CN108486189A - 三酶一酵富硒牛樟芝小分子多糖的生产方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供的三酶一酵富硒牛樟芝小分子多糖的生产方法，与现有技术相比，本发明先经过唾液淀粉酶酶解，先分解淀粉等，以免影响胃蛋白酶及木瓜蛋白酶对富硒牛樟芝中多糖等的酶解，提高得糖率。然后控制胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的酶解温度、pH环境及酶解时间等，提高酶解效率。经过3次酶解后进行乳酸菌发酵，进一步分解为小分子多糖，使制备的富硒牛樟芝小分子多糖分子量更小，溶解度更高，更容易被人以吸收。然后经过分离，超临界CO2萃取，超滤，得到的产品小分子多糖获得率高，小分子多糖含量高。

Description

三酶一酵富硒牛樟芝小分子多糖的生产方法
技术领域
本发明涉及富硒牛樟芝小分子多糖的生产方法，具体涉及三酶一酵富硒牛樟芝小分子多糖的生产方法，依次利用唾液淀粉酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解，最后利用乳酸菌发酵，整个过程仿生酶解，得到富硒牛樟芝小分子多糖。
背景技术
牛樟芝富含多糖，萜类，甾体类化合物，马来酸及琥珀酸衍生物等主要活性化合物，具有护肝、抗癌、调节免疫、去过敏、解毒和抗炎等功效。
近年来牛樟芝的药理作用得到医学界的广泛重视，提取分离牛樟芝化合物组分，研制开发新技术新产品前景十分广阔。
发明内容
本发明的目的在于提供三酶一酵富硒牛樟芝小分子多糖的生产方法，依次利用唾液淀粉酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解，最后利用乳酸菌发酵，整个过程仿生酶解，得到的富硒牛樟芝小分子多糖活性高，安全度高。在牛樟芝培养过程中加入硒盐和铁盐及维生素E促进牛樟芝对硒元素的吸收，提高硒含量，从而提高其功效。
本发明提供的三酶一酵富硒牛樟芝小分子多糖的生产方法，包括以下步骤：
1)将富硒牛樟芝干燥，粉碎，过筛后，加水，调节pH至7-7.5，加入唾液淀粉酶，于36-37.5℃保温条件下进行酶解反应；
2)然后调节pH至1.5-2.0，加入胃蛋白酶，于37-42℃保温条件下进行酶解反应；
3)然后调节pH至7.5-8.0，加入木瓜蛋白酶，于36-40℃保温条件下进行酶解反应；
4)向步骤3)制得的体系中加入乳酸菌，保温发酵后，离心，分离后滤液减压浓缩，然后浓缩液经过超临界CO2萃取；
5)萃取液经过超滤后，减压浓缩，干燥，即得富硒牛樟芝小分子多糖。
步骤1)中富硒牛樟芝的种植方法为：
利用液态培养基培养牛樟芝，每20-30天向培养基中加入EM富硒液。
EM富硒液的加入量是液态培养基的2-5％。
所述EM富硒液的制备方法为：
将硒盐、铁盐和维生素E与EM原液稀释液混合，搅拌混匀后在20-28℃温度下发酵10-18天得EM富硒液，巴氏灭菌后备用。其中硒盐、铁盐和维生素E与EM原液稀释液的质量比为1:5-10:0.5-1.5:2-4。EM原液稀释液是指将EM原液稀释5-10倍。
步骤1)中牛樟芝粉碎后过60-100目筛。
步骤1)中加水量为牛樟芝质量的4-6倍。
步骤1)中唾液淀粉酶的加入量是富硒牛樟芝质量的0.05-1％。
步骤1)中所述酶解反应进行2-3h；
步骤2)中胃蛋白酶的加入量是富硒牛樟芝质量的0.03-1.8％。
步骤2)中所述酶解反应进行2-4h；
步骤3)中木瓜蛋白酶的加入量是富硒牛樟芝质量的0.03-1.7％。
步骤3)中所述酶解反应进行2-5h；
步骤4)中乳酸菌的加入量为富硒牛樟芝质量的0.05-1％。
步骤4)中发酵条件为30-37℃条件下，pH5-6条件下发酵15-28h。
