抗犬细小病毒的基因工程抗体及其应用，涉及抗体工程技术领域，将已获得的犬细小病毒单克隆抗体的可变区序列与犬源抗体恒定区进行组装，得到抗犬细小病毒的基因工程嵌合抗体，经过试验验证，所述基因工程抗体的细胞上清液的血凝抑制效价为1：2⁴～2⁵；中和效价为1:203。可见所述基因工程抗体表现出良好的中和犬细小病毒的活性，且能抑制犬细小病毒对红细胞的凝集作用，可应用于单克隆抗体犬源化研究和犬细小病毒的防治等领域，对推动犬源化单克隆抗体药物的发展具有重要意义。

Description

一种抗犬细小病毒的基因工程抗体及其应用

技术领域

本发明属于抗体工程技术领域，具体涉及一种抗犬细小病毒的基因工程抗体及其应用。

背景技术

犬细小病毒(canine parovirus,CPV)属于细小病毒科细小病毒属，是家犬和几种野生食肉动物的重要病原体，主要的自然宿主是犬。犬被感染后会引发犬细小病毒病，该病分为肠炎型和心肌炎型，具有发病率高、传染性强、死亡率高等特点，可造成严重经济损失，严重危害中国养犬业的发展。

预防犬细小病毒病的疫苗主要有：灭活苗、弱毒苗和多联苗，但是对市场上疫苗的免疫效果调查研究发现，仅20％的疫苗能产生100％保护力的抗体。对于犬细小病毒感染，目前尚没有特效药物，临床上多采用对症治疗、支持疗法和特异性疗法联合应用。其中，特异性疗法，一般早期采用犬细小病毒单克隆抗体及犬细小病毒抗血清。市售抗血清有异种动物免疫血清和犬源血清，异种动物血清虽然能保护幼龄动物和成年动物免受感染，但无法连续注射，否则将造成剧烈的过敏反应，严重时可导致动物死亡；而犬源血清具有犬源缺乏和制备成本高的特点。临床上采用的抗犬细小病毒单克隆抗体为鼠源单克隆抗体，由于鼠源单克隆抗体注射至其他种源动物时易产生抗鼠源抗体导致治疗效果下降影响了临床应用。随着宠物犬的数量增多，研究犬细小病毒病的诊断和防治具有重要意义。

目前，市场上的犬细小病毒单克隆抗体和抗血清具有较强的免疫原性，在治疗过程中会存在副作用降低疗效，限制了其临床应用。因此，制备低免疫原性、高亲和力、特异性强的单克隆抗体更有利于推动抗体药物的大规模临床应用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗犬细小病毒的基因工程抗体及其应用，可表现出良好的中和犬细小病毒的活性作用，抑制犬细小病毒对红细胞的凝集作用佳，且用于治疗犬细小病毒感染时可降低免疫原性和产生的过敏反应。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种抗犬细小病毒的基因工程抗体，所述基因工程抗体中包括犬源抗体的恒定区和鼠源抗体的可变区；

所述恒定区包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区的核苷酸序列如SEQID NO.5所示；所述轻链恒定区的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

所述可变区包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的核苷酸序列如SEQID NO.1所示；所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

优选的，所述重链可变区的编码氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述轻链可变区的编码氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

优选的，所述基因工程抗体的种类包括：单链抗体、双链抗体或嵌合抗体。

优选的，所述基因工程抗体的种类还包括：所述单链抗体、双链抗体或嵌合抗体的衍生物、功能等同物或同源物，以及抗体片段或含有抗原结合结构域的任何多肽。

本发明还提供了所述基因工程抗体在制备防治犬细小病毒感染药物中的应用。

相比于现有技术，本发明具有以下有益效果：本发明将已获得的犬细小病毒单克隆抗体的可变区序列与犬源抗体恒定区进行组装，得到抗犬细小病毒的基因工程嵌合抗体，表现出良好的中和犬细小病毒的活性，可应用于单克隆抗体犬源化研究和犬细小病毒的防治等领域，对推动犬源化单克隆抗体药物的发展具有重要意义。

本发明所述基因工程抗体，对犬细小病毒具有良好的中和活性，且能抑制犬细小病毒对红细胞的凝集作用，可将其应用于犬细小病毒病的防治研究等领域，对推动犬源化单克隆抗体药物的发展具有重要意义。

在本发明实施例中，经过试验验证，所述基因工程抗体的细胞上清液的血凝抑制效价为1：2⁴～2⁵；中和效价为1:203，因此所述抗体为中和抗体，可以与CPV有效结合阻断其对细胞的感染，具有一定治疗作用，可添加药学上可接受的载体，用于制备治疗犬细小病毒感染药物。

