CN108486251A

CN108486251A - 一种用于快速诊断与鉴别诊断bhd综合征的目标基因捕获测序方法及应用

Info

Publication number: CN108486251A
Application number: CN201810338726.4A
Authority: CN
Inventors: 张昕昕; 易龙; 高千; 闵海燕; 朱成楚
Original assignee: NANJING UNIVERSITY (SUZHOU) HIGH-TECH INSTITUTE; Taizhou Enze Medical Center Group
Current assignee: NANJING UNIVERSITY (SUZHOU) HIGH-TECH INSTITUTE; Taizhou Enze Medical Center Group
Priority date: 2018-04-16
Filing date: 2018-04-16
Publication date: 2018-09-04

Abstract

本发明公开了一种用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的目标基因捕获测序方法及应用。本发明的一个基因panel在制备用于诊断与鉴别诊断BHD综合征的试剂盒的用途，所述基因panel包含四个基因：FLCN、SERPINA1、TSC1、TSC2。所述的基因panel，富集捕获的基因区域包括：FLCN全基因序列；SERPINA1、TSC1、TSC2三个基因的外显子及外显子‑内含子交界50bp的区域。通过设计引物，进行长片段多重PCR反应富集目标区域序列进行二代测序，可以检出各种类型的突变形式，有效诊断和鉴别诊断BHD。本发明的方法降低检测成本，并提高检测的灵活性与效率。

Description

一种用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的目标基因捕获测序方法及应用

技术领域

本发明属于生物技术和诊断学领域，具体涉及用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的目标基因捕获测序方法及应用。

背景技术

原发性自发性气胸(PSP)是指在无明显外伤及基础疾病的情况下发生的气体进入负压胸膜腔，造成肺压缩的病理状态，气体进入患者的胸膜腔，造成肺不张和低氧血症，重者可发生呼吸困难，危及生命。病理上多认为由胸膜下肺大疱破损引起。约有11.5％的PSP患者被报道有家族史，说明这些患者气胸的发生与遗传相关。部分家族性 PSP可归因为某些基因遗传突变，如FBN1,COL3A1,CBS,SERPINA1 和TSC1/TSC2等引起的特定遗传性单基因疾病，这些基因突变导致的综合征多不以气胸为首发表现，肺外表型明显，易于鉴别。相当一部分PSP病人(约10％)是由FLCN基因遗传性杂合突变引起，该基因杂合突变可导致以皮损、肺大泡/气胸及肾癌为特征的BHD综合征(BHD,OMIM#135150)[7-11]，临床上需要与其他PSP进行鉴别诊断。

近几年在气胸人群中的研究表明，FLCN突变的患者可仅有肺大疱或PSP表型，而皮肤和肾脏的表型晚发或缺失，即临床上存在相当数量的，仅表现为PSP的“隐形”(undiagnosed)BHD患者，与其他PSP难以辨别，加之临床缺乏适宜的筛查手段，常造成广泛的混诊或误诊，并被当作单纯PSP进行治疗。由于FLCN基因突变携带者及其一级亲属患肾癌的风险较正常人高9.3倍，定期随访检查，准确及时发现这些患者，早期诊断、预防和治疗肾癌，成为改善该病预后的关键。所以，从PSP患者中诊断出BHD综合征是一个迫切需要。在我国相关研究和临床诊断及鉴别诊断尚未广泛开展。

目前为止，BHD综合征的分子诊断主要依赖于Sanger测序，而BHD综合征的致病基因FLCN目前已被报道有多种突变形式，包括点突变、小插入/缺失以及大片段缺失或重复，前两种突变可以使用Sanger测序检测到，而大片段缺失或重复则需要另外使用 MLPA等技术来检测，这就增加了基因诊断的工作量和复杂性。此外，由于SERPINA1和TSC1/TSC2基因突变也会引起PSP，TSC1/TSC 突变的患者同样也会有肾癌表现，临床上与BHD较难鉴别，所以在进行BHD的诊断和鉴别诊断时，这些基因也应该列入PSP患者的筛查范围。这样每个需要筛查的患者就需要设计86对引物，做86个 PCR和一代测序反应，以及至少4组MLPA探针反应，这些因素使得整个基因诊断流程相对复杂，成本高、效率低且工作量巨大，导致这种基于传统技术基础的诊断体系很难满足目前临床筛查的需求。因此，需要一种有效、经济、易操作且准确的技术对整个BHD-PSP疑似群体进行筛查。

随着近几年下一代测序技术的发展，目前已建立全基因组测序和目标序列捕获测序等捕获方法，使用目标序列捕获方法，我们能够将目标基因或基因组区域特异性捕获下来进行高通量二代测序，其一次实验就可以同时对几百人甚至几千人的目标基因进行测序，目前已经被成功应用于一些基因异质性疾病如乳腺癌及先天性肌萎缩等的临床筛查研究。

综上所述，临床PSP群体中有约10％是BHD-SPS，这一部分人群具有肾癌的高风险，且其一级亲属也存在相似风险，必须早期鉴别诊断，以利于肾癌的早期识别和防治。而现有基因诊断技术相对复杂，若在临床推广具有成本高却收益低、操作相对复杂且耗时长等不足。因此，可以利用下一代测序技术，将FLCN及需要与BHD鉴别诊断的基因富集下来进行二代测序，以期建立一个不仅能检测SNV、小插入/缺失的突变，同时也能检测基因内大片段缺失或重复的基因筛查方法。该方法使用更少的模板DNA，却能够更快更高效地得到人群中的突变信息，且成本更低，适合应用于临床筛查诊断。

发明内容

本发明的目的是提供用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的目标序列捕获测序方法，完成并规范化从目标序列富集的引物设计到下机后数据分析的一系列流程，并以此为基础制备可进行临床推广的用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的试剂盒。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：本发明的一个基因panel在制备用于诊断与鉴别诊断BHD综合征的试剂盒的用途，所述基因panel包含四个基因：FLCN、SERPINA1、TSC1、TSC2。

进一步地，所述的基因panel，富集捕获的基因区域包括：FLCN 全基因序列；SERPINA1、TSC1、TSC2三个基因的外显子及外显子- 内含子交界50bp的区域。

本发明的一种富集所述的基因区域序列所设计的286对引物序列，所述的286对引物序列包括上游引物和下游引物，所述的上游引物具有序列表中SEQ ID N0：1、3、5、7、9、11……569、571所示的核苷酸序列，所述的上游引物具有序列表中SEQ ID N0：2、3、6、8、10、12……570、572所示的核苷酸序列。

本发明的一种用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的目标基因捕获测序方法，包括如下步骤：

(1)目标基因区域的选取与引物设计；

(2)多重PCR体系引物panel优化；

(3)血液及组织DNA提取、质量检测；

(4)样本目标片段多重PCR反应；

(5)样本添加特异性标签序列；

(6)定量后上机测序；

(7)测序结果的信息分析。

进一步地，在步骤(7)中，拷贝数量变异(Copy number variation, CNV)分析及断点分析

step1:把每个样本的外显子的深度标准化，方法为：每个外显子的平均深度除以该样本所有比对到目标区域的reads数；

Step2:将step1中得到的标准化的值与对照样本比较，得到结果 <0.7视为杂合缺失，>1.3视为杂合重复；

Step3:为了找到精确的断点，对20-bp interval做标准化深度，同样和对照样本比较，连续的<0.7或>1.3视为杂合缺失或重复，而边界处的20-bp interval即为断点处。

进一步地，在步骤(7)中，使用基于深度的方法(depth-based method)进行拷贝数量变异分，使用GATK Depth of Coverage tool version 3.1得到每个位点的深度结果。

更进一步地，在步骤(7)中，Step1:优化后的基于标准化深度的拷贝数量变异的分析方法，如式Ⅰ所示：

本发明的所述的FLCN、SERPINA1、TSC1、TSC2四个基因的引物序列及多重扩增反应体系在快速诊断与鉴别诊断BHD试剂盒中的应用。

本发明的所述的用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的目标基因捕获测序方法在快速诊断与鉴别诊断BHD试剂盒中的应用。

有益效果：本发明使用长片段扩增的富集方法，可以自行设计引物进行目标区域的捕获，同订购商业化捕获探针相比，可降低检测成本，并提高检测的灵活性与效率。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：(1)本发明评估并验证了目标序列捕获测序法作为BHD临床筛查性基因诊断的有效性及可行性。结果显示所有已知突变都能够被准确检出，假阴性率为0。

(2)本发明提出了一个新的在PSP人群中筛查诊断和鉴别诊断 BHD综合征患者的方法，该方法由于其快速、高通量及花费较少的优点，加上可以在一次实验中检测到Sanger测序无法同时检测的多种突变形式，更加适用于在大样本量的人群中做突变筛查，可以代替一代测序和MLPA在临床实验室推广应用。以此为基础制备可进行临床推广的用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的试剂盒。

(3)本发明通过设计引物，进行长片段多重PCR反应富集目标区域序列进行二代测序，可以检出各种类型的突变形式，有效诊断和鉴别诊断BHD。同时改进了CNV分析的方法，不仅能够检出大片段缺失，同时可以检出其大致断点，并提高CNV检测结果的准确性。