步骤4)中所述离心是指在8000-10000r/min条件下离心10-20min。
步骤4)中所述超临界CO2萃取条件为：压力为20-35MPa，萃取温度是35-45℃，静态萃取时间1-2h；动态萃取温度为35-45℃，萃取时间为2-5h；萃取压力为20-35MPa；I级分离釜压力8-12MPa，Ⅱ级分离釜压力5-8MPa。
步骤5)中所述超滤是指用截留相对分子质量为3KD的中空纤维膜进行超滤。
本发明中在牛樟芝培养基培养时加入富硒液，而且富硒液中还加入铁盐和维生素E，相互补充，能够促进牛樟芝对硒元素的吸收，提高牛樟芝富硒含量，有利于形成硒多糖。
在本发明提供的三酶一酵制备富硒牛樟芝小分子多糖的过程中，先经过唾液淀粉酶酶解，先分解淀粉等，以免影响胃蛋白酶及木瓜蛋白酶对富硒牛樟芝中多糖等的酶解，提高得糖率。然后控制胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的酶解温度、pH环境及酶解时间等，提高酶解效率。经过3次酶解后进行乳酸菌发酵，进一步分解为小分子多糖，使制备的富硒牛樟芝小分子多糖分子量更小，溶解度更高，更容易被人以吸收。然后经过分离，超临界CO2萃取，超滤，得到的产品小分子多糖获得率高，小分子多糖含量高。
与现有技术相比，本发明采用仿生酶解的方法，依次利用唾液淀粉酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解，最后利用乳酸菌发酵。经过三次酶解和一次发酵，使富硒牛樟芝酶解完全，得到的富硒牛樟芝小分子多糖分子更小，产量更多，更有利于人体吸收，发挥其作用。
具体实施方式
实施例1
种植富硒牛樟芝：
利用液态培养基培养牛樟芝，每20天向培养基中加入液态培养基质量的2％的EM富硒液。所述EM富硒液的制备方法为：
将硒盐Na2SeO4、铁盐FeCl3和维生素E与EM原液稀释液混合，搅拌混匀后在25℃温度下发酵16天得EM富硒液，巴氏灭菌后备用。其中硒盐、铁盐和维生素E与EM原液稀释液的质量比为1:6:0.6:2.5。EM原液稀释液是指将EM原液稀释6倍。
三酶一酵富硒牛樟芝小分子多糖的生产方法，包括以下步骤：
1)将上述种植得到的富硒牛樟芝干燥，粉碎，过100目筛，加4倍量的水混匀，调节pH至7，加入富硒牛樟芝质量0.1％的唾液淀粉酶，于37.5℃保温条件下进行酶解反应2h；
2)然后调节pH至1.5，加入富硒牛樟芝质量0.6％的胃蛋白酶，于38℃保温条件下进行酶解反应4h；
3)然后调节pH至7.5，加入富硒牛樟芝质量0.7％的木瓜蛋白酶，于38℃保温条件下进行酶解反应5h；
4)向步骤3)制得的体系中加入富硒牛樟芝质量0.11％的乳酸菌，35℃发酵27h发酵后，在10000r/min条件下离心15min，分离后滤液减压浓缩，然后浓缩液经过超临界CO2萃取，萃取条件为：压力为25MPa，萃取温度是40℃，静态萃取时间2h；动态萃取温度为45℃，萃取时间为4h；萃取压力为30MPa；I级分离釜压力10MPa，Ⅱ级分离釜压力6MPa。
5)萃取液用截留相对分子质量为3KD的中空纤维膜进行超滤，减压浓缩，干燥，即得富硒牛樟芝小分子多糖。
检测制备的富硒牛樟芝小分子多糖分子量更小，更容易被吸收，提取率比现有的单一酶解高33.5％。
实施例2
种植富硒牛樟芝：
利用液态培养基培养牛樟芝，每28天向培养基中加入液态培养基质量的4％的EM富硒液。所述EM富硒液的制备方法为：
将硒盐Na2SeO4、铁盐FeCl3和维生素E与EM原液稀释液混合，搅拌混匀后在21℃温度下发酵18天得EM富硒液，巴氏灭菌后备用。其中硒盐、铁盐和维生素E与EM原液稀释液的质量比为1:8:0.8:4。EM原液稀释液是指将EM原液稀释8倍。
