CN108486081B - 一种植物巯基丙酮酸硫转移酶及其应用 - Google Patents
一种植物巯基丙酮酸硫转移酶及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108486081B CN108486081B CN201810420410.XA CN201810420410A CN108486081B CN 108486081 B CN108486081 B CN 108486081B CN 201810420410 A CN201810420410 A CN 201810420410A CN 108486081 B CN108486081 B CN 108486081B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- atmst
- plant
- sulfhydryl
- pyruvate
- escherichia coli
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- -1 sulfhydryl pyruvic acid sulfur Chemical compound 0.000 title claims abstract description 13
- 108090000984 Sulfurtransferases Proteins 0.000 title claims abstract description 12
- 102000004385 Sulfurtransferases Human genes 0.000 title claims abstract description 11
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 23
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims abstract description 8
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 claims abstract description 7
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 claims abstract description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 28
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 19
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 7
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 claims description 4
- 101100422618 Arabidopsis thaliana STR1 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 2
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 claims 4
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 abstract description 6
- 230000036579 abiotic stress Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M sodium thioglycolate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CS GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000004790 biotic stress Effects 0.000 abstract 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 5
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- OJOLFAIGOXZBCI-UHFFFAOYSA-N 3-mercaptopyruvic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)CS OJOLFAIGOXZBCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N Carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000005156 Dehydration Diseases 0.000 description 1
- 108010074124 Escherichia coli Proteins Proteins 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012233 TRIzol extraction Methods 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;zinc Chemical compound [Zn].CC(O)=O.CC(O)=O ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000013720 root morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 description 1
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Substances [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000014793 stomatal movement Effects 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M thioglycolate(1-) Chemical compound [O-]C(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 239000004246 zinc acetate Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/13—Transferases (2.) transferring sulfur containing groups (2.8)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P11/00—Preparation of sulfur-containing organic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y208/00—Transferases transferring sulfur-containing groups (2.8)