(4)从建好的组织样本库中选择BHD-PSP(验证组)和随机挑选的PSP样本(发现组)，在这些样本中进行目标区域的富集并测序，在验证组中评估该方法同时检测SNV、小插入/缺失和基因内大片段缺失的能力及效率(假阴性率)；在发现组中评估该方法检测的假阳性率。综合评估该方法用于BHD诊断与鉴别诊断的准确性，完成并规范化从目标序列富集的引物设计到下机后数据分析的一系列流程。

附图说明

图1为本发明的正常样本和有基因内缺失样本的FLCN基因的深度分布图；图中可见每个样本的深度分布情况是类似的，而缺失区域的深度会普遍低一些。

图2为本发明的FLCN基因在标准化前后的深度分布比较图；A 图为一个样本FLCN基因的原始深度分布图；B图为该样本的标准化深度比的分布图。标准化深度比的值可以在不同样本间直接进行比较。

图3为本发明的利用标准化深度方法成功检出大片段缺失图；我们可以直观的看到缺失的外显子。A-D图分别为四个样本中FLCN 基因每个外显子的标准化深度值，<0.7的被视为杂合缺失。

图4为本发明的利用20-bp interval标准化深度方法进行断点分析图；我们可以直观的看到杂合缺失区域的序列位置。A-D图分别为四个样本中FLCN基因每20bp-interval的标准化深度值，虚线代表的是缺失区域的平均标准化数值。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明的一个基因panel在制备用于诊断与鉴别诊断BHD综合征的试剂盒的用途，所述基因panel包含四个基因：FLCN、SERPINA1、 TSC1、TSC2。

所述的基因panel，富集捕获的基因区域包括：FLCN全基因序列；SERPINA1、TSC1、TSC2三个基因的外显子及外显子-内含子交界50bp的区域。

本发明的一种富集权利要求2所述的基因区域序列所设计的286 对引物序列(表1)。本发明的一种富集所述的基因区域序列所设计的286对引物序列，所述的286对引物序列包括上游引物和下游引物，所述的上游引物具有序列表中SEQ ID N0：1、3、5、7、9、11……569、 571所示的核苷酸序列，所述的上游引物具有序列表中SEQ ID N0： 2、3、6、8、10、12……570、572所示的核苷酸序列。

(1)目标基因区域的选取与引物设计；

(2)多重PCR体系引物panel优化；

(3)血液及组织DNA提取、质量检测；

(4)样本目标片段多重PCR反应；

(5)样本添加特异性标签序列；

(6)定量后上机测序；

(7)测序结果的信息分析。

拷贝数量变异(Copy number variation,CNV)分析及断点分析

使用基于深度的方法(depth-based method)进行拷贝数量变异分，使用GATKDepth of Coverage tool version 3.1得到每个位点的深度结果。

Step1:优化后的基于标准化深度的拷贝数量变异的分析方法，如式Ⅰ所示：

实施例1

一、实验材料与方法

1.目标基因区域的选取与引物设计

我们对FLCN基因进行全基因序列富集，对于鉴别诊断的 SERPINA1,TSC1/TSC2基因进行外显子及外显子-内含子交界50bp 区域序列的富集。针对以上目标区域所设计的测序引物见表1。引物设计原则为：以人基因组为模板，扩增可获得清晰单一条带的引物用于后续试验。

基于长片段多重PCR扩增设计的引物序列如表1所示：

2.多重PCR体系引物panel优化

按每个panel 20对引物的标准，将经设计的引物混合为多重PCR引物 panel。并以标准人基因组为模板进行扩增。基于毛细管电泳的特殊方法，我们能够判断多重体系中每对引物是否高效、特异地进行扩增，并以此调整，优化多重PCR panel中的引物组成及浓度。最终获得的优化panel数量约为引物数的二十分之一。

3.血液及组织DNA提取、质量检测

(1)新鲜或冷冻血液(需在常温放0.5h以上)颠倒混匀；(2)

(1)取200ul血液加入200ul AL裂解液中，每管加入20ul蛋白酶K，涡旋震荡1min后，放于56-60℃金属浴中消化10-15min，中间需颠倒混匀2-3 次；

(2)取15-20mg组织剪碎，加入ATL组织裂解液及20ul蛋白酶K， 56-60℃金属浴中消化3h，每隔0.5h颠倒混匀1次，vortex 15s，然后加入 200ul AL；

(3)加入200ul 100％乙醇，涡旋震荡30s，全部转移至离心柱中，离心柱放在收集管上，12,000rpm离心1min，弃滤液；

(4)加入500ul wash buffer AW1，12,000rpm离心1min，弃滤液，离心柱放回收集管上；

(5)加入500ul wash buffer AW2，13,300rpm离心3min，弃滤液，离心柱放回收集管上；空管13,300rpm再离心3min；

(6)将离心柱转移至一个新的EP管中，在离心柱膜中央滴入提前预温的洗脱液AE80-100ul，室温放置5-10min；

(7)取1ul洗脱液，使用Nanodrop检测DNA的浓度及纯度 (OD260/280比值)，OD值在1.8～2.0之间视为纯度较高，记录浓度；另取 1ul，和loading buffer混合后，进行琼脂糖凝胶(1.5％)电泳(120V,45min) 分析，看DNA是否有降解及RNA污染，通过质量检测的DNA用于后续试验。

4.样本目标片段多重PCR反应

使用优化后的多重PCR引物panel，以样品基因组为模板，进行多重PCR 扩增。经质控后，将以同一个样品基因组DNA为模板的所有多重PCR引物 panel的扩增产物混合，并确保每个位点引物扩增产物的量相当。

5.样本添加特异性标签序列

利用带有Index序列的引物，通过PCR扩增向文库末端引入和illumina 平台兼容的特异性标签序列。反应采用11个循环数的PCR程序，尽可能降低 PCR的倾向性。

6.定量后上机测序

将所有样品Index PCR扩增产物等量混合，并经割胶回收获得最终的 FastTarget测序文库，文库的片段长度分布经Agilent 2100Bioanalyzer验证。文库摩尔浓度精确定量后，最终于IlluminaHiseq/Miseq平台，以2×150 bp/2×250bp的双端测序模式进行高通量测序，获得FastQ数据。

7.测序结果的信息分析

所有的信息分析都是在分析者不知道患者突变信息的情况下完成的。

1)一般分析(使用的均为开源软件)

(1)下机数据进行过滤去掉低质量的序列，然后去接头后，得到每个样品的.fastq文件；(2)使用FastQC(Babraham Bioinformatics,Cambridge,UK)软件评估数据质量；(3)采用hg19human reference genome(February 2009 assembly)作为参考基因组，使用BWA/GATK将测序得到的序列与参考基因组比对并拼接后得到.bam文件；(4)使用GATK检测snp/indel，得到.vcf文件，包含的样品的变异信息；(5)把包含变异信息的文件(.vcf)使用Annovar[36] 软件进行注释，包括：①基于基因注释(gene-based)：refGene,knownGene,ensGene三个数据库的注释；②基于基因组区域注释(region-based)：phastConsElements46way：phastCons程序基于脊椎动物全基因组对位排列预测的保守区域，way数是指所使用的物种数目；GERP++ELEM：使用GERP++ elements预测的保守区域；genomicSuperDups：基因组的重复片段。③基于过滤信息的注释(filter-based)：esp6500si_all：外显子组测序计划6500个外显子测序结果的遗传变异位点，包括SNP，InDel和Y染色体上的变异； 1000g2012apr_all：千人基因计划2012年4月公布的数据；snp137：dbSNP数据，版本137；snp137Nonflagged：dbSNP数据库(版本137)中和临床不相关的突变位点(common variation)；clinvar_20140211：临床上会引起疾病的变异位点；avsift：针对非同义突变SNP的“有害性”值，数值越小越“有害”，表明该SNP导致蛋白功能改变的可能性大；ljb_pp2(LJB_PolyPhen2)：用于单基因遗传病和复杂疾病的变异位点功能预测，针对非同义突变SNP的“有害性”值，数值越小越“有害”，表明该SNP导致蛋白结构或功能改变的可能性大。

2)突变位点筛选

基于过滤信息的注释进行筛选。具体的筛选过程如下：(1)过滤 dbSNP_nonflagged(MAF在1％以上，和临床不相关的突变位点)；(2)过滤千人基因组数据库(人群中频率大于0.005)变异位点，去除个体间多样性位点，得到真正可能致病的罕见突变(rare)；(3)筛选外显子区(exonic)或剪接位点区(splicing，上下2bp)的变异；(4)去除同义突变(不导致氨基酸编码改变的突变)，得到对基因表达产物有影响的突变；(5)SIFT,PolyPhen2预测影响蛋白功能的非同义突变位点；(6)筛选出的位点为可能有害的突变位点。