三酶一酵富硒牛樟芝小分子多糖的生产方法，包括以下步骤：
1)将上述种植得到的富硒牛樟芝干燥，粉碎，过80目筛，加5倍量的水混匀，调节pH至7，加入富硒牛樟芝质量0.5％的唾液淀粉酶，于37.5℃保温条件下进行酶解反应2.5h；
2)然后调节pH至1.5，加入富硒牛樟芝质量0.7％的胃蛋白酶，于38℃保温条件下进行酶解反应3h；
3)然后调节pH至8，加入富硒牛樟芝质量1％的木瓜蛋白酶，于38℃保温条件下进行酶解反应5h；
4)向步骤3)制得的体系中加入富硒牛樟芝质量0.3％的乳酸菌，32℃发酵20h发酵后，在10000r/min条件下离心20min，分离后滤液减压浓缩，然后浓缩液经过超临界CO2萃取，萃取条件为：压力为30MPa，萃取温度是45℃，静态萃取时间2h；动态萃取温度为40℃，萃取时间为5h；萃取压力为35MPa；I级分离釜压力8MPa，Ⅱ级分离釜压力8MPa。
5)萃取液用截留相对分子质量为3KD的中空纤维膜进行超滤，减压浓缩，干燥，即得富硒牛樟芝小分子多糖。
检测制备的富硒牛樟芝小分子多糖分子量更小，更容易被吸收，提取率比现有的单一酶解高37.1％。

Claims (10)

1.三酶一酵富硒牛樟芝小分子多糖的生产方法，其特征在于，所述生产方法包括以下步骤：
1)将富硒牛樟芝干燥，粉碎，过筛后，加水，调节pH至7-7.5，加入唾液淀粉酶，于36-37.5℃保温条件下进行酶解反应；
2)然后调节pH至1.5-2.0，加入胃蛋白酶，于37-42℃保温条件下进行酶解反应；
3)然后调节pH至7.5-8.0，加入木瓜蛋白酶，于36-40℃保温条件下进行酶解反应；
4)向步骤3)制得的体系中加入乳酸菌，保温发酵后，离心，分离后滤液减压浓缩，然后浓缩液经过超临界CO2萃取；
5)萃取液经过超滤后，减压浓缩，干燥，即得富硒牛樟芝小分子多糖。
2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤1)中富硒牛樟芝的种植方法为：
利用液态培养基培养牛樟芝，每20-30天向培养基中加入EM富硒液。
3.根据权利要求2所述的生产方法，其特征在于，EM富硒液的加入量是液态培养基的2-5％。
4.根据权利要求2或3所述的生产方法，其特征在于，所述EM富硒液的制备方法为：
将硒盐、铁盐和维生素E与EM原液稀释液混合，搅拌混匀后在20-28℃温度下发酵10-18天得EM富硒液，巴氏灭菌后备用。
5.根据权利要求4所述的生产方法，其特征在于，其中硒盐、铁盐和维生素E与EM原液稀释液的质量比为1:5-10:0.5-1.5:2-4。
6.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤1)中唾液淀粉酶的加入量是富硒牛樟芝质量的0.05-1％。
7.根据权利要求1或6所述的生产方法，其特征在于，步骤1)中所述酶解反应进行2-3h。
8.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤4)中乳酸菌的加入量为富硒牛樟芝质量的0.05-1％。
9.根据权利要求1或8所述的生产方法，其特征在于，步骤4)中发酵条件为30-37℃条件下，pH5-6条件下发酵15-28h。
10.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤4)中所述超临界CO2萃取条件为：压力为20-35MPa，萃取温度是35-45℃，静态萃取时间1-2h；动态萃取温度为35-45℃，萃取时间为2-5h；萃取压力为20-35MPa；I级分离釜压力8-12MPa，Ⅱ级分离釜压力5-8MPa。
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