附图说明

图1为实施例1中犬源化CPV基因工程抗体的结构示意图，犬源化CPV基因工程抗体包含两条轻链和两条重链，其轻链由N端可变区V_L和C端恒定区C_L组成，重链由N端可变区V_H和C端恒定区C_H

(C_H1-C_H2-C_H3)组成，其中V_L和V_H来自鼠源CPV单克隆抗体可变区，C_L和C_H来自犬源抗体恒定区；

图2为实施例1中犬源化CPV基因工程抗体的轻重链的真核表达载体酶切鉴定图；

图3为实施例2提供的犬源化CPV基因工程抗体的血凝抑制结果图；

图4为实施例2提供的犬源化CPV基因工程抗体与CPV的中和试验中的病毒回归对照；

图5为实施例2提供的犬源化CPV基因工程抗体与CPV的中和试验细胞病变结果图；

图6为实施例2提供的犬源化CPV基因工程抗体间接免疫荧光检测结果图。

具体实施方式

本发明提供了一种抗犬细小病毒的基因工程抗体，结构示意图如图1所示，所述基因工程抗体中包括犬源抗体的恒定区和鼠源抗体的可变区；

本发明所述基因工程抗体为鼠源CPV单克隆抗体的犬源化改造，本发明对所述鼠源CPV单克隆抗体的制备方法并没有特殊限定，在本发明实施例中按照中国专利CN109627331A的方法制备鼠源CPV单克隆抗体。

本发明在组装所述基因工程抗体时，优选的将鼠源抗体的重链可变区基因序列与犬源抗体重链恒定区基因序列组装，轻链可变区基因序列与犬源抗体轻链恒定区基因序列组装，经密码子优化后，其重链的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.7所示，轻链的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.8所示。本发明对所述组装的方法并没有特殊限定，利用本发明的常规组装方法即可。

在本发明中，所述重链可变区的编码氨基酸序列优选如SEQ ID NO.3所示；所述轻链可变区的编码氨基酸序列优选如SEQ ID NO.4所示。

在本发明中，所述基因工程抗体的种类优选包括：单链抗体、双链抗体或嵌合抗体，以及所述单链抗体、双链抗体或嵌合抗体的衍生物、功能等同物或同源物，以及抗体片段或含有抗原结合结构域的任何多肽。

本发明所述药物中还包括药学上可接受的辅料，本发明对所述辅料的具体种类并没有特殊限定。

下面结合实施例对本发明提供的抗犬细小病毒的基因工程抗体及其应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

鼠源CPV单克隆抗体的犬源化改造

(1)犬源化CPV基因工程抗体的构建

采用公开号CN109627331A的专利申请说明书实施例的方法，获得小鼠CPV单克隆抗体，经测序其重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，连于克隆载体，挑取克隆进行测序，采用IMGT对测序结果在线分析得到抗体序列的重链氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

将已获得的小鼠CPV单克隆抗体的重链可变区基因序列与犬源抗体重链恒定区基因序列(如SEQ ID NO.5所示)(NCBI GenBank：AF354265.1)组装，轻链可变区基因序列与犬源抗体轻链恒定区基因序列(如SEQ ID NO.6所示)(NCBI Reference Sequence:XR_003234360.1)组装，经密码子优化后(重链基因序列如SEQ ID NO.7所示，轻链基因序列如SEQ ID NO.8所示)，分别构建到pcDNA3.1(+)表达载体。转化至DH5α感受态细胞中，挑取单克隆进行菌液扩增。采用无内毒素质粒提取试剂盒提取质粒，对提取的质粒进行酶切鉴定结果如图2所示，泳道1为酶切后的pcDNA3.1(+)和轻链产物，泳道2为酶切后的pcDNA3.1(+)和重链产物，由此证明犬源化CPV基因工程抗体轻链和重链成功构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)上。

实施例2

犬源化CPV基因工程抗体的表达及活性研究

(1)犬源化CPV基因工程抗体的真核表达

以1×10⁶cells/孔细胞密度将HEK-293贴壁细胞接种于六孔板中生长12h后，进行瞬时转染实验。按轻链：重链＝1：1混合后与PEI(1μg/μL)为1：3的比例转染至于HEK-293细胞中进行表达，转染72h后收集上清进行活性鉴定。