3)拷贝数量变异(Copy number variation,CNV)分析及断点分析

使用基于深度的方法(depth-based method)进行拷贝数量变异分析。我们发现对于不同的样本，在同一个基因内，深度的分布是类似的(图1)。由于每个样本得到的测序量不一致导致平均深度不同，我们并不能直接在不同样本间比较某一位置的深度。所以我们引入了一个参数：标准化深度。然后计算该样本与对照样本的的标准化深度比(Normalizeddepth ratio)。图2显示了一个样本的FLCN基因在标准化前后的深度分布比较图。使用GATKDepth of Coverage tool version 3.1得到每个位点的深度结果。(1)把每个样本的外显子的深度标准化，方法为：每个外显子的平均深度除以该样本所有比对到目标区域的reads数。(2)将(1)中得到的标准化的值与对照样本比较，得到结果<0.7视为杂合缺失，>1.3视为杂合重复；(3)为了找到精确的断点，我们对20-bp interval做标准化深度，同样和对照样本比较，连续的<0.7或>1.3视为杂合缺失或重复，而边界处的20-bp interval即为断点处。

8.使用一代测序的方法验证检测到的有害突变位点是否假阳性。

二、实验结果

1.在验证组中成功检测各种突变形式包括：SNVs,Indels及大片段缺失

在验证组的19个PSP患者(F01-F19)中，我们成功检测到了所有已知的突变形式(15种)，诊断率为100％。这些突变形式包括：2个点突变(1个无义突变，1个剪切位点突变)，4个小插入突变及6个小缺失突变(插入/ 缺失的片段大小由1bp到23bp不等)和3个基因内大片段缺失。由于我们二代测序实验结果的假阴性率为0％，故此方法可以应用于临床大规模的筛查，而不用担心该方法可能漏诊。

2.基因内大片段缺失的检测及断点分析

使用基于深度CNV分析方法，我们在不知患者突变信息的情况下，正确地检测出来全部4个FLCN基因内的大片段杂合缺失，包括：1个FLCN基因1-3 号外显子缺失(averagenormalized depth ratio＝0.356)，1个FLCN基因14号外显子缺失(normalized depthratio＝0.601)和2个FLCN基因9-14号外显子缺失 (average normalized depth ratio分别为0.533和0.539)(图3.A-D)。

在成功检出外显子缺失后，为进一步明确该方法能否检出精确断点，我们以20bp为读框计算其标准化深度，然后和对照样品比较，成功测出断点边界，误差在100bp以内(图4.A-D)，和MLPA相比，大大减少了使用一代测序扩增断点连接处的工作量。

三、结论

综上所述，目标序列捕获二代测序不仅成功检测出了错义突变、无义突变、剪切位点突变、内含子branch-site突变、小插入/缺失和基因内大片段缺失各种突变形式，故该发明可以有效诊断BHD。而且通过基于深度分析的方法，能够检测出大片段缺失的断点，误差在100bp以内。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，本发明要求保护范围由所附的权利要求书、说明书及其等效物界定。

序列表

<110> 南京大学（苏州）高新技术研究院台州恩泽医疗中心（集团）

<120> 一种用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的目标基因捕获测序方法及应用

<130> 2018

<160> 572

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列1)

<400> 1

gggactggga gggaagagc 19

<210> 2

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列1)

<400> 2

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<210> 3

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列2)

<400> 3

aacacagttt ccggtggaga aaa 23

<210> 4

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列2)

<400> 4

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<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列3)

<400> 5

gtctgaggga caccaagcac tc 22

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列3)

<400> 6

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<210> 7

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列4)

<400> 7

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<210> 8

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列4)

<400> 8

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<210> 9

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列5)

<400> 9

tgacacatgc agccagacc 19

<210> 10

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列5)

<400> 10

gggactacca gcgcacacc 19

<210> 11

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列6)

<400> 11

gatcgcacca cggcactc 18

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列6)

<400> 12

gccaccactc caggctactt 20

<210> 13

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列7)

<400> 13

ttgcagtgag ccaagactag gt 22

<210> 14

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列7)

<400> 14

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<210> 15

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列8)

<400> 15

tgggtgacag agtgagtgag actt 24

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列8)

<400> 16

accttygcct cctaggttca 20

<210> 17

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列9)

<400> 17

aacatggcaa aaccccattt ct 22

<210> 18

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列9)

<400> 18

gtgcctagca aacactcagg aca 23

<210> 19

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列10)

<400> 19

ccctcgagcc ctggtcac 18

<210> 20

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列10)

<400> 20

ttccacgagt ttaaggaagg ttttt 25

<210> 21

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列11)

<400> 21

gccaagactg cgcaactg 18

<210> 22

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列11)

<400> 22

agcaccagcc ctccattc 18

<210> 23

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列12)

<400> 23

cccattgctt tctgggtgtg 20

<210> 24

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列12)

<400> 24

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<210> 25

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列13)

<400> 25

cccctgttac ggatccaaaa gtc 23

<210> 26

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列13)

<400> 26

cgtatctcag caggaggaca gg 22

<210> 27

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列14)

<400> 27

catgcctgga actgcttctt c 21

<210> 28

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列14)

<400> 28

tcggagtgca cctacagagc 20

<210> 29

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列15)

<400> 29

aggcaggtgt gggagtcag 19

<210> 30

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列15)

<400> 30

gagcagggga gcaagtgga 19

<210> 31

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列16)

<400> 31

tcaggaatgc tccacacacc 20

<210> 32

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列16)

<400> 32

ccctagattc cgcccctttc t 21

<210> 33

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列17)

<400> 33

cgtgttagat aaatgagagg actgagaa 28

<210> 34

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列17)

<400> 34

acctttcctt tgggtcctgc tac 23

<210> 35

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列18)

<400> 35

tggcttaaaa atctactgct caaca 25

<210> 36

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列18)

<400> 36

gcctcgtgtg tggtggtct 19

<210> 37

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列19)

<400> 37

gcagagcacc cacactaacc t 21

<210> 38

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列19)

<400> 38

attcagaacc ctggggagtg tc 22

<210> 39

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列20)

<400> 39

gggagcagct tacagccagt c 21

<210> 40

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列20)

<400> 40

aaactcatgg gctgaagcaa tc 22

<210> 41

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列21)

<400> 41

accctccctc aagctgttgt c 21

<210> 42

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列21)

<400> 42

tgaactcctg acttcgtgat cc 22

<210> 43

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列22)

<400> 43

attttagctg aactcttgca yctct 25

<210> 44

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列22)

<400> 44

cccaaagtgc crgggtta 18

<210> 45

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列23)

<400> 45

tcagcccatg agtttgagac c 21

<210> 46

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列23)

<400> 46

tcaggttcac gccattctcc 20

<210> 47

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列24)

<400> 47

tgcaagttcc catctttcct ttt 23

<210> 48

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列24)

<400> 48

acttagggag gctgaggtag gtg 23

<210> 49

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列25)

<400> 49

gtgtctgcca ccacacctg 19

<210> 50

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列25)

<400> 50

tctcctgctt gagaaggaaa ctg 23

<210> 51

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列26)

<400> 51

catctacatc acaccaactt acttttca 28

<210> 52

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列26)

<400> 52

cacggccata attccagcta c 21

<210> 53

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列27)

<400> 53

ccaacttact tttcaggcca tagg 24

<210> 54

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列27)

<400> 54

gcacggccat aattccagct ac 22

<210> 55

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列28)

<400> 55

tttgcggaag ggtctcattc t 21

<210> 56

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列28)

<400> 56

cgaggaggcg ggagaatc 18

<210> 57

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列29)

<400> 57

acgccaagaa gaaagaaaaa cct 23

<210> 58

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列29)

<400> 58

ttgaactcct gacttcgtga tcc 23

<210> 59

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列30)

<400> 59

caaggagggc agatcaccta a 21

<210> 60

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列30)

<400> 60

acctcgtgat ctgcccacct 20

<210> 61

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列31)

<400> 61

tggtggtgca tgcctgtaa 19

<210> 62

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列31)

<400> 62

ctccgcttcc aggctcaaac 20

<210> 63

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列32)

<400> 63

ctccagcctg ggcaataaga 20

<210> 64

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列32)

<400> 64

cgtctgacaa gtgcttttgc tttc 24

<210> 65

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列33)

<400> 65

gaagcggagg tggcagtg 18

<210> 66

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列33)

<400> 66

tgggtggtat tcagagaggt ctagtaa 27

<210> 67

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列34)

<400> 67

ggagcctgcc ctcaccag 18

<210> 68

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列34)

<400> 68

agactgtcag ccagggcatt t 21

<210> 69

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列35)

<400> 69

caatctctac caggtgtttg ctgaa 25

<210> 70

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列35)

<400> 70

gtgctatgag aacaccatag gaagtagg 28

<210> 71

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列36)

<400> 71

aattccctga tgtggyagag tgtctg 26

<210> 72

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列36)

<400> 72

ggatcccagc tgctaactta atg 23

<210> 73

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列37)

<400> 73

acacagcttc tataactagt ctcccactg 29

<210> 74

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列37)

<400> 74

cgtggtcatc aagtaattga gtaatagtgg 30

<210> 75

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列38)

<400> 75

ccaaggtggg cggatcac 18

<210> 76

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列38)

<400> 76

ccccaccccg ctttttattt ta 22

<210> 77

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列39)

<400> 77

ccactgggga gcctcattaa gt 22

<210> 78

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列39)