- C12Y208/01—Sulfurtransferases (2.8.1)
- C12Y208/01002—3-Mercaptopyruvate sulfurtransferase (2.8.1.2)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种植物巯基丙酮酸硫转移酶（AtMST）及其应用。本发明以拟南芥cDNA为模板，克隆巯基丙酮酸硫转移酶基因AtMST，构建重组体pET28a‑AtMST，并将其转化进入大肠杆菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导表达、Ni柱纯化，证明了MST蛋白以巯基丙酮酸钠为底物，具有催化H2S产生的活性。结合H2S信号在植物体内广泛而重要的功能，在实际生产中，可以通过转基因技术，从而建立对生物胁迫和非生物胁迫具有更高抵抗能力的转基因植物。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物巯基丙酮酸硫转移酶及其应用，属于分子生物学领域。
背景技术
H2S是继一氧化氮（NO）和一氧化碳（CO）以来的第三种气体信号分子。在植物中，H2S信号参与植物的各个生理过程，如促进种子萌发、根形态建成、增强叶片的光合作用、调节气孔运动、延缓植物衰老；H2S还通过调控基因表达，与植物激素协同等方式参与到植物抵抗各种生物胁迫和非生物胁迫的过程中，如水分胁迫、温度胁迫、重金属胁迫等。
在植物体内，H2S主要通过酶催化反应降解生成。目前已经被鉴定的催化植物体内源H2S产生的酶见下表，它们均以半胱氨酸（Cys）为底物发挥作用，目前尚未有人报道植物体内有其他底物可以产生H2S。
表1 植物体内催化产生H2S的酶
MST是植物体内氰化物去毒化过程中重要的酶，该酶可将底物巯基丙酮酸钠上的硫烷硫原子转移到氰离子上，生成无毒的硫氰酸盐和丙酮酸，但尚未有报道显示该蛋白与植物体内的H2S生成有关。
发明内容
本发明提供了植物巯基丙酮酸硫转移酶及其应用，包括以下步骤：
（1）以拟南芥cDNA为模板，克隆巯基丙酮酸硫转移酶基因AtMST，可操作性地连接至T7启动子（T7:: AtMST）。
（2）转化大肠杆菌BL21（DE3）株系，加入IPTG诱导表达基因AtMST；
（3）将所述大肠杆菌经25-37℃培养3-5 h，至OD600达到0.8-1.0，加0.05-0.5mM的IPTG，16-37℃诱导培养12-22h，收集大肠杆菌细胞，超声破碎，提取总蛋白；
（4）Ni琼脂糖凝胶纯化柱纯化目的蛋白。
上述方法中，巯基丙酮酸硫转移酶基因AtMST为拟南芥基因，细胞为大肠杆菌。
上述方法中，所述酶的编码基因登录号为At1g79230，可操作性地连接至T7启动子T7:: AtMST。
上述方法中，所述构建体为原核表达构建体pET28a。
本发明提供的方法包括获得目的蛋白的方法，与未诱导表达的总蛋白进行比较时，催化H2S产生的速率显著增加。
本发明的有益效果：
通过原核表达和蛋白体外纯化，获得目的蛋白AtMST具有显著的催化H2S产生的活性，该蛋白可作为H2S的产生酶发挥作用。结合H2S作为气体信号分子在植物体内广泛而重要的功能，在实际生产中，可以通过转基因技术，从而建立对生物胁迫和非生物胁迫具有更高抵抗能力的转基因植物。
附图说明
图1为拟南芥AtMST基因克隆以及T7:: AtMST转化大肠杆菌菌液PCR鉴定，显示目的条带的结果。
图2 为T7:: AtMST重组质粒转化大肠杆菌，并在IPTG诱导条件下与无IPTG诱导的大肠杆菌的对比示意图。
图3 为IPTG诱导并经过纯化后转入T7:: AtMST重组质粒的目的蛋白与其他处理相比，催化H2S产生的速率极显著升高的示意图。
具体实施方式
下面通过实施例来进一步说明本发明，但不局限于以下实施例。
实验材料：拟南芥（Arabidopsis thaliana）叶片，大肠杆菌BL21（DE3）株系。
实施例1．拟南芥AtMST基因的克隆。
取生长4周的莲座叶，提取总RNA（TRIzol提取试剂盒，TaKaRa公司），反转录为cDNA（去基因组反转录试剂盒，abm公司），以该cDNA为模板，用AtMST特异性引物进行PCR，克隆得到AtMST基因。如图1显示出，在以拟南芥cDNA为模板进行高保真PCR后，得到大小为1140 bp的片段为目的片段；阴性对照是以ddH2O为模板，没有得到任何条带；第4泳道为重组pET28a-AtMST构建体进行菌液PCR检测所得片段，说明重组构建体构建成功。
实施例2． T7:: AtMST重组质粒转化大肠杆菌，在IPTG诱导条件下与无IPTG诱导的大肠杆菌的对比实验（制备目的蛋白的方法以及空白对照实验）：
实验材料的准备：取拟南芥叶片提取总RNA，反转录为cDNA，克隆AtMST基因（At1g79230），构建T7:: AtMST重组体，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，卡那霉素筛选得到阳性菌。挑取单菌落，PCR鉴定，得到转化成功的大肠杆菌，用于实验。
将上述两种大肠杆菌各分为两组，一组加入IPTG（终浓度为0.05-0.5 mM），另一组加入等量双蒸水，于25-37℃条件下振荡培养12-20 h，10000 rpm，4℃离心集菌，加入10 mLPBS，超声破碎；12000 rpm，4℃离心，取上清，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。转入T7:: AtMST表达载体的大肠杆菌在IPTG诱导下表达出特异的蛋白条带，纯化得到目的蛋白（见图2）。
图2显示出，在T7:: AtMST重组质粒转化大肠杆菌，并在IPTG诱导条件下可以产生重组MST条带，纯化后得到单一的重组MST蛋白条带。而无IPTG诱导的大肠杆菌蛋白中无产生的MST蛋白条带，说明本发明成功表达并纯化出目的蛋白。
实施例3：H2S产率的测定实验。
按照以下配方将反应体系混合：1mL混合体系中加入150 μmol·L-1巯基丙酮酸钠，100μg蛋白，其余用pH=7的PBS缓冲液补充，将混合液加入到40 mL带盖锥形瓶中；剪去1.5mL离心管管盖，向其中加入500μL质量分数1% 的醋酸锌溶液；将离心管放入锥形瓶中，盖好锥形瓶盖。37℃，115 rpm震荡，充分反应15 min后，分别加入100μL 20 mM DPD和30 mM FeCl3溶液终止反应，黑暗静置15 min，测定OD670。根据标准曲线计算出H2S的产率。