(2)血凝抑制法测定上清中犬源化CPV基因工程抗体对犬细小病毒与猪红细胞结合的阻抗作用

在96孔V型血凝板中25μL/孔加入PBS(0.15M pH6.5)，在第一列中分别加入25μL犬源化CPV基因工程抗体，每个抗体做3个重复，做2倍比梯度稀释，稀释至最后一排弃去25μL，25μL/孔加入八单位抗原(即3个血凝单位的CPV溶液)，猪红细胞对照区加入25μL/孔PBS，37℃1h。随后，50μL/孔加入1％猪红细胞液，4℃1h，竖立血凝板记录结果。

实验结果如图3所示，A、B排为CPV单克隆抗体，C、D、E排为正常HEK-293细胞上清液，F、G、H排为表达的犬源化CPV基因工程抗体的细胞上清液，I、J、K排为表达的空质粒细胞上清液，L排为1％猪红细胞液对照，M排为八倍抗原对照。在各对照均成立情况下，犬源化CPV基因工程抗体的细胞上清液的血凝抑制效价为1：2⁴～2⁵。结果说明犬源化CPV基因工程抗体可抑制犬细小病毒对猪红细胞的凝集作用。

(2)犬源化CPV基因工程抗体的中和犬细小病毒活性检测

将待检样品(实验组，空白293细胞组，空质粒对照组)和阳性对照组样品(CPV单克隆抗体)在96孔板中做2倍比梯度稀释，每个稀释度做4孔重复，稀释后每孔加入100个TCID₅₀/0.05mL的CPV病毒稀释液0.05mL，置37℃1h。每孔再加入0.1mL F81细胞悬液(细胞浓度2×10⁵～3×10⁵cells/mL)，轻轻混匀后放入37℃5％CO₂恒温培养箱中，5日后显微镜下观察细胞病变(CPE)统计结果，根据Reed-Muench法计算细胞上清的中和效价。

病毒对照组：即病毒回归试验，每次检测都要设立病毒对照。将本次检测稀释好的100个TCID₅₀的病毒再做10倍梯度稀释，分别将100、10、1、0.1、0.01个TCID₅₀的病毒每孔加入0.05mL。结果0.01、0.1个TCID₅₀应不引起病变，100、10个TCID₅₀必须引起细胞病变。

细胞对照组：正常细胞对照应在整个中和试验中一直保持良好的形态。

图4中0.01、0.1个TCID₅₀CPV完全未引起F81细胞病变；100、10、1个TCID₅₀CPV完全引起F81细胞的病变，表明病毒组符合病毒回归实验结果要求。实验结果如图5所示，其中A为正常F81细胞；B为CPV单克隆抗体；C为表达犬源化CPV基因工程抗体的HEK-293细胞上清液；D为表达空质粒的HEK-293细胞上清液；E为正常HEK-293细胞上清液；F为CPV对照；细胞对照组完全无病变F81细胞一直保持良好的形态，表明本实验所用的F81细胞适用中和效价检测实验。表1结果表明上清液中犬源化CPV基因工程抗体的中和效价结果为1:203。结果说明该抗体为中和抗体，可以与CPV有效结合阻断其对细胞的感染，具有一定治疗作用，可添加药学上可接受的载体，用于制备治疗犬细小病毒感染药物。

表1 HEK-293细胞上清中和检测结果

(3)犬源化CPV基因工程抗体的间接免疫荧光检测

在96孔细胞板中100μL/孔加入F81细胞悬液(2×10⁵～3×10⁵cells/mL)，100μL/孔加入100个TCID₅₀/100μL的CPV。37℃5％CO₂培养箱培养。48h后，弃上清，200μL/孔加入80％冷丙酮室温条件下固定细胞30min。弃液，100μL/孔PBST洗板3次，3min/次。将孔内液体拍净，50μL/孔加入犬源化CPV基因工程抗体，37℃孵育1h。弃液，100μL/孔PBST洗板3次，3min/次，孵育二抗，二抗为兔抗犬IgG/FITC 1:200倍稀释，伊文思蓝1:300倍稀释，混合后50μL/孔加入，37℃避光孵育1h。弃液，100μL/孔PBST洗板3次，3min/次，荧光显微镜下观察结果。

实验结果如图6所示，其中A为被CPV感染的F81细胞；B为正常F81细胞；可见正常F81细胞未被CPV感染，呈红色，而被CPV感染的F81细胞出现病变呈绿色荧光，说明犬源化CPV基因工程抗体能与CPV结合且犬源化改造成功。结果表明经过犬源化改造后的CPV抗体依然能保持其活性，同时表明这种改造方法有效，进而可以应用在其他犬类疾病防治性抗体犬源化改造等方面，推动犬类抗体药物发展。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 长春工业大学