<400> 78

aggaggagct tgctggaagt ag 22

<210> 79

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列40)

<400> 79

ggaggacacg gtgctaccct att 23

<210> 80

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列40)

<400> 80

ccgagaccct gagatttgaa gatag 25

<210> 81

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列41)

<400> 81

aacatcaaat gagatcacag tcctcatccc cataga 36

<210> 82

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列41)

<400> 82

cgaccaccta cccagcgcag tcag 24

<210> 83

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列42)

<400> 83

ccctccgcca acccctcaga cc 22

<210> 84

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列42)

<400> 84

cgagtgagtg tggtcgctcc tggt 24

<210> 85

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列43)

<400> 85

cggggtggcg aggctctcaa g 21

<210> 86

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列43)

<400> 86

tcccagtcag acctcggagt tgtagga 27

<210> 87

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列44)

<400> 87

agcctgggca acaagagc 18

<210> 88

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列44)

<400> 88

acgtccgcca ctgcaaag 18

<210> 89

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列45)

<400> 89

gcttccatta tgaaccctcc tgt 23

<210> 90

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列45)

<400> 90

tgcttgcgac cctggaga 18

<210> 91

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列46)

<400> 91

tctcggctcc tccctcagt 19

<210> 92

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列46)

<400> 92

ctaacgcctg cccttgctct 20

<210> 93

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列47)

<400> 93

cgcttcaatc ttattcagga tggt 24

<210> 94

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列47)

<400> 94

ccacgggcct tgtgttgt 18

<210> 95

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列48)

<400> 95

tgagagactg gtcatcctca cac 23

<210> 96

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列48)

<400> 96

aacccttaac tattcacgaa taacctg 27

<210> 97

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列48)

<400> 97

cgctcatccc aggtcagtg 19

<210> 98

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列49)

<400> 98

caaattctta ccactacgag caggtt 26

<210> 99

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列50)

<400> 99

gcgcaaataa atagtaggca tcaaac 26

<210> 100

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列50)

<400> 100

cctcctgctt caacatacag ctac 24

<210> 101

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列51)

<400> 101

gggaaacagg cctggagac 19

<210> 102

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列51)

<400> 102

tggtcagggc tcagcaaac 19

<210> 103

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列52)

<400> 103

ctggacatcc ccaaaccaaa ag 22

<210> 104

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列52)

<400> 104

cgtggggtgg gaggatgt 18

<210> 105

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列53)

<400> 105

tcataggcac ccaatcacca g 21

<210> 106

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列53)

<400> 106

cctcaggccc aaagtggaac 20

<210> 107

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列54)

<400> 107

ctccggccag ggacacat 18

<210> 108

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列54)

<400> 108

cccccacgtg ctctcctc 18

<210> 109

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列55)

<400> 109

cgctacctgt gtgaagatag aacac 25

<210> 110

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列55)

<400> 110

catacagcag ccagtacgag gag 23

<210> 111

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列56)

<400> 111

gctgagcccc aggaagttg 19

<210> 112

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列56)

<400> 112

tccagacaag agttagggac ctg 23

<210> 113

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列57)

<400> 113

aaaccccaca cgcctcct 18

<210> 114

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列57)

<400> 114

ggcctgagag ggaacaaaaa tg 22

<210> 115

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列58)

<400> 115

ggcctgagag ggaacaaaaa tg 22

<210> 116

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列58)

<400> 116

ggtgagaaca tcttttcctt aggtgtg 27

<210> 117

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列59)

<400> 117

ttggcatccc cacctgac 18

<210> 118

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列59)

<400> 118

tgctctacaa agttttatga acacaca 27

<210> 119

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列60)

<400> 119

ggcacccagg acctaaacaa 20

<210> 120

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列60)

<400> 120

gcaagagctt tggaatctag catttat 27

<210> 121

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列61)

<400> 121

aaacaaatca gcaaaaccat cagaaa 26

<210> 122

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列61)

<400> 122

ccgggctggt ctcaaact 18

<210> 123

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列62)

<400> 123

ggcasagaga gaagttccag gtt 23

<210> 124

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列62)

<400> 124

gtgcacacgg ctggatgt 18

<210> 125

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列63)

<400> 125

tctccacagc tgagaccatg ac 22

<210> 126

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列63)

<400> 126

agacagcagg ctggactctc ctaa 24

<210> 127

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列64)

<400> 127

cccacctgtt attaacttcc atgac 25

<210> 128

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列64)

<400> 128

ccttggggct tctggatgt 19

<210> 129

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列65)

<400> 129

acataagcaa cggacaagga aggt 24

<210> 130

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列65)

<400> 130

acgacaaaat ctaacagtgt tgtctcc 27

<210> 131

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列66)

<400> 131

atggtttgat atgcaagttg ttcctaa 27

<210> 132

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列66)

<400> 132

ggatcacgag gtcaggagtt c 21

<210> 133

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列67)

<400> 133

gccaccatgc ccagctaa 18

<210> 134

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列67)

<400> 134

ttggcatccc atggtcctc 19

<210> 135

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列68)

<400> 135

gcatccaaac caattacagt gct 23

<210> 136

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列68)

<400> 136

gcatcaggag ctcaggagga g 21

<210> 137

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列69)

<400> 137

tcacttcctg cagggttttg aag 23

<210> 138

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列69)

<400> 138

ctgggacaac tctgaggctg aa 22

<210> 139

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列70)

<400> 139

tggcaacaca ggggctttc 19

<210> 140

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列70)

<400> 140

cgggctaagt agacagcaac tga 23

<210> 141

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列71)

<400> 141

ggctgaggtg ggtggatca 19

<210> 142

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列71)

<400> 142

gattgaagac aatttcatca tcccact 27

<210> 143

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列72)

<400> 143

gcaacacagg ggctttctcc 20

<210> 144

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列72)

<400> 144

ccgggctaag tagacagcaa ctg 23

<210> 145

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列73)

<400> 145

gctgcggcca ggtcctat 18

<210> 146

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列73)

<400> 146

acgtgtagat cctcgagaac tgtg 24

<210> 147

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列74)

<400> 147

ctggtgagaa aactcaaatc agtaaga 27

<210> 148

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列74)

<400> 148

cggacatggt ggcaggtg 18

<210> 149

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列75)

<400> 149

gccccagcct cccaagta 18

<210> 150

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列75)

<400> 150

ctatctgggc atattacttc ctgtggt 27

<210> 151

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列76)

<400> 151

gctgcgtggt gctaaagttt g 21

<210> 152

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列76)

<400> 152

gaaggcttcg ttgggagga 19

<210> 153

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列77)

<400> 153

ggcacgatca cggcttact 19

<210> 154

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列77)

<400> 154

aaatgatgtt ggatgtagcc ataaagaa 28

<210> 155

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列78)

<400> 155

cctcaatctt ctgggctcaa gt 22

<210> 156

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列78)

<400> 156

cagaacagct gagaggacta aatgaaa 27

<210> 157

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列79)

<400> 157

gtgcctgact tcgttcttta tgg 23

<210> 158

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列79)

<400> 158

catgcgcagt atggggtttc 20

<210> 159

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列80)

<400> 159

ggaagggtgc acgtcagaa 19

<210> 160

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列80)

<400> 160

ggaaagacaa agcctgggaa tc 22

<210> 161

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列81)

<400> 161

cgtgctaaaa agctcaccaa gaca 24

<210> 162

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列81)

<400> 162

atgcttctgc ttgcaaatga cc 22

<210> 163

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列82)

<400> 163

ccagcctggg caacaagag 19

<210> 164

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列82)

<400> 164

tgcaggtgct ggtgaaggt 19

<210> 165

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列83)

<400> 165

tgcacctgcc tgcagaaac 19

<210> 166

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列83)

<400> 166

ggcttcccca ggttcctgat 20

<210> 167

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列84)

<400> 167

taccacagac ctgtagcacc aaga 24

<210> 168

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列84)

<400> 168

ccgattttgt gatagccaag tgc 23

<210> 169

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列85)

<400> 169

tgggacgaac tgaaacagaa cac 23

<210> 170

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列85)

<400> 170

gagggaaacg cggctctg 18

<210> 171

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列86)

<400> 171

cgagacagga aatcacaaca atcac 25

<210> 172

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列86)

<400> 172

accgagaagc tcctggaagg t 21

<210> 173

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列87)

<400> 173

ttctccatct ggaccaaggt atc 23

<210> 174

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列87)

<400> 174

ctccaagttc ctcccatcca tct 23

<210> 175

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列88)

<400> 175

aggcagttcc acaagtcaac gac 23

<210> 176

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列88)

<400> 176

tgagtcgtat cattccagcc ataaa 25

<210> 177

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列89)

<400> 177

gcaaggggga gctgttctaa 20

<210> 178

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列89)

<400> 178

tgcctcagcc tcccagagt 19

<210> 179

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列90)

<400> 179

cagtattgtg attatattta tggctggaat g 31

<210> 180

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列90)

<400> 180

ggaactcact tcttcctggg ttca 24

<210> 181

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列91)

<400> 181

gctgggtgtg gtgacagg 18

<210> 182

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列91)