图3结果显示，在IPTG诱导时，AtMST基因表达产生的巯基丙酮酸硫转移酶，可以以巯基丙酮酸钠为底物，催化H2S产生，从而增加内源性H2S的含量；相比之下，在未加入IPTG进行诱导的对照组蛋白中，未见其有催化H2S产生的活性。说明本发明所得目的蛋白MST具有催化H2S产生的新功能。
在上述实施例中，对本发明的实施方式做了描述，很显然，在本发明的发明构思下，仍可作出很多变化的应用。如将AtMST蛋白进行真核表达，改变测定H2S产率反应体系的底物（如将巯基丙酮酸钠改为巯基丙酮酸）等。因此，在本发明构思下做出的任何改变都将属于本发明的保护范围。
序列表
<110> 山西大学
<120> 一种植物巯基丙酮酸硫转移酶及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1140
<212> DNA
<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400> 1
atggcctcga cccttttctc cagaactttc ttggctgcta gtcaccgact gattactcct 60
tctcttccgc aaaagatctt taatccagcc acctttctca gtaggtcact ccactctcag 120
ttaggctccg cttctacagc ctataaatca actacttggg ctcgtcgagc tatggcttct 180
actggagttg agacaaaagc cggttactcc acatcatccg tatcaaccag tgaacctgtt 240
gtttctgttg attggcttca tgctaatctt agagagcctg atttgaagat tttggatgct 300
tcatggtata tgccggatga gcagagaaat ccgatccaag aatatcaggt tgctcatatt 360
ccccgcgctc tcttctttga tttggatgga atatcagatc gaaaaactag tttgccacat 420
atgttgccca ctgaggaagc ttttgctgct ggttgttctg ctcttggaat tgataacaaa 480
gatgaagtgg ttgtctatga tggaaagggg atctttagtg cagcccgtgt atggtggatg 540
ttccgagttt ttggacatga aaaagtttgg gtgctcgatg gaggtctacc aagatggcgt 600
gcatcaggtt atgatgttga atctagtgca tcaggtgatg ctattctgaa agccagtgcc 660
gcaagtgagg ctatagagaa aatttatcaa ggacaaaccg tcagtccgat aacctttcag 720
actaagttcc agccacatct agtgtggaca cttgatcagg tcaagaacaa tatggaggat 780
ccgacttatc aacacataga cgctcgttcc aaagccaggt ttgatggtac tgctccagaa 840
ccccgtaagg gaataagaag cggtcatata cctggaagca aatgtatccc ttttcctcag 900
atgtttgatt cttgtaacac attgttacca gcagaggagc tgaagaaacg atttgaccaa 960
gaagatatct cactggacaa gcctattatg gcctcgtgtg ggactggtgt aacagcttgc 1020
atcttggcaa tggggcttca ccggctgggg aaaaccgacg tgccgatcta tgatgggtcg 1080
tggactgaat gggcgacaca accagacttg cccatagaga gtgttgaatc ttcttcatga 1140
Claims (4)
1.一种植物巯基丙酮酸硫转移酶在催化硫化氢产生中的应用，其特征在于：所述植物巯基丙酮酸硫转移酶由以下步骤制备得到：以拟南芥cDNA为模板，克隆基因AtMST，构建pET28a-AtMST重组体，并转化大肠杆菌BL21（DE3）进行原核表达纯化，得到AtMST蛋白；
植物巯基丙酮酸硫转移酶的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。
2.根据权利要求1所述的植物巯基丙酮酸硫转移酶在催化硫化氢产生中的应用，其特征在于：包括以下步骤：
（1）以拟南芥cDNA为模板，克隆巯基丙酮酸硫转移酶基因AtMST，构建AtMST的重组构建体；
（2）转化大肠杆菌BL21（DE3）株系，加入IPTG诱导表达巯基丙酮酸硫转移酶基因；
（3）将所述大肠杆菌经37℃培养3 h，至OD600达到0.8-1.0，加0.05-0.5mM的IPTG，16-37℃诱导培养20h，收集大肠杆菌细胞，超声破碎，提取总蛋白；
（4）Ni琼脂糖凝胶纯化柱纯化目的蛋白。
3.根据权利要求2所述的植物巯基丙酮酸硫转移酶在催化硫化氢产生中的应用，其特征在于：所述酶的编码基因为At1g79230，可操作性地连接至T7启动子T7:: AtMST。
4.根据权利要求2所述的植物巯基丙酮酸硫转移酶在催化硫化氢产生中的应用，其特征在于：所述构建体为原核表达构建体pET-28a。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810420410.XA CN108486081B (zh) | 2018-05-04 | 2018-05-04 | 一种植物巯基丙酮酸硫转移酶及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810420410.XA CN108486081B (zh) | 2018-05-04 | 2018-05-04 | 一种植物巯基丙酮酸硫转移酶及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108486081A CN108486081A (zh) | 2018-09-04 |
| CN108486081B true CN108486081B (zh) | 2021-07-02 |
Family
ID=63353457