<120> 一种抗犬细小病毒的基因工程抗体及其应用

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 369

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

caggtgcagc tgaagcagtc aggacctggc ctagtgcagc cctcacagag cctgtccatc 60

acctgcacag tctctggttt ctcattaact agctatggtg tacactgggt tcgccactct 120

ccaggaaagg gtctggagtg gctgggagtg atatggagtg gtggaagcac agactataat 180

gcagctttca tatccagact gagcatcacc aaggacaatt ccaagaccca agttttcttt 240

aaaatgaaca gtctgcaagc taatgacaca gccatatatt actgtgccag aaactccttc 300

tacgggagta cgccagggtc ctatgctatg gactactggg gtcaaggaac ctcagtcacc 360

gtctcctca 369

<210> 2

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

caaattgttc tcacccagtc tccagcatcc ctgtccatgg ctataggaga aaaagtcacc 60

atcagatgca tagccagcac tgatattgat gatgatatga actggtacca gcagaagcca 120

gggaaacctc ctaacctcct tatttcagaa ggcaatactc ttcgtcctgg agtcccatcc 180

cgattctcca gcagtggcta tggtacagat tttgttttta caattcaaaa catgctctca 240

gaagatgttg cagattacta ctgtttgcaa agtgataact tgccgctcac gttcggtgct 300

gggaccaagc tggagctgaa a 321

<210> 3

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Val His Trp Val Arg His Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Ile

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Thr Lys Asp Asn Ser Lys Thr Gln Val Phe Phe

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Ala Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Gln Arg Asn Ser Phe Tyr Gly Ser Thr Pro Gly Ser Tyr Ala Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 4

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Met Ala Ile Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Arg Cys Ile Ala Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp

20 25 30

Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Asn Leu Leu Ile

35 40 45

Ser Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ser

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Val Phe Thr Ile Gln Asn Met Leu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Asp Asn Leu Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 5

<211> 1005

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gcctccacca cggccccctc ggttttccca ctggccccca gctgcgggtc cacttccggc 60