<400> 182

agtcacgata cattggttgg cttgt 25

<210> 183

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列92)

<400> 183

agcaaacacg gctaaggact g 21

<210> 184

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列92)

<400> 184

cttccctttg catttcaggt gt 22

<210> 185

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列93)

<400> 185

gcaacctgtc ttgtgcaaaa atg 23

<210> 186

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列93)

<400> 186

agcaagagtt tctgggcctt atg 23

<210> 187

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列94)

<400> 187

cgctgtgggc atccaaact 19

<210> 188

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列94)

<400> 188

cattaggaag gggacaggag aag 23

<210> 189

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列95)

<400> 189

ccaatcattc ccaacagcat agc 23

<210> 190

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列95)

<400> 190

tgccctccag aagcacaga 19

<210> 191

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列96)

<400> 191

tggtcaatga gctgagacaa acaa 24

<210> 192

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列96)

<400> 192

catggtggtg catgcctgt 19

<210> 193

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列97)

<400> 193

aacctctgcc tcatgggttc 20

<210> 194

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列97)

<400> 194

tggggctctg cttgctgt 18

<210> 195

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列98)

<400> 195

caccaccatg cccagcta 18

<210> 196

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列98)

<400> 196

gcctcggatc tcagcacctt 20

<210> 197

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列99)

<400> 197

gcaatgcaca caycatgagt aaga 24

<210> 198

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列99)

<400> 198

cgcctgcttt gctggtct 18

<210> 199

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列100)

<400> 199

agagctgagc gagaaccagg ac 22

<210> 200

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列100)

<400> 200

ggaaggtccg gggaatcatc 20

<210> 201

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列101)

<400> 201

acagagcggc tcatgcagt 19

<210> 202

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列101)

<400> 202

ccgtgaaggc cccatctt 18

<210> 203

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列102)

<400> 203

caaagccgtg ctgctcatc 19

<210> 204

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列102)

<400> 204

cccttgcagt ccacaatgac 20

<210> 205

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列103)

<400> 205

cgactcagac agccctttcc tc 22

<210> 206

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列103)

<400> 206

tacatttgag tctgggagag gtgt 24

<210> 207

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列104)

<400> 207

ccaagagctg gcaatgtact gaa 23

<210> 208

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列104)

<400> 208

atcgctgaag atggcaatga aag 23

<210> 209

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列105)

<400> 209

caacacttgt cattgtggac tgc 23

<210> 210

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列105)

<400> 210

cagcctgggt gacaagagc 19

<210> 211

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列106)

<400> 211

cactgaaatc cgcacatttt attcttt 27

<210> 212

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列106)

<400> 212

gccggcagat cacctgag 18

<210> 213

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列107)

<400> 213

ctgagtagct gggattgtaa gagtgtg 27

<210> 214

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列107)

<400> 214

gcagctcggc atgtctgtt 19

<210> 215

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列108)

<400> 215

cctcattaca tacttactct tccttaacac a 31

<210> 216

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列108)

<400> 216

tgctgaggtg tggatgattt ct 22

<210> 217

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列109)

<400> 217

acagtaaggg agcttggtgt gtc 23

<210> 218

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列109)

<400> 218

ggaagcattt ctaggttagg tggt 24

<210> 219

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列110)

<400> 219

gcacgggatc atcactgaga ctt 23

<210> 220

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列110)

<400> 220

agccactgtg ccccacct 18

<210> 221

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列111)

<400> 221

caacctgggc aacatactga ga 22

<210> 222

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列111)

<400> 222

cctccaccct gggtttaagt ga 22

<210> 223

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列112)

<400> 223

gcttgagccc aggagtttga g 21

<210> 224

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列112)

<400> 224

cagcacagca cagggtacag g 21

<210> 225

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列113)

<400> 225

agaaaatgct cagcaagtcc aaca 24

<210> 226

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列113)

<400> 226

cccagctctt cagcattgtc c 21

<210> 227

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列114)

<400> 227

cctagtcgtc tctccaagga gttt 24

<210> 228

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列114)

<400> 228

cgtcacacac acctgcctaa a 21

<210> 229

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列115)

<400> 229

cagtgcctgc ctccctgt 18

<210> 230

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列115)

<400> 230

cagggctgcc ggtcactt 18

<210> 231

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列116)

<400> 231

gacgtattta atggaggtct ctttatca 28

<210> 232

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列116)

<400> 232

tctctgcgat ctctgtgttc tgttt 25

<210> 233

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列117)

<400> 233

gcaaatctga gctcggaaaa ct 22

<210> 234

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列117)

<400> 234

ctcacttcag cctcagtttt gtct 24

<210> 235

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列118)

<400> 235

gctccatctc attcaatccc aagt 24

<210> 236

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列118)

<400> 236

gctgccacac caacatcct 19

<210> 237

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列119)

<400> 237

agcctccatc attggttctg a 21

<210> 238

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列119)

<400> 238

gggcatcctt gagctggttt t 21

<210> 239

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列120)

<400> 239

cagcaagact ctccycacag 20

<210> 240

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列120)

<400> 240

ccaaaatcag gggtgggtgt 20

<210> 241

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列121)

<400> 241

ggatgcagct cttacacgtc ctc 23

<210> 242

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列121)

<400> 242

tccccaaagt cccgtgct 18

<210> 243

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列122)

<400> 243

tgcagcagaa ccaaaagaac aag 23

<210> 244

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列122)

<400> 244

ctgccgtggc cttcatgtt 19

<210> 245

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列123)

<400> 245

tgggagcacg ggactttg 18

<210> 246

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列123)

<400> 246

agcctcccga ataacgaatt aca 23

<210> 247

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列124)

<400> 247

ggcaggcaag tgtaattcgt tattc 25

<210> 248

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列124)

<400> 248

aggtgtggga tggacaggag 20

<210> 249

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列125)

<400> 249

tcccttcctt gctgggacac 20

<210> 250

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列125)

<400> 250

cgacccaaag aggacacaca 20

<210> 251

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列126)

<400> 251

tcaggatgag cggaaagaac tg 22

<210> 252

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列126)

<400> 252

gggtgagcag gcggaaga 18

<210> 253

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列127)

<400> 253

cgcacgcatc cgactgtt 18

<210> 254

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列127)

<400> 254

aggggctggg gaggtttc 18

<210> 255

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列128)

<400> 255

gctcgcagaa gtggcagag 19

<210> 256

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列128)

<400> 256

gtcccctccc ctatttgctg t 21

<210> 257

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列129)

<400> 257

cagtgcgaga ggaacagaga tagg 24

<210> 258

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列129)

<400> 258

ggcccacatg gagcaggt 18

<210> 259

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列130)

<400> 259

acctggcaaa ccctgtgaga ac 22

<210> 260

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列130)

<400> 260

ccaccctgcc cttcaactct 20

<210> 261

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列131)

<400> 261

ccctcatgca gcttacctcc t 21

<210> 262

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列131)

<400> 262

tctctgataa cacatccagg gtctt 25

<210> 263

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列132)

<400> 263

cagggtggag gctgtagga 19

<210> 264

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列132)

<400> 264

cactgtccct tcctgctcag at 22

<210> 265

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列133)

<400> 265

gggtggaggt ggggaaca 18

<210> 266

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列133)

<400> 266

gtcatgttgg ctagctgtcc tc 22

<210> 267

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列134)

<400> 267

gctttagcaa ggtgggactg g 21

<210> 268

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列134)

<400> 268

atcgccacct tccgtctc 18

<210> 269

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列135)

<400> 269

gcagcttgac attgtcctcc tc 22

<210> 270

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列135)

<400> 270

tgggacacag ctcctttcag 20

<210> 271

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列136)

<400> 271

gggtcatggc tggtatctgg t 21

<210> 272

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列136)

<400> 272

atccctccca tgttttctct gagt 24

<210> 273

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列137)

<400> 273

ccagatgctc catgaacaca gt 22

<210> 274

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列137)

<400> 274

cctcttcatg ggaaaagtgg tga 23

<210> 275

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列138)

<400> 275

acatgcaggc agggacca 18

<210> 276

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列138)

<400> 276

gtgctgacca tcgacgagaa a 21

<210> 277

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列139)

<400> 277

catgggtatg gcctctaaaa acat 24

<210> 278

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列139)

<400> 278

cgcttgtcag gaagatggac ag 22

<210> 279

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列140)

<400> 279

cccccacaca ttcttcccta c 21

<210> 280

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列140)

<400> 280

ggtgggtccc agaagaacaa g 21

<210> 281

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列141)

<400> 281

gcctcattct ggaagccaag t 21

<210> 282

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列141)

<400> 282

atgccaccgc catcttctt 19

<210> 283

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列142)

<400> 283

ttcattttcc aggaacttgg tga 23

<210> 284

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列142)

<400> 284

aagtcaagga caccgaggaa gag 23

<210> 285

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列143)

<400> 285

aaacatgcct aaacgcttca tca 23

<210> 286

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列143)

<400> 286

cgagggatgt gtgtcgtcaa 20

<210> 287

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列144)