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810420410.XA Active CN108486081B (zh) | 2018-05-04 | 2018-05-04 | 一种植物巯基丙酮酸硫转移酶及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108486081B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108795913B (zh) * | 2018-05-04 | 2021-07-02 | 山西大学 | 一种植物中能催化h2s产生的酶及其应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105008923A (zh) * | 2013-01-22 | 2015-10-28 | 新蛋白质组学公司 | 在癌症诊断中的血小板生物标记物 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060107345A1 (en) * | 2003-09-30 | 2006-05-18 | Nickolai Alexandrov | Sequence-determined DNA fragments and corresponding polypeptides encoded thereby |
| US20140066362A1 (en) * | 2011-02-01 | 2014-03-06 | New York University | Method for treating infections by targeting microbial h2s-producing enzymes |
| CN104080334A (zh) * | 2011-09-14 | 2014-10-01 | 新天然替代品公司 | 高生物利用度的零价硫的制备和组合物及其用途 |
| WO2015008317A1 (ja) * | 2013-07-19 | 2015-01-22 | 株式会社大塚製薬工場 | Ｄ－システインを有効成分として含有する硫化水素産生誘導剤 |
| KR101656175B1 (ko) * | 2015-02-24 | 2016-09-09 | 경희대학교 산학협력단 | 황화수소 생산을 억제하는 억제제를 포함하는 말초신경계 퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
| CN106083760B (zh) * | 2016-02-16 | 2018-09-14 | 中国科学院理化技术研究所 | 一种可选择性检测硫化氢的荧光化学传感器、制备方法及应用 |
-
2018
- 2018-05-04 CN CN201810420410.XA patent/CN108486081B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105008923A (zh) * | 2013-01-22 | 2015-10-28 | 新蛋白质组学公司 | 在癌症诊断中的血小板生物标记物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108486081A (zh) | 2018-09-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109628439B (zh) | 一种促进番茄叶绿素合成及光合效率的基因及应用 | |
| CN110205332B (zh) | 一种增强植物对镉毒害的耐受性并降低植物镉含量的编码基因及应用 | |
| CN113667682B (zh) | Yh66-rs11190基因突变体及其在制备l-缬氨酸中的应用 | |
| CN110029113B (zh) | 一种水稻粒型生长发育相关编码基因及其应用 | |
| CN112626057B (zh) | 一种嵌合型植物腈水解酶突变体、编码基因及其应用 | |
| CN111423499B (zh) | 调控植物抗氧化能力和耐盐性的盐芥转录因子EsbZip60及其编码基因和应用 | |
| CN110499301B (zh) | 一种催化效率提高的内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶突变体 | |
| CN108486081B (zh) | 一种植物巯基丙酮酸硫转移酶及其应用 | |
| CN107338256B (zh) | 一种在真核细胞中表达固氮酶基因的方法 | |
| CN108034642B (zh) | 葡萄糖氧化酶CnGOD19及其改良酶、基因和应用 | |
| CN108795913B (zh) | 一种植物中能催化h2s产生的酶及其应用 | |
| JP2009520490A (ja) | 細胞発現システムを使用する水素生産方法 | |
| CN113846085B (zh) | 一种具有双酶活性的蛋白质及其用途 | |
| CN113025594B (zh) | 多肽、核酸及其在合成香叶醇上的应用 | |
| CN115322977A (zh) | 忽地笑LaCOMT及其编码基因在提高植物汞胁迫耐受性中的应用 | |
| CN114540381A (zh) | 一种苹果组蛋白脱乙酰化酶MdHDA6基因及其应用 | |
| CN109438563B (zh) | 一种烟草kup7蛋白及其编码基因与应用 | |
| JP5552706B2 (ja) | 藻類由来のマンニトール合成関連遺伝子 | |
| CN109553666B (zh) | 一种来自烟草的钾转运蛋白kup9及其编码基因与应用 | |
| CN113528540A (zh) | 水稻粒型基因OsMKK3编码基因及其应用 | |
| CN112011546A (zh) | SlMS基因在调控番茄育性中的应用及方法 | |
| CN115028694B (zh) | 与l-谷氨酸产量相关的蛋白及其相关生物材料和应用 | |
| CN109485709B (zh) | 一种烟草kup4蛋白及其编码基因与应用 | |
| CN114277069B (zh) | 制备l-缬氨酸的方法及其所用生物材料 | |
| CN113337537B (zh) | OsCDKB1；1蛋白及其编码基因在水稻耐盐中的功能与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240130 Address after: Room B1302, Unit 2, Building 6, Phase 2, Lingang Industrial Park, Airport New City, Xixian New Area, Xi'an City, Shaanxi Province, 712000 Patentee after: Saixikang (Shaanxi) Biotechnology Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: 030006, No. 92, Hollywood Road, Xiaodian District, Shanxi, Taiyuan Patentee before: SHANXI University Country or region before: China |