tccacggtgg ccctggcctg cctggtgtca ggctacttcc ccgagcctgt aactgtgtcc 120

tggaattccg gctccttgac cagcggtgtg cacaccttcc cgtccgtcct gcagtcctca 180

gggctctact ccctcagcag catggtgaca gtgccctcca gcaggtggcc cagcgagacc 240

ttcacctgca acgtggccca cccggccagc aaaactaaag tagacaagcc agtgcccaaa 300

agagaaaatg gaagagttcc tcgcccacct gattgtccca aatgcccagc ccctgaaatg 360

ctgggagggc cttcggtctt catctttccc ccgaaaccca aggacaccct cttgattgcc 420

cgaacacctg aggtcacatg tgtggtggtg gatctggacc cagaagaccc tgaggtgcag 480

atcagctggt tcgtggacgg taagcagatg caaacagcca agactcagcc tcgtgaggag 540

cagttcaatg gcacctaccg tgtggtcagt gtcctcccca ttgggcacca ggactggctc 600

aaggggaagc agttcacgtg caaagtcaac aacaaagccc tcccatcccc gatcgagagg 660

accatctcca aggccagagg gcaagcccat cagcccagtg tgtatgtcct gccgccatcc 720

cgggaggagt tgagcaagaa cacagtcagc ttgacatgcc tgatcaaaga cttcttccca 780

cctgacattg atgtggagtg gcagagcaat ggacagcagg agcctgagag caagtaccgc 840

acgaccccgc cccagctgga cgaggacggg tcctacttcc tgtacagcaa gctctctgtg 900

gacaagagcc gctggcagcg gggagacacc ttcatatgtg cggtgatgca tgaagctcta 960

cacaaccact acacacagga atccctctcc cattctccgg gtaaa 1005

<210> 6

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

cggaatgatg cccagccagc cgtctatttg ttccaaccat ctccagacca gttacacaca 60

ggaagtgcct ctgttgtgtg cttgctgaat agcttctacc ccaaagacat caatgtcaag 120

tggaaagtgg atggtgtcat ccaagacaca ggcatccagg aaagtgtcac agagcaggac 180

agcaaggaca gtacctacag cctcagcagc accctgacga tgtccagtac tgagtaccta 240

agtcatgagt tgtactcctg tgagatcact cacaagagcc tgccctccac cctcatcaag 300

agcttccaaa ggagcgagtg tcagagagtg gac 333

<210> 7

<211> 1437

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

atggaaacag atacactcct cctctgggtg ctgctgctct gggtgccagg atctacagga 60

caggtgcagc tgaaacagtc aggaccaggt ctggtgcagc cttctcagtc tctgtctatc 120

acttgtaccg tgagcggatt ctctctgaca tcttacggag tgcattgggt gagacattct 180

ccaggaaaag gactcgagtg gctgggagtg atttggagcg gaggatctac agattataac 240

gccgccttca tcagcagact gtctatcacc aaggacaaca gcaagaccca ggtgttcttc 300

aagatgaact ctctgcaggc caacgataca gctatctact attgcgcccg gaacagcttc 360

tacggatcta caccaggatc ttacgccatg gattattggg gacagggaac atcagtgacc 420

gtgtcttctg cttctacaac agctcctagc gtgtttcctc tggctccttc ttgcggatct 480

acatcaggat ctacagtggc tctggcttgt ctggtgagcg gatattttcc agagccagtg 540

acagtgtctt ggaatagcgg atctctgaca agcggagtgc acacatttcc ttcagtgctg 600

cagtcttctg gcctgtactc tctgtctagc atggtgacag tgccttctag taggtggcct 660

tcagagacat tcacttgtaa cgtggcccat ccagcttcta agaccaaggt ggataagcca 720

gtgcctaaga gagagaacgg aagagtgcct agacctccag attgtcctaa gtgtccagct 780

ccagaaatgc tgggaggacc ttccgtgttt atctttcctc ctaagcctaa ggacacactg 840

ctgatcgcta gaacaccaga agtgacttgc gtggtggtgg atctggaccc cgaagatccc 900

gaagtgcaga tctcttggtt cgtggacgga aagcagatgc agacagctaa gacacagcct 960

agagaggaac agttcaacgg aacctacaga gtggtgtcag tgctgcctat tggacatcag 1020

gattggctga agggcaagca gttcacttgc aaggtgaaca ataaggccct gccttctcct 1080

atcgagagaa ccatctctaa ggctagagga caggctcatc agccttcagt gtacgtgctg 1140

cctccttcta gagaggagct gtctaagaac accgtgtctc tgacttgcct gatcaaggac 1200

ttcttccctc cagatatcga cgtcgagtgg cagtctaatg gacagcagga accagagagc 1260

aagtacagaa caacacctcc tcagctggac gaagacggat cttacttcct gtacagcaag 1320

ctgagcgtgg ataaaagtcg ctggcagaga ggagacacct tcatttgcgc agtgatgcac 1380

gaagctctgc acaatcacta cacccaggaa tctctgtctc attctccagg aaaatga 1437

<210> 8

<211> 717

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

atggaaacag atacactcct cctctgggtg ctgctgctct gggtgccagg atctacagga 60

cagattgtgc tgactcagtc tccagcttct ctgtctatgg ctatcggaga gaaggtgacc 120

atcagatgta tcgcctctac cgatatcgac gacgacatga attggtacca gcagaagcca 180

ggcaaacctc ctaatctgct gatcagcgag ggaaatacac tgaggccagg agtgccttct 240

aggttctctt ctagcggata cggcaccgat ttcgtcttca ccatccagaa tatgctgagc 300

gaggacgtgg cagattacta ttgtctgcag agcgacaatc tgcctctgac atttggagca 360

ggaaccaagc tggaactgaa gagaaacgac gctcagccag cagtgtatct gtttcagcct 420

tctccagatc agctgcatac aggatcagca tcagtggtgt gtctgctgaa tagcttctac 480

cctaaggaca tcaacgtcaa gtggaaggtg gacggagtga ttcaggacac aggaatccag 540

gaaagcgtga cagagcagga ttctaaggac tctacctact ctctgtctag cacactgacc 600

atgtcttcta ccgagtacct gtctcacgaa ctgtactctt gcgagatcac ccacaagtct 660

ctgccttcta ccctgatcaa gagcttccag agaagcgagt gtcagagagt ggattga 717

Claims

1.一种抗犬细小病毒的基因工程抗体，其特征在于，所述基因工程抗体中包括犬源抗体的恒定区和鼠源抗体的可变区；

所述恒定区包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示；所述轻链恒定区的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

所述可变区包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示；所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述基因工程抗体，其特征在于，所述重链可变区的编码氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述轻链可变区的编码氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

3.根据权利要求1或2所述基因工程抗体，其特征在于，所述基因工程抗体的种类包括：单链抗体、双链抗体或嵌合抗体。

4.根据权利要求3所述基因工程抗体，其特征在于，所述基因工程抗体的种类还包括：所述单链抗体、双链抗体或嵌合抗体的衍生物、功能等同物或同源物，以及抗体片段或含有抗原结合结构域的任何多肽。

5.权利要求1～4任一项所述基因工程抗体在制备防治犬细小病毒感染药物中的应用。