<400> 287

ggtttgagaa tatttttgct tgtttctatg 30

<210> 288

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列144)

<400> 288

aagctagtgg ataagttttt ggagga 26

<210> 289

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列145)

<400> 289

tgaaggcttc tgagtggtac aactttt 27

<210> 290

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列145)

<400> 290

accaatatct tcttctcccc agtg 24

<210> 291

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列146)

<400> 291

accaatatct tcttctcccc agtg 24

<210> 292

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列146)

<400> 292

sgtgaagtcg ccaaacctct 20

<210> 293

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列147)

<400> 293

caggatttca tcgtgagtgt cag 23

<210> 294

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列147)

<400> 294

ctgcctggtc cctgtctcc 19

<210> 295

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列148)

<400> 295

agccaggttg ggggtgat 18

<210> 296

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列148)

<400> 296

gcacttccac gtggtgtcaa 20

<210> 297

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列149)

<400> 297

gcggataccc actccacaac 20

<210> 298

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列149)

<400> 298

acttagcccc tgtttgctcc tc 22

<210> 299

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列150)

<400> 299

tgcctgggca gtgtacagc 19

<210> 300

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列150)

<400> 300

atgggctcta acccactctg atc 23

<210> 301

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列151)

<400> 301

gcacaatgac ccccactcta ag 22

<210> 302

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列151)

<400> 302

cagagtcctg agctgaacca aga 23

<210> 303

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列152)

<400> 303

ctgaaggctg gcaggaggt 19

<210> 304

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列152)

<400> 304

ctgagtttat gagggcccag tct 23

<210> 305

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列153)

<400> 305

aaagctcata artgcaagaa atgtagtt 28

<210> 306

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列153)

<400> 306

ctgacagcct ttcactctcc ac 22

<210> 307

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列154)

<400> 307

ggcttggtga tggccatatc tt 22

<210> 308

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列154)

<400> 308

ccatcccaaa ctaatctagg aatcactg 28

<210> 309

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列155)

<400> 309

tgaactatcg aaatcactat ttggtatgac 30

<210> 310

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列155)

<400> 310

ctgtggtaag ggccaggaga 20

<210> 311

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列156)

<400> 311

ggacttcctg gctgctgtgt 20

<210> 312

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列156)

<400> 312

ttgcaaggac tcctcagcta tg 22

<210> 313

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列157)

<400> 313

gggtcaatgg gtgatgtgct 20

<210> 314

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列157)

<400> 314

cccagaaagc ctcacatatc tcc 23

<210> 315

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列158)

<400> 315

aggagataga gaaaacaaag cagagacc 28

<210> 316

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列158)

<400> 316

gccgtggccc agttttgt 18

<210> 317

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列159)

<400> 317

gcctcagtca ttttccagaa gtg 23

<210> 318

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列159)

<400> 318

cctgctcatc ccccactc 18

<210> 319

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列160)

<400> 319

cgggtcaaga ggaggacatt 20

<210> 320

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列160)

<400> 320

gctccagtct tccttgtcct gtct 24

<210> 321

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列161)

<400> 321

cggcatggaa gagacaggaa c 21

<210> 322

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列161)

<400> 322

acccgcaaca agtattggaa aaa 23

<210> 323

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列162)

<400> 323

gtcacagaac tctggatgta aacagata 28

<210> 324

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列162)

<400> 324

acaggctgga ggagggtttg 20

<210> 325

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列163)

<400> 325

gcagcttcct tctccaggtg 20

<210> 326

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列163)

<400> 326

gaatttctac caaatagtag agcataccac 30

<210> 327

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列164)

<400> 327

tttgtttgct cttcggttct ttc 23

<210> 328

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列164)

<400> 328

gcaacagcac acatagtttc tggtatattt 30

<210> 329

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列165)

<400> 329

tacatcctcc cctcaacaac tg 22

<210> 330

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列165)

<400> 330

gcgagaggtg agctactttg tg 22

<210> 331

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列166)

<400> 331

gccctgcttt tacccagtaa tgt 23

<210> 332

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列166)

<400> 332

ggtgggcaga cagtgacct 19

<210> 333

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列167)

<400> 333

caccttctca gaacagtttg gact 24

<210> 334

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列167)

<400> 334

ccaaaggtag gaaggtcaag gtc 23

<210> 335

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列168)

<400> 335

cgcagcttag tcccaaaggt c 21

<210> 336

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列168)

<400> 336

ggattttcaa aaagccgttg ac 22

<210> 337

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列169)

<400> 337

aggacatctt tcacaacttc tccatct 27

<210> 338

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列169)

<400> 338

aattccttta aaaaggtgca ctacagtt 28

<210> 339

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列170)

<400> 339

gctcatttgc tctgcgtctt c 21

<210> 340

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列170)

<400> 340

gcagagtcta ccttgaaacc aattaag 27

<210> 341

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列171)

<400> 341

tgtcaggctc ctcttccagt c 21

<210> 342

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列171)

<400> 342

ccataaatat gaactgcagg ataaaatggt 30

<210> 343

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列172)

<400> 343

ccataaatat gaactgcagg ataaaatggt 30

<210> 344

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列172)

<400> 344

tggtttggtt ttggacatga taaac 25

<210> 345

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列173)

<400> 345

tttccatcct tagaactacc cactgc 26

<210> 346

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列173)

<400> 346

taacaaatgt ggctccaagc tc 22

<210> 347

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列174)

<400> 347

aacccacagc ctcctagaac tca 23

<210> 348

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列174)

<400> 348

ggcacttaaa gccttttcct gaat 24

<210> 349

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列175)

<400> 349

tccatgctgc ctcctttctt 20

<210> 350

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列175)

<400> 350

aaagcttaaa acccaataca gtctagtttc 30

<210> 351

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列176)

<400> 351

cttttgcact tgggcctctt 20

<210> 352

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列176)

<400> 352

ctgaattgtc agatgtggag tattagtg 28

<210> 353

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列177)

<400> 353

atgggatttc cttccctttc taagt 25

<210> 354

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列177)

<400> 354

agctatacca gcagaaaacc tgttca 26

<210> 355

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列178)

<400> 355

cagcctgtgc taggctgagt agtt 24

<210> 356

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列178)

<400> 356

aactgtcacg gtacgaaatc ttagtg 26

<210> 357

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列179)

<400> 357

ctgccacagg ctgggaatc 19

<210> 358

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列179)

<400> 358

gtgaacttgg ctttcctgtt tctatc 26

<210> 359

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列180)

<400> 359

ggatgctaga atatttattg ccatgcta 28

<210> 360

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列180)

<400> 360

ggcagagaat ccaaactcaa caag 24

<210> 361

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列181)

<400> 361

ctctttatga ctgaatcctt ctattctttt t 31

<210> 362

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列181)

<400> 362

cgggagaatg ctggcaaag 19

<210> 363

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列182)

<400> 363

cagtgtaagc cactccatgt cc 22

<210> 364

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列182)

<400> 364

tttagttaaa ttgaagaaag tcagctcttg 30

<210> 365

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列183)

<400> 365

cagttcttag gcttctagcr tttctttc 28

<210> 366

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列183)

<400> 366

cctcactgta gcaggttcta ggctac 26

<210> 367

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列184)

<400> 367

gtggggcagc ctagtgggta t 21

<210> 368

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列184)

<400> 368

agcttatatg tgacactgca gcagaaa 27

<210> 369

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列185)

<400> 369

tctgccatta ctaacatgga gagtgtg 27

<210> 370

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列185)

<400> 370

ttctgtctac tggcctccct ttgt 24

<210> 371

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列186)

<400> 371

cctgggaaat gatggtcaca tac 23

<210> 372

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列186)

<400> 372

ggctggtgtg taggtggtaa aa 22

<210> 373

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列187)

<400> 373

agcaagctga gatggcctaa a 21

<210> 374

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列187)

<400> 374

tgataagctt cctagaaagt tctgtgtaaa 30

<210> 375

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列188)

<400> 375

ggtgtgtggt ctccacagtg c 21

<210> 376

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列188)

<400> 376

gctctcaatt agaccaggta gtttgtt 27

<210> 377

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列189)

<400> 377

tgcaagtatg aataaaccgt tgttct 26

<210> 378

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列189)

<400> 378

tcctttgaac ctgtgcaata tgag 24

<210> 379

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列190)

<400> 379

acaaccagct ttgcaggcta tg 22

<210> 380

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列190)

<400> 380

cctaaccccc tctcatttac ctc 23

<210> 381

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列191)

<400> 381

agcagaaagt ggtgtgttag actcaa 26

<210> 382

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列191)

<400> 382

ccagggtctg agtgcaagtt cat 23

<210> 383

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列192)

<400> 383

aactggccct tggattagaa ca 22

<210> 384

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列192)

<400> 384

catgaacaca gctaaggaat gatggt 26

<210> 385

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列193)

<400> 385

ggattgttga catgctttta ggattg 26

<210> 386

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列193)

<400> 386

ccacgcattt tgcactagga 20

<210> 387

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列194)

<400> 387

ggaaggtcaa gaggcatttc a 21

<210> 388

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列194)

<400> 388

gttggacagc tacatatcat ggactac 27

<210> 389

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列195)

<400> 389

aggacctccg tcccatttc 19

<210> 390

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列195)

<400> 390

actgggcaaa gacttgggtg t 21

<210> 391

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列196)

<400> 391

ctttgaaacg tgcattcaca cc 22

<210> 392

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列196)

<400> 392

gtaataagag cgagagccag tgtg 24

<210> 393

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列197)

<400> 393

ggctctcaga aaggctactg gtc 23

<210> 394

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列197)

<400> 394

gggcagtagt ggaagcagag g 21

<210> 395

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列198)

<400> 395

gggtttctct ggggtagaaa gctc 24

<210> 396

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列198)

<400> 396

agcggagttc agtgtcagtg tg 22

<210> 397

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列199)

<400> 397

gttgtggcca gatgcctctt c 21

<210> 398

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列199)

<400> 398

tcacacttaa gattgccacc tactatcc 28

<210> 399

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列200)

<400> 399

ttgaggaaag gaacgtcaga gtg 23

<210> 400

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列200)

<400> 400

ttggagatct tagatttata tggcaggt 28

<210> 401

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列201)

<400> 401

cagcttagtc ccaaggtcat gaa 23

<210> 402

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列201)

<400> 402

tccaggcaag gtaactttca tca 23

<210> 403

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列202)

<400> 403

tccaattcaa acacctgggt tatc 24

<210> 404

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列202)

<400> 404

acggattttg gaactggaat ctc 23

<210> 405

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列203)

<400> 405

tccaaaagaa ggtggtcttt cttg 24

<210> 406

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列203)

<400> 406

aaaatgcctt ctcagtcctt cttaca 26

<210> 407

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列204)

<400> 407

ttcactgatg ggaccccttt aaact 25

<210> 408

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列204)

<400> 408

ccctcccttt ccccacct 18

<210> 409

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列205)

<400> 409

tggctggaaa gtgcttgtat agc 23

<210> 410

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列205)

<400> 410

cagcagcaga tggagttctt ga 22

<210> 411

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列206)

<400> 411

tctgagtgct tgttctgcag ttg 23

<210> 412

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列206)

<400> 412

gccattatgt cagggactgt gaa 23

<210> 413

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列207)

<400> 413

gaacccatga cacagacact caag 24

<210> 414

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列207)

<400> 414

gtggctaggt aggcctgtga tct 23

<210> 415

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列208)

<400> 415

tgaagaattt ctgccatgat ttca 24

<210> 416

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列208)

<400> 416

aggagcagcg tgacactatg gta 23

<210> 417

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列209)

<400> 417

cctggtgctg cagtttatac ctg 23

<210> 418

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列209)

<400> 418

agatgaaatg ttcgcagtgt gtgt 24

<210> 419

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列210)

<400> 419

atcatgctga cccaaaacaa aac 23

<210> 420

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列210)

<400> 420

gggcttgatt gaaccatctg taa 23

<210> 421

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列211)

<400> 421

caatagccaa ggggagatct gtt 23

<210> 422

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列211)

<400> 422

cagattttga ccacaaggaa gtga 24

<210> 423

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列212)

<400> 423

tgcctcaagg tgggagtgtg 20

<210> 424

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列212)

<400> 424

ctgaggagct gttaaagaaa gcaaaa 26

<210> 425

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列213)

<400> 425

ggaggtagag ggcacaccat 20

<210> 426

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列213)

<400> 426

gcggcagtgc tgatgaaag 19

<210> 427

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列214)

<400> 427

tttacaagga ctgggagtga agatac 26

<210> 428

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列214)

<400> 428

gaggctttga ctctcccttt tacc 24

<210> 429

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列215)

<400> 429

agcaccatac cctcctgtcc 20

<210> 430

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列215)

<400> 430

ctgctcgcct gagggaaga 19

<210> 431

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列216)

<400> 431

cagggaggag tgtaaaggct cag 23

<210> 432

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列216)

<400> 432

aaactgccta gtctttccca ggt 23

<210> 433

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列217)

<400> 433

agatttatag cagagcgagg gtca 24

<210> 434

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列217)

<400> 434

cagccttctc tgttcagcat ga 22

<210> 435

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列218)

<400> 435

tttggatatc ccagaatttc cttgt 25

<210> 436

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列218)

<400> 436

actgcactcg gctgaccttt aa 22

<210> 437

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列219)

<400> 437

caaagtgagg cttgcaagtg agt 23

<210> 438

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列219)

<400> 438

taggctgaaa aaaaatcggc agt 23

<210> 439

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列220)

<400> 439

aaagagagct cctcctgcca tta 23

<210> 440

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列220)

<400> 440

acactggcca tggatataaa cctc 24

<210> 441

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列221)

<400> 441

gacccaaagg gtcagcttca c 21

<210> 442

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列221)

<400> 442

caaatggtct agaggaccat ctttttt 27

<210> 443

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列222)

<400> 443

agaaaatgga gggacatgca aat 23

<210> 444

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列222)

<400> 444

agcctcatat gaagatggct attctg 26

<210> 445

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列223)

<400> 445

tgtgtcagca taagggctgg t 21

<210> 446

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列223)

<400> 446

ctggcactga gttgacactc tga 23

<210> 447

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列224)

<400> 447

gctgtatgag tgcttccaag tgg 23

<210> 448

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列224)

<400> 448

ccatcatttg gatgttccac aa 22

<210> 449

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列225)

<400> 449

aaaggtataa atgcagccta tctaaacagt 30

<210> 450

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列225)

<400> 450

tttgcactcc tcaatctgtc tcc 23

<210> 451

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列226)

<400> 451

tcagggtttc cactgaaagg tc 22

<210> 452

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列226)

<400> 452

gtggcttgtt tgcctgtcc 19

<210> 453

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列227)

<400> 453

taatcaataa tgaaagcatt cacctcac 28

<210> 454

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列227)

<400> 454

tactgtacaa tgccgatcct ggt 23

<210> 455

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列228)

<400> 455

tgagaaaagc caaatgccta gaag 24

<210> 456

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列228)

<400> 456

tcctctcgtt actgggtcat gtc 23

<210> 457

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列229)

<400> 457

agaaggcaaa agaggtgctt gag 23

<210> 458

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列229)

<400> 458

tctgcatgac ccttgcttta cat 23

<210> 459

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列230)

<400> 459

aagctcagga caagttgcac agt 23

<210> 460

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列230)

<400> 460

ggattttgtg acaggaagct gtg 23

<210> 461

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列231)

<400> 461

gtggctctaa agtcaatctc ttctttct 28

<210> 462

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列231)

<400> 462

aatggggcca tttagtgact gtt 23

<210> 463

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列232)

<400> 463

ttcatgccat agatggtcca gtt 23

<210> 464

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列232)

<400> 464

agaagcttgt gccagatgaa cc 22

<210> 465

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列233)

<400> 465

ggatccctac caagcaagtg agt 23

<210> 466

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列233)

<400> 466

ttcgagaagg aggggaggtc 20

<210> 467

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列234)

<400> 467

cctacttatc tcagaggatg gataatgtg 29

<210> 468

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列234)

<400> 468

cccctaggct gctgctgtg 19

<210> 469

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列235)

<400> 469

tcctctgcca tcattaactc gtttc 25

<210> 470

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列235)

<400> 470

ttgattgcac ttgattaagc ttttgt 26

<210> 471

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列236)

<400> 471

cacaggtgct cggctcttc 19

<210> 472

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列236)

<400> 472

ccccagattg ctgcaaaga 19

<210> 473

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列237)

<400> 473

agcctcggca acctcaca 18

<210> 474

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列237)

<400> 474

aggcgtgagg ggagctct 18

<210> 475

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列238)

<400> 475

tctcggtccc aagggtgac 19

<210> 476

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列238)

<400> 476

gcctgcctgt ctgggttc 18

<210> 477

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列239)

<400> 477

tctggtgcca agtccatgtg 20

<210> 478

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列239)

<400> 478

gaggctcaga aagctgcact tc 22

<210> 479

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列240)

<400> 479

ctctgacagc aaaccagcct ct 22

<210> 480

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列240)

<400> 480

gtgggcccca gacagagac 19

<210> 481

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列241)

<400> 481

agagctctgt gccctgtgtg 20

<210> 482

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列241)

<400> 482

cacgtgcaca acagagacag c 21

<210> 483

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列242)

<400> 483

ggaattggaa gtgtcacgag atg 23

<210> 484

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列242)

<400> 484

attgctgccc acggagct 18

<210> 485

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列243)

<400> 485

agtgttctca cggctgctga c 21

<210> 486

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列243)

<400> 486

acagactcca acacaacgca gat 23

<210> 487

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列244)

<400> 487

cgggacaagg gtgctgtc 18

<210> 488

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列244)

<400> 488

gcttccagga accacacctg 20

<210> 489

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列245)

<400> 489

gtgctggacg tgggtctga 19

<210> 490

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列245)

<400> 490

tccctcagac atgcaaacag c 21

<210> 491

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列246)

<400> 491

ggttgggaag agccaagtct g 21

<210> 492

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列246)

<400> 492

gtggcagctc cctgtcctc 19

<210> 493

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列247)

<400> 493

caaagcagag cctcagatgc tag 23

<210> 494

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列247)

<400> 494

tcttttgggg aaaaacccta ctg 23

<210> 495

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列248)

<400> 495

cctctggcta ccccgtgac 19

<210> 496

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列248)

<400> 496

agaaaaatgt ggggcctacc tg 22

<210> 497

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列249)

<400> 497

agagtctgct cgggtagctc ag 22

<210> 498

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列249)

<400> 498

tgatgatgtc aggcatctcc ac 22

<210> 499

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列250)

<400> 499

gcagcgcgag atggtctact 20

<210> 500

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列250)

<400> 500

ctgagagagg gcaccagaga ag 22

<210> 501

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列251)

<400> 501

gccgtgttgg ccttcaga 18

<210> 502

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列251)

<400> 502

cagggcatga agtgcaaaaa a 21

<210> 503

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列252)

<400> 503

ctgagcgcct cggtttttt 19

<210> 504

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列252)

<400> 504

ctccacctgc ctgtcactct g 21

<210> 505

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列253)

<400> 505

cccctagcct gcagcttgt 19

<210> 506

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列253)

<400> 506

gacttggagg caccgtcag 19

<210> 507

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列254)

<400> 507

cccctccact ggcttgttc 19

<210> 508

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列254)

<400> 508

atgcactgcc acccaggt 18

<210> 509

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列255)

<400> 509

gacaatgtgg tccacgtgat tct 23

<210> 510

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列255)

<400> 510

caggtggagg tttttcaggc tat 23

<210> 511

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列256)

<400> 511

gatacagacg tccctcacca gtg 23

<210> 512

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列256)

<400> 512

actcgcccac aggagaccta g 21

<210> 513

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列257)

<400> 513

tcagatgtcc ccattcctgt tt 22

<210> 514

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列257)

<400> 514

agaacctggt gcaagaccaa ac 22

<210> 515

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列258)

<400> 515

gctgacgata gcctgaaaaa cct 23

<210> 516

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列258)

<400> 516

ttcccacgct tgtcgtcac 19

<210> 517

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列259)

<400> 517

cacgctccct gtcttctagg tct 23

<210> 518

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列259)

<400> 518

cttagtcccc aggctggtac g 21

<210> 519

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列260)

<400> 519

acgtggcacc ctcgtacc 18

<210> 520

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列260)

<400> 520

gggccttcct gaacactgg 19

<210> 521

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列261)

<400> 521

gttcactgag gccagcactg t 21

<210> 522

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列261)

<400> 522

gctgaggcct tctcaggttt c 21

<210> 523

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列262)

<400> 523

acttctccag gaccacggac t 21

<210> 524

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列262)

<400> 524

aatatcccaa gagggccaag tct 23

<210> 525

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列263)

<400> 525

acatcgtggt cctgaggatt gt 22

<210> 526

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列263)

<400> 526

atgagggcgt tagacagctc ct 22

<210> 527

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列264)

<400> 527

ttctcctcgg acatcaacaa cat 23

<210> 528

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列264)

<400> 528

ctcagcagag aggagccaca tt 22

<210> 529

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列265)

<400> 529

ctctgctcga cctgtgtgta gc 22

<210> 530

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列265)

<400> 530

acattctgca cagacgtcct cat 23

<210> 531

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列266)

<400> 531

ctgtccctct ggtcaggaga ag 22

<210> 532

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列266)

<400> 532

gagccctgcc tcccctaag 19

<210> 533

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列267)

<400> 533

gcacagctgg tggcagtg 18

<210> 534

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列267)

<400> 534

caccctccga ggagacgac 19

<210> 535

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列268)

<400> 535

agtctggaaa atgcagtggg agt 23

<210> 536

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列268)

<400> 536

tcagctgtca accatgttcc taaa 24

<210> 537

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列269)

<400> 537

cctgctgaca ggggttctct t 21

<210> 538

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列269)

<400> 538

cagggtcccc gaggatgt 18

<210> 539

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列270)

<400> 539

catccccatc gagcgagtc 19

<210> 540

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列270)

<400> 540

gctggccccg actgtctt 18

<210> 541

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列271)

<400> 541

gacggggaaa gtgctgcctg gtc 23

<210> 542

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列271)

<400> 542

ccaggttccc gcaggagagg tgt 23

<210> 543

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列272)

<400> 543

aggctctgtg ttcctccctg t 21

<210> 544

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列272)

<400> 544

cacagggagc ttaggccaga g 21

<210> 545

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列273)

<400> 545

tctggcctaa gctccctgtg 20

<210> 546

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列273)

<400> 546

gggcccagac tccctacc 18

<210> 547

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列274)

<400> 547

gctggaatgg atggtcttgt ct 22

<210> 548

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列274)

<400> 548

gcagtccttc agctcgatga g 21

<210> 549

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列275)

<400> 549

ggctcctaca ggtacacgga gtt 23

<210> 550

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列275)

<400> 550

ggggagctgg agcaggtg 18

<210> 551

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列276)

<400> 551

agtaatcagg aggtgcccca gt 22

<210> 552

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列276)

<400> 552

acacagcagt gggcacctg 19

<210> 553

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列277)

<400> 553

ctagcagtgc aaccaggcag ta 22

<210> 554

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列277)

<400> 554

gtctggggag acttggtggt c 21

<210> 555

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列278)

<400> 555

tcacggcact gctccagtt 19

<210> 556

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列278)

<400> 556

cagggacagg acagtcagtg g 21

<210> 557

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列279)

<400> 557

ccctgcacgc aaatgtga 18

<210> 558

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列279)

<400> 558

accgctctgc ccacacac 18

<210> 559

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列280)

<400> 559

ggaatatggg gctccctcag 20

<210> 560

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列280)

<400> 560

cgctggccca cctcatag 18

<210> 561

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列281)

<400> 561

ctactccaac cccagcctac ct 22

<210> 562

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列281)

<400> 562

caagcagaca aagtcaataa aagagc 26

<210> 563

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列282)

<400> 563

cctgcacttc agggacttct tg 22

<210> 564

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列282)

<400> 564

tccttcccat ccaggttaca ctt 23

<210> 565

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列283)

<400> 565

gggaggtgag tgggagatgt aga 23

<210> 566

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列283)

<400> 566

ttattcactg cggagctgaa ctt 23

<210> 567

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列284)

<400> 567

tgacgtcata gagtgactag accacag 27

<210> 568

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列284)

<400> 568

gacttacatg ggggactcct gag 23

<210> 569

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列285)

<400> 569

cctgggtgtc ctctcctgtg 20

<210> 570

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列285)

<400> 570

atcagacaac cattcatggg aga 23

<210> 571

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列286)

<400> 571

ctctgtcttt gggaggagat ggt 23

<210> 572

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(引物序列286)

<400> 572

ggcaagggac actggagct 19

Claims

1.一个基因panel在制备用于诊断与鉴别诊断BHD综合征的试剂盒的用途，所述基因panel包含四个基因：FLCN、SERPINA1、TSC1、TSC2。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的基因panel，富集捕获的基因区域包括：FLCN全基因序列；SERPINA1、TSC1、TSC2三个基因的外显子及外显子-内含子交界50bp的区域。

3.一种富集权利要求2所述的基因区域序列所设计的286对引物序列，所述的286对引物序列包括上游引物和下游引物，所述的上游引物具有序列表中SEQ ID N0：1、3、5、7、9、11……569、571所示的核苷酸序列，所述的上游引物具有序列表中SEQ ID N0：2、3、6、8、10、12……570、572所示的核苷酸序列。

4.一种用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的目标基因捕获测序方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)目标基因区域的选取与引物设计；

(2)多重PCR体系引物panel优化；

(3)血液及组织DNA提取、质量检测；

(4)样本目标片段多重PCR反应；

(5)样本添加特异性标签序列；

(6)定量后上机测序；

(7)测序结果的信息分析。

5.根据权利要求4所述的用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的目标基因捕获测序方法，其特征在于：

在步骤(7)中，拷贝数量变异(Copy number variation,CNV)分析及断点分析

Step2:将step1中得到的标准化的值与对照样本比较，得到结果<0.7视为杂合缺失，>1.3视为杂合重复；

6.根据权利要求4所述的用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的目标基因捕获测序方法，其特征在于：在步骤(7)中，使用基于深度的方法(depth-based method)进行拷贝数量变异分，使用GATK Depth of Coverage tool version 3.1得到每个位点的深度结果。

7.根据权利要求6所述的用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的目标基因捕获测序方法，其特征在于：在步骤(7)中，Step1:优化后的基于标准化深度的拷贝数量变异的分析方法，如式Ⅰ所示：

8.权利要求1或2所述的FLCN、SERPINA1、TSC1、TSC2四个基因的引物序列及多重扩增反应体系在快速诊断与鉴别诊断BHD试剂盒中的应用。

9.权利要求4至7任一项所述的用于快速诊断与鉴别诊断BHD综合征的目标基因捕获测序方法在快速诊断与鉴别诊断BHD试剂盒中的